以鱼粉、大豆浓缩蛋白为主要蛋白质源，高筋面粉为主要糖源，鱼油、豆油为主要脂肪源配制半纯化基础饲料，其组成及营养水平见表1。分别在基础饲料中添加200、400、600、800、1 000 mg/kg的β-葡聚糖(啤酒酵母提取物，主链为β-1,3结构，纯度>90.0%)，配制5种试验饲料。原料经粉碎过40目筛，按配方准确称取并逐级混匀后，用SLX-80型双螺杆挤压机制成粒径为2.0 mm的颗粒饲料，55 ℃烘干，自然冷却后放入密封袋中，置于-20 ℃冰箱中保存备用。

试验所用花鲈购自福建诏安县英港育苗场。试验鱼先在室外水泥池中暂养至8 g左右，每天投喂商品饲料2次。养殖试验在广东省农业科学院动物科学研究所水产实验室室内循环养殖系统的养殖桶(体积约为300 L)内进行。选取体重为(8.35±0.17) g的花鲈720尾，随机分成6组，每组4个重复，每个重复30尾鱼。试验开始前用基础饲料驯养1周，待其稳定后，分别投喂基础饲料和5种试验饲料，记作G0(对照组)、G200、G400、G600、G800和G1000组。投饲量为体重的4%～6%，每天投喂2次(08:30和18:00)，饲养6周。试验期间水温为28.0~30.9 ℃，盐度1‰，溶氧量>7 mg/L，pH在7.5~8.0，氨氮<0.1 mg/L。每周换水2次，每次换水量为1/3。

饲养试验结束后禁食24 h，称重和统计存活率。从每个重复随机取8尾鱼，以1 mL注射器自尾静脉取血，血液采集后静置4 h，离心制备血清，分装后将血清置于-80 ℃冰箱中保存待测；采血后解剖，摘取肝脏样品置于-80 ℃冰箱中保存待测。每个重复再随机抽取3尾鱼保存于-80 ℃冰箱中，用于常规营养成分分析。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 鱼粉 Fish meal 40.0 大豆浓缩蛋白 Soybean protein concentrate 19.0 高筋面粉 Strong flour 29.0 鱼油 Fish oil 3.0 大豆油 Soybean oil 3.0 卵磷脂 Lecithin 2.0 维生素C单磷酸酯 Ascorbyl-monophosphate 0.5 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 0.5 海藻酸钠 Sodium alginate 0.5 甜菜碱 Betaine 0.5 氯化胆碱 Choline chloride 1.0 矿物质预混料 Mineral premix1) 0.5 维生素预混料 Vitamin premix2) 0.5 合计 Total 100.0 营养水平 Nutrient levels 粗蛋白质 Crude protein 48.38 粗脂肪 Crude lipid 10.49 粗灰分 Ash 10.16 水分 Moisture 3.69 1)每千克维生素预混料含有One kilogram of vitamin premix contained the following：VA 32 300 000 IU，VD 1 600 000 IU，VE 16 g，VK3 4 g，VB1 4 g，VB2 8 g，VB6 4.8 g，VB12 0.016 g，烟酸 nicotinic acid 28 g，泛酸钙 calcium pantothenate 16 g，叶酸 folic acid 1.285 g，生物素 biotin 0.064 g，肌醇 inositol 40 g，水分 moisture≤10%。 2)每千克矿物质预混料含有One kilogram of mineral premix contained the following：Ca 230 g，K 36 g，Mg 9 g，Fe 10 g，Zn 8 g，Mn 1.9 g，Cu 1.5 g，Co 0.25 g，I 0.032 g，Se 0.05 g，水分 moisture≤10%。

表1 基础饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) %

饲养试验结束后，每个重复选14尾鱼，采用氯化铵进行氨氮应激试验。向水体(体积约300 L)中加入氯化铵溶液，非离子氨浓度达到3.29 mg/L(非离子氨浓度的计算方法参考文献^[11])，同时调节pH为7.76，应激期间水体pH用水质监测仪测定。观察鱼发病和死亡情况，统计死亡尾数，计算96 h内的累计死亡率和相对保护率，计算公式如下：

采用SPSS 17.0软件进行数据分析和统计，先对数据作单因素方差分析(one-way ANOVA)，若处理间有显著差异，再作Duncan氏法多重比较，P<0.05表示差异显著。

由表2可知，饲料中添加β-葡聚糖后花鲈的FBW、WGR、SGR显著升高(P<0.05)，FCR显著降低(P<0.05)，其最大值和最小值均出现在G400组。各组之间的SR、CF、HSI差异不显著(P>0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 饲料中添加β-葡聚糖对花鲈生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary β-glucan on growth performance of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus) 项目Items 组别Groups G0 G200 G400 G600 G800 G1000 初均重 IBW/g 8.32±0.25 8.46±0.08 8.29±0.12 8.32±0.17 8.34±0.13 8.41±0.24 末均重 FBW/g 30.85±1.59a 33.75±1.06b 34.07±0.66b 33.71±0.70b 33.18±1.32b 33.06±1.19b 增重率 WGR/% 271.02±19.80a 298.88±13.53b 311.15±2.05b 305.33±2.11b 297.60±14.62b 293.16±5.89b 特定生长率 SGR/(%/d) 3.12±0.13a 3.29±0.08b 3.37±0.01b 3.33±0.01b 3.29±0.09b 3.26±0.04b 饲料系数 FCR 1.19±0.06b 1.07±0.09a 1.05±0.01a 1.06±0.01a 1.11±0.06b 1.10±0.02a 存活率 SR/% 98.34±1.92 100.00±0.00 99.17±1.67 100.00±0.00 98.34±1.92 97.50±3.19 肥满度 CF/(g/cm3) 1.94±0.09 1.90±0.05 1.93±0.03 1.88±0.06 1.89±0.04 1.91±0.05 肝体指数 HSI/% 0.89±0.12 0.79±0.10 0.78±0.07 0.78±0.08 0.83±0.04 0.84±0.10 同行数据上标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。 Values in the same row with different small letter superscripts are significantly different (P<0.05). The same as below.

表2 饲料中添加β-葡聚糖对花鲈生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary β-glucan on growth performance of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus)

采用抛物线与折线模型相结合分析饲料中β-葡聚糖添加量(y)与花鲈WGR(x)之间的关系，获得方程y=-0.030 8x+323.41 (R²=0.990 5)与y=-0.000 2x²+0.178 3x+271.02 (R²=1.000 0)。由方程得出，花鲈获得最大WGR时，饲料中β-葡聚糖的添加量为415.10 mg/kg(图1)。

图1(Figure 1)

Fig. 1

图1 饲料中β-葡聚糖添加量与花鲈增重率的回归关系 Fig.1 Regression relationship between dietary β-glucan supplemental level and WGR of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus)

由表3可知，饲料中添加β-葡聚糖对花鲈的全鱼粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和水分含量均没有显著影响(P>0.05)。

由表4可知，各组血清生化指标均无显著差异(P>0.05)。当添加量为400 mg/kg时，TP含量最高，LDL含量最低；当添加量为600 mg/kg时，ALT活性和TG含量最低。饲料中添加β-葡聚糖有升高TP含量及降低CHO和UN含量的趋势。

氨氮应激96 h内各组花鲈的累计死亡率如表5所示。与对照组相比，G400和G600组的累计死亡率均显著降低(P<0.05)，相对保护率分别为60.0%和58.1%。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 饲料中添加β-葡聚糖对花鲈体成分的影响(湿重基础) Table 3 Effects of dietary β-glucan on body composition of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus) (wet weight basis) % 项目Items 组别Groups G0 G200 G400 G600 G800 G1000 粗蛋白质 Crude protein 23.54±1.89 23.33±1.23 22.92±0.91 22.53±0.53 22.38±0.94 22.15±1.06 粗脂肪 Crude lipid 3.18±0.84 3.67±1.02 3.60±0.71 3.25±0.25 3.65±1.31 3.35±0.38 粗灰分 Ash 4.88±0.31 4.71±0.05 4.97±0.17 4.76±0.27 4.74±0.34 4.75±0.12 水分 Moisture 65.30±2.91 66.00±1.90 66.90±1.10 67.91±0.88 67.20±1.39 67.10±0.98

表3 饲料中添加β-葡聚糖对花鲈体成分的影响(湿重基础) Table 3 Effects of dietary β-glucan on body composition of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus) (wet weight basis) %

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 饲料中添加β-葡聚糖对花鲈血清生化指标的影响 Table 4 Effects of dietary β-glucan on serum biochemical indices of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus) 项目Items 组别Groups G0 G200 G400 G600 G800 G1000 低密度脂蛋白 LDL/(mmol/L) 0.09±0.09 0.04±0.01 0.04±0.01 0.06±0.02 0.06±0.02 0.04±0.02 高密度脂蛋白 HDL/(mmol/L) 1.15±0.31 1.19±0.12 1.19±0.21 1.26±0.08 1.27±0.11 1.26±0.16 胆固醇 CHO/(mmol/L) 4.17±0.34 3.82±0.37 3.92±0.31 3.86±0.15 4.14±0.45 4.07±0.26 甘油三酯 TG/(mmol/L) 4.33±0.27 4.11±0.37 4.45±0.24 3.96±0.25 4.31±0.50 4.41±0.50 尿素氮 UN/(mmol/L) 1.68±1.18 1.43±0.25 1.55±0.47 1.53±0.10 1.38±0.54 1.40±0.14 总蛋白 TP/(mmol/L) 40.30±2.60 42.80±1.25 42.97±1.36 40.90±2.65 40.43±3.44 42.07±4.29 谷丙转氨酶 ALT/(U/L) 20.66±1.54 18.57±3.24 17.98±3.09 14.96±3.03 16.51±3.90 21.24±16.18

表4 饲料中添加β-葡聚糖对花鲈血清生化指标的影响 Table 4 Effects of dietary β-glucan on serum biochemical indices of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus)

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 氨氮应激96 h内花鲈的累积死亡率和相对保护率 Table 5 Cumulative mortality rate and relative protection ratio of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus) under ammonia-nitrogen stress for 96 h % 项目Items 组别Groups G0 G200 G400 G600 G800 G1000 应激鱼尾数 Stressed fish No. 14 14 14 14 14 14 累计死亡率 Cumulative mortality rate 62.5±14.7b 44.6±13.5ab 25.0±24.4a 26.2±8.2a 50.0±18.9ab 46.4±13.7ab 相对保护率 Relative protection ratio 28.6 60.0 58.1 20.0 25.7 累积死亡率经过反正弦转换后进行单因素方差分析。 Cumulative mortality rate was processed by one-way ANOVA after arc-sine transformation.

表5 氨氮应激96 h内花鲈的累积死亡率和相对保护率 Table 5 Cumulative mortality rate and relative protection ratio of Japanese seabass (Lateolabrax japonicus) under ammonia-nitrogen stress for 96 h %

研究表明，饲料中添加一定量的β-葡聚糖能够提高凡纳滨对虾的生长性能^{[11, 12, 13]}，合理利用鱼粉与葡聚糖的协同作用可以显著提高对虾的饲料效率，降低饲料成本^[14]。Ai等^[15]在大黄鱼(Pseudosciaena crocea)上也有相似的报道。本试验结果显示，饲料中添加β-葡聚糖能够显著提高花鲈的WGR、SGR并降低FCR，适宜添加量为415.10 mg/kg，其促生长作用与以上学者的研究结果一致。目前，关于β-葡聚糖对水产动物的促生长已有较多报道，但其作用机理仍未有明确结论。一般认为，β-葡聚糖不具有直接的营养作用，其促生长作用是与其免疫调节作用紧密相关的。β-葡聚糖通过增强机体的免疫屏障，减少机体为支持免疫应答而消耗的营养物质，降低免疫应答中产物对采食和生长的抑制作用，从而促进动物的生长^[16]。张健^[17]亦认为，β-葡聚糖对凡纳滨对虾生长的促进作用可能是来源于对虾对疾病抵抗能力的增强。李富东等^[18]的研究结果显示，饲料中添加0.50%的β-葡聚糖在试验前期有提高鲤的生长性能，而在中后期有降低其生长性能的趋势，这表明β-葡聚糖随着投喂时间的延长可能会降低鲤的生长。另有研究表明，硅藻来源的β-葡聚糖组大西洋鳕仔鱼存活率显著高于酵母来源的β-葡聚糖组，并由此认为β-葡聚糖的来源会影响其功效的发挥^[19]，原因可能是不同来源的β-葡聚糖在化学结构上的差异对其功效产生了影响^[20]。关于投喂时间、投喂方式和β-葡聚糖的来源等对花鲈生长性能的影响以及关于该类物质促生长的作用机理等都有待于进一步的研究。

鱼类血液指标被广泛地用来评价鱼类的健康状况、营养状况及对环境的适应状况，是重要的生理、病理和毒理学指标^{[21, 22]}。血清中HDL能够降低炎症状态下脂肪细胞的分泌，促进细胞内CHO的流出^[23]。血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量与心血管疾病的发生存在紧密的正相关。CHO是体内重要的脂类物质，它不仅参与形成细胞膜，而且是合成胆汁酸、维生素D以及甾体激素的原料，CHO含量的高低反映了脂类吸收状况，同时可以反映肝脏脂肪代谢状况^[24]。在高胆固醇血症病人上的研究显示，与对照组相比，食用酵母来源β-葡聚糖后，在7周内血浆总CHO含量降低8%，在此基础上第8周又降低6%，差异显著，同时可以显著升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量^[25]。不同程度的脂肪肝与肝内TG积聚的量有关。徐文^[26]研究显示，高TG增加脂肪肝的患病率，而单纯的高CHO升高对脂肪肝的产生没有多大影响，脂肪肝与TG、CHO等之间的关系还有待进一步的研究。本试验中，各添加组血清CHO含量均低于对照组，血清TG含量除400 mg/kg组外，其余各添加组均低于对照组，这与赵红霞等^[6]的研究结果不一致，可能是花鲈所消化的营养物质通过代谢促进了生长。血清TP含量反映鱼体的营养与代谢状况，也间接反映了机体的免疫水平的高低；血清UN为衡量机体蛋白质分解代谢的指标。本试验研究表明，饲料中添加适量β-葡聚糖在一定程度升高花鲈体内血清TP含量，降低UN含量，说明饲料中添加β-葡聚糖能够促进机体蛋白质的合成，进而提高花鲈对蛋白质的消化吸收。ALT是广泛存在于动物体内的重要的转氨酶，参与蛋白质代谢，是肝细胞受损最灵敏指标之一。长期严重脂肪肝可因肝内代谢紊乱或脂变的肝细胞压迫肝窦引起肝细胞缺血坏死，导致肝脏ALT活性升高，诱发肝纤维化及肝硬化^[27]。周传朋等^[28]研究表明，投喂0.1%~0.2%寡糖-中草药复合物降低了鱼体血清中ATL活性。贺国龙等^[29]研究亦表明，添加0.5%的酵母细胞壁免疫多糖显著降低了血清中ALT活性。本试验结果表明，饲料中添加适量β-葡聚糖可在一定程度上降低血清ALT活性，但各组之间无显著差异。关于β-葡聚糖对血清ALT活性的作用机理还有待进一步研究。

在集约化养殖过程中，养殖动物粪便及残饵的累积使外界氨氮浓度增加，破坏了细胞膜离子平衡，其自身氨氮排泄也受到阻碍而在体内积累，渗通调节、主动运输遭破坏，造成机体损伤^[30]。长期严重急性氨中毒会导致养殖鱼类生长性能下降，摄食率降低^[31]，免疫功能下降^[32]，甚至死亡^[33]。本试验结果显示，饲料中添加β-葡聚糖能降低花鲈对氨氮应激的累计死亡率，其中400和600 mg/kg β-葡聚糖添加组花鲈的累计死亡率显著低于对照组，但2个更高剂量(800和1 000 mg/kg)β-葡聚糖添加组的累计死亡率虽然也低于对照组，但与400和600 mg/kg β-葡聚糖添加组相比均有所升高。这表明，β-葡聚糖对花鲈抗氨氮应激能力的提升与添加量有关，这一结果与β-葡聚糖在鲤鱼^[34]、凡纳滨对虾^[35]和中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)^[36]上得出的结论一致，说明饲料中适量添加β-葡聚糖对于提高花鲈抗氨氮应激能力具有重要的意义。