脂类是含能量最高的营养素，能量是碳水化合物和蛋白质的2.25倍左右，并且热增耗低，消化能或代谢能转化为净能的效率比蛋白质和碳水化合物高5%~10%[1]。20世纪50年代国外已普遍将脂类用于家禽饲料中。我国畜牧业起步较晚，相对于发达国家还有一定的差距，如猪、鸡等的饲料转化率相对于国际先进水平要低0.3~0.6个百分点[2]。对于能量而言，我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)推荐的快大型肉鸡0~3周龄和4~6周龄能量需求分别为12.55和12.97 MJ/kg，只凭植物性饲料难以达到如此高的能量要求，需要添加油脂。以玉米-豆粕型饲粮为例，参考《中国饲料成分及营养价值表(2008)》，经计算前后期分别需要添加4.30%和4.70%菜籽油。但Pucci等[3]研究发现，肉鸡饲粮中豆油添加量超过2.33%时，粗脂肪(EE)利用率会降低，并且如果油脂用量超过了3%会使颗粒变软，质量下降[4]。许多研究指出幼龄畜禽内源脂肪酶分泌不足是制约其利用饲粮中脂肪的主要原因。Noy等[5]在肉鸡上的研究发现，十二指肠脂肪酶活性在4日龄时很低，21日龄时脂肪酶活性是4日龄时的20倍；Sell[6]研究发现，6日龄时肉鸡对脂肪的利用率为68.5%，而14日龄时上升到82.6%；即使在第8周，火鸡对脂肪利用率可从90.8%上升到96.5%。因此，在肉鸡饲粮中添加脂肪酶很有必要。目前在饲粮中添加脂肪酶的研究较少，并且结论也不尽相同，其在饲粮中的应用也远不及植酸酶等酶制剂广泛。为此，本试验旨在探讨在商品肉鸡饲粮降低能量的情况下添加脂肪酶对肉鸡生长性能及养分利用率的影响，为脂肪酶的合理使用提供试验依据。
脂肪酶由绵阳禾本生物工程有限公司提供，颗粒状，包被型，脂肪酶活性为5 000 U/g，添加量为200 g/t，可为每千克饲粮提供1 000 U脂肪酶；油脂为混合油，由隆生集团三联饲料有限公司提供。
试验选取660只1日龄健康科宝肉公鸡，随机分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复22只鸡。试验采用2×2+1因子完全随机设计，试验设计见表1。
 | 表1 试验设计 Table 1 Experimental design |
试验在四川农业大学动物营养研究所科研基地进行。试验动物笼养，自由采食和饮水，试验期42 d。基础饲粮参照我国鸡饲养标准(NY/T 33—2004)肉鸡营养需要配制，1~42 d均使用颗粒料，饲料调制温度为65～75 ℃。基础饲粮组成及营养水平见表2。
| 表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) % |
试验第21天和第42天20:00断料至次日08:00以重复为单位称重，分别计算各阶段体重(BW)、体增重(BWG)、采食量(FI)、料重比(F/G)、死亡率(mortality)和淘汰率(culling rate)。
试验第43天，以重复为单位选择1只接近平均体重的健康公鸡，采血后颈静脉放血处死，去毛，称重，为屠体重；屠体分离气管、食道、嗉囊、肠道(包括胰脏)、脾脏、胆囊、生殖器官、法氏囊和肌胃内容物后称重，为半净膛重；半净膛重去除腺胃、肌胃、心、肝、腹脂(包括腹部板油和肌胃周围的脂肪)、头颈和脚，为全净膛重。分离腹脂、腿(去除腿部皮肤及皮下脂肪)和胸肌(沿着胸骨脊将附着于胸骨脊两侧的肌肉剥离)分别称重。计算公式如下：
屠宰率(%)=(屠体重/宰前活重)×100； 半净膛率(%)=(半净膛重/宰前活重)×100； 全净膛率(%)=(全净膛重/宰前活重)×100； 腹脂率(%)=腹脂重/(全净膛重+腹脂重)×100； 腿肌率(%)=(两侧腿重/全净膛重)×100； 胸肌率(%)=(两侧胸肌重/全净膛重)×100。于试验第43天生长试验结束后，从各处理中选择6只接近均重的鸡，缝合集粪盖，单笼饲养，自由饮水，预试3 d后采用强饲法进行代谢试验，试验鸡饥饿排空48 h后每只强饲60 g相应处理的饲粮，准确收集48 h排泄物于-20 ℃冰箱保存。粪样于60~65 ℃烘干至恒重，粉碎过40目筛于-20 ℃冰箱保存待测。
测定饲料及粪样中的能量、干物质(DM)和EE含量，并计算表观代谢能(AME)及DM、EE和能量的表观利用率，测定方法参照张丽英[7]的方法。计算公式如下：
某养分表观利用率(%)=(该养分食入量-粪尿中该养分含量)/该养分食入量×100。每个处理根据各阶段FI及饲粮营养水平计算粗蛋白质、AME、钙和有效磷实际摄入量。
每个处理以1 000只肉鸡计算，根据BW和FI计算1~42 d的总增重、饲料成本、收入和利润。
收入=总增重(kg)×售价(元/kg)； 饲料成本=[1~21 d的总FI(kg)×1~21 d饲料价格(元/kg)]+[22~42 d的总FI×22~42 d饲料价格(元/kg)]； 利润=收入-饲料成本。用SPSS 16.0软件统计分析：1)采用单因素ANOVA分析比较各处理之间的差异；2)采用GLM程序中的双因素方差分析，分析脂肪酶、能量水平及其互作效应。用LSD法进行多重比较，数据以平均值±标准误(mean±SE)表示，P<0.05表示差异显著,P<0.10表示存在差异显著的趋势。
饲粮添加脂肪酶对肉鸡生长性能的影响见表3。
| 表3 饲粮添加脂肪酶对肉鸡生长性能的影响
Table 3 Effects of dietary lipase on growth performance of broilers
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BW和BWG：不同处理肉鸡各阶段BW和BWG无显著差异(P>0.05)。但与PC相比，NC2 42 d BW、22~42 d和1~42 d BWG均有降低趋势(P<0.10)。双因素分析显示，脂肪酶有提高42 d BW、22~42 d和1~42 d BWG的趋势(P<0.10)，与饲粮能量水平无显著的交互作用(P>0.05)。
FI和F/G：不同处理肉鸡各阶段FI无显著差异(P>0.05)。与PC相比，NC2 1~21 d及1~42 d F/G显著提高(P<0.05)，22~42 d F/G有提高趋势(P<0.10)，NC1 22~42 d F/G有提高趋势(P<0.10)；与负对照相比，NC2+脂肪酶有降低1~21 d F/G的趋势(P<0.10)。双因素分析显示，能量进一步降低有提高1~21 d F/G的趋势(P<0.10)；脂肪酶显著降低了22~42 d和1~42 d F/G(P<0.05)，有降低1~21 d F/G的趋势(P<0.10)。
死亡率和淘汰率：与PC相比，NC1和NC2各阶段死亡率及淘汰率均无显著变化(P>0.05)，NC1+脂肪酶和NC2+脂肪酶对各阶段死亡率及淘汰率也无显著影响(P>0.05)。双因素分析显示，能量进一步降低有提高1~42 d淘汰率的趋势(P<0.10)。
由表4可知，与PC相比，NC1显著降低了肉鸡屠宰率及全净膛率(P<0.05)；与NC1相比，NC1+脂肪酶有提高半净膛率的趋势(P<0.10)。
| 表4 饲粮添加脂肪酶对肉鸡屠宰性能的影响
Table 4 Effects of dietary lipase on slaughter performance of broilers %
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双因素分析表明，能量水平或脂肪酶对肉鸡屠宰性能无显著影响(P>0.05)；能量水平和脂肪酶对屠宰率、半净膛率的交互作用显著(P<0.05)。
由表5可知，与PC相比，NC2 AME显著降低(P<0.05)；与负对照相比，NC1+脂肪酶和NC2+脂肪酶对EE表观利用率的提高趋于显著且有高于PC的趋势(P<0.10)。
| 表5 饲粮添加脂肪酶对肉鸡AME及养分表观利用率的影响 Table 5 Effects of dietary lipase on AME and nutrient apparent availability of broilers |
双因素分析表明，脂肪酶显著提高了EE表观利用率(P<0.05)，对DM表观利用率有提高趋势(P<0.10)；能量与脂肪酶对养分表观利用率的交互作用不显著(P>0.05)。
饲粮添加脂肪酶对肉鸡养分摄入量的影响见表6。不同处理各阶段各养分摄入量差异较小。
| 表6 饲粮添加脂肪酶对肉鸡养分摄入量的影响
Table 6 Effects of dietary lipase on nutrient intakes of broilers
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由表7可知，与PC相比，NC1和NC2利润降低；在NC1和NC2中添加脂肪酶利润提高，且高于PC，其中NC2+脂肪酶利润最高。
| 表7 肉鸡经济效益(按1 000只/处理进行计算)
Table 7 Economic efficiency of broilers (calculated on 1 000 birds per treatment)
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吕秋凤等[8]在肉鸡上的研究发现，饲粮能量(1~21 d 11.91 MJ/kg，22~42 d 12.54 MJ/kg)降低0.29 MJ/kg，对生长性能影响不显著，但各阶段BW、BWG有所降低，F/G有所升高。王书全[9]将爱拔益加(AA)肉鸡2个阶段饲粮代谢能(1~21 d 12.25 MJ/kg，22~42 d 12.96 MJ/kg)均分别降低0.36、0.40 MJ/kg，也有类似的结果。本试验在PC饲粮代谢能(1~21 d 12.13 MJ/kg，22~42 d 12.76 MJ/kg)基础上，1~21 d及22~42 d代谢能均分别降低0.21或0.42 MJ/kg对肉鸡各阶段BW、BWG、FI均无显著影响，但与PC相比，NC2 42 d BW、22~42 d和1~42 d BWG有降低的趋势，NC2 1~21 d及1~42 d F/G显著提高，NC1和NC2 22~42 d F/G有提高的趋势，这与前人的研究结果[10, 11, 12]类似。家禽具有为能而食的本能，可以通过调节FI来满足能量需求，FI通常随饲粮能量的降低而升高[1]，但本试验中不同能量水平之间FI无显著差异，这与汤建平等[13]研究结果一致。Al-Batshan等[14]研究发现肉仔鸡FI随能量水平的升高而显著下降，这可能是由于该研究中能量水平分别为12.55、13.31、14.23 MJ/kg，最高能量水平与最低能量水平相差1.68 MJ/kg，大于本试验中能量差值，本试验中能量差值较小导致了各能量水平之间各阶段养分的摄入量差异较小，这可能是造成各阶段BW及BWG无显著差异的原因。
有学者认为饲粮能量水平显著影响肉鸡体内脂肪的沉积，通常饲粮代谢能提高会使腹脂率提高[15]。汤建平[16]在28~42 d肉鸡上的研究表明，当饲粮能量水平从12.33 MJ/kg提高到12.75 MJ/kg时对公母鸡全净膛率、胸肌率、腿肌率、鸡翅率及腹脂率均没有显著影响。本试验发现，饲粮代谢能降低对半净膛率、腿肌率、胸肌率、腹脂率没有显著影响，与汤建平[16]报道一致，但NC1显著降低了屠宰率和全净膛率。范春鹤[17]将肉鸡21~42 d饲粮能量从13.57 MJ/kg降低到12.31 MJ/kg时，显著降低了42 d屠宰率，全净膛率也有一定的降低。本试验结果与范春鹤[17]报道类似。顾宪红等[18]在22~42 d肉鸡上的研究发现，饲粮能量分别为11.75、12.59、13.40 MJ/kg时对肉鸡屠宰率、半净膛率、全净膛率、腹脂率、左腿肌率没有显著影响，但随能量的提高，右胸肌率和皮脂厚显著降低。试验结果不一致的原因可是与营养水平的设置和动物的生长阶段有关。
饲粮中三酰甘油的消化吸收需要脂肪酶、辅脂酶、胆盐、磷脂及肠道等的联合协作，这些因素中任何一个或几个受到限制都可能会导致脂肪的利用率降低[19, 20]。家禽在出壳时胰腺分泌的脂肪酶不足是造成脂肪利用率低的重要原因[21, 22]。
本试验中，与负对照相比，在降低能量水平的NC1和NC2饲粮中添加脂肪酶对肉鸡FI无显著影响，但改善了肉鸡各阶段BW、BWG，并显著降低了22~42 d和1~42 d F/G，有降低1~21 d F/G的趋势；代谢试验亦表明脂肪酶显著提高了EE表观利用率，对DM表观利用率有提高的趋势。Polin等[23]在1~21 d莱航公鸡饲粮中添加0.10%猪胰脂肪酶，杨新文等[24]在南方鲇饲粮中添加0.10%、0.30%的微生物脂肪酶(活性为20 000 U/g)，Brenes等[25]在肉鸡饲粮中添加100 000 U/kg的微生物脂肪酶均显著提高了EE利用率。Al-marzooqi等[26]在肉鸡饲粮中添加0.714%的2种胰脂肪酶，均显著提高了EE利用率和AME；李芳林等[27]在肉鸡饲粮中添加0.02%的微生物脂肪酶，显著提高了肉鸡39~42日龄AME；刘桂武[28]在哺乳母猪及断奶仔猪饲粮中分别添加0.02%、0.03%的微生物脂肪酶(活性为20 000 U/g)，结果发现哺乳母猪及断奶仔猪的总能消化率、EE消化率均显著提高，并且0.03%脂肪酶组显著提高了断奶仔猪的DM消化率。本试验结果与前人的报道类似。从养分摄入量看，加酶对各养分的摄入量无显著影响，说明外源脂肪酶的添加提高了养分的利用率，从而改善了各阶段BW、BWG和F/G。
关于饲粮中添加脂肪酶对家禽生长性能及养分利用率的影响也有不一致的报道。Kermanshahi[29]在肉鸡饲粮中分别添加0、50、100、200、400 U/g的液体Pseudomonas sp.脂肪酶，显著降低了EE利用率、FI和BWG，显著提高了F/G，并且21日龄十二指肠及空肠的混合内容物的脂肪酶活性显著降低，可能是由于该脂肪酶的添加使得三酰甘油彻底水解为游离脂肪酸(由于是液体脂肪酶，所以这种作用甚至在饲料中就已经开始)，降低了肠道pH，从而导致脂肪酶的活性降低和胆盐的沉淀。Meng等[30]在肉鸡菜籽油及牛脂的小麦型饲粮(菜籽油及牛脂添加量均为5%)中添加100 U/kg的脂肪酶，结果发现对5~18日龄BW、FI、F/G及EE表观利用率和回肠消化率影响均不显著。Slominski等[31]在肉仔鸡的小麦型饲粮中添加100 U/kg饲粮的脂肪酶，结果发现脂肪酶的添加对4~18日龄FI、BWG、F/G、EE表观利用率及回肠消化率均无显著影响。推测其原因，可能是由于这2个研究中脂肪酶添加量为100 U/kg，而本试验中脂肪酶添加量为1 000 U/kg，且试验时间较短。此外添加于饲粮中的脂肪酶必须经过胃肠道的酸性环境和内源酶的水解，再到达作用位点，并且需要在作用位点pH范围内才会具有较高的活性[32]。不同的脂肪酶，其最适温度、pH也不同，本试验中所使用的脂肪酶经桂涛等[33]测定，最适pH为7.5，当pH为3.0~11.0时还具有60%以上的相对酶活，其耐热性良好，85 ℃制粒后还具有85%的相对酶活。并且是经过包被的，这更有利于通过胃的酸性环境和制粒时的高温。因此这可能也是导致本研究结果与他人研究结果不一致的原因之一。Lichovnikova等[34]在21~72周龄褐壳蛋鸡小麦型饲粮(粗蛋白质含量为17.53%，代谢能为11.59 MJ/kg，没有外源添加油脂)中添加300 U/kg饲粮的脂肪酶，结果发现其对21~72周龄褐壳蛋鸡的产蛋率、蛋重、平均每只鸡每天的产蛋重、FI、料蛋比影响均不显著。这可能是由于21~72周龄蛋鸡的消化道已经发育成熟，所以添加脂肪酶的效果不明显，而且脂肪酶的添加量也较低。
许多研究指出，肉鸡1~21日龄时消化器官和消化酶发育不完善，影响其早期生长[5, 35, 36]。因此建议在肉鸡早期饲粮中添加外源酶，以提高生长性能。本试验发现，肉鸡饲粮中添加脂肪酶对生长性能的改善作用后期要优于前期，可能是由于前期由于肉鸡BW较小，FI较低，脂肪酶的作用有限。此外，张铁鹰等[37]研究发现，肉鸡1~49日龄的空肠食糜脂肪酶活性(U/g鲜重)呈三次曲线关系，在14日龄达到峰值后，到42日龄一直降低，并且腺胃和肌胃pH从7～42日龄一直升高。空肠是脂肪吸收的主要场所，因此建议在肉鸡中后期饲粮中添加酶制剂可能更有利于BW的增加，并且腺胃和肌胃pH的升高有利于外源脂肪酶活性在消化道内的稳定。
肉鸡通常是被分割后进行消费的，因此屠宰性能对肉鸡生产有重要意义。本试验结果显示，饲粮中添加脂肪酶对肉鸡屠宰性能无显著影响，但有提高半净膛率的趋势。目前，关于脂肪酶对肉鸡屠宰性能影响的报道较少。Brenes等[26]在科宝肉鸡基础饲粮中添加0.5 g/kg的脂肪酶(活性为100 000 U/g)，结果发现脂肪酶的添加对腹脂率(10-2 g/g BW)的影响不显著，加酶不加酶都为0.69%。李芳林等[28]在肉仔鸡饲粮中添加脂肪酶，结果发现对42日龄时腹脂率的影响不显著。本试验结果与前人类似。半净膛重是在屠体基础上去除肠道等后的重量，有报道指出饲粮中添加酶制剂可显著降低肉鸡十二指肠、空肠、回肠及盲肠相对重量[38]，因此半净膛率提高可能是由于脂肪酶的添加提高了养分利用率，从而降低了肠道相对重量。
有学者认为酶制剂在低营养水平饲粮中效果更好[39]。本实验室倪志勇等[40]在肉鸡上的研究也发现复合酶(含淀粉酶、β-葡聚糖酶、蛋白酶、纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶及糖化酶)在饲粮低营养水平时作用效果更大；刘雅石[41]在肉鸭上有关植酸酶的研究发现，在低营养水平饲粮中添加植酸酶对肉鸭生长性能的改善效果要优于高营养水平饲粮。邹佳玲[42]研究发现,在肉鸡低代谢能饲粮中添加非淀粉多糖复合酶对生长性能的改善效果优于正常能量饲粮。本试验结果显示，能量与脂肪酶无显著交互作用，但相对于负对照，NC2+脂肪酶后对AME、能量及EE表观利用率和各阶段BW、BWG及F/G的改善程度均优于NC1+脂肪酶，这与前人的研究结果一致。但也有不一致的报道。唐琼[43]在肉鸭4种能量水平的饲粮(1~14日龄：12.13、11.76、11.38、11.00 MJ/kg，15~42日龄:10.92、10.59、10.25、9.92 MJ/kg)中添加1 860 U/kg的木聚糖酶，结果发现能量水平与木聚糖酶对生长性能无显著互作。乔楠[44]通过麦麸调节营养水平，在猪高(70~132日龄&133~172日龄：14.02&13.93 MJ/kg)、中(70~132日龄&133~172日龄：13.60&13.51 MJ/kg)、低(70~132日龄&133~172日龄：13.31&13.31 MJ/kg)3种能量水平饲粮中添加木聚糖酶，结果发现中能水平饲粮中添加木聚糖酶对消化能的改善效果优于高能和低能 (中能、低能、高能饲粮加酶后消化能分别提高0.42、0.33、0.21 MJ/kg)。酶的催化作用是底物与酶的互作，因此实际应用时要考虑二者的比例。
① 饲粮能量(前期12.13 MJ/kg，后期12.76 MJ/kg)分别降低210和420 kJ/kg后，可不同程度降低肉鸡后期及全期BW和BWG，提高各阶段F/G。
② 在低能量饲粮中添加1 000 U/kg脂肪酶能够显著改善后期及全期F/G，从而改善肉鸡BW和BWG，且NC2+脂肪酶的效果优于NC1+脂肪酶。
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