京红蛋鸡是我国自主培育的褐壳蛋鸡品种，具有开产早、适应性强、产蛋量高和耗料低等特点。另外，在家禽饲粮中，含硫氨基酸作为主要的限制性氨基酸，参与蛋鸡体内胆碱、肌酸等物质合成，还广泛参与机体免疫、解毒护肝、甲基转移与抗球虫病等多种生理功能[1]。蛋鸡在7~12周龄主要是骨骼和肌肉的发育，该阶段直接影响蛋鸡后期的生产性能。目前，国内外关于蛋鸡7~12周龄含硫氨基酸需要量有了一定的报道。D’Agostini等[2]研究证明，罗曼粉和罗曼褐蛋鸡7~12周龄总蛋氨酸+半胱氨酸需要量分别为0.710%(可消化蛋氨酸+半胱氨酸水平为0.639%)和0.706%(可消化蛋氨酸+半胱氨酸水平为0.635%)。陈祥林等[3]建议7~12周龄岑溪三黄鸡的含硫氨基酸需要量为0.55%。但是由于京红蛋鸡品种特性和国外蛋鸡品种有较大差别，其营养需要量也存在一定差异，仍参考海兰褐、罗曼、尼克、伊莎褐等蛋鸡的营养标准配制饲粮，会造成饲料资源的浪费或无法获得最大经济效益。因此，本试验旨在研究饲粮不同含硫氨基酸水平对7~12周龄京红商品代蛋鸡生长性能和血清生化指标的影响，估计其含硫氨基酸的需要量，为京红商品代蛋鸡饲养标准的订定提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验设计试验选取6周龄末体重、胫长均匀一致的京红商品代蛋鸡750只，采用单因素试验设计，随机分为5组，每组5个重复，每个重复30只鸡。对照(A)组饲喂含硫氨基酸水平为0.42%的基础饲粮(表 1)，其他必须氨基酸水平(除含硫氨基酸外)根据析因法得到的净需要量和饲粮氨基酸的利用率确定，其他营养指标均满足NY/T 33—2004的要求。试验B、C、D和E组在基础饲粮水平上用0.08%、0.16%、0.24%和0.32%的蛋氨酸替代等量的膨润土，使其含硫氨基酸水平分别达到0.50%、0.58%、0.66%和0.74%。采用封闭式鸡舍3层全阶梯式笼养，鸡舍温度保持在18~27 ℃，纵向负压通风。干粉料自由采食，每天饲喂2次，喂料时根据鸡的采食情况适当增减料，以刺激蛋鸡食欲，乳头式饮水器自由饮水，按照《京红商品代蛋鸡饲养手册》管理，试验期6周。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
试验用DL-蛋氨酸(纯度≥99%)由住友化学株式会社提供。
1.3 测定指标 1.3.1 生长性能指标6周龄末以重复为单位称重、量胫长，得到初始体重(IBW)，每2周以重复为单位结料、称重，12周末得到试验末体重(FBW)，计算每组平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和胫长。
1.3.2 血清生化指标在试验结束时，每个重复随机挑选1只试鸡翅静脉采血，室温静置，3 000 r/min离心15 min，吸取上清液，-20 ℃冰箱保存。采用日立全自动生化分析仪(日立-7600)测定血清中总蛋白、白蛋白、尿酸、氨的含量以及碱性磷酸酶的活性，根据总蛋白和白蛋白的含量计算球蛋白的含量及白球比。
1.4 数据处理分析试验数据用Excel 2010表格进行整理汇总，采用SAS 9.2软件一般线性模型(GLM)进行单因素方差分析和Duncan氏多重比较，应用Contrast语句进行线性和二次的趋势分析，并用单斜率非线性折线回归模型进行分析，断线拐点对应的X轴截点即为含硫氨基酸需要量。生长性能数据统计分析以重复作为试验单位，血清生化指标以单只鸡为试验单位统计分析，结果用平均值和标准误表示，以P < 0.05为差异显著。
2 结果与分析 2.1 不同含硫氨基酸水平对7~12周龄京红蛋鸡生长性能的影响由表 2可知，在初始体重无显著差异(P>0.05)的情况下，饲粮中添加不同水平的含硫氨基酸可以显著影响试验末体重、平均日增重和料重比(P < 0.05)，但是对平均日采食量和胫长无显著影响(P>0.05)。
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表 2 不同含硫氨基酸水平对7~12周龄京红蛋鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of different levels of sulphur amino acids on growth performance of Jinghong layers from 7 to 12 weeks of age |
随着饲粮中含硫氨基酸水平的提高，蛋鸡平均日增重、试验末体重呈显著线性增长(P < 0.05)，其中含硫氨基酸水平为0.58%、0.66%、0.74%组末体重和平均日增重显著高于0.42%和0.50%组(P < 0.05)，且0.58%、0.66%、0.74%组之间差异不显著(P>0.05)；含硫氨基酸水平为0.66%组料重比显著低于0.50%组(P < 0.05)，其他3组之间差异不显著(P>0.05)。
2.2 不同含硫氨基酸水平对7~12周龄京红蛋鸡血清生化指标的影响由表 3可知，不同含硫氨基酸水平显著影响血清总蛋白、球蛋白含量和白球比(P < 0.05)，对白蛋白、氨含量及碱性磷酸酶活性无显著影响(P>0.05)。0.66%含硫氨基酸组血清总蛋白、球蛋白含量显著高于其他4组(P < 0.05)，且其他4组之间无显著差异(P>0.05)；0.66%含硫氨基酸组血清白球比显著低于其他4组(P < 0.05)，其他4组之间差异不显著(P>0.05)。
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表 3 不同含硫氨基酸水平对7~12周京红蛋鸡血清生化指标的影响 Table 3 Effects of different levels of sulphur amino acids on serum biochemical indices of Jinghong layers from 7 to 12 weeks of age |
由图 1可知，含硫氨基酸水平由0.42%提高到0.62%时，蛋鸡末体重呈线性增加，超过0.62%后达到平台期，在拐点处(x=0.62)达到最大值。将末体重(y1)与含硫氨基酸水平(x)拟合的单斜率非线性折线回归方程如下：y1=1 015.00-389.80(0.62-x)(P=0.04，R2=0.96，x≤0.62)。
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图 1 末体重与含硫氨基酸水平单斜率非线性折线拟合图 Figure 1 Fitted one-slope nonlinear broken line of FBW plotted against sulphur amino acid level |
由图 2可知，含硫氨基酸水平由0.42%提高到0.62%时，平均日增重呈线性增加，超过0.62%达到平台期，在拐点处(x=0.62)达到最大值。将平均日增重(y2)与含硫氨基酸水平(x)拟合的单斜率非线性折线回归方程如下：y2=14.11-9.31(0.62-x)(P=0.04，R2=0.96，x≤0.62)。
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图 2 平均日增重与含硫氨基酸水平单斜率非线性折线拟合图 Figure 2 Fitted one-slope nonlinear broken line of ADG plotted against sulphur amino acid level |
饲粮中的含硫氨基酸主要包括蛋氨酸和半胱氨酸，蛋氨酸是家禽饲粮的第一限制性氨基酸，参与体内多种物质的合成与代谢，蛋氨酸的代谢产物为谷胱甘肽、牛磺酸和同型半胱氨酸[4-5]，是发挥主要作用的含硫氨基酸。不同品种、生长阶段的蛋鸡含硫氨基酸的最佳需要量存在差异，例如NRC(1994)建议6~12周龄褐壳蛋鸡含硫氨基酸需要量为0.49%[6]，我国《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)建议0~8周龄生长蛋鸡含硫氨基酸水平为0.74%，9~18周龄蛋鸡推荐需要量为0.55%[7]。饲粮中添加适宜水平的蛋氨酸可以促进肉禽的生长，降低料重比[8-9]。张静等[10]研究7~12周龄略阳乌鸡可消化蛋氨酸需要量发现，不同水平的蛋氨酸对平均日增重和平均日采食量有显著影响，而对料重比无显著影响。另外，宋丹等[11]研究发现饲粮蛋氨酸水平可以显著影响5~8周龄京红蛋鸡的试验末体重和料重比，但对蛋鸡平均日增重和平均日采食量无显著影响，得出该阶段蛋氨酸的需要量为0.44%。席鹏彬等[9]证明，随着饲粮中蛋氨酸水平的提高，黄羽肉鸡的体重、平均日增重和群体均匀度呈现二次曲线的趋势，先升高再降低，且显著影响平均日采食量和料重比，也呈现二次曲线的趋势，先降低后升高。本试验中含硫氨基酸水平显著影响末体重、平均日增重和料重比，且随着含硫氨基酸水平提高有线性增长或降低的趋势，与上述研究有相似之处，但本试验呈现的不是明显的二次曲线形式，而是呈线性断线变化，当含硫氨基酸增到一定水平(即断线拐点x=0.62)，末体重和平均日增重不再发生变化，达到平台期，0.62%即为含硫氨基酸的需要量。
此外，从本试验生长性能结果可以看出，随着含硫氨基酸水平的提高，整体上平均日增重显著提高，料重比显著降低，表明饲粮中氨基酸从缺乏到平衡对机体生长发育至关重要。因此，在饲粮中添加适宜水平的含硫氨基酸可促进蛋鸡生长，提高饲料利用效率，从而提高蛋鸡生产的经济效益。另有研究报导，含硫氨基酸水平略高于NRC标准有助于动物生长[12]，与本试验结果一致。
育成期的营养调控的最终目标是产蛋期的高产稳产。育成期发育状况与产蛋期生产性能具有较高相关性。吴忠旭等[13]研究发现海兰白育成期末重(126日龄)与其21~65周龄阶段的累计产蛋量、只日产蛋量、累计产蛋数呈极显著正相关。但是单纯通过生长性能数据确定育成期蛋鸡的营养需要量仍然具有一定风险，建议结合血清生化指标、体成分测定、产蛋期跟踪观察试验等进行综合评定。
3.2 不同含硫氨基酸水平对7~12周龄京红蛋鸡血清生化指标的影响血清生化指标能够反映动物体内代谢和某些器官机能的重要指标。血清中总蛋白包括白蛋白和球蛋白，具有运输多种代谢物质，调节被运输物质的生理功能，维持血管内外渗透压和酸碱度的作用，同时总蛋白含量反映机体营养代谢状况[14]。白蛋白主要用来运输合成体组织的原料和代谢废物，球蛋白反映机体的免疫能力，球蛋白含量升高，则意味着动物机体体液免疫功能的增强[15]。张静等[10]研究表明，不同蛋氨酸水平对7~12周龄略阳乌鸡血清白蛋白、球蛋白含量和白球比均无显著影响。本试验中含硫氨基酸水平未显著影响白蛋白含量，但随着含硫氨基酸水平升高，血清中白蛋白含量有上升的趋势，表明含硫氨基酸促进机体氨基酸代谢，并且宋海彬[16]研究表明白蛋白含量与动物生长速度呈正相关，这与本试验体重增长结果一致。含硫氨基酸水平显著影响总蛋白和球蛋白含量，且0.66%组总蛋白与球蛋白含量显著高于其他4组，这是由于高含硫氨基酸水平刺激动物机体免疫系统的激活。
碱性磷酸酶的活性是评价蛋鸡生长发育的敏感指标，其活力越高，生长速度越快[17]。本试验中含硫氨基酸水平未能对碱性磷酸酶活性显著影响，但0.58%、0.66%组的碱性磷酸酶活性高于其他各组，说明饲粮含硫氨基酸水平为0.58%、0.66%时，促进蛋鸡生长发育，这与末体重和平均日增重结果相吻合。
尿酸是禽类蛋白质和氨基酸代谢的主要终产物之一，饲粮中氨基酸不平衡会影响血液中尿酸的含量[18]。研究表明，饲粮中添加蛋氨酸可以使肉鸡体重增加，血清中尿酸含量降低[19]，与本试验中各组尿酸含量变化规律不一致，其原因可能是：0.42%~0.50%组含硫氨基酸水平不能满足动物机体的需要，各必需氨基酸水平不平衡，造成除含硫氨基酸外的必需氨基酸浪费，使得血清中尿酸含量较高；随着含硫氨基酸水平上升，组成蛋白质的氨基酸趋于平衡，利用率提高，尿酸含量逐步下降，当含硫氨基酸水平过量，在满足需要的情况下，未利用的被分解成尿酸。由此可以看出含硫氨基酸水平在0.50%~0.66%之间，各氨基酸水平从逐渐平衡到过量。
4 结论综合饲粮不同含硫氨基酸水平对生长性能、血清生化指标等数据的影响，7~12周龄京红商品代蛋鸡含硫氨基酸需要量范围为0.58%~0.66%；以末体重和平均日增重为指标，通过单斜率非线性折线回归分析得到7~12周龄京红商品代蛋鸡含硫氨基酸需要量是0.62%(折合只日平均需要量为314 mg/d)。
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