2. 河南牧业经济学院, 郑州 450003
2. Henan University of Animal Husbandry and Economy, Zhengzhou 450003, China
随着选育技术和营养水平的不断改进，肉鸡生长速度越来越快，但是肉鸡代谢机能和生理机能并没有随着生长速度的加快和体形的增大而得到加强。限制肉鸡的早期生长是保证鸡体器官均衡发育的有效措施[1, 2, 3]。许多肉鸡限饲研究表明：限饲降低肉鸡腹脂沉积[4]、腹水综合症[5]、猝死综合征[6]和腿病[7]等代谢性疾病的发病率，且适当的早期限饲能够诱发肉鸡补偿性生长[8]。由于限饲后补偿生长的作用，肉仔鸡在出栏时可达到与自由采食组相同的体重[9]。早期限饲诱发肉鸡补偿性生长可能改善了肠道功能结构。家禽对营养物质消化吸收的主要部位在小肠，肠绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度是衡量小肠消化吸收功能的重要指标[10]。
限饲是肉鸡生产中的常规饲养技术[11]，大量试验证明了肉鸡限饲是必要的和可行的[12, 13, 14, 15, 16]。但目前对三黄肉鸡的限饲研究几乎是空白。三黄鸡以喙黄、脚黄、皮黄，皮薄骨细，肉质细嫩，肉味香浓而久负盛名，具有较高的经济价值和开发前景[17]，本试验旨在研究不同能量限制水平对三黄鸡补偿生长及肠道结构的影响，为科学的三黄鸡养殖方案提供参考依据，也为生产实践提供指导。
1 材料与方法 1.1 试验动物与设计试验一：限饲试验(15~30日龄)，选用1日龄快速型三黄肉仔鸡(母苗、黄羽)200只，1~14日龄让其自由采食，15日龄选取体重相近的72只鸡，随机分配到3个组，自由采食组(对照组)、15%能量限制组(试验1组)和30%能量限制组(试验2组)，单笼饲养，每组24只，每只鸡为1个重复，在限饲15 d(30日龄)后称重，每组挑选接近平均体重的7只鸡进行屠宰，取样。
试验二：补偿生长试验(31~65日龄)，限饲试验结束后，试验1、2组剩余鸡只恢复自由采食，单笼饲养，开展补偿生长研究；3个组分别在补偿生长期14 d(44日龄)和35 d(65日龄)时进行称重，统计饲料消耗，并且每个阶段每组挑选接近平均体重的6只鸡屠宰，取样。
1.2 试验饲粮饲粮配制参照我国《鸡饲养标准》(2004)，限 饲阶段对照组饲粮参照黄羽肉小鸡标准进行配制，自由采食，每天称量采食量，并以此计算试验1、2组第2天的饲喂量；而试验1、2组配制的饲粮，能量水平与对照组饲粮一致，调整试验饲粮其他养分水平，通过控制试验组采食量(以对照组采食量为基础，分别限制15%和30％的采食量)，保证试验1、2组摄入的能量比对照组分别低15%和30%外，摄入的其他各养分量均与对照组相同。补偿生长阶段试验饲粮参照黄羽肉中鸡标准进行配制。试验饲粮组成及营养水平见表1。
 | 表1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis) |
本试验在河南农业大学动物实验房进行，试验鸡均采用单笼饲养，饲喂粉料，日喂2次，能量限制1、2组的饲喂量是自由采食组的85%和70%，自由饮水，每周带鸡消毒2次，定时清扫卫生，控制好其正常生长所需温度和湿度，每日23 h光照，并做好日常记录工作(各组鸡只采食、饮水、精神状态等)，按照肉鸡常规免疫程序进行免疫。
1.4 测定指标及方法 1.4.1 生长性能指标的测定每天定时称料，记录每天每只鸡的采食量。分别在30(限饲15 d)、44(补偿生长14 d)、65日龄(补偿生长35 d)禁食8~12 h后，早上空腹称重，根据初重、末重、每天采食量，计算各个阶段鸡只平均日增重(average daily gain,ADG)、总采食量(total feed intake,TFI)、料重比。
1.4.2 肠道组织样品的测定限饲阶段和补偿生长阶段挑选一定数量鸡屠宰后，分别截取十二指肠、空肠、回肠肠道2 cm，置于10%中性福尔马林溶液中固定，固定时间24 h以上，固定好的肠段经脱水、包埋制作石蜡切片，进行苏木精-伊红(HE)染色[18]，制作十二指肠、空肠、回肠的组织切片，检测肠道结构(肠壁厚度、绒毛高度、隐窝深度)。从十二指肠、空肠、回肠组织切片中选取完整、伸展良好的肠壁、绒毛和隐窝，运用莱卡Qwin软件，每个切片取3个视野，每个视野至少取10根绒毛和20个隐窝进行测量，分别在测微尺显微镜下测定各肠段肠壁厚度、绒毛高度、隐窝深度，并显微拍照和记录数值。
肠壁厚度：浆膜到黏膜下层距离。
绒毛高度：游离于肠腔内的部分，自绒毛基部至顶端作一垂线，此距离即为绒毛长度。
隐窝深度：自隐窝底部至肠壁固有层作一垂线，此距离即为隐窝深度。
绒毛高度/隐窝深度(V/C)：根据绒毛高度和隐窝深度计算得来。
1.5 数据分析试验数据采用SPSS 17.0软件中one-way ANOVA进行统计分析，采用Duncan氏法多重比较进行差异显著性检验。结果以平均值±标准差(mean±SD)表示，以P<0.05作为差异显著性判断标准。
2 结 果 2.1 能量限制对三黄鸡生长性能的影响由表2可见，对三黄鸡进行15 d的限饲后，试验1、2组末重、平均日增重均显著低于对照组(P<0.05)，且试验2组平均日增重显著低于试验1组(P<0.05)；对照组料重比与试验组差异不显著(P>0.05)。
| 表2 能量限制对三黄鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of feed restriction on performance of Sanhuang chickens (n=24) |
由表3可见，补偿生长14 d后，在试验组补偿生长起始阶段初重显著低于对照组情况下(P<0.05)，末重、总采食量均差异不显著(P>0.05)，试验2组平均日增重显著高于对照组(P<0.05)，料重比显著低于对照组(P<0.05)，试验1组平均日增重、料重比与对照组相比均差异不显著(P>0.05)；限饲-补偿生长14 d阶段，试验组末重、平均日增重、料重比与对照组相比均差异不显著(P>0.05)，总采食量显著低于对照组(P<0.05)，而2 个试验组之间差异不显著(P>0.05)。
| 表3 能量限制对三黄鸡前期补偿生长性能的影响 Table 3 Effects of feed restriction on earlier stage compensatory growth phase of Sanhuang chickens (n=17) |
由表4可见，补偿生长35 d后，试验组平均日增重高于对照组，但差异不显著(P>0.05)，3个组之间总采食量差异不显著(P>0.05)，而试验2组料重比显著低于试验1组(P<0.05)。限饲-补偿 生长35 d阶段，3个组之间的末重、平均日增重、料重比均差异不显著(P>0.05)，但试验2组料重比最低。
| 表4 能量限制对三黄鸡全期补偿生长性能的影响 Table 4 Effects of compensatory growth phase on the whole period performance of Sanhuang chickens (n=11) |
由表5可见，能量限饲至30日龄后，试验组与对照组相比，十二指肠、空肠、回肠肠壁厚度均无显著差异(P>0.05)，试验组十二指肠、空肠肠壁厚度与对照组相比有增厚的趋势；补偿生长至44日龄后，试验组与对照组十二指肠、空肠、回肠肠壁 厚度均无显著差异(P>0.05)，试验组十二指肠肠壁厚度与对照组相比有降低的趋势；补偿生长至65日龄后，试验组十二指肠肠壁厚度与对照组相比有降低的趋势(P>0.05)，各个组空肠肠壁厚度也无显著差异(P>0.05)，对照组回肠肠壁厚度低于试验2组(P<0.05)。
| 表5 能量限制对三黄鸡肠壁厚度的影响 Table 5 Effects of feed restriction on intestine wall thickness in Sanhuang chickens |
由表6可见，能量限饲至30日龄后，试验组与对照组相比，空肠、回肠绒毛高度有增高趋势(P>0.05)，试验2组十二指肠绒毛高度有高于其他2组的趋势(P>0.05)；补偿生长至44日龄后，试验组与对照组相比，空肠、回肠绒毛高度有增高趋势(P>0.05)，试验2组十二指肠绒毛高度有高于其他2组的趋势(P>0.05)；补偿生长至65日龄后，试验组十二指肠绒毛高度低于试验组，空肠、回肠绒毛高度高于对照组，均差异不显著(P>0.05)。
| 表6 能量限制对三黄鸡绒毛高度的影响 Table 6 Effects of feed restriction on villus height in Sanhuang chickens |
由表7可见，能量限饲至30日龄后，试验组十二指肠隐窝深度比对照组大，试验1组空肠隐窝深度小于对照组，试验组回肠隐窝深度比对照组小，但均差异不显著(P>0.05)；补偿生长至44日龄后，试验2组十二指肠、回肠隐窝深度比对照组和试验1组小(P>0.05)，试验1组空肠隐窝深度比对照组和试验2组大(P>0.05)；补偿生长至65日龄后，试验组与对照组相比，十二指肠、空肠、回肠隐窝深度均差异不显著(P>0.05)。
| 表7 能量限制对三黄鸡隐窝深度的影响 Table 7 Effects of feed restriction on crypt depth in Sanhuang chickens |
由表8可见，能量限饲至30日龄后，试验1组十二指肠、空肠绒毛高度/隐窝深度高于对照组和试验2组，试验组回肠绒毛高度/隐窝深度高于对照组，均差异不显著(P>0.05)；补偿生长至44日龄后，试验1组十二指肠绒毛高度/隐窝深度低于对照组和试验2组，试验2组空肠绒毛高度/隐窝深度高于对照组和试验1组，试验组回肠绒毛高度/隐窝深度高于对照组，均差异不显著(P>0.05)；补偿生长至65日龄后，试验组十二指肠绒毛高度/隐窝深度低于对照组，试验组空肠、回肠绒毛高度/隐窝深度高于对照组，均差异不显著(P>0.05)。
| 表8 能量限制对三黄鸡绒毛高度/隐窝深度的影响 Table 8 Effects of feed restriction on villus height/crypt depth in Sanhuang chickens |
能量限制及补偿生长效应在三黄鸡生长性能和肠道结构上的报道相对较少。本试验结果显示，试验组限饲至30日龄后，末重、平均日增重均显著低于对照组，但料重比差异不显著。王佳伟等[19]对4~8周龄哈博德母鸡进行30%能量限制研究表明，肉鸡8周龄的体重、平均日增重显著低于自由采食组，陈继兰等[20]对石歧黄鸡的研究表明，降低饲粮代谢能水平(13.2~11.3 MJ/kg)，显著降低试验鸡的平均日增重，Susbilla等[21]研究表明，限饲自由采食饲料量的50%，降低了39日龄体重，但对饲料转化效率没有影响；本试验与前人试验结果基本一致。但是莫棣华[22]的研究认为，饲粮能量浓度对“广黄”鸡的增重没有影响。
3.2 能量限制对三黄鸡补偿生长性能的影响大多数研究者建议，通过限饲来诱发肉鸡的补偿性生长应该在生长早期进行，一方面因为肉鸡早期生长速度较快，另一方面是由于肉鸡生长周期短，在早期进行限饲可使肉鸡有足够的补偿生长时间。本试验补偿生长14 d后试验2组料重比显著低于对照组和试验1组，整个补偿生长35 d阶段，试验2组料重比低于对照组，差异不显著，这些都证实肉仔鸡能否得到完全补偿生长与限饲程度、补偿生长持续时间等有很大关联。Deaton[23]研究表明，7到14日龄肉鸡饲喂自由采食组90%的采食量，41日龄体重不受影响，整个试验期的生长速率也不受影响。苏瑛等[24]研究限饲对爱拔益加肉鸡生产性能的影响，对照组全程自由采食，试验1组4~10日龄饲喂75％自由采食量，试验2和试验3组在10~16日龄分别饲喂75％和65％自由采食量，结果表明，试验3组49日龄体重显著高于对照组和试验2组，限饲组1~49日龄生长速率显著优于对照组。本试验与前人试验均表明，适当的限饲可以使肉鸡后期获得足够的补偿生长效应。而Lippens等[25]研究表明当肉仔鸡早期采食量限饲为对照的90%，限饲时间为4 d时，可产生完全的补偿生长，但提高限饲强度，限饲时间超过8 d时，肉仔鸡无法恢复正常体重，说明限饲强度和持续时间影响补偿生长效果。
3.3 能量限制对三黄鸡肠道结构的影响家禽对营养物质消化吸收的主要部位在小肠，因此肠道的发育情况直接影响到家禽机体的消化功能，小肠的正常结构是营养物质消化与吸收的基础。十二指肠介于胃和空肠之间，胰管与胆总管均开口于十二指肠，它既接受胃液，又接受胰液和胆汁的注入，对于消化功能十分重要。空肠的消化和吸收力强，蠕动快，肠内常呈排空状态，回肠是3个肠段中肠壁最薄的部位，营养物质在回肠很容易通过浓度依赖性扩散被吸收[26]。肠的肠绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度是衡量小肠消化吸收功能的重要指标[10]。小肠黏膜表面形成绒毛，绒毛内有小肠腺，但没有十二指肠腺[18]。小肠液是由十二指肠腺和肠腺分泌的一种碱性的液体，小肠液分泌量较大，可稀释小肠内的营养物质，使小肠内容物的渗透压与血浆相近，有利于营养物质的吸收，碱性小肠液特别是十二指肠腺的分泌物，对小肠黏膜抵御胃酸的侵蚀有重要保护作用[27]。
3.3.1 能量限制对三黄鸡肠壁厚度的影响关于能量限制对肠壁厚度的影响几乎未见报道。能量限制与饲粮抗原一样，对肉鸡肠道造成应激反应，限饲强度越高，对鸡只肠道造成的应激越大，试验结果显示，限饲至30日龄后，试验组鸡只十二指肠、空肠肠壁厚度与对照组相比较厚，可能是由于限饲造成的肠道应激引起胰液的大量分泌，代偿性引起肠壁增生增厚[27]。补偿生长后，试验组十二指肠肠壁厚度低于对照组，补偿生长至65日龄时，回肠肠壁厚度显著高于对照组，目前未见相关文献报道，引起这些变化的具体原因还需进一步验证。
3.3.2 能量限制对三黄鸡绒毛高度的影响小肠绒毛(intestinal villus)是由肠上皮和固有层共同向肠腔突出形成的细小突起，长约0.35~1.00 mm，可使肠腔表面积扩大约10倍，绒毛多呈梓状、叶状或指状等。肠绒毛的数量、长度和形态结构很大程度上决定消化道的消化吸收功能[28]。小肠黏膜表面皱壁、绒毛和上皮细胞游离面的微绒毛可显著扩大小肠的内表面积，促进小肠对养分的消化和吸收[29]。本试验结果表明，限饲阶段试验组空肠、回肠绒毛高度与对照组相比有增高的趋势，这在一定程度上提高了消化吸收能力；补偿生长后，试验组空肠、回肠绒毛高度高于对照组，这在一定程度提高了空肠、回肠对营养物质的吸收，促进了补偿生长效应。小肠绒毛高度的增加有助于提高动物机体的消化吸收能力[30]。绒毛变短时，肠上皮细胞数减少，对营养物质的消化吸收能力降低，肠绒毛长度增加，消化吸收功能增强，腹泻率降低，生长发育加快[31]。
3.3.3 能量限制对三黄鸡隐窝深度的影响小肠绒毛高度和隐窝深度可以反映肠道上皮组织的发育程度及其机能[32]。隐窝深度反映了肠上皮细胞的生成率。正常情况下，隐窝基部的细胞不断地分化并向绒毛的端部迁移，形成具有吸收能力的肠上皮细胞，以补充绒毛正常脱落的肠上皮，如果此过程减慢，则隐窝变浅。隐窝变浅表明肠上皮细胞成熟率上升，分泌功能增强[33]。本试验结果显示，限饲后十二指肠隐窝深度变大，空肠、回肠隐窝深度变小，这可能与小肠不同肠段结构不同有关，补偿生长后，试验组十二指肠、空肠、回肠隐窝深度与对照组差异不显著，但有变小的趋势，综合分析比较表明，能量限饲在一定程度上使鸡只肠道隐窝深度变浅，可能促进了肠液的分泌，提高营养物质的消化吸收。
3.3.4 能量限制对三黄鸡绒毛高度/隐窝深度的影响绒毛高度/隐窝深度是反映肠黏膜形态是否正常的重要指标，综合反映了小肠的功能状态。绒毛高度/隐窝深度上升，则黏膜功能改善，消化吸收功能增强，生长发育加快；绒毛高度/隐窝深度下降，表明消化吸收功能下降，黏膜受损，消化吸收功能降低[34]。本试验结果表明，对三黄鸡限饲至30日龄后，试验1组十二指肠、空肠和试验1、2组回肠的绒毛高度/隐窝深度增加，补偿生长至44日龄后，试验2组空肠和试验1、2回肠的绒毛高度/隐窝深度增加，继续补偿生长至65日龄后，空肠和回肠的绒毛高度/隐窝深度增加，从而增强肉鸡消化吸收功能，致使肉鸡限饲后获得了较好的补偿生长效应。
4 结 论① 能量限制显著降低了三黄鸡限饲期生长性能，且经过35 d的补偿生长，表现出完全补偿生长效应。
② 能量限制在一定程度上改善了三黄鸡十二指肠、空肠、回肠的肠道形态结构(肠壁厚度、绒毛高度、隐窝深度)。
③ 本试验结果表明，对动物进行限饲，恢复后期营养水平会使其表现出一定的补偿生长效应，这与限饲程度、营养物质性质、恢复生长时间等都有关联。
致谢：感谢河南农业大学牧医工程学院王志祥教授对该文稿所提出的宝贵意见。
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