2. 中国农业科学院饲料研究所, 北京 100081
2. Institute of Feed Research, Chinese Academy of Agriculture Science, Beijing 100081, China
水貂是经济价值较高的珍贵毛皮动物,维生素D和钙、磷的摄入对水貂骨骼代谢、生长性能起着十分重要的作用,是提高水貂生长性能和毛皮品质的重要因素。维生素D在钙、磷吸收的过程中十分关键,具有决定性的调节作用。而钙、磷是维持毛皮动物代谢的重要元素,也是维持骨骼正常代谢不可或缺的常量元素。饲粮中钙、磷和维生素D水平过高容易导致毛皮动物代谢疾病或产生毒副作用,过低则不能满足毛皮动物生长发育的需求,精准确定水貂饲粮中维生素D及钙的水平对水貂生产实践具有重要的指导意义。Bassett等[1]指出水貂在骨骼发育时,每天每只维生素D的添加剂量不少于40 IU。Leoschke等[2]指出水貂饲粮每千克干物质中维生素D含量应不少于400 IU。Hilleman[3]研究表明,从7月到打皮时期,水貂饲粮干物质中维生素D含量为10 000、25 000和40 000 IU/kg时毛皮品质没有显著差异。Helgebostad等[4]研究表明,饲粮干物质中维生素D含量在5 000 IU/kg时对水貂没有毒性作用,当维生素D含量超过100 000 IU/kg时,在短时间内即出现毒性作用,Perel’dik等[5]得出了同样的结论。Mertin等[6]测定了水貂养殖场中饲粮钙水平,发现饲粮钙水平为3.4%时对水貂的生长性能没有负面影响。Basset等[7]研究表明,在饲粮维生素D含量为820 IU/kg、钙磷比在0.75~1.70内时,水貂对鲜饲料中钙的需要量为0.3%,Rimeslatten[8]却在同等条件下得出钙的需要量为0.4%~1.0%。国内对水貂营养的研究以及养殖场实际配料时,饲粮钙水平不一,在2.30%~3.91%不等[9-11]。饲粮中钙磷比影响水貂对钙、磷2种元素的吸收。Jøergensen[12]指出水貂每天需摄入100 IU维生素D,饲粮适宜的钙磷比为0.75~1.70。中华人民共和国行业标准《水貂配合饲粮》推荐钙磷比为1~2[13]。从提高育成期水貂的生长性能和营养物质消化率的角度考虑,刘帅等[14]建议饲粮中磷水平为1.4%~1.8%,钙磷比为1.5~2.0。目前国内外在水貂维生素D和钙、磷需要方面做了大量研究,但试验数据年份比较早,且研究中维生素D水平范围比较大。近些年,由于进化及驯化的影响,水貂体重差异较大,对维生素D和钙的需要量也不同。因此,探究水貂饲粮精准的维生素D和钙水平显得尤为重要。本试验通过固定饲粮钙磷比,配制不同维生素D、钙水平的饲粮,研究饲粮不同维生素D和钙水平对育成期水貂生长性能、营养物质消化率及氮代谢的影响,以筛选出适宜育成期水貂的饲粮维生素D和钙水平,为完善水貂营养标准奠定基础,为水貂的科学饲养提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验动物饲养试验地点为农业部长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站。选取(60±5) 日龄健康短毛黑公水貂117只,随机分成9组(Ⅰ~Ⅸ组),且同窝水貂不在同一组内以消除遗传因素带来的影响,每组13个重复,每个重复1只,各重复之间水貂初始体重差异不显著(P>0.05)。
1.2 试验设计与试验饲粮试验采用3×3双因素随机试验设计,饲粮钙磷比固定为2,设3个维生素D(维生素D3形式)水平(2 100、4 100和6 100 IU/kg)和3个钙水平(2.30%、2.70%和3.10%)。参考NRC(1982)[15]以及相关文献[16-17]中关于水貂育成期各营养物质需要量,以黄花鱼、鸡骨架、鸡头、鸡腺胃、鸡肝、膨化玉米粉为原料,共配制9种育成期水貂试验饲粮,其组成及营养水平见表l。Ⅰ组水貂饲喂含2.30%钙与2 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅱ组水貂饲喂含2.30%钙与4 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅲ组水貂饲喂含2.30%钙与6 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅳ组水貂饲喂含2.70%钙与2 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅴ组水貂饲喂含2.70%钙与4 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅵ组水貂饲喂含2.70%钙与6 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅶ组水貂饲喂含3.10%钙与2 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅷ组水貂饲喂含3.10%钙与4 100 IU/kg维生素D的饲粮,Ⅸ组水貂饲喂含3.10%钙与6 100 IU/kg维生素D的饲粮。饲粮钙水平通过沸石粉和磷酸氢钙调节,维生素D以维生素D3形式添加,购自浙江新维普添加剂有限公司。预试期13 d,正试期60 d。
1.3 饲养管理试验开始前,对水貂接种犬瘟热和细小病毒疫苗。试验水貂均单笼饲养,每日07:30与15:30各饲喂1次,自由饮水,每日记录实际采食量。正式试验开始后,每日观察并记录试验水貂的健康状况。
消化代谢试验于2016年8月16日至2016年8月18日进行,共计3 d,采用全收粪法。消化代谢试验期间饲养管理与日常饲养管理相同。每天收集尿液,尿液收集前在收集桶内加入10%硫酸20 mL固氮,测定尿液中的氮含量。每天收集的粪便称重后按鲜重的5%加入10%硫酸溶液,并加少量甲苯防腐,保存于-20 ℃备用。将3 d的尿液和粪便分别混合均匀后取样,其中粪便先在80 ℃下杀菌2 h,然后降到65 ℃烘干至恒重,磨碎过40目筛,制成风干样本,以备实验室分析。
1.5 测定指标及方法正试期开始后,以第1天称重作为初重,然后每隔15 d在早晨饲喂之前空腹称重,以试验结束后称重作为末重,计算每只水貂的日增重以及每组的平均日增重;记录每只水貂每天的给料量和残余料量,计算每只水貂的采食量以及每组的平均日采食量。测定基础饲粮、粪便等样品的干物质、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、钙、磷含量[18]。维生素D水平参照GB/T 17818—2010采用高效液相色谱法检测。
某种营养物质消化率(%)=[(某种营养物质摄入量-粪中某种营养物质总量)/某种营养物质摄入量]×100;
碳水化合物含量=干物质含量-粗蛋白质含量-粗脂肪含量-粗灰分含量;
氮沉积(g/d)=食入氮-粪氮-尿氮;
净蛋白质利用率(%)=(氮沉积/食入氮)×100;
蛋白质生物学价值(%)=[氮沉积/(食入氮-粪氮)]×100。
1.6 数据处理结果以“平均值±标准差”表示,数据用Excel 2010进行整理并用SAS 9.4软件中的一般线性模型(GLM)程序进行有交互作用的双因素方差分析(two-way ANOVA),并采用Duncan氏法进行多重比较,P < 0.05为差异显著,P < 0.01为差异极显著。
2 结果 2.1 饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂生长性能的影响由表 2可知,育成期水貂的末重、平均日增重、料重比组间存在极显著差异(P<0.01),以Ⅷ组末重、平均日增重最大,料重比最小。饲粮钙水平对育成期水貂的末重、平均日增重、料重比有极显著的影响(P<0.01)。随着钙水平的升高,末重、平均日增重呈现逐渐上升的趋势,且钙水平为2.3%时极显著低于钙水平为3.1%时(P<0.01);料重比则呈现逐渐下降的趋势,且钙水平为2.3%时极显著高于钙水平为2.7%和3.1%时(P<0.01)。饲粮维生素D水平对育成期水貂的末重、平均日增重、料重比有极显著的影响(P<0.01)。饲粮维生素D水平为4 100 IU/kg时,末重、平均日增重显著高于维生素D水平为2 100和6 100 IU/kg时(P<0.05),而料重比极显著低于维生素D水平为2 100和6 100 IU/kg时(P<0.01)。饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂料重比有极显著的交互作用(P<0.01)。
由表 3可知,育成期水貂的干物质排出量、脂肪消化率组间存在极显著差异(P < 0.01),干物质消化率组间存在显著差异(P < 0.05),以Ⅷ组干物质排出量最低,干物质消化率最高,脂肪消化率则以Ⅱ组最高。饲粮钙水平极显著影响脂肪消化率(P < 0.01),显著影响干物质排出量(P < 0.05)。钙水平为3.1%时脂肪消化率极显著低于钙水平为2.3%和2.7%时(P<0.01);钙水平为3.1%时干物质排出量显著高于钙水平为2.7%时(P < 0.05)。饲粮维生素D水平极显著影响干物质排出量(P < 0.01),显著影响干物质消化率和脂肪消化率(P < 0.05)。维生素D水平为4 100 IU/kg时干物质排出量极显著低于维生素D水平为2 100和6 100 IU/kg时(P<0.01),同时干物质消化率显著高于维生素D水平为2 100和6 100 IU/kg时(P<0.05);此外,维生素D水平为4 100 IU/kg时脂肪消化率显著高于维生素D水平为2 100 IU/kg时(P<0.05)。饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂脂肪消化率有极显著的交互作用(P<0.01)。饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂的干物质采食量、蛋白质消化率、碳水化合物消化率均无显著影响(P>0.05),但蛋白质消化率、碳水化合物消化率、脂肪消化率都有随维生素D水平的升高先增加再降低的二次变化趋势,且均以维生素D水平为4 100 IU/kg时最高。
由表 4可知,育成期水貂的食入氮、粪氮、尿氮组间不存在显著差异(P>0.05),氮沉积组间存在极显著差异(P<0.01),以Ⅷ组最高,Ⅰ组最低,Ⅷ组显著高于其他各组(P<0.05)。此外,蛋白质利用率组间存在极显著的差异(P < 0.01),Ⅷ组极显著高于Ⅲ、Ⅸ组(P<0.01);蛋白质生物学价值组间存在显著差异(P < 0.05),Ⅷ组显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅸ组(P<0.05)。饲粮钙水平极显著影响氮沉积(P<0.01),且氮沉积随钙水平的升高呈现增加的趋势,钙水平为3.1%时极显著高于钙水平为2.3%时(P<0.01)。饲粮钙水平对食入氮、粪氮、尿氮、净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值均无显著影响(P>0.05)。维生素D水平对食入氮、粪氮、尿氮均无显著影响(P>0.05),对氮沉积有极显著的影响(P<0.01),对净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值有显著影响(P < 0.05)。氮沉积、净蛋白质利用率和蛋白质生物学价值均呈现随维生素D水平的升高而先增高后降低的二次趋势,其中氮沉积表现为维生素D水平为4 100 IU/kg时极显著高于维生素D水平为2 100和6 100 IU/kg时(P < 0.01),净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值均表现为维生素D水平为4 100 IU/kg时显著高于维生素D水平为2 100和6 100 IU/kg时(P < 0.05)。饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂的氮沉积、净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值均有显著的交互作用(P<0.05)。
表 2中结果显示,试验结束后不同组水貂平均日增重不一致,组间存在极显著差异,说明不同的饲粮维生素D和钙水平对水貂的生长性能有一定影响,饲粮的钙水平和维生素D水平必须维持在一定范围内才能保证水貂的快速生长。王爽等[19]研究指出,饲粮钙、磷及维生素D水平对生长前期北京鸭的日采食量、日增体质量有显著的交互作用,而对其料重比无显著的交互作用。本研究中饲粮钙及维生素D水平对育成期水貂的料重比有显著的交互作用,对平均日增重和平均日采食量无显著的交互作用。冀红芹[20]研究表明,随着饲粮钙水平的升高,杜长大三元杂交仔猪平均日增重先升高后降低,与王晓宇等[21]、林映才等[22]在猪上的研究结果一致,说明在一定范围内,高钙能够提高猪的生长性能。维生素D又称抗佝偻病维生素,在动物体内能够促进钙和磷的吸收,为动物生长所必需。饲粮维生素D水平适宜会促进动物的生长,长期过量添加维生素D则会对动物机体造成毒副作用。Atencio等[23]研究表明,维生素D可提高肉鸡采食量、体增重以及降低雏鸡死亡率,从而提高肉鸡的生长性能,与杨晓丹[24]的研究结果一致。而贾洪阁[25]研究发现,随着饲粮维生素D水平的升高,肉仔鸡体重出现先升高后下降的趋势,与本试验结果一致。在本试验条件下,随着饲粮钙水平的升高,水貂平均日增重呈现升高的趋势,说明高钙有利于提高育成期水貂的生长性能;钙水平为为3.1%时水貂生长较快,这比前人的研究结果[7-8]高,可能是由水貂品种、大小以及饲粮钙磷比和维生素D水平不同所致,其机理有待于深入研究。与维生素D水平为2 100 IU/kg时相比,维生素D水平为4 100 IU/kg时提高了育成期水貂的平均日增重,当维生素D水平继续升高为6 100 IU/Kg时平均日增重反而降低,说明饲粮适宜的维生素D水平能够促进育成期水貂的生长,过高水平的维生素D反而不利于其生长。因此,饲粮钙水平为3.4%、维生素D水平为4 100 IU/kg时育成期水貂的生长性能较佳。
3.2 饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂营养物质消化率的影响研究表明,饲粮维生素D水平对3~5月龄獭兔的平均日采食量[26]、1~28日龄蛋雏鸭[27]的平均日采食量均无显著影响,与本试验结果一致。本试验中,随着饲粮钙水平的升高,育成期水貂的干物质排出量先降低后升高,干物质消化率呈现出升高的趋势,这与水貂体重变化的趋势是一致的。在钙磷比固定的情况下,钙水平升高即磷水平升高,Takeuchi等[28]研究指出,磷参与ATP供能,使体内脂肪酸活化作用增强,磷的增加有助于增强β氧化、增加糖原生成,进而使脂肪沉积降低,蛋白质沉积增加。然而,过量的钙会在肠道中与脂肪酸形成不溶性的皂化物,使饱和脂肪消化率降低[14, 29-30]。维生素D的主要生理功能是调节机体对钙、磷的吸收,维持血钙、血磷的正常水平。适量的维生素D可促进机体对钙、磷的吸收,但过量维生素D的摄入会对动物产生一定的毒性,动物表现为多尿、高尿钙、食欲下降甚至废绝,生长停滞[25]。本试验中,育成期水貂的脂肪消化率随饲粮钙水平的升高呈现先增加后降低的趋势,钙水平为3.1%时的脂肪消化率比钙水平为2.7%时降低2%,与前人的研究结果一致。脂肪消化率随着维生素D摄入量的增加呈现先升高后降低的趋势,可能是由于适量的维生素D促进钙吸收,提高脂肪消化率,而过量的维生素D则引起血钙增加,多余的钙沉积在关节、血管、心脏、肠壁等部位,导致肝脏负荷工作,组织、器官退化和钙化,引起水貂脂肪消化率下降。饲粮钙和维生素D水平对育成期水貂的碳水化合物消化率无显著影响,各组平均碳水化合物消化率为81.16%,高于张海华等[10]在水貂上所得结果,原因可能是本试验饲粮能量低于NRC(1982)[15]推荐的17.08 MJ/kg,动物为了满足能量需求而提高了碳水化合物的消化率,其机理有待深入研究。在本试验条件下,饲粮钙水平为2.7%、维生素D水平为4 100 IU/kg时有利于育成期水貂获得较好的营养物质消化率。
3.3 饲粮维生素D和钙水平对育成期水貂氮代谢的影响研究指出,饲粮粗蛋白质与磷水平之间并不存在显著的交互作用[31]。刘帅等[14]研究表明,不同钙、磷水平对育成期水貂粪氮、尿氮无显著影响,但随着饲粮磷水平的升高,氮沉积先升高后降低;饲粮磷水平的升高提高了氮的利用率,增加了净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值。Mudd等[32]研究指出,氮沉积受饲粮磷水平的影响要大于饲粮钙水平。Vipperman等[33]研究发现,高钙可以导致体内氮沉积下降,其主要原因是钙、磷、脂肪等作用形成皂素,抑制了部分氨基酸的作用。本试验条件下,随着饲粮钙水平的升高,氮沉积呈现一直上升的趋势,这是由于本试验中最高钙水平在适宜钙水平范围内,与前人研究结果一致。饲粮钙水平对育成期水貂的净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值无显著影响,可能是因为试验中在钙磷比一定的情况下,磷梯度变化不大。氮沉积、净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值随维生素D水平的升高先增高后降低,可能是由于适量的维生素D促进了磷的吸收,提高了氮的利用率,而过量的维生素D使血钙、血磷增加,导致氮的利用率降低。在本试验条件下,钙水平为3.1%、维生素D水平为4 100 IU/kg时育成期水貂对氮的利用率最高。
4 结论综合各项指标,在本试验条件下,饲粮中钙磷比为2、维生素D水平为4 100 IU/kg、钙水平为3.1%时,育成期水貂可以获得较好的生长性能、较高的营养物质消化率及氮利用率。
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