作为家禽饲粮的第二限制性氨基酸,赖氨酸是“理想蛋白质”的参比氨基酸[1],参与体蛋白质合成、促进生长发育。饲粮中合理的赖氨酸供给量对于确定其他氨基酸的供给量极为重要。京红1号蛋鸡是我国自主培育的优良褐壳蛋鸡配套系,具有适应性强、产蛋量高、耗料低等特点,已成为我国主推品种,然而关于其育雏期赖氨酸需要量的研究报道较少。因此,研究京红1号蛋鸡母雏饲粮中赖氨酸供给量对该品种蛋鸡的健康养殖和标准化生产具有重要意义。当前,关于京红1号蛋鸡氨基酸需要量的研究集中于产蛋高峰期[2-3]和蛋雏鸡的蛋氨酸需要量[4-5]。不同营养标准对蛋雏鸡生长期的阶段划分不同,NRC (1994) 将其分为1~6周龄、7~12周龄和13~18周龄;我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004) 将蛋雏鸡生长期分为1~8周龄和9~18周龄;加拿大《实用家禽营养》将其分成1~6周龄、7~10周龄、11~16周龄和17~18周龄;《海兰褐蛋鸡饲养手册》则将蛋鸡生长期分为1~6周龄、7~12周龄和13~15周龄;罗曼褐壳蛋鸡的营养标准将生长期分为1~4周龄、5~8周龄和9~15周龄。不可否认,蛋雏鸡生长阶段划分越细,饲粮营养更易符合雏鸡的营养需要。此外,各种标准对褐壳蛋鸡赖氨酸的推荐量不尽相同,NRC (1994) 推荐 (1~6周龄) 为0.80%,《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004) 推荐 (1~8周龄) 为1.00%,加拿大《实用家禽营养》推荐 (7~10周龄) 为0.90%,《海兰褐蛋鸡饲养手册》推荐 (1~6周龄) 为1.10%[6]。盲目引用标准配制饲粮可能会造成营养素浪费,影响蛋鸡日后产蛋性能;合理的营养素供给量可提高营养效率、减少排泄,有助于降低饲养成本,提高生产效益[7]。研究和更新蛋雏鸡饲粮赖氨酸营养供给量,可更好适应京红1号后备母鸡的生长发育需要,为产蛋期的持续高产做准备。因此,本试验研究了饲粮中赖氨酸水平 (0.70%~1.26%) 对京红1号蛋鸡生长性能、血液指标、免疫器官和小肠发育等的影响,探讨5~8周龄京红1号蛋鸡赖氨酸需要量,以期为京红1号蛋鸡全价饲粮的科学配制提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料L-赖氨酸盐酸盐,纯度98.5%,由Evonik Degussa公司提供。
1.2 试验设计与试验饲粮选取360只体重相近、健康的4周龄末京红1号蛋鸡母雏,组间、重复间试鸡体重[(265.70±3.04) g]无显著差异 (P > 0.05)。采用单因素试验设计,试鸡随机分成5个组,每组6个重复,每个重复12只鸡。试验饲粮参照NRC (1994)[8]和《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)[9],结合《京红蛋鸡饲养手册》配制,饲粮中通过添加晶体赖氨酸使赖氨酸水平分别为0.70%、0.84%、0.98%、1.12%和1.26%(表 1)。所有饲粮采取多点取样各500 g置于4 ℃保存,用于测定粗蛋白质、钙、磷、蛋氨酸、赖氨酸和苏氨酸含量。
采用2层笼养,自由采食和饮水。每笼饲养1个重复试鸡 (12只),每天07:00、13:00和17:00各投料1次,每天监测鸡群健康状况,记录死淘鸡数。光照周期为8 h (白天):16 h (夜晚),常规免疫,试验期4周。
1.4 检测指标和方法 1.4.1 生长性能试验开始前试鸡逐只称重,此外分别在饲养试验的第8天、第15天和第22天06:00空腹,将试鸡以重复为单位称重,每周末20:00统计当周耗料量,计算平均日采食量 (average daily feed intake, ADFI);饲养试验期末,所有试鸡逐只称体重,计算群体均匀度 (community evenness,CE)、平均日增重 (average daily gain, ADG) 和料重比 (feed/gain, F/G)。
CE (%)=(每个重复平均体重在±10%范围内的鸡数/每个重复鸡数)×100。
1.4.2 体格发育、消化器官及免疫器官指数于饲养试验的第4周末,每重复随机选取2只试鸡,称重,颈静脉放血致死。称屠体重、全净膛重、心脏和肝脏重,计算心脏和肝脏指数。用游标卡尺测量胫长。
心脏 (肝脏) 指数 (%)=[心脏 (肝脏) 重量/活体重量]×100。
取胰腺称重,分别取十二指肠、空肠及回肠,自然伸直用直尺测量长度,去除内容物称重。
取胸腺、脾脏、法氏囊,剔除表面结缔组织,称重,计算胸腺、脾脏和法氏囊指数。
免疫器官指数 (%)=(免疫器官重量/活体重量)×100。
1.4.3 血液指标于饲养试验的第4周末,每重复随机选取2只试鸡,颈静脉采血10 mL,其中6 mL室温倾斜静置,3 500 r/min离心15 min,取血清;另4 mL注入肝素钠抗凝管,3 500 r/min离心10 min,取血浆。血浆和血清样品均置于-20 ℃冰箱保存。
血清总蛋白 (TP)、白蛋白 (ALB)、尿素氮 (UN)、尿酸 (UA) 含量和碱性磷酸酶 (ALP) 活性采用全自动生化分析仪测定,试剂盒购于上海科华生物工程股份有限公司。委托北京北方生物技术研究所,采用激素放射性免疫 (RIA) 法测定血浆中生长激素 (GH) 含量,试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.4.4 饲粮养分含量试验饲粮中粗蛋白质含量参照GB/T 6432—1994测定,钙含量参照GB/T 13885—2003测定,磷含量参照GB/T 6437—2002测定,蛋氨酸、赖氨酸和苏氨酸含量参照GB/T 18246—2000测定。
1.5 统计分析结果以“平均值±标准差”表示,数据利用SPSS 19.0中的one-way ANOVA程序分析,采用LSD多重比较进行差异显著性检验,以P < 0.05为差异显著性标准。通过回归中的曲线估计拟合二次曲线,获得显著性二次效应时,再按Wasserman等[10]推荐方法求出获得最大二次效应时的赖氨酸水平,该值乘以95%即为适宜赖氨酸需要量。
2 结果与分析 2.1 饲粮赖氨酸水平对5~8周龄京红1号蛋鸡生长性能的影响由表 2可知,饲粮赖氨酸水平对试验期内蛋鸡F/G的影响无显著差异 (P > 0.05),其中0.98%赖氨酸组F/G最低;蛋鸡ADG和8周龄体重随饲粮赖氨酸水平的升高均先升高再降低,其中0.84%赖氨酸组的ADG最高,显著高于1.26%赖氨酸组 (P < 0.05),0.84%赖氨酸组8周龄体重最高,显著高于其他组 (P < 0.05);蛋鸡ADFI随饲粮赖氨酸水平的升高先降低后升高,0.98%和1.12%赖氨酸组显著低于0.70%赖氨酸组 (P < 0.05);各组CE随饲粮赖氨酸水平的升高呈二次曲线 (先升高再降低) 趋势,0.84%、0.98%和1.12%赖氨酸组的CE显著高于1.26%赖氨酸组 (P < 0.05)。综上,饲粮赖氨酸水平在0.84%~1.12%,京红1号母雏鸡的生长性能较好。
由表 3可知,随着饲粮赖氨酸水平的升高,各组全净膛重呈先升高再降低的二次曲线变化趋势,0.98%和1.12%赖氨酸组显著高于0.70%和1.26%赖氨酸组 (P < 0.05);屠体重和心脏指数先升高再降低,0.84%、0.98%和1.12%赖氨酸组均显著高于1.26%赖氨酸组 (P < 0.05);0.98%赖氨酸组肝脏指数和胫长均显著高于其他组 (P < 0.05)。综上,饲粮赖氨酸水平显著影响屠体重、全净膛重、心脏指数、肝脏指数及胫长;0.84%和0.98%赖氨酸组的京红1号蛋鸡的体格发育状况优于其他组。
由表 4可知,饲粮赖氨酸水平对蛋鸡胰腺重、十二指肠长、空肠重和回肠长的影响无显著差异 (P > 0.05),其中0.84%赖氨酸组胰腺重最高,0.98%赖氨酸组空肠重和回肠长最高。饲粮赖氨酸水平显著影响十二指肠重、空肠长和回肠重 (P < 0.05),其中0.84%、0.98%和1.12%赖氨酸组十二指肠重显著高于其他组 (P < 0.05);0.98%和1.12%赖氨酸组的空肠长显著高于0.70%和1.26%赖氨酸组 (P < 0.05);0.84%和0.98%赖氨酸组的回肠重显著高于0.70%赖氨酸组 (P < 0.05)。综上,从消化器官发育角度看,饲粮适宜赖氨酸水平为0.84%~1.12%。
由表 5可知,饲粮赖氨酸水平显著影响蛋鸡的胸腺指数和法氏囊指数 (P<0.05),对脾脏指数的影响差异不显著 (P > 0.05);0.84%赖氨酸组胸腺指数显著高于0.98%、1.12%和1.26%赖氨酸组 (P<0.05);0.84%、0.98%和1.12%赖氨酸组法氏囊指数显著高于其他组 (P<0.05);0.84%赖氨酸组的脾脏指数最高。结果提示,当以免疫器官指数为衡量标准时,京红1号蛋鸡饲粮赖氨酸适宜水平为0.84%~1.12%。
由表 6可知,饲粮赖氨酸水平显著影响血清生化指标和血浆生长激素含量 (P < 0.05)。0.84%、0.98%和1.12%赖氨酸组血清TP和ALB含量显著高于0.70%和1.26%赖氨酸组 (P < 0.05);0.98%赖氨酸组血清UN含量最低,显著低于1.26%赖氨酸组 (P < 0.05);0.84%和0.98%赖氨酸组血清UA含量显著低于其他组 (P < 0.05);0.84%赖氨酸组ALP活性显著高于0.70%赖氨酸组 (P < 0.05),其他组间无显著差异 (P > 0.05)。0.84%赖氨酸组血浆GH含量显著高于0.70%、1.12%和1.26%赖氨酸组 (P < 0.05)。结果提示京红1号蛋鸡饲粮赖氨酸适宜水平为0.84%~1.12%。
由表 7可知,根据8周龄蛋鸡体重、CE、全净膛重、屠体重、心脏指数、肝脏指数、胫长、十二指肠重和血清UA含量等指标,各自拟合二次曲线,得出适宜饲粮赖氨酸水平分别为0.906%、0.888%、0.931%、0.928%、0.889%、0.902%、0.902%、1.071%和0.958%。综上,5~8周龄京红1号蛋鸡饲粮中最佳赖氨酸水平为0.931%。
赖氨酸是家禽必需氨基酸之一,饲粮中适宜水平的赖氨酸可提高家禽的ADG、降低ADFI,促进动物生长[11];本试验结果支持上述观点,饲粮赖氨酸水平显著影响京红1号蛋鸡母雏8周龄体重,这也与王信喜等[12]的研究结果一致。适当提高饲粮赖氨酸水平可改善北京鸭在生长前期和后期的体增重[13];本试验结果显示,适宜赖氨酸水平 (0.84%) 可使8周龄京红1号蛋鸡获得较大体重和ADG。前期CE的高低直接影响蛋禽产蛋期的生产性能[14];胴体发育和胫长等可用于评价家禽发育,蛋鸡体重和胫长、胸宽同步,鸡只可适时开产和增加产蛋性能[15]。本研究结果显示,5~8周龄京红1号蛋鸡饲粮中补充0.84%~1.12%赖氨酸可获得满意的CE、全净膛重、屠体重、心脏指数、肝脏指数和胫长,这为蛋鸡的适时开产和产蛋期较优产蛋性能的维持提供了保证。
3.2 饲粮赖氨酸水平对8周龄京红1号蛋鸡消化器官和免疫器官发育的影响氨基酸是构成机体免疫系统的基本物质,与免疫器官发育关系密切。胸腺、脾脏和法氏囊等的指数可用于评价雏鸡的免疫状态[16-17]。饲粮中适宜的赖氨酸水平可显著提高蛋鸡的胸腺指数和脾脏指数[18],本研究结果与之相似,蛋鸡饲粮中0.84%~1.12%赖氨酸可获得较高的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数。作为家禽第二限制性氨基酸,赖氨酸在饲粮中含量不当会影响其他氨基酸的利用,从而影响机体免疫功能,但目前针对赖氨酸对家禽免疫功能的研究,还仅局限在免疫器官指数等表观指标上,需进行深入研究。
肠道是营养物质消化吸收的主要部位,小肠是家禽消化、吸收营养素的主要器官,胰腺分泌消化酶辅助动物消化吸收,因此消化器官重量和胰腺可用于评价动物消化系统的发育。本课题组前期研究证实,饲粮氨基酸水平显著影响蛋雏鸡的胰腺、十二指肠和空肠的发育[19]。本试验中,饲粮赖氨酸水平在0.84%~1.12%时均获得较高的十二指肠重和空肠重,这与生长性能最佳的赖氨酸水平范围一致,因消化道重量、长度增加,增加了营养物质在小肠内的停留时间,促进了动物消化吸收营养物质,进而改善生长性能。
3.3 饲粮赖氨酸水平对京红1号蛋鸡血液指标的影响血清生化指标是反映动物体内代谢和某些器官机能状态的重要指标。血清TP具有维持血管内正常胶体渗透压和酸碱度,运输多种代谢物,调节被运输物质的生理作用等功能,并与机体的免疫功能有密切关系,通过TP可间接了解机体的营养状况;ALB除维持渗透压外,还可提供能量和修复组织[20],TP和ALB含量反映机体蛋白质的合成能力。本试验结果表明,饲粮赖氨酸水平显著影响血清TP和ALB含量,适量赖氨酸可显著提高8周龄京红1号蛋鸡血清TP和ALB含量,这与前人的研究结果[11]一致,说明饲粮中适宜赖氨酸水平可促进机体蛋白质合成,促进生长。
血清UN、UA都是禽类体内蛋白质和氨基酸代谢的终产物,含量高低间接表明了禽类对蛋白质和氨基酸物质的吸收、利用情况。血清中UN、UA含量高,说明饲粮氨基酸组成不平衡、分解代谢加速;两者的含量越低,氮的利用效率越高,机体的蛋白质合成增加[21]。饲粮中适宜的赖氨酸水平可降低蛋雏鸭血清UA、UN含量[11],与本试验的结果一致,饲粮赖氨酸水平显著影响8周龄京红1号蛋鸡血清中UN、UA含量,且0.84%和0.98%赖氨酸组的生长性能明显优于其他组,说明此时氨基酸平衡较好,利于体内蛋白质的合成。
ALP主要由成骨细胞产生,血液中ALP活性增强利于提高动物增重[11]。本试验结果显示:0.84%赖氨酸组的血浆ALP活性显著高于0.70%赖氨酸组,对应0.84%赖氨酸组的体重、ADG高于其他组,说明适宜的饲粮赖氨酸水平可促进雏禽生长。GH是机体内重要的内分泌激素,在胚胎期和生长早期的血浆GH含量较高,可促进蛋白质合成和氨基酸转运[22]。本试验中,随饲粮赖氨酸水平的提高,血浆GH含量先升高再降低,与前人研究结果[11]一致,说明饲粮中适宜赖氨酸水平可促进动物机体GH的分泌,使5~8周龄京红1号蛋鸡处于良好的生长状态。
4 结论饲粮赖氨酸水平对5~8周龄京红1号蛋鸡的生长性能、胴体发育和免疫器官有较大影响。通过对生长性能、体格发育等指标拟合二次曲线,推荐此阶段京红1号蛋鸡母雏的饲粮赖氨酸需要量为0.93%。
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