2. 广东科贸职业学院,广州 510430;
3. 动物营养学国家重点实验室,北京 100193
2. Guangdong Vocational College of Science and Trade, Guangzhou 510430, China;
3. State Key Laboratory of Animal Nutrition, Beijing 100193, China
维生素D是维持高等动物生命所必需的营养素,目前已发现的维生素D及其代谢物、类似物达37种以上[1]。目前,肉鸡生产中,维生素D的补给形式主要是维生素D3。在高度集约化的生产条件下,鸡群应激是难以避免的,如鸡群密度、热应激、疾病(如霉菌毒素中毒、肠炎、营养不良、免疫功能失调)等,易损害维生素D3的吸收或在肝脏中的羟化作用。1α羟基维生素D3(1α-OH-D3)与25羟基维生素D3(25-OH-D3)属于同工体,结构与维生素D3、1,25-(OH)2-D3类似[2],其活性与1,25-(OH)2-D3相当。动物机体内不能够合成1α-OH-D3,但可以通过化学方法人工合成[3]。25-OH-D3和1α-OH-D3作为活性维生素D3,理论上具有更高的生物学效价和使用效率。
麻益良等[4]指出,从维生素D3在机体内的代谢过程来看,使用25-OH-D3可以绕过在肝脏中羟化作用产生的对维生素D3的额外需要,并且也可以防止其不利影响。Edwards[5]研究表明,在饲粮中加入25-OH-D3有利于减轻吸收不良综合征对鸡,尤其是对肉鸡造成的危害。在肉雏鸡中的研究显示,25-OH-D3的吸收率(83%)高于维生素D3(66%)[6]。研究发现,单独添加1α-OH-D3可改善1~21日龄肉鸡的生长性能和骨骼发育,提高饲粮磷利用率[7]。给鸡口服或注射1α-OH -D3, 可迅速检测到标记的1,25-(OH)2-D3,结果显示,1α-OH-D3是通过在C-25上经羟基化转化成1,25-(OH)2-D3来发挥其生物学功能的[8, 9]。
目前,关于25-OH-D3和1α-OH-D3代替维生素D3的研究,国内外主要集中在快大型肉鸡42日龄前的生长前期阶段,在黄羽肉鸡生长后期的应用研究报道还比较少。因此,本试验旨在通过研究25-OH-D3和1α-OH-D3对42~63日龄黄羽肉鸡生长性能、血液生化指标、胫骨指标和养分消化率的影响,探讨其在黄羽肉鸡饲粮中代替维生素D3的效果,并为其合理利用提供依据。
本试验所使用的1α-OH-D3由上海皓元生物医药科技有限公司提供,纯度为98%;25-OH-D3由丹尼斯克添加剂(上海)有限公司提供,纯度为98%。
本试验共设8个处理,具体试验设计方案见表1。处理1为正常钙磷饲粮对照组,处理2为低钙磷饲粮对照组,处理3、4、5为25-OH-D3单因子试验处理;处理6、7、8为1α-OH-D3单因子试验处理。
| 表1 各处理钙、磷含量及维生素D3水平 Table 1 Calcium and phosphorus contents and vitamin D3 level of all treatments |
试验选用42日龄健康、发育良好的快大型岭南黄羽肉公鸡(广东省温氏食品集团培育)2 400只,随机分为8个处理,每个处理5个重复,每个重复60只鸡。试验用鸡分组遵循各处理间初始体重差异不显著(P>0.05)原则。试验期从42日龄到63日龄,共21 d。
试验采用封闭式地面平养,各处理饲养管理和环境条件一致,试鸡自由采食和饮水,按照常规饲养操作规程和免疫程序进行饲养和免疫。
试验采用玉米-豆粕型基础饲粮,并参考美国NRC(1994)和我国黄羽肉鸡营养需要标准(NY/T 33—2004)进行饲粮配方设计,基础饲粮组成及营养水平见表2。
每天观察鸡的生长发育、发病及死亡情况,记录死淘数进行采食量校正。于饲养试验第20天(鸡62日龄)21:00断料,期间自由饮水,次日08:00以重复为单位称取试验鸡和剩料重量,计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、饲料/增重(F/G)。
在受试鸡63日龄时, 每个重复选取3只接近平均体重的试验肉鸡,颈静脉采血10 mL 于15 mL试管中,倾斜静置待有血清析出时,4 000 r/min离心10 min,取上清液分装,-80 ℃保存待测。
血清钙、磷含量及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和碱性磷酸酶(ALP)活性采用美国Bio-Rad酶标仪进行测定,所用BECKMAN型分析试剂盒购自南京建成生物有限公司。
试鸡屠宰当天08:00采血后颈静脉放血处死,取两侧胫骨,剔除筋膜(保持骨膜和软骨帽完整无损),用生理盐水清洗,分装,-20 ℃低温冰箱冻存待测。
分别测定胫骨鲜重、长度、直径、折断力、骨密度、强度、脱脂重、粗灰分含量、钙含量和磷含量。采用Lunar Prodigy骨密度测量仪根据双能X线吸收法原理进行测定左侧胫骨的骨密度。胫骨强度测定参照Cromwell[10]提出的方法,通过INSTRON-4411型嫩度仪测定胫骨折断力来反映胫骨强度(参数设置:压力传感器的压力50 kgf,探头下压速度500 mm/min)。
| 表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % |
取右侧胫骨,用纱布包好、系紧、敲破后放入乙醚中浸泡96 h后取出,待乙醚完全挥发后,放入105 ℃烘箱中烘干至恒重,得到胫骨脱脂重。将脱脂胫骨粉碎,过40目筛后用于测定胫骨粗灰分、钙和磷含量。
胫骨粗灰分含量采用AOAC中的方法测定,胫骨钙含量采用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)络合滴定法测定,胫骨磷含量采用钼黄比色法测定。
通过代谢试验测定钙、磷和干物质的表观消化率和真消化率。选择120只63日龄体重接近的公鸡,随机分为9个组,每组6个重复,每个重复2只鸡。组1~8同饲养试验处理饲粮,组9为内源处理。代谢试验操作过程参照Sibbald[11]的方法,具体过程包括:适应期72 h,饲喂玉米-豆粕型基础饲粮(表2);预试期24 h,饲喂待测饲粮,禁饲排空48 h后强饲待测饲粮50 g,排泄物收集48 h。排泄物的收集过程中,每当待集粪袋中的排泄物超过粪袋容积的1/4时,将排泄物无损失地转入相应编号的培养皿中,待每只试验鸡完成了48 h的收集期后,将全部粪样转入65 ℃烘箱中鼓风干燥。烘干样在天平室回潮24 h后称重,粉碎过40目筛制成风干样品。分别测定钙、磷和干物质的表观消化率和真消化率。
以每重复为试验单元,采用SAS 17.0进行数据统计,应用ANOVA进行方差分析,应用Duncan氏法进行多重比较检验,统计显著水平为P<0.05,数据结果表示为“平均值±标准误”。
由表3可知,对25-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加70、90 μg/kg 25-OH-D3显著提高了肉鸡ADG、ADFI(P<0.05),显著降低了F/G(P<0.05),50 μg/kg 25-OH-D3显著提高了肉鸡ADG(P<0.05),显著降低了F/G(P<0.05),ADFI无显著变化(P>0.05)。其中90 μg/kg 25-OH-D3添加效果最佳。对1α-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加2.5、5.0 μg/kg 1α-OH-D3对肉鸡ADG、ADFI和F/G影响不显著(P>0.05),10.0 μg/kg添加量效果最佳,显著提高了AGD、ADFI(P<0.05)和降低了F/G(P<0.05)。
与正常钙磷饲粮对照组(钙0.8%,磷0.55%)相比,降低钙磷水平(钙0.7%、磷0.45%)或单独添加不同水平的25-OH-D3和1α-OH-D3代替维生素D3,肉鸡ADG和ADFI均无显著变化(P>0.05),添加90 μg/kg 25-OH-D3显著降低了F/G(P<0.05),其余处理F/G无显著变化(P>0.05)。
由表4可知,单独添加不同水平的25-OH-D3和1α-OH-D3可不同程度地影响42~63日龄肉鸡钙、磷表观消化率和真消化率,对干物质表观消化率和真消化率均无显著影响(P>0.05)。对25-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加70、90 μg/kg 25-OH-D3显著提高了钙表观消化率和真消化率(P<0.05),70 μg/kg 25-OH-D3显著提高了磷表观消化率(P<0.05)。对1α-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加2.5、5.0、10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了钙表观消化率和真消化率(P<0.05),5.0、10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了磷表观消化率和真消化率(P<0.05)。
| 表3 不同维生素D3对42~63日龄黄羽肉鸡生长性能的影响 Table 3 Effects of different vitamin D3 on growth performance of yellow-feathered broilers aged from 42 to 63 days |
与正常钙磷饲粮对照组(钙0.8%,磷0.55%)相比,降低钙磷水平(钙0.7%、磷0.45%)或单独添加不同水平的25-OH-D3和1α-OH-D3代替维生素D3,可不同程度地影响钙磷消化。添加70、90 μg/kg 25-OH-D3或2.5、5.0、10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了钙表观消化率和真消化率(P<0.05),添加10.0 μg/kg 1α-OH-D3使磷表观消化率和真消化率分别提高了33.64%和13.76%。
| 表4 不同维生素D3对42~63日龄黄羽肉鸡养分消化率的影响
Table 4 Effects of different vitamin D3 on nutrition digestibility of yellow-feathered broilers aged from 42 to 63 days %
|
由表5可知,单独添加不同水平的25-OH-D3和1α-OH-D3可不同程度地影响42~63日龄肉鸡血清钙、磷含量和钙磷比及TRAP活性,但对血清ALP活性无显著影响(P>0.05)。对25-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加50、70、90 μg/kg 25-OH-D3显著提高了血清磷含量(P<0.05)和降低了血清钙磷比(P<0.05),添加90 μg/kg 25-OH-D3显著降低了血清钙含量和TRAP活性(P<0.05)。对1α-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加2.5、5.0 μg/kg 1α-OH-D3的各处理血清生化指标无显著变化(P>0.05),添加10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了血清磷含量(P<0.05),显著降低了血清钙磷比和TRAP活性(P<0.05)。
与正常钙磷饲粮对照组(钙0.8%,磷0.55%)相比,添加90 μg/kg 25-OH-D3或10.0 μg/kg 1α-OH-D3使血磷含量显著提高了63.16%、20.18%(P<0.05),但对血清TRAP和ALP活性均无显著影响(P>0.05)。
由表6可知,对25-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加50、70、90 μg/kg 25-OH-D3对胫骨粗灰分率和钙含量无显著影响(P>0.05),添加90 μg/kg 25-OH-D3显著提高了胫骨粗灰分重和磷含量(P<0.05),显著降低了胫骨钙磷比(P<0.05)。对1α-OH-D3处理进行单因子分析结果显示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加2.5、5.0、10.0 μg/kg 1α-OH-D3对胫骨粗灰分率和钙、磷含量无显著影响(P>0.05),但添加10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了胫骨粗灰分重(P<0.05),显著降低了胫骨钙磷比(P<0.05)。
与正常钙磷饲粮对照组(钙0.8%,磷0.55%)相比,降低钙磷水平(钙0.7%,磷0.45%)或单独添加不同水平的25-OH-D3和1α-OH-D3代替维生素D3,可不同程度地影响胫骨粗灰分重、钙和磷含量。其中添加10.0 μg/kg 1α-OH-D3对胫骨粗灰分重、粗灰分率、钙和磷含量及钙磷比均无显著影响(P>0.05)。
| 表5 不同维生素D3对42~63日龄黄羽肉鸡血清生化指标的影响 Table 5 Effects of different vitamin D3 on serum biochemical parameters of yellow-feathered broilers aged from 42 to 63 days |
| 表6 不同维生素D3对42~63日龄黄羽肉鸡胫骨成分的影响 Table 6 Effects of different vitamin D3 on tibia composition of yellow-feathered broilers aged from 42 to 63 days |
如表7所示,与低钙磷饲粮对照组相比,添加不同水平的25-OH-D3或1α-OH-D3对肉鸡胫骨质量各指标均有不同程度提高,其中添加90 μg/kg 25-OH-D3或10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了胫骨鲜重、脱脂重、脱脂重指数、长度、折断力和骨密度(P<0.05)。与正常钙磷饲粮对照组相比,添加90 μg/kg 25-OH-D3或10.0 μg/kg 1α-OH-D3对以上胫骨指标均无显著影响(P>0.05),但可显著降低胫骨矿化度(P<0.05)。
本试验结果显示,与维生素D3空白对照组(低钙磷饲粮对照组)相比,饲粮中添加70、90 μg/kg 25-OH-D3或10.0 μg/kg 1α-OH-D3均可显著改善42~63日龄黄羽肉鸡的ADG、ADFI和F/G,50 μg/kg 25-OH-D3可显著改善ADG和F/G;与维生素D3正常组(正常钙磷饲粮对照组)相比,降低钙磷水平后除90 μg/kg 25-OH-D3显著降低了F/G外,单独添加25-OH-D3或1α-OH-D3,生长性能均无显著变化。
Edwards[5]研究表明,在磷缺乏型饲粮中添加1α-OH-D3可显著提高肉鸡的日增重。Snow等[12]研究结果显示,在玉米-豆粕型饲粮中添加1α-OH-D3可显著提高日增重以及日采食量。杨晓丹[13]研究表明,添加1α-OH-D3改善了1~21日龄肉鸡体增重、采食量和饲料转化率,并降低了死亡率。本试验结果与上述结果相似。
| 表7 不同维生素D3对42~63日龄黄羽肉鸡胫骨质量的影响
Table 7 Effects of different vitamin D3 on tibia quality of yellow-feathered broilers aged from 42 to 63 days
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在饲粮中直接添加25-OH-D3可以满足家禽对维生素D3的需要。Edwards[5]研究表明,在饲粮 中添加25-OH-D3能够显著降低料重比,对日增重和采食量的影响不稳定。本试验结果表现的趋势与上述试验结果一致,与维生素D3空白组相比,随着25-OH-D3添加量的提高,42~63日龄的ADG和ADFI提高,F/G降低。与维生素D3正常组相比,其生长性能的改善不明显。Morrissey等[14]研究表明,当在饲粮中添加100 μg/kg的25-OH-D3时会出现肾组织钙化,并且表现出日增重比对照组降低25%。本次试验中并没有出现25-OH-D3的毒副作用,表明在本试验条件下,90 μg/kg的25-OH-D3尚未达到中毒剂量。
本试验结果表明,与维生素D3空白对照组相比,饲粮中添加25-OH-D3或1α-OH-D3不同程度上提高了钙、磷的表观消化率和真消化率,其中70、90 μg/kg 25-OH-D3或2.5、5.0、10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了钙的表观消化率和真消化率,5.0、10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了磷的表观消化率和真消化率。1α-OH-D3或25-OH-D3代替维生素D3对干物质消化率的影响不显著,但可促进钙、磷消化率,这与Edwards[5]和贾洪阁[15]的研究结果一致。这说明1α-OH-D3或25-OH-D3主要是促进机体对钙、磷的吸收,但是对干物质的消化率没有显著影响。
本试验结果显示,与维生素D3空白对照组相比,单独添加不同水平的25-OH-D3或1α-OH-D3不同程度地提高了42~63日龄肉鸡血清磷含量及降低了钙磷比和TRAP活性,其中添加90 μg/kg 25-OH-D3或10.0 μg/kg 1α-OH-D3效果显著,但对血清ALP活性无显著影响。这与文献报道一致,韩进诚[16]研究表明在1~21日龄肉鸡饲粮(NPP 0.21%,总磷0.45%)和22~42日龄肉鸡饲粮(NPP 0.13%,总磷0.35%)中添加5.0 μg/kg的1α-OH-D3能显著提高血清中磷含量,但是会显著降低血浆钙含量。杨晓丹[13]研究表明,肉鸡(饲粮中NPP为0.21%)血浆中钙含量随着1α-OH-D3添加而显著降低,磷含量则显著提高。
但本试验结果也与部分文献结论不一致。Edwards[5]向饲喂玉米-豆粕型低磷饲粮的1~16日龄肉鸡的基础饲粮中添加1α-OH-D3,结果发现鸡血浆钙含量逐渐升高,添加量为10.0 μg/kg时到达平台期,且血浆磷含量呈显著提高。Haussler等[2]对3~4周龄白莱航公鸡进行4周试验,给饲粮维生素D3缺乏的公鸡口服45Ca,测定血浆和骨骼中45Ca含量,结果显示:饲粮添加1α-OH-D3或1,25-(OH)2-D3后,血浆和骨骼中45Ca活性显著提高,表明1α-OH-D3可促进Ca吸收和沉积。贾洪阁[15]研究发现,不同水平的25-OH-D3和维生素D3对血清无机磷、钙含量和ALP活性影响不显著。总体而言,本试验结果与大部分文献均表明,添加维生素D3、25-OH-D3或1α-OH-D3能够提高血清磷含量,促进磷的吸收,改善肉鸡磷营养。
Onyango等[17]指出,家禽饲粮中矿物质的平衡与否通常用骨骼发育状况来反映,而反映骨骼矿化的指标有骨粗灰分、折断力、骨重和骨密度等。本试验选用了物理特性参数,如胫骨重、胫骨指数、长度、折断力和骨密度等,胫骨成分如粗灰分、钙和磷含量等,来综合研究饲粮中添加不同形式的维生素D3对黄羽肉鸡骨骼发育状况的影响。试验结果表明,与维生素D3空白对照组相比,添加10.0 μg/kg 1α-OH-D3或90 μg/kg 25-OH-D3显著提高了胫骨灰分重、鲜重、脱脂重、脱脂重指数、长度、折断力、骨密度,这说明降低饲粮钙磷水平后,适量添加1α-OH-D3或25-OH-D3能够改善钙、磷的吸收和沉积,促进胫骨发育。这与杨晓丹[13]和杨宽民等[18]的研究结果相似。
大量研究结果表明维生素D3能够提高骨粗灰分含量[19, 20, 21]。韩进诚[16]研究显示,在1~21日龄肉鸡低磷饲粮中添加5.0 μg/kg 1α-OH-D3可提高胫骨灰分重量(P=0.011 7)和含量(P=0.022 3)、胫骨强度(P=0.103 4)及磷含量(P=0.096 3),但胫骨钙含量未受1α-OH-D3影响。Edwards[5]研究表明,在肉鸡饲粮(钙1.0%,磷0.7%)中添加1α-OH-D3或25-OH-D3后能显著提高胫骨粗灰分含量;以胫骨粗灰分含量为基础,25-OH-D3的生物效价是1α-OH-D3的22.32%。杨晓丹[13]试验结果表明,在NPP为0.29%的饲粮基础上添加1α-OH-D3后,胫骨指标随1α-OH-D3和NPP水平升高而升高;与负对照组相比,粗灰分重、粗灰分含量、磷的含量随1α-OH-D3添加水平的增加而增加,胫骨中钙的含量有提高的趋势。本试验中,与维生素D3空白对照组相比,添加90 μg/kg 25-OH-D3或10.0 μg/kg 1α-OH-D3显著提高了胫骨粗灰分重和钙磷比,90 μg/kg 25-OH-D3显著提高了胫骨磷含量。其余处理胫骨粗灰分重、粗灰分率、钙含量、磷含量与维生素D3空白对照组无显著差异,但均有随着1α-OH-D3或25-OH-D3水平增加而升高的趋势。
① 与低钙磷饲粮(钙0.7%,磷0.45%)相比,添加25-OH-D3一定程度上改善了42~63日龄黄羽肉鸡的生长性能、钙和磷消化率及胫骨发育,并提高了血清磷含量。其中,90 μg/kg的添加剂量效果最佳。
② 与低钙磷饲粮(钙0.7%,磷0.45%)相比,添加1α-OH-D3一定程度上改善了42~63日龄黄羽肉鸡的生长性能、钙和磷消化率及胫骨发育,并提高了血清磷含量。其中,10.0 μg/kg的添加剂量效果最佳。
③ 25-OH-D3或1α-OH-D3能够有效代替维生素D3。
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