近年来，随着畜牧业的发展，全株玉米青贮作为优质粗饲料资源，在反刍动物粗饲料供应上占有重要地位^[1-2]。全株玉米青贮具有营养价值和干物质(DM)含量高、碳水化合物丰富、缓冲能值低等特点，是反刍动物的良好饲料。如何高效生产优质、安全的全株玉米青贮，有效提高其利用率受到广泛关注。传统的青贮方式并不能改变玉米秸秆的营养价值，利用微生物或者添加营养性添加剂提高青贮饲料的利用率越来越受到重视。目前广泛使用的青贮添加剂主要有：1)抑制性添加剂，改善青贮有氧发酵性，抑制霉菌和酵母菌的增殖，常用的有挥发性脂肪酸及其无机酸盐和有机酸等^[3]；2)促进性添加剂，促进乳酸菌的优势发酵，提高青贮品质，包括乳酸菌和酶制剂等^[4]；3)营养性添加剂，为青贮中乳酸菌的发酵提供充足的底物，如尿素、氯化铵、糖蜜等^[5]。

乳酸片球菌(Lactococcus lactococcus)是片球菌属，乳酸片球菌种，能够产酸，具有调节胃肠道菌群、维持肠道微生态平衡的功能。乳酸片球菌能够改善南美白对虾养殖过程中水质，提高其存活率^[6]。Wajda等^[7]报道，乳酸片球菌可以提高火鸡肉类的脂肪含量，提高肉类品质。在养殖细角滨对虾时，饲喂乳酸菌可以有效避免弧菌病毒的影响，提高机体免疫力^[8-9]。Gianfrancesco等^[10]给断奶仔猪饲喂乳酸片球菌后发现，仔猪在断奶期抗传染病的能力得到了提高，并且乳酸片球菌对小肠黏膜具有保护作用。Quarantelli等^[11]将乳酸片球菌添加进蛋鸡饲粮后，发现其产蛋率和产蛋总量都得到了提高，并且降低了饲料转化率。Ferguson等^[12]给罗非鱼饲料补充乳酸片球菌后，发现罗非鱼的非特异性免疫能力有所提高，肠道菌群平衡也得到了改善。尿素能够为反刍动物瘤胃微生物提供非蛋白氮，然而关于乳酸片球菌与尿素混合使用的报道并不多见。因此，本试验主要研究在全株玉米青贮中乳酸片球菌以及乳酸片球菌与尿素混合添加对杜泊绵羊消化代谢、血清生化及瘤胃发酵指标的影响，为全株玉米青贮饲料在育肥羊上更好地利用提供科学依据。

1 材料与方法 1.1 试验材料和试验设计

乳酸片球菌制剂购自洛阳欧科拜克生物技术股份有限公司，乳酸片球菌含量≧1.0×10⁹ CFU/g。

试验选取60只体重[(23.0±1.5) kg]相近、健康状况良好的2月龄断奶杜泊绵羊公羊，随机分为3组，每组4个重复，每个重复5只羊。分别饲喂由不含任何添加剂(对照组)、单一添加全株玉米鲜重0.1%乳酸片球菌(益生菌组)和全株玉米鲜重0.1%乳酸片球菌与0.5%尿素混合添加(混合组)的3种不同全株玉米青贮配制而成的全混合日粮(TMR)。

1.2 试验饲粮

乳熟至腊熟期的地方全株玉米(含水量60%~70%)经联合收割机切割至2~3 cm，运输至羊场，根据试验设计统一制作窖贮饲料，青贮5个月时开始饲养试验。全株玉米青贮直接和其他原料混合制成全混合日粮，全混合日粮配方参照《肉羊饲养标准》(NY/T 816—2004)，按照肉羊体重25 kg、日增重0.25 kg/d营养需要量进行设计。全混合日粮组成及营养水平见表 1。

1.3 饲养管理

试验前对圈舍进行清扫、消毒，对羊只实行防疫、驱虫、打耳号。每日饲喂2次，自由采食、自由饮水。预试期10 d，正试期90 d。

1.4 样品采集与制备

在饲养试验结束前1周，每个重复中随机选取1只试验羊转移至代谢笼中进行7 d消化代谢试验，预试期4 d，采样3 d，每天准确称取每只羊的给料量和剩余料量。采用全收粪尿法准确称量每只羊每天排粪量、排尿量，并按每只羊每天总排粪量的10%取样，最后将3 d的粪样混合均匀后分成2份。一份加入10%的硫酸，使粪样基本浸泡在硫酸中，定氮时将粪样揉碎混匀取样；另一份冷藏保存，65 ℃烘干制成风干粪样，供测定其他营养物质含量。尿样用于尿能和尿氮测定。在正试期结束前1天，晨饲前每个重复中随机选取2只试验羊采集颈静脉血样5 mL，以1 788.8×g常温离心5 min，取上层血清冷冻(-20 ℃)保存，用于血清生化指标的测定。同时，每个重复中随机选取2只试验羊，采食3 h后用瘤胃管抽取50 mL瘤胃液，用pH计(PHS-3C，上海雷磁仪器股份有限公司)立即测定瘤胃液pH，然后用4层纱布过滤。取滤液5 mL放于带盖的试管中，一份滤液加入1 mL 25%偏磷酸和2滴饱和氯化汞溶液使酶灭活，-20 ℃冰箱冷冻保存，用于挥发性脂肪酸(volatile fatty acids，VFA)含量测定；另一份滤液盛放于试管中，-20 ℃冰箱冷冻保存，用于测定氨态氮(NH₃-N)含量。

1.5 测定指标及方法 1.5.1 常规营养成分测定方法

饲料、粪样和尿样中能量采用氧弹式燃烧测热器(WZR-1TCⅡ，长沙奔腾仪器股份有限公司)测定，粗蛋白质(CP)含量采用GB/T 6432—2018^[13]的方法测定，DM含量采用GB/T 6435—2014^[14]的方法测定，粗灰分(Ash)含量采用GB/T 6438—2007^[15]的方法测定，中性洗涤纤维(NDF)含量采用GB/T 20806—2006^[16]的方法测定，酸性洗涤纤维(ADF)含量采用NY/T 1459—2007^[17]的方法测定，钙(Ca)含量采用GB/T 6436—2002^[18]的方法测定，磷(P)含量采用GB/T 6437—2002^[19]的方法测定。

1.5.2 血清生化指标测定方法

血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿素氮(UN)含量采用日本和光纯药工业株式会社提供的试剂盒，采用GS200全自动生化分析仪(深圳市锦瑞电子有限公司)进行测定。血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，采用UV762型紫外分光光度计测定。血清葡萄糖(GLU)含量采用简易罗氏血糖仪测定。

1.5.3 瘤胃发酵指标测定方法

瘤胃液pH用pH计测定，瘤胃液NH₃-N含量利用分光光度计比色法^[20]测定，瘤胃液VFA含量利用GC-9A型气相色谱仪(日本岛津公司)测定。

1.6 数据计算与统计分析

采用Excel 2007和SPSS 13.0统计软件对试验数据进行处理和方差分析，Duncan氏法多重比较检验，显著水平为P < 0.05，试验数据均表示为平均值±标准误。能量、氮代谢相关指标计算公式如下：

消化能(DE，MJ/d)=食入能-粪能；

代谢能(ME，MJ/d)=食入能-粪能-尿能；

能量消化率(EAD，%)=[(食入能-粪能)/食入能]×100；

能量利用率(EMR，%)=[(食入能-粪能-尿能)/食入能]×100；

消化氮(DN，g/d)=食入氮-粪氮；

沉积氮(RN，g/d)=食入氮-粪氮-尿氮；

氮的消化率(NAD，%)=[(食入氮-粪氮)/食入氮]×100；

氮的利用率(NUR，%)=[(食入氮-粪氮-尿氮)/食入氮]×100。

2 结果与分析 2.1 全株玉米青贮常规成分含量及感官性能

全株玉米青贮窖贮5个月后，对照组和益生菌组青贮饲料呈暗绿色，气味酸而不刺鼻，质地茎叶结构清晰辨认，不粘手，混合组青贮饲料呈黄褐色、无氨味。各组全株玉米青贮常规营养成分含量见表 2。

2.2 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊营养物质摄入量的影响

由表 3可以看出，益生菌组与对照组相比，CP摄入量无显著差异(P＞0.05)；混合组的CP摄入量显著高于益生菌组和对照组(P＜0.05)。各组的DM、NDF、ADF、Ash、Ca、P摄入量无显著差异(P＞0.05)。

2.3 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊氮代谢的影响

由表 4可以看出，混合组的食入氮、尿氮、可消化氮、沉积氮和氮的消化率均显著高于对照组(P＜0.05)，其中氮的消化率较对照组提高了10.32%。益生菌组的氮的利用率显著高于对照组(P＜0.05)，较对照组提高了11.28%。

2.4 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊能量代谢的影响

由表 5可以看出，益生菌组的消化能和能量利用率显著低于对照组(P＜0.05)，分别降低了6.26%和5.41%；混合组的能量消化率和能量利用率显著高于对照组(P＜0.05)，分别提高了7.26%和6.06%。

2.5 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊营养物质表观消化率的影响

由表 6可以看出，与对照组相比，益生菌组的DM、OM、NDF和ADF表观消化率差异不显著(P＞0.05)。混合组的DM、NDF和ADF表观消化率显著高于对照组(P＜0.05)，分别提高了11.43%、11.38%和9.50%。

2.6 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊血清生化指标的影响

由表 7可以看出，益生菌组的血清GLU、TP含量及ALT、AST活性均显著高于对照组(P＜0.05)，分别提高了34.10%、12.63%、78.64%和5.45%。

2.7 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊瘤胃发酵指标的影响

由表 8可以看出，混合组的瘤胃液NH₃-N含量显著高于对照组(P＜0.05)，益生菌组的瘤胃液NH₃-N含量显著低于对照组(P＜0.05)。各组的瘤胃液乙酸、丙酸和丁酸比例差异不显著(P＞0.05)。益生菌组的瘤胃液总挥发性脂肪酸(TVFA)含量显著高于对照组，而pH显著低于对照组和混合组(P＜0.05)。

3 讨论 3.1 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊营养摄入的影响

目前，微生态制剂是青贮饲料过程中制作使用较广泛的添加剂，它的主要作用是促进乳酸菌大量繁殖，改变青贮饲料内微生物区系，调控青贮发酵过程，更有效地保存饲料的营养物质，改善青贮品质^[21]。荣辉等^[22]研究了乳酸菌制剂、绿汁发酵液和GLU对象草青贮发酵品质的影响，结果表明，无论是GLU单独添加组还是与乳酸菌制剂组合添加组均提高了整个青贮过程中的水溶性碳水化合物含量。李发杰等^[23]也有类似报道，微生物添加剂能够明显提高改善青贮饲料品质。刘明晖^[24]报道，有益微生剂中的有益微生物在饲料发酵过程中和机体内能将难以消化的粗纤维降解成易消化吸收的糖类、氨基酸等小分子物质，起到了深度生化饲料的作用。杨燕宁^[25]在羊饲粮中添加益生菌，发现添加益生菌不仅能改善羊的胃肠道环境，同时还有助于维系体内的菌群平衡。饲粮的适口性会对动物的采食量造成一定的影响，许腾等^[26]研究发现，添加0.6%尿素的玉米青贮秸秆降低了鲁西黄牛的采食量，Wilson等^[27]认为尿素水平超过1.0%时会通过降低饲粮的适口性而使动物采食量降低。本研究表明，全株玉米青贮中添加0.1%植物乳酸片球菌与0.5%尿素的全混合日粮能够提高杜波绵羊营养物质摄入量。

3.2 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊消化代谢指标的影响

益生菌制剂产生的淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等能降解植物性碳水化合物和饲料中的复杂物质，使碳水化合物更好地被肠道吸收利用，提高饲料转化率。此外，益生菌制剂能够使动物机体内代谢能产生多种氨基酸，合成B族维生素、维生素K等代谢物，可以作为动物体内的营养物质进一步吸收^[28]。穆晓峰等^[29]研究表明，玉米秸秆经石灰和益生菌发酵剂同步处理后，其DM消失率、CP降解率、NDF降解率均有显著提高。徐勇等^[30]报道，经化学处理和微生物混合培养，水稻秸秆纤维素和半纤维素降解率均有大幅度提高，秸秆中的难分解组分经化学处理后朝着易被微生物分解和利用的方向转化。杨华等^[31]在肉羊饲粮中添加益生菌制剂后进行试验，结果显示，在基础饲粮中添加500和1 000 mg/kg的益生菌制剂均能显著提高肉羊的生长性能、营养物质消化率和肉品质。本研究表明，全株玉米青贮中添加0.1%植物乳酸片球菌与0.5%尿素的全混合日粮可提高杜泊绵羊能量和蛋白质的消化率和利用率，且有利于DM、NDF和ADF的消化。

3.3 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊血清生化指标的影响

血清是动物机体内环境的重要组成部分，其成分的变化可反映健康动物营养代谢情况。动物机体内GLU含量是机体能量周转代谢的重要指标，保持相对稳定。反刍动物的GLU来源于瘤胃内VFA和消化道吸收的外源性GLU，通过糖异生作用合成糖元，以满足机体能量需要。GLU是动物机体内能量平衡的一种常用指标，反映了机体对糖的吸收、转运和代谢动态平衡。血清中TP、UN以及其他含氮物质反映了机体蛋白质在体内的消化、吸收和代谢情况。AST和ALT是动物体内重要的转氨酶，在非必需氨基酸的合成和蛋白质分解中起着重要的中介作用，其活性反映了蛋白质合成和分解代谢的状况和机体内氨基酸的利用情况^[32-33]。本试验中，全株玉米青贮中添加乳酸片球菌显著提高了杜泊绵羊的血清GLU、TP含量及ALT、AST含量，这与林冬梅等^[34]研究的复合益生菌对蛋鸡血清生化指标影响的结果相近。

3.4 全株玉米青贮中乳酸片球菌及其与尿素混合添加对杜泊绵羊瘤胃发酵的影响

瘤胃液pH是反映瘤胃发酵水平的一项综合指标，它受饲粮性质、唾液分泌及瘤胃内酸、碱性物质排出、吸收等多种因素的影响。瘤胃液pH对瘤胃内微生物群落的生存起着重要作用，同时也综合反映了瘤胃微生物代谢活性。NH₃-N不仅是饲粮中蛋白质、内源性蛋白质和非蛋白氮分解的终产物，也是瘤胃微生物合成微生物蛋白质的主要氮源。瘤胃液NH₃-N含量一方面受瘤胃壁吸收和食糜排空速度的影响，另一方面又直接影响着瘤胃微生物蛋白质的产量。瘤胃液中NH₃-N含量过低会影响微生物蛋白质的产量，过高表明氨释放速度大于其利用速度，这将造成氨的损失^[35]。瘤胃VFA主要包括乙酸、丙酸和丁酸，是反刍动物重要的能源物质，有95%的VFA在瘤胃、网胃和瓣胃内被吸收进入体组织，进行氧化供能或用于合成脂肪、GLU。当反刍动物食入纤维含量高的饲粮时，会降低瘤胃中脂肪酸的总产量，但能提高乙酸的比例；当食入易发酵的饲料时，微生物活动增加，进而提高瘤胃TVFA含量。本试验结果显示，全株玉米青贮中添加乳酸片球菌显著提高了杜泊绵羊瘤胃液中TVFA含量，显著降低了瘤胃液pH和NH₃-N含量，这可能是由于乳酸片球菌能够高效利用碳源产生乙酸所致。

4 结论

饲喂在全株玉米青贮中单一添加乳酸片球菌的全混合日粮并不能改变杜泊绵羊消化性能，饲喂在全株玉米青贮中乳酸片球菌与尿素混合添加的全混合日粮有利于营养物质的消化吸收和利用。