过瘤胃不饱和脂肪对安格斯肉牛生长性能、血清指标及相关基因表达的影响

引用本文

杨致玲, 杨国义, 刘旗, 赫磊, 吴树峰, 杨文强, 张拴林, 刘强, 郭刚. 过瘤胃不饱和脂肪对安格斯肉牛生长性能、血清指标及相关基因表达的影响[J]. 动物营养学报, 2019, 31(8): 3632-3642.

YANG Zhiling, YANG Guoyi, LIU Qi, HE Lei, WU Shufeng, YANG Wenqiang, ZHANG Shuanlin, LIU Qiang, GUO Gang. Effects of Rumen Undegradable Unsaturated Fat on Growth Performance, Biochemical Indices and Related Gene Expression of Angus Beef[J]. Chinese Journal of Animal Nutrition, 2019, 31(8): 3632-3642.

过瘤胃不饱和脂肪对安格斯肉牛生长性能、血清指标及相关基因表达的影响

杨致玲¹ , 杨国义² , 刘旗² , 赫磊² , 吴树峰¹ , 杨文强¹ , 张拴林¹ , 刘强¹ , 郭刚¹

1. 山西农业大学动物科技学院, 太谷 030801;
2. 山西省林草局草原工作总站, 太原 030000

收稿日期: 2019-01-31

基金项目: 山西省科技攻关项目（20140311022-2）；山西现代农业牛产业技术体系（18-05）

作者简介: 杨致玲(1965-), 女, 山西太谷人, 高级实验师, 学士, 从事动物营养与饲料科学研究。E-mail:1652109648@qq.com.

通信作者: 张拴林, 教授, 硕士生导师, E-mail:shuanlinzhang@126.com.

摘要: 本试验旨在研究过瘤胃不饱和脂肪对安格斯肉牛生长性能、血清指标及相关基因表达的影响。选用24头平均体重（447.78±2.53）kg、15~17月龄安格斯去势公牛，随机分为4组，每组6头。1、2、3和4组分别饲喂含有0、2.0%、4.0%和6.0%过瘤胃不饱和脂肪的试验饲粮。试验期77 d，其中预试期10 d，正试期67 d，正试期分为前期（27 d）和后期（40 d）2个阶段。结果表明：1）试验前期，4组的平均日增重显著高于1和2组（P < 0.05），1组的料重比显著高于4组（P < 0.05）。试验前期、后期和全期，各组之间平均日采食量差异不显著（P>0.05）。2）试验前期和后期，2和3组的血清胰岛素（INS）含量显著高于1组（P < 0.05），2、3和4组的血清胰高血糖素（GC）含量显著高于1组（P < 0.05）。试验前期，3组的血清生长激素（GH）含量显著低于1组（P < 0.05）；试验后期，2、3和4组的血清GH含量显著低于1组（P < 0.05）。3）试验前期和后期，各组之间血清甘油三酯脂肪酶（ATGL）、肉碱棕榈酰转移酶-Ⅰ（CPT-Ⅰ）和乙酰辅酶A羧化酶（AACase）活性没有显著差异（P>0.05）。4）试验前期和后期，各组之间血清葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、白蛋白（ALB）和总胆固醇（TCHO）含量及谷丙转氨酶（ALT）活性均无显著差异（P>0.05）。试验前期，4组的血清总蛋白（TP）含量显著高于1组（P < 0.05），2、3和4组的血清丙二醛（MDA）含量显著低于1组（P < 0.05），2、3和4组的血清谷草转氨酶（AST）活性显著高于1组（P < 0.05）；试验后期，3和4组的血清MDA含量显著低于1组（P < 0.05），2和3组的血清AST活性显著高于1组（P < 0.05）。5）4组的背最长肌中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的基因表达量显著高于1组（P < 0.05）。由此可见，饲粮中添加过瘤胃不饱和脂肪对试验全期的平均日增重、平均采食量和料重比没有显著影响，对血清ATGL、CPT-Ⅰ和AACase的活性没有显著影响，提高了血清GC和INS含量，促进了背最长肌PPARγ的基因表达。综合以上结果，本试验条件下，饲粮过瘤胃不饱和脂肪适宜添加量为4.0%。

关键词: 过瘤胃脂肪生长性能血清指标 FASN PPARγ

Effects of Rumen Undegradable Unsaturated Fat on Growth Performance, Biochemical Indices and Related Gene Expression of Angus Beef

YANG Zhiling¹ , YANG Guoyi² , LIU Qi² , HE Lei² , WU Shufeng¹ , YANG Wenqiang¹ , ZHANG Shuanlin¹ , LIU Qiang¹ , GUO Gang¹

1. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, China;
2. General Station of Grassland, Bureau of Forestry and Grassland of Shanxi Province, Taiyuan 030000, China

Corresponding author: ZHANG Shuanlin, professor, E-mail:shuanlinzhang@126.com.

Abstract: The objective of the current study was to evaluate the effects of rumen undegradable unsaturated fat (RUF) on growth performance, biochemical indices and related gene expression of Angus beef. Twenty-four Angus steers[average body weight of (447.78±2.53) kg, 15 to 17 months of age] were randomly assigned to 4 groups with 6 beef in each group. Groups 1, 2, 3 and 4 were fed experimental diets containing 0, 2.0%, 4.0% and 6.0% RUF, respectively. The experiment lasted 77 days including a 10-day preliminary test period and a 67-day formal test period, and the formal test period was divided into two stages:early stage (27 days) and later stage (40 days). The results showed as follows:1) in early stage, the average daily gain of group 4 was significantly higher than that of groups 1 and 2 (P < 0.05), the ratio of feed to gain of group 1 was significantly higher than that of group 4 (P < 0.05). In early stage, later stage and whole stage, there was no significant difference on the average daily feed intake among all groups (P>0.05). 2) In early stage and later stage, the serum insulin (INS) content of groups 2 and 3 was significantly higher than that of group 1 (P < 0.05), the serum glucagon (GC) content of groups 2, 3 and 4 was significantly higher than that of group 1 (P < 0.05). In early stage, the serum growth hormone (GH) content of group 3 was significantly lower than that of group 1 (P < 0.05); in later stage, the serum GH content of groups 2, 3 and 4 was significantly lower than that of group 1 (P < 0.05). 3) In early stage and later stage, there were no significant differences on the activities of adipose triglyceride lipase (ATGL), carnitine palmitoyl transferase-Ⅰ (CPT-Ⅰ) and acetyl-coenzyme A carboxylase (AACase) in serum among all groups (P>0.05). 4) In early stage and later stage, there were no significant differences on the glucose (GLU), triglyceride (TG), albumin (ALB) and total cholesterol (TCHO) contents and alanine aminotransferase (ALT) activity in serum among all groups (P>0.05). In early stage, the serum total protein (TP) content of group 4 was significantly higher than that of group 1 (P < 0.05), the serum malondialdehyde (MDA) content of groups 2, 3 and 4 was significantly lower than that of group 1 (P < 0.05), the serum glutamic oxaloacetic transaminase (AST) activity of groups 2, 3 and 4 was significantly higher than that of group 1 (P < 0.05); in later stage, the serum (MDA content of groups 3 and 4 was significantly lower than that of group 1 (P < 0.05), the serum AST activity of groups 2 and 3 was significantly higher than that of group 1 (P < 0.05). 5) The gene expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in Longissimus dorsi of group 4 was significantly higher than that of group 1 (P < 0.05). In conclusion, dietary RUF has no significant effects on the average daily gain, average daily feed intake and ratio of feed to gain of beef in whole stage, and has no significant effects on the activities of aATGL, CPT-Ⅰ and AACase in serum, but improves the contents of GC and INS in serum, promotes the gene expression of PPARγ in Longissimus dorsi. Overall consideration, under this experimental conditions, the optimum dietary RUF content is 4.0%.

Key words: rumen protected fat growth performance serum indices FASN PPARγ

饲粮中添加脂肪可有效提高育肥牛生长性能，是生产高档牛肉和提高胴体品质的重要途径^[1]。但添加脂肪过多对瘤胃发酵有副作用，当肉牛饲粮中脂肪的添加量超过饲粮干物质的8.62%时，显著降低了粗蛋白质(CP)的表观消化率和氮沉积量^[2]；超过9.00%时，显著降低了中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的表观消化率^[3]，同时也引起采食量的下降^[4]。此外，不同脂肪源对瘤胃发酵的影响有一定差异^[5]。研究表明，饲粮中分别添加2%、4%和6%的不同脂肪源(饱和脂肪和不饱和脂肪)，每千克增重需要的增重净能和平均日增重(ADG)虽然差异不显著，但饱和脂肪的效果优于不饱和脂肪^[6]，不饱和脂肪的副作用更大。然而，饲粮中添加富含多不饱和脂肪酸(PUFA)的亚麻籽，可提高牛肉中ω-3脂肪酸含量^[7]和机体的抗氧化能力^[8]，改变牛肉中脂肪酸组成^[9]，可以提供更有利于人类健康的牛肉^[10]。PUFA能影响细胞膜磷脂中PUFA组成及含量，影响细胞膜的流动性和受体功能^[11-12]，在一定条件下还可以从细胞膜磷脂池中释放出来并转变为游离状态，经过代谢产生更多具有生物活性的脂质调节物质^[13]。PUFA还可以调节肝细胞中肉碱棕榈酰转移酶-Ⅰ(CPT-Ⅰ)和羟甲基戊二酸辅酶A(HMG-CoA)的基因表达，使其mRNA水平提高2~4倍^[14]。

过瘤胃不饱和脂肪既可以避免对瘤胃发酵及主要微生物的抑制作用，还能改善牛肉脂肪酸组成，近年来得到广泛的应用。前人研究表明，肉牛饲粮中添加4%的不同过瘤胃脂肪源(饱和脂肪和不饱和脂肪)，均可提高平均日增重和机体抗氧化能力^[15]，其中的过瘤胃不饱和脂肪显著改善了肌肉中脂肪酸的组成^[16]。此外，饲粮中添加2.0%~6.0%的过瘤胃不饱和脂肪，对NDF的表观消化率无显著影响，还提高了饲粮中粗蛋白质和粗脂肪(EE)的表观消化率及背膘厚度^[17]。目前，国内外关于不同添加量的过瘤胃不饱和脂肪对肉牛生长性能及相关基因表达影响的研究鲜见报道。本试验的目的是研究不同添加量的过瘤胃不饱和脂肪对安格斯肉牛生长性能、血清指标及相关基因表达的影响。

1 材料与方法 1.1 试验动物、试验材料与试验设计

过瘤胃不饱和脂肪由山西农业大学动物科技学院研制，用胡麻油为原料制成，采用不饱和脂肪酸钙皂形式添加。其干物质(DM)含量为97.00%，以干物质为基础，钙和钠的含量分别为6.64%和0.19%，脂肪含量为83.14%，其中C12 : 0、C14 : 0、C16 : 0和C16 : 1含量均为0，C18 : 0、C18 : 1、C18 : 2和C18 : 3含量分别为3.00%、27.77%、26.83%和24.93%，其余长链脂肪酸含量为0.61%。用瘤胃尼龙袋法测定过瘤胃不饱和脂肪24和48 h瘤胃平均消失率分别为5.15%和8.63%。

选择24头平均体重(447.78±2.53) kg、15~17月龄的安格斯去势公牛，按单因素完全随机设计分为4组，每组6头。1、2、3和4组分别饲喂含有0、2.0%、4.0%和6.0%过瘤胃不饱和脂肪的试验饲粮。整个试验期77 d，其中预试期10 d，正试期67 d，正试期分为前期(27 d)和后期(40 d)。

1.2 试验饲粮及饲养管理

根据体重和日增重1.2 kg^[18]计算营养需要并设计各组试验饲粮，其组成及营养水平见表 1。前期和后期的精粗比分别是60.49 : 39.51和73.66 : 26.34，除增重净能和采食量外，4组其他养分供给量相同。过瘤胃不饱和脂肪的综合净能值是在饲粮粗脂肪表观消化率的基础上根据粗脂肪含量计算消化能，然后参照前人资料进行品种校正，再计算综合净能^[18-20]。试验牛采取颈枷控制的单槽饲喂方式，每日分别于06：30和15:00饲喂，下槽后自由饮水，每日测定和记录采食量。

表 1 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

%
项目 Items	前期Early stage				后期Later stage
项目 Items	1组 Group 1	2组 Group 2	3组 Group 3	4组 Group 4	1组 Group 1	2组 Group 2	3组 Group 3	4组 Group 4
原料Ingredients
玉米青贮Corn silage	13.36	13.10	12.82	12.56
羊草Chinese wildrye	27.37	26.82	26.28	25.73	27.15	26.60	26.07	25.51
玉米Corn	37.34	36.59	35.85	35.10	57.55	56.40	55.25	54.10
豆粕Soybean meal	3.56	3.49	3.42	3.35	5.83	5.71	5.60	5.48
棉粕粕Cottonseed meal	5.93	5.81	5.69	5.57	2.91	2.85	2.79	2.74
过瘤胃不饱和脂肪 Rumen undegradable unsaturated fat		2.00	4.00	6.00		2.00	4.00	6.00
胚芽粕Germ meal	8.89	8.71	8.53	8.36	3.64	3.57	3.49	3.42
石粉Limestone	0.89	0.87	0.85	0.84	0.44	0.43	0.42	0.41
磷酸氢钙CaHPO₄	0.89	0.87	0.85	0.84	0.51	0.50	0.49	0.48
食盐NaCl	0.59	0.58	0.57	0.55	0.51	0.50	0.49	0.48
小苏打NaHCO₃	0.59	0.58	0.57	0.55	0.73	0.72	0.70	0.69
预混料Premix¹⁾	0.59	0.58	0.57	0.55	0.73	0.72	0.70	0.69
合计Total	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00	100.00
营养水平Nutrient levels²⁾
综合净能NE_mf/(MJ/kg)	5.29	5.73	6.17	6.17	5.82	6.25	6.67	7.09
粗蛋白质CP	11.03	10.81	10.59	10.37	9.90	9.70	9.50	9.31
粗脂肪EE	2.67	4.28	5.89	7.50	2.58	4.19	5.80	7.41
中性洗涤纤维NDF	30.15	29.55	28.94	28.34	25.13	24.63	24.12	23.62
酸性洗涤纤维ADF	18.93	18.55	18.17	17.79	13.46	13.19	12.92	12.65
钙Ca	0.76	0.74	0.73	0.71	0.48	0.47	0.46	0.45
总磷TP	0.32	0.31	0.31	0.30	0.24	0.24	0.23	0.23
¹⁾预混料为每千克饲粮提供The premix provided the following per kilogram of diets：VA 3 000 IU，VD 300 IU，VE 15 IU，Fe 30 mg，Cu 8 mg，Zn 30 mg，Mn 40 mg，I 0.25 mg，Co 0.1 mg，Se 0.1 mg。 ²⁾综合净能为计算值，其余营养水平为实测值。NE_mf was a calculated value, while the other nutrient levels were measured values.

表 1 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

1.3 样品采集、测定指标与方法 1.3.1 饲粮营养水平和生长性能

采用GB/T 6435—2006^[21]的方法测定水分含量，计算干物质含量；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法(GB/T 6432—1994^[22])进行测定；粗脂肪含量采用索氏浸提法(GB/T 6433—2006^[23])进行测定；采用GB/T 20806—2006^[24]的方法测定NDF含量；采用NY/T 1459—2007^[25]的方法测定ADF含量；采用高锰酸钾法(GB/T 6436—2002^[26])测定钙含量；采用分光光度法(GB/T 6437—2002^[27])测定总磷含量。

正试期的开始、前期和后期结束时连续2 d在晨饲前称重，取其平均值作为该时间点的体重值；测定并记录每天每头试验牛饲粮添加量和剩余量，计算各阶段平均日采食量(ADFI)、平均日增重和料重比(F/G)。

1.3.2 血清生化、激素、相关酶指标

在试验前期和后期结束时的当天晨饲前1 h，对所有试验牛采血，离心(3 000×g，10 min)分离血清，置于-20 ℃保存，用于测定血清生化、激素、相关酶指标。

血清乙酰辅酶A羧化酶(AACase)、CPT-Ⅰ、甘油三酯脂酶(ATGL)活性以及胰岛素(INS)、生长激素(GH)、胰高血糖素(GC)含量采用酶联免疫吸附测定法测定，谷丙转氨酶(ALT)活性采用微板法测定，谷草转氨酶(AST)活性采用赖氏法测定，以上用酶标仪(Spectra Max M5)进行测定。血清总蛋白(TP)含量采用微量酶标法测定，白蛋白(ALB)含量采用溴甲酚绿比色法测定，甘油三酯(TG)含量采用甘油三酯检测试剂盒(GPO-PAP法)测定，总胆固醇(TCHO)含量采用总胆固醇检测试剂盒(COD-PAP法)测定，葡萄糖(GLU)含量采用氧化酶法测定，丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法测定，以上指标测定所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，采用日立7020全自动生化分析仪进行测定。

1.3.3 相关基因表达

试验结束当天屠宰所有试验牛，采集背最长肌和肝脏样品，所有样品迅速置于液氮中冷冻后，在-80 ℃冷冻保存，用于过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂肪酸合成酶(FASN)的基因表达量测定。

采用Rio等^[28]的方法提取背最长肌和肝脏总RNA，用核酸蛋白测定仪测定其浓度及质量，并用1%琼脂糖凝胶进行电泳以检测其完整性。经检测合格的RNA样品立即进行反转录，剩余RNA迅速置于-80 ℃保存备用。根据GenBank中已公布的基因序列，设计牛PPARγ和FASN基因实时定量PCR的上、下游引物，基因引物序列及扩增参数见表 2，并送于北京奥科生物技术有限责任公司进行合成。使用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测试剂盒(TaKaRa，日本)进行实时定量PCR检测，具体操作步骤见试剂盒说明。于Mx3005P型实时定量PCR仪中进行PCR反应，以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参基因，用2^-ΔΔCt法对获得的数据进行处理计算。

表 2 基因引物序列及扩增参数 Table 2 Gene primer sequences and amplification parameters

1.4 数据统计

所有数据用Excel 2010进行处理后，采用SAS 9.2统计软件中的GLM过程对数据进行单因素分析，用Duncan氏法进行多重比较，结果用平均值±标准差来表示，P＜0.05为差异显著。

2 结果 2.1 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛生长性能的影响

由表 3可以看出，试验前期和后期，各组之间末重差异不显著(P＞0.05)。试验前期，4组的平均日增重显著高于1和2组(P＜0.05)，与3组差异不显著(P＞0.05)；试验后期和全期，各组之间平均日增重差异不显著(P＞0.05)。试验前期、后期和全期，各组之间平均日采食量差异不显著(P＞0.05)。试验前期，1组的料重比显著高于4组(P＜0.05)，与2和3组差异不显著(P＞0.05)；试验后期和全期，各组之间料重比差异不显著(P＞0.05)。

表 3 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛生长性能的影响 Table 3 Effects of dietary rumen undegradable unsaturated fat on growth performance of beef

项目 Items	1组 Group 1	2组 Group 2	3组 Group 3	4组 Group 4
始重Initial weight/kg	446.25±18.46	445.13±19.69	449.25±17.25	450.50±13.92
末重Final weight/kg
前期Early stage	484.85±15.32	481.30±17.63	493.50±15.38	496.40±12.61
后期Later stage	526.00±29.89	530.90±24.77	539.50±25.04	544.50±18.57
平均日增重ADG/(kg/d)
前期Early stage	1.43±0.31^b	1.34±0.34^b	1.64±0.29^ab	1.70±0.24^a
后期Later stage	1.03±0.19	1.25±0.15	1.15±0.09	1.20±0.19
全期Whole stage	1.19±0.14	1.28±0.17	1.35±0.17	1.40±0.11
平均日采食量ADFI/(kg/d)
前期Early stage	8.77±0.10	8.76±0.21	8.64±0.25	8.41±0.58
后期Later stage	7.85±0.03	7.87±0.03	7.83±0.09	7.72±0.22
全期Whole stage	8.22±0.02	8.23±0.10	8.16±0.15	7.99±0.37
料重比F/G
前期Early stage	6.10±0.31^a	5.88±0.30^ab	5.27±0.38^ab	4.94±0.46^b
后期Later stage	7.62±0.66	5.62±0.64	6.81±0.81	6.43±0.91
全期Whole stage	6.91±0.34	6.43±0.37	6.04±0.40	5.71±0.42
同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P < 0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P < 0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表 3 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛生长性能的影响 Table 3 Effects of dietary rumen undegradable unsaturated fat on growth performance of beef

2.2 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清激素指标的影响

由表 4可以看出，试验前期和后期，2和3组的血清INS含量显著高于1组(P＜0.05)，4组与1组之间差异不显著(P＞0.05)。试验前期和后期，2、3和4组的血清GC含量显著高于1组(P＜0.05)。试验前期，2和4组的血清GH含量与对照组差异不显著(P＞0.05)，3组的血清GH含量显著低于1组(P＜0.05)；试验后期，2、3和4组的血清GH含量显著低于1组(P＜0.05)。

表 4 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清激素指标的影响 Table 4 Effects of dietary rumen undegradable unsaturated fat on serum hormone indices of beef

2.3 饲粮添加过瘤胃脂肪对血清脂肪动员与合成相关酶活性的影响

由表 5可以看出，试验前期和后期，各组之间血清ATGL、CPT-Ⅰ和AACase活性没有显著差异(P＞0.05)。

表 5 饲粮添加过瘤胃脂肪对血清脂肪动员与合成相关酶活性的影响 Table 5 Effects of dietary rumen undegradable unsaturated fat on serum lipid mobilization and synthesis related enzyme activities of beef

2.4 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清生化指标的影响

由表 6可以看出，试验前期和后期，各组之间血清GLU、TG、ALB和TCHO含量均无显著差异(P＞0.05)。试验前期，4组的血清TP含量显著高于1组(P＜0.05)，2和3组的血清TP含量与1组差异不显著(P＞0.05)；试验后期，各组之间血清TP含量差异不显著(P＞0.05)。试验前期，2、3和4组的血清MDA含量显著低于1组(P＜0.05)；试验后期，3和4组的血清MDA含量显著低于1组(P＜0.05)，2组的血清MDA含量低于1组，但差异不显著(P＞0.05)。试验前期，2、3和4组的血清AST活性均显著高于1组(P＜0.05)；试验后期，2和3组的血清AST活性显著高于1和4组(P＜0.05)，4组的血清AST活性高于1组，但差异不显著(P＞0.05)。试验前期和后期，各组之间血清ALT活性无显著差异(P＞0.05)。

表 6 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清生化指标的影响 Table 6 Effects of dietary rumen undegradable unsaturated fat on serum biochemical indices of beef

阶段 Stages	项目 Items	1组 Group 1	2组 Group 2	3组 Group 3	4组 Group 4
前期 First stage	葡萄糖GLU/(mmol/L)	2.55±0.44	2.70±0.26	2.97±0.41	2.95±0.39
	甘油三酯TG/(mmol/L)	0.45±0.11	0.64±0.15	0.49±0.31	0.48±0.04
	总胆固醇TCHO/(mmol/L)	3.18±0.55	3.09±0.12	3.73±0.35	3.60±0.64
	白蛋白ALB/(g/L)	37.18±2.52	36.24±2.18	35.52±2.64	37.52±2.17
	总蛋白TP/(g/L)	61.81±0.75^b	60.17±4.06^b	64.22±5.34^ab	70.96±3.03^a
	丙二醛MDA/(nmol/L)	3.24±0.08^a	1.39±0.12^b	1.87±0.10^b	1.58±0.09^b
	谷草转氨酶AST/(U/L)	30.29±2.96^b	36.94±2.34^a	37.80±4.21^a	38.02±1.37^a
	谷丙转氨酶ALT/(U/L)	10.59±0.83	12.01±0.72	12.40±0.32	12.42±0.13
后期 Later stage	葡萄糖GLU/(mmol/L)	2.51±0.19	2.68±0.42	3.01±0.05	3.02±0.40
	甘油三酯TG/(mmol/L)	0.32±0.16	0.34±0.06	0.36±0.12	0.33±0.21
	总胆固醇TCHO/(mmol/L)	4.46±0.96	4.12±1.40	4.61±0.59	4.66±0.41
	白蛋白ALB/(g/L)	41.06±3.23	38.46±1.86	36.46±1.09	36.91±0.58
	总蛋白TP/(g/L)	58.70±6.32	63.22±3.66	59.00±1.66	58.96±6.05
	丙二醛MDA/(nmol/L)	4.86±0.58^a	4.22±0.43^ab	3.81±0.12^b	2.95±0.22^b
	谷草转氨酶AST/(U/L)	22.69±1.52^b	26.55±3.31^a	35.98±3.44^a	23.34±3.01^b
	谷丙转氨酶ALT/(U/L)	11.70±0.26	11.81±0.30	12.25±0.58	11.77±0.20

表 6 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清生化指标的影响 Table 6 Effects of dietary rumen undegradable unsaturated fat on serum biochemical indices of beef

2.5 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛背最长肌和肝脏中PPARγ和FASN基因表达的影响

由表 7可以看出，各组之间背最长肌和肝脏中FASN的基因表达量无显著差异(P＞0.05)。4组的背最长肌中PPARγ的基因表达量显著高于1组(P＜0.05)，其余组之间差异不显著(P＞0.05)；各组之间肝脏中PPARγ的基因表达量差异不显著(P＞0.05)。

表 7 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛背最长肌和肝脏中PPARγ和FASN基因表达的影响 Table 7 Effects of dietary rumen undegradable unsaturated fat on gene expression of PPARγ and FASN in Longissimus dorsi and liver of beef

3 讨论 3.1 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛生长性能的影响

提高饲粮能量水平是提高肉牛平均日增重和肉品质的重要途径。本研究表明，饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪可提高肉牛平均日增重，且随着过瘤胃不饱和脂肪添加量的提高平均日增重有升高的趋势。这与前人的研究结果^[16]相似，可能是摄入总能较高、特别是有效能值较高引起的结果。饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪后提高了饲粮的能量水平，使葡萄糖含量提高，通过反馈作用降低了食欲，这可能是采食量下降的原因之一；此外，过瘤胃不饱和脂肪有特殊的味道，也可能影响食欲，这也可能是引起采食量下降的原因。

饲粮中的过瘤胃不饱和脂肪在瘤胃中几乎不降解，进入小肠后在小肠上皮细胞重新被酯化，中间代谢途径比碳水化合物较少，减少了能量的消耗，从而提高了饲粮的利用效率。此外，脂肪的有效能值比蛋白质和碳水化合物都高，这可能是随着过瘤胃不饱和脂肪添加量的提高料重比呈现下降趋势的原因。

3.2 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清激素指标的影响

本试验中，2、3和4组的血清GC活性均显著高于1组，这可能是饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪后谷物比例降低，导致葡萄糖前体物减少，因而导致脂肪酸糖异生作用的结果^[29]。饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪可能会阻隔瘤胃微生物与饲料颗粒之间的接触，或者干扰消化酶对饲料颗粒的消化^[6]。

INS可促进糖类、脂肪和蛋白质三大营养物质的贮存。本试验中，2、3和4组的血清GLU、TP和TG等含量的提高，反馈性调节INS分泌，这可能是2、3和4组的血清INS含量提高的原因。GH能促进氨基酸进入细胞代谢，加强蛋白质合成，促进脂肪分解，使组织脂肪含量减少。本试验中，2、3和4组血清GH含量的降低可能是育肥后期蛋白质沉积较少，而脂肪沉积较多引起的。

3.3 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清脂肪动员与合成相关酶活性的影响

ATGL是机体脂肪分解时的关键酶和限速酶，其活性受多种激素通过腺苷-3′, 5′-环化一磷酸(cAMP)激活蛋白激酶的级联放大的变构调节，故又称激素敏感性脂肪酶^[30]。本试验中，2、3和4组的血清ATGL活性与1组无显著差异，但大多数低于1组，说明添加脂肪有利于抑制机体脂肪被动员。AACase是脂肪生物合成过程中的限速酶^[30]，其活性的提高有利于机体脂肪的生物合成。本试验中，2、3和4组的血清AACase活性均高于1组，表明饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪有利于机体脂肪的合成。CPT-Ⅰ是10个碳原子以上的脂肪酸进入线粒体进行氧化的载体，被认为是体脂肪动员和分解的关键酶。本试验中，试验前期2、3和4组的血清CPT-Ⅰ活性随着过瘤胃不饱和脂肪添加量的提高有所升高，试验后期则有所下降，这可能是机体组织在蛋白质周转代谢过程中对组织脂肪代谢引起。

3.4 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛血清生化指标的影响

本试验中，2、3和4组血清葡萄糖含量均高于1组，且随着饲粮过瘤胃不饱和脂肪酸添加量的增加而提高，这与GC含量的提高相关，可能是脂肪酸糖异生作用的结果引起葡萄糖含量提高，继而也提高了GC含量。杨致玲等^[20]研究表明，饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪降低了ADF表观消化率，同时还有降低NDF表观消化率的趋势，生成的丙酸浓度降低，合成葡萄糖的前提物减少，因而加大了脂肪酸和氨基酸的糖异生作用。

肝脏是脂肪合成、运转和利用的主要器官，饲粮中游离脂肪酸和内源性脂肪酸可被肝细胞摄取和合成TG，并以脂蛋白形式释放到血液，但肝脏中合成的TG可以和添加的亚油酸结合形成高密度脂蛋白在体内进行代谢，二者综合作用提高了血清TG含量。本试验结果表明，2、3和4组血清TG和TCHO含量与1组差异不显著，但均高于1组，与前人研究结果^[31-32]相同。引起血清TG含量升高的原因，可能是添加过瘤胃不饱和脂肪为TG的合成提供了更多的脂肪酸。而血清TCHO含量较高的原因，一方面是由于饲粮中的不饱和脂肪中的亚油酸可以和胆固醇结合，形成高密度脂蛋白而进行代谢，这具有降低胆固醇作用；另一方面则是饲粮中的不饱和脂肪为胆固醇的合成提供了更充足的乙酰辅酶A，这是合成胆固醇的前体物^[30]，这2个因素相互作用影响胆固醇含量。这可能是2组血清TCHO含量低于1组，而3和4组高于1组的原因。

血清TP是机体蛋白质合成代谢的一个重要指标，主要有血清ALB和球蛋白组成，具有维持血管内胶体正常渗透压和酸碱度、运输多种代谢物的功能。饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪酸后，可能是需要合成更多的蛋白质以形成脂蛋白而进行代谢，提高了血清中ALB和TP含量。

本试验中，试验前期2、3和4组的血清MDA含量均显著低于1组，试验后期3和4组的血清MDA含量显著低于1组；且试验后期血清MDA含量高于试验前期。有资料显示，通过金属诱导产生的活性氧(ROS)会氧化生物膜上磷脂区的PUFA，这些PUFA含量的相对减少和饱和脂肪酸含量的相对增加引起生物膜结构被破坏^[33]，而PUFA氧化后生成的脂质过氧化物在分解时可产生MDA，因此，MDA被认为是反映动物机体抗氧化能力的重要指标。正常生理状态下，动物机体机可以自行对自由基的产生、利用和清除进行调解，当机体氧化防御系统受到损伤，则产生氧化损伤，在修复氧化损伤过程中，必须用另一不饱和脂肪酸修补已发生氧化的区域，否则会影响生物膜结构的完整性和功能^[34]。可能是饲粮中添加的不饱和脂肪酸会及时修复生物膜，避免更多的脂质过氧化物生成，所以，2、3和4组的血清MDA含量相对较少；试验后期正处于炎热的8月，热应激会加速ROS氧化生物膜，所以，试验后期的血清MDA含量比试验前期高。2、3和4组血清AST、ALT活性均大于第1组，但在正常范围之内，说明添加过瘤胃不饱和脂肪未影响糖类、蛋白质和脂肪之间的相互作用。

3.5 饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪对肉牛背最长肌和肝脏中PPARγ和FASN基因表达的影响

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)有3种亚型，其中的PPARγ与抗肿瘤关系最为密切。本课题组前期研究发现，饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪提高了背膘厚度^[17]。本试验中，饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪促进了背最长肌PPARγ的基因表达，支持前人的研究结果^[35]；但抑制了肝脏中PPARγ的基因表达的结果可能与不饱和脂肪性质有关。

FASN是一种多功能代谢酶，通过催化乙酰辅酶A和丙二酸单酰辅酶合成软脂酸，在动物的脂肪生成和沉积中发挥着重要作用^[36]，主要在肝脏和脂肪组织中表达，FASN基因的单核苷酸多态性(SNP)与牛肉的脂肪酸组成有关^[37]。秦文等^[38]的研究结果表明，由于牦牛背最长肌中单不饱和脂肪酸和PUFA含量显著高于黄牛，其FASN基因的表达量也显著高于黄牛。本课题组前期研究发现，饲粮添加过瘤胃不饱和脂肪显著改善了背最长肌脂肪酸组成^[17]。本试验中，添加过瘤胃不饱和脂肪有促进FASN基因表达的趋势，与秦文等^[38]的研究结果一致。

4 结论

① 饲粮中添加过瘤胃不饱和脂肪对试验全期的平均日增重、平均日采食量和料重比没有显著影响，对血清ATGL、CPT-Ⅰ和AACase的活性没有显著影响，提高了血清GC和INS含量，促进了背最长肌PPARγ的基因表达。

② 在本试验条件下，饲粮中过瘤胃不饱和脂肪的适宜添加量为4.0%。

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