2. 广东省水产动物精准营养与高效饲料工程技术研究中心, 湛江 524088
2. Aquatic Animals Precision Nutrition and High-Efficiency Feed Engineering Research Center of Guangdong Province, Zhanjiang 524088, China
碳水化合物作为一种重要的能源营养素，以其丰富的可利用性和较低的成本被广泛地应用于水产饲料[1]。海洋养殖经济鱼类对碳水化合物的利用率相对低下，从而限制了碳水化合物在海水养殖中的应用。而鱼类对碳水化合物的利用能力及对葡萄糖(glucose，GLU)的耐受能力一直是鱼类营养学的重要研究内容与方向[2]。一些参与鱼类生长过程的代谢产物，如非必需氨基酸和核酸等，也可由碳水化合物作为前体物质来合成[3]。与哺乳动物和鸟类相比，鱼类利用碳水化合物的能力较差[3-5]，水产饲料中适宜的碳水化合物水平一般低于20%[6]，其过高会对鱼类产生不良影响，如抑制生长[1]、使血糖水平持续偏高[7-9]、增加肝糖原累积[10-14]和降低免疫功能等[15-16]，因此，鱼类曾被认为是天生的糖尿病患者。但也有研究证明，适当提高饲料中碳水化合物水平，可以部分降低蛋白质作为能量的消耗，起到节约蛋白质的作用[16-19]，并能减少氨氮的排泄，减轻对养殖环境的污染[20]。对长吻
目前，关于石斑鱼饲料中适宜碳水化合物水平的研究已有一些报道。Suwirya等[26]报道了老鼠斑(Cromileptes altivelis)可以有效地利用中等水平(20%)的糊精；而对赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)[23]的研究显示，饲料玉米淀粉水平在6%时其生长最好，此外在杂交石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus ♀×Epinephelus lanceolatus♂)[27]的试验结果表明，10%脂肪和8%碳水化合物的饲料饲喂效果最佳；而王勇[28]却发现斜带石斑鱼能够有效利用饲料中26%的生玉米淀粉。迄今为止，关于石斑鱼饲料适宜碳水化合物水平还没有较为一致的研究结果。
因此，本试验旨在研究饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼生长性能、体成分、血浆生化指标及肠道消化酶、肝脏代谢酶和肝脏免疫酶活性的影响，以确定斜带石斑鱼对碳水化合物的适宜需要量，为今后精准高效配合饲料的研制提供基础数据。
1 材料与方法 1.1 试验设计及饲料制作试验用斜带石斑鱼购自广东省雷州市覃斗镇某石斑鱼养殖场。暂养期结束后挑选健康、规格均匀、初重(102.80±1.02) g的斜带石斑鱼300尾，随机分为5个组，每组3个重复，每个重复20尾。5组分别投喂碳水化合物水平为7%、14%、21%、28%和35%的等氮等能的试验饲料。试验期8周。
试验饲料以白鱼粉和酪蛋白为蛋白质源，以鱼油和大豆卵磷脂为脂肪源，以糊精为碳水化合物源，配制5种等氮等能的试验饲料，饲料碳水化合物水平分别为7%、14%、21%、28%和35%，试验饲料组成及营养水平见表 1。饲料原料粉碎过40目筛，按配方比例称取各种原料进行混合，少量组分采用逐级扩大法混合，然后加入鱼油和大豆卵磷脂，将油脂微粒搓散后，放入V型立式混合机中混合均匀，缓慢加入所配饲料重量30%左右的水后再次混匀，用F-26双螺杆挤压机(华南理工大学，广州)制粒，饲料粒径3~4 mm。饲料晾干后用封口袋分装，于-20 ℃冰箱中贮存待用。
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表 1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
试验在广东海洋大学东海岛生物研究基地室内海水养殖系统中进行。每个重复1个1 m3的玻璃钢桶，每桶放20尾鱼。每天投喂2次(08:30和16:30)，均缓慢投喂至表观饱食。开始投饲时石斑鱼均至水面抢食饲料，随后抢食强度下降，最后鱼全部沉入水底不再上来抢食时视为表观饱食。投完1 h后用虹吸法吸取残饵，烘干，称重。试验期间每天定时观察试验鱼摄食情况，并记录死亡数。根据摄食及天气情况，调整投喂量。不间断充气，水温28.5~31.5 ℃，pH 7.5~8.0，盐度26~30，氨氮和亚硝酸盐浓度≤0.5 mg/L，溶氧浓度≥6 mg/L。
1.3 样品采集 1.3.1 粪便收集斜带石斑鱼在正式试验开始2周后，开始收集粪便。每次投喂1 h后清理残饵和粪便，再过2~3 h用虹吸法收集新鲜的粪便，将收集好的粪便分装于做好编号封口袋中，每天1次，直至收集到足够的粪便(约5 g干重)。试验结束后将收集好的粪便于烘箱中50 ℃烘24 h，研磨、粉碎过40目筛后置于-20 ℃冰箱中保存。
1.3.2 样品采集试验结束后斜带石斑鱼饥饿24 h后取样。各桶斜带石斑鱼用丁香酚麻醉后称重、计数。每桶随机取5尾鱼测量体重、体长，计算肥满度(condition factor，CF)，然后于-20 ℃冰箱保存，用于全鱼常规营养成分分析。每桶随机取5尾鱼，尾静脉采血，血样放入1.5 mL抗凝管中，室温下静置4 h后，然后离心(3 500×g，10 min，4 ℃)，取上清液，保存于-80 ℃冰箱，用于血浆生化指标测定。将取血后的斜带石斑鱼分离内脏，分别称每尾鱼的内脏团和肝脏重量，计算肝体比(hepatosomatic index，HSI)和脏体比(viscerosomatic index，VSI)。然后分离背部肌肉，于-80 ℃冰箱保存，用于肌肉常规营养成分分析。最后每桶再随机取3尾鱼，分离肝脏、胃、前肠，-80 ℃冰箱保存，备测代谢酶、免疫酶和消化酶活性。
1.4 指标测定原料、饲料、全鱼、肌肉和粪便样品的常规营养成分测定采用AOAC(1995)[29]方法进行。其中，水分含量的测定为105 ℃烘干恒重法，粗蛋白质含量的测定为凯氏定氮法，粗脂肪含量的测定为索氏抽提法，粗灰分含量的测定为箱式电阻炉550 ℃灼烧法，能量用5E-1C型电脑量热仪(长沙开元仪器股份有限公司)测定。
饲料和粪便用高氯酸消化后，采用电感耦合等离子发射光谱仪(ICP-OES，VISTA-MPX，VARIAN，美国)测定其中三氧化二钇(Y2O3)含量。饲料中营养物质表观消化率(ADC)的计算方法参照Cheng等[30]的方法进行，计算公式如下：
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血浆总蛋白(total protein，TP)、GLU、甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)含量采用全自动生化分析仪(7020型，Hitachi，日本)测定。
肠道消化酶[胃蛋白酶(pepsin，PS)、脂肪酶(lipase，LPS)、淀粉酶(amylase，AMS)]活性、肝脏代谢酶[己糖激酶(hexokinase，HK)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase，PFK)、果糖-1, 6-二磷酸酶(fructose-1, 6-bisphosphatase，FBPase)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PDH)]和免疫酶[碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)、酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)]活性均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定，相应操作参照说明书进行。肝脏溶菌酶(lysozyme，LZM)活性测定方法参照Ellis[31]的方法。
1.5 计算公式及数据统计方法
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使用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，当有显著差异(P < 0.05)时，用Duncan氏法对各组的平均值进行比较。数据用平均值±标准差(mean±SD)表示。使用Excel 2010对饲料碳水化合物水平和SGR建立二元回归模型。
2 结果 2.1 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼生长性能的影响由表 2可知，斜带石斑鱼的SR不受饲料碳水化合物水平影响(P>0.05)。斜带石斑鱼的WGR、SGR和PER均随着饲料碳水化合物水平升高呈现先上升后下降的趋势，其中28%组的WGR、SGR显著高于其他各组(P < 0.05)，PER显著高于7%和14%组(P < 0.05)；而斜带石斑鱼的FCR随着饲料碳水化合物水平升高呈现先下降后上升的趋势，28%组的FCR显著低于7%和14%组(P < 0.05)。
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表 2 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary carbohydrate level on growth performance of orange-spotted grouper (n=3) |
随着饲料碳水化合物水平升高，斜带石斑鱼的CF呈现先上升后下降的趋势，最高值出现在28%组，显著高于7%、14%和21%组(P < 0.05)；斜带石斑鱼的HSI和VSI都逐渐上升，均在35%组取得最高值，35%组的VSI显著高于7%组(P < 0.05)，35%组的HSI显著高于其他各组(P < 0.05)。
在本试验条件下，以SGR为评价指标，经二次回归曲线模型拟合后得出：斜带石斑鱼对饲料中碳水化合物的适宜需要量为28.50%(图 1)。
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图 1 饲料碳水化合物水平与斜带石斑鱼特定生长率之间的关系 Fig. 1 Relationship between dietary carbohydrate level and SGR of orange-spotted grouper |
由表 3可知，粗脂肪和能量表观消化率变化趋势相同，即随着饲料碳水化合物水平的升高逐渐下降，其中，35%组的粗脂肪和能量表观消化率显著低于7%、14%、21%组(P < 0.05)，与28%组无显著差异(P>0.05)。21%和35%组的干物质表观消化率显著高于7%、14%组(P < 0.05)。斜带石斑鱼的粗蛋白质表观消化率不受饲料碳水化合物水平的显著影响(P>0.05)。
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表 3 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼营养物质表观消化率的影响 Table 3 Effects of dietary carbohydrate level on nutrient apparent digestibilities of orange-spotted grouper |
由表 4可知，随着饲料碳水化合物水平的升高，全鱼粗蛋白质含量均逐渐下降，35%组显著低于7%组(P < 0.05)；全鱼粗脂肪含量逐渐上升，35%组显著高于其他各组(P < 0.05)。35%组的全鱼粗灰分含量显著低于7%、14%和28%组(P < 0.05)。斜带石斑鱼的全鱼水分含量不受饲料碳水化合物水平的显著影响(P>0.05)。
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表 4 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼全鱼、肌肉常规营养成分和组织糖原含量的影响 Table 4 Effects of dietary carbohydrate level on routine nutritional composition in whole body and muscle and tissues glycogen content of orange-spotted grouper (n=3) |
斜带石斑鱼的肌肉粗蛋白质和水分含量不受饲料碳水化合物水平的显著影响(P>0.05)。随着饲料碳水化合物水平的升高，肌肉粗脂肪含量逐渐上升，35%组显著高于7%组(P < 0.05)，但与其他各组无显著差异(P>0.05)。7%组的肌肉粗灰分含量显著高于其他各组(P < 0.05)，但其他各组间差异不显著(P>0.05)。
随着饲料碳水化合物水平的升高，肝糖原和肌糖原含量逐渐升高，35%组的肝糖原含量显著高于7%、14%和21%组(P < 0.05)；35%组的肌糖原含量显著高于其他各组(P < 0.05)，28%组显著高于7%和14%组(P < 0.05)。
2.4 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼血浆生化指标的影响由表 5可知，随着饲料碳水化合物水平的升高，血浆GLU含量最大值出现在28%组，血浆TP、TG和TC含量最大值均出现在35%组。35%组的血浆TP含量显著高于7%组(P < 0.05)，但与其他各组没有显著差异(P>0.05)。28%组的血浆GLU含量显著高于7%和14%组(P < 0.05)，但与21%和35%组没有显著差异(P>0.05)。35%组的血浆TG含量显著高于7%和14%组(P < 0.05)，但与21%和28%组没有显著差异(P>0.05)。35%组的血浆TC含量显著高于7%、14%和21%组(P < 0.05)，但与28%组没有显著差异(P>0.05)。
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表 5 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼血浆生化指标的影响 Table 5 Effects of dietary carbohydrate level on plasma biochemical parameters of orange-spotted grouper (n=3) |
由表 6可知，随着饲料碳水化合物水平的升高，肝脏FBPase活性先升高后降低，肝脏HK、PFK和G6PDH活性最高值均出现在35%组。35%组的肝脏HK活性显著高于7%组(P < 0.05)，与14%、21%和28%组无显著差异(P>0.05)。35%组的肝脏PFK活性显著高于其他4组(P < 0.05)，14%、21%和28%组显著高于7%组(P < 0.05)。35%组的肝脏G6PDH活性显著高于7%、14%和21%组(P < 0.05)。21%组的肝脏FBPase活性最高，显著高于7%、14%和35%组(P < 0.05)。
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表 6 饲料中碳水化合物水平对斜带石斑鱼肝脏代谢酶活性的影响 Table 6 Effects of dietary carbohydrate level on liver metabolism enzyme activities of orange-spotted grouper (n=3) |
由表 7可知，35%组的肠道胃蛋白酶活性显著高于7%、14%、28%组(P < 0.05)，7%和14%组显著低于21%、28%和35%组(P < 0.05)。35%组的肠道脂肪酶活性显著低于7%、14%和28%组(P < 0.05)。35%组的肠道淀粉酶活性显著高于7%、14%和28%组(P < 0.05)，与21%组无显著差异(P>0.05)。
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表 7 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼肠道消化酶活性的影响 Table 7 Effects of dietary carbohydrate level on intestinal digestive enzyme activities of orange-spotted grouper (n=3) |
由表 8可知，随着饲料碳水化合物水平升高，斜带石斑鱼肝脏AKP活性逐渐上升，肝脏SOD活性先上升后下降，肝脏ACP活性逐渐下降。35%组的肝脏AKP活性显著高于其他各组(P < 0.05)，21%和28%组显著高于7%和14%组(P < 0.05)。7%组的肝脏ACP活性显著高于21%、28%和35%组(P < 0.05)，但与14%组没有显著差异(P>0.05)。28%组的肝脏SOD活性显著高于7%组(P>0.05)，与其他各组没有显著差异(P>0.05)。35%组的肝脏LZM活性最高，显著高于7%、14%和21%组(P < 0.05)，但与28%组没有显著差异(P>0.05)。
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表 8 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼肝脏免疫酶活性的影响 Table 8 Effects of dietary carbohydrate level on liver immune enzyme activities of orange-spotted grouper (n=3) |
与哺乳动物和鸟类相比，鱼类对碳水化合物利用能力较低，特别是肉食性鱼类[1, 32]，当缺乏碳水化合物时，蛋白质会被分解用于能量供应，降低生长性能。长吻鮠[21]、大西洋鲑(Salmo salar)[22]和赤点石斑鱼(Epinephelus akaara)[23]的研究表明，与不含碳水化合物的饲料相比，饲料中含有低水平的碳水化合物更能促进鱼的生长。本试验中，随着饲料碳水化合物水平的升高，斜带石斑鱼的WGR、SGR和PER逐渐上升，均在28%组达到最大值，而FCR变化趋势同PER相反。这说明斜带石斑鱼可以在一定程度上利用糊精形式的碳水化合物。王勇[28]研究表明，斜带石斑鱼(初重20.79 g)能够有效利用饲料中26%的生玉米淀粉，与本试验结果接近。而黄岩等[33]研究发现，斜带石斑鱼(初重6.75 g)较为适宜生长的蛋白质和玉米淀粉水平分别为45%和20%。此结果小于本试验结果，可能是因为试验所用碳源不同，相比于玉米淀粉，斜带石斑鱼能更好地利用糊精。Ren等[34]的研究也表明糊精是团头鲂(Megalobrama amblycephala)的最佳碳源；此外还有可能是因为石斑鱼规格不同(本次试验斜带石斑鱼初重为102.80 g，黄岩试验所用斜带石斑鱼初重为6.75 g)造成的。在日本比目鱼(Paralichthy solivaceus)[35]的研究中发现，饲料中适宜碳水化合物水平为18%~24%。暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)[36]获得最佳生长和饲料利用的淀粉水平为22.5%~23.5%。在本试验中，以SGR为评价指标，经二次回归曲线模型拟合后得出，斜带石斑鱼对饲料中碳水化合物适宜需要量为28.5%，与上述研究基本一致。
3.2 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼营养物质表观消化率的影响表观消化率反映了鱼类对饲料中某些成分的消化、吸收和利用能力。饲料的表观消化率受饲料性质、化学成分和外源酶的影响。本研究中，随着饲料碳水化合物水平升高，斜带石斑鱼的干物质表观消化率逐渐上升，然后趋于稳定；各组粗蛋白质表观消化率差异不显著。军曹鱼对饲料蛋白质有较高的消化率，但不同碳水化物水平组间蛋白质消化率无显著差异[37]；欧洲鲈鱼(Dicentrarchus labrax)[38]、团头鲂[16]和暗纹东方鲀[36]研究中也发现了类似的结果。暗纹东方鲀[36]和刺参(Apostichopus japonicus)[39]的研究表明，粗脂肪表观消化率不受饲料碳水化合物水平的影响，而在青鱼(Mylopharyngodon pieces)[40]研究中得出，饲料碳水化合物水平越高，粗脂肪表观消化率越低，即饲料粗脂肪含量越高其表观消化率越高。还有一些研究也发现，饲料中碳水化合物水平对其他营养物质的表观消化率有显著影响，尤其是脂类[41-44]。本试验中，斜带石斑鱼的粗脂肪、能量表观消化率均与饲料碳水化合物水平呈负相关，这说明斜带石斑鱼对粗脂肪和能量表观消化率的下降在很大程度上与试验饲料配方中鱼油水平逐渐减少有关。
3.3 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼全鱼、肌肉常规营养成分和组织糖原含量的影响许多研究表明，全鱼常规营养成分不受饲料碳水化合物水平的影响。本试验中，随着饲料中碳水化合物水平的上升，全鱼和肌肉的粗脂肪含量逐渐增加，粗蛋白质和粗灰分含量逐渐下降。印尼须鲃(Puntius gonionotus)[45]的研究中也发现随着饲料中碳水化合物水平的增加，全鱼干物质和粗脂肪含量增加。本试验结果表明，过多的碳水化合物在体内通过糖酵解等途径转化为脂肪后在肝脏和肌肉中沉积，导致鱼类肝脏和肌肉脂肪含量增加[46-47]，从而降低机体蛋白质和灰分的比例。肝脏和肌肉是GLU以糖原形式储存的主要部位，饲料中碳水化合物经消化吸收以GLU形式进入肝脏和血液，当饲料碳水化合物水平较高时，肝糖原合成会增加[47]。本试验结果也显示，斜带石斑鱼肝糖原和肌糖原含量均随饲料碳水化合物水平的增加而逐渐升高。在军曹鱼[37]、刺参[39]、高首鲟(Acipenser transmontanus)[14]、杂交条纹鲈(Morone chrysops ♀×Morone saxatilis♂)[48]、赤点石斑鱼[23]、尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)[42]和欧洲鲈鱼[38]研究中也得出类似的结果。
3.4 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼血浆生化指标的影响血浆生化指标随着鱼的营养状况不同而发生变化[49-50]。GLU含量的恒定是机体健康的重要指标之一，TG、胆固醇是脂类在血液中存在和运输的形式，其含量代表脂肪在体内代谢的状况[47]。本试验中，随着饲料中碳水化合物水平的升高，斜带石斑鱼的血浆GLU、TP、TG和TC含量均逐渐升高，而当碳水化合物水平达到28%时，趋于稳定或继续升高。这表明在含有较高碳水化物水平的饲料中，GLU和脂质转运的反应更为活跃。在尼罗罗非鱼[42]、欧洲鲈鱼[51]和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[52]的研究中也有类似的结果。
3.5 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼肝脏代谢酶活性的影响GLU分解供能首要途径就是糖酵解。糖酵解第一步是在HK(肝脏为葡萄糖激酶)催化下，GLU磷酸化生成6-磷酸葡萄糖，其中，HK对GLU能否进入糖酵解途径起着关键作用[7]。不少学者已经在多种鱼类体内测得HK活性[38-39, 53-54]，在大口黑鲈(Micropterus salmoides)[11]和海鲈(Perca fluviatilis)[13]的研究中发现，HK受饲料碳水化合物的诱导而产生，其活性也随着饲料碳水化合物水平的升高而上升；但在虹鳟[55]和杂交罗非鱼(Oreochromis niloticus× O. aureus)[56]的研究结果表明，HK活性不受饲料碳水化合物水平及营养状况的影响。在本试验中，斜带石斑鱼肝脏HK活性随饲料碳水化合物水平的增加而升高。上述结果的差异可能是由于鱼的种类、饲料配方和饲养环境等试验不同造成的。
PFK是糖酵解途径的一个限速酶，作用是催化果糖-6-磷酸转化为果糖-1, 6-二磷酸[7]。一些研究发现，PFK的活性不受饲料中碳水化合物水平的影响[11, 36, 42]。对大口黑鲈[10]的研究发现，高淀粉组的肝脏PFK活性显著高于低淀粉组。本研究结果表明，斜带石斑鱼的肝脏PFK活性与碳水化合物水平呈正相关，在大口黑鲈[10]、罗非鱼[56]和金头鲷(Sparus aurata)[57-58]的研究中也得到了类似结果。由此可见，PFK的活性受营养条件的限制，在高碳水化合物水平饲料条件下其活性增高；说明在鱼类糖酵解途径中，PFK作用很大，推测该代谢环节不是鱼类对碳水化合物利用的限制步骤。此外，饲料碳水化合物水平对不同食性鱼类糖酵解途径相关酶活性影响也不尽相同。王渊源等[59]在研究鲤鱼、真鲷和鲺鱼(Seriola quinqueradiata)饲料中糊精适宜需要量时发现，PFK活性在不同鱼体其数值差异较大，次顺序为鲤鱼>真鲷>鲺鱼，得出杂食性鱼类糖酵解途径比较活跃，其PFK活性较高。综上所述，不同种类、不同食性鱼类PFK活性受饲料碳水化合物水平的影响各不相同。
一般认为，投喂高碳水化合物水平饲料时，鱼体内GLU异生作用受到抑制。Kirchner等[55]对虹鳟的研究表明，摄食高碳水化合物饲料组要比低碳水化合物饲料组的FBPase活性低。对大口黑鲈和欧洲鲈鱼的研究发现，高碳水化合物饲料对肝脏FBPase活性有抑制作用[10, 60]。本试验结果表明，斜带石斑鱼肝脏FBPase活性随饲料碳水化合物水平增加而呈现先升高后降低的趋势；其活性升高说明斜带石斑鱼体内糖异生作用加强，非糖物质或糖代谢中间产物通过该作用转化成GLU以供机体利用；饲料碳水化合物达到一定水平后，肝脏FBPase活性降低，其原因可能是该酶促反应的底物磷酸二羟丙酮较多地流向脂肪合成途径，致使斜带石斑鱼体内糖异生作用减弱，而磷酸二羟丙酮又可以转化成脂酰甘油的前体甘油-3-磷酸，说明石斑鱼体内各营养素的代谢并不单一而是紧密联系的。也有资料显示，FBPase活性受饲料蛋白质水平的影响远比受饲料碳水化合物水平的影响要大的多[55, 60-61]。
G6PDH是磷酸戊糖途径的关键酶，参与脂肪酸合成所需还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的生成[62]。G6PDH活性的增高，有利于提高鱼类对饲料中碳水化合物的利用。Barroso等[63]报道，当鱼体完全不摄入含碳水化合物饲料时，其肝脏G6PDH活性降低，但对脂肪组织中G6PDH活性无显著影响。在尼罗罗非鱼[6]、欧洲鳗鲡[64]、鲤鱼[65]、金头鲷[58]上的研究发现，肝脏G6PDH活性随饲料碳水化合物水平的增加逐渐上升。在本试验中，随着饲料碳水化合物水平增加，斜带石斑鱼的肝脏G6PDH活性逐渐上升。这表明石斑鱼体内磷酸戊糖代谢途径增强，斜带石斑鱼对高碳水化合物饲料具有一定的代谢适应性。
3.6 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼肠道消化酶活性的影响鱼类肠道消化酶活性不但可以反映基本的消化生理特征，还可以作为衡量鱼类对饲料营养成分消化、吸收和利用的重要指标[66]，鱼类肠道消化酶活性的高低决定鱼类对营养物质消化吸收的能力。一般认为，肉食性鱼类消化道较短，肠道α-淀粉酶活性低，对碳水化合物的利用能力显著低于草食性和杂食性鱼类[7]。本试验中，肠道淀粉酶活性随着饲料碳水化合物水平的升高而上升；说明饲料中碳水化合物对斜带石斑鱼肠道淀粉酶分泌有诱导作用，这与截齿拟鲤(Rutilus frisii)[67]、军曹鱼[37]、塞内加尔鳎(Solea senegalensis)[68]、亚洲鳎(Scleropages formosus)[69]的研究结果一致。除肠道淀粉酶活性外，肠道蛋白酶活性也随着饲料中碳水化合物水平的变化而发生变化[39, 45, 66, 70]。饲料碳水化合物水平升高可以显著增加截齿拟鲤的肠道胰蛋白酶活性[67]。本试验中，肠道胃蛋白酶活性也随饲料中碳水化合物水平的上升而增加。对印尼须鲃[45]的研究结果表明，随着饲料中碳水化合物水平的增加，肠道脂肪酶活性先升高后降低。本试验中，肠道脂肪酶活性随饲料中碳水化合物水平的上升而下降。由此可知，饲料碳水化合物水平对不同鱼种肠道脂肪酶活性影响不同，这种差异可能和鱼类的物种特异性和食性等有关。
3.7 饲料碳水化合物水平对斜带石斑鱼肝脏免疫酶活性的影响研究表明，肉食性鱼类对碳水化合物的利用能力弱，主要是因为消化酶活性低和GLU转运载体较少且敏感性低[71]。因此，过多的摄入碳水化合物可导致鱼类出现氧化应激[72]，从而影响鱼类的先天免疫[25, 73]。此外，高碳水化合物可能还会影响鱼类对疾病的易感性[74]。目前，关于饲料碳水化合物水平对鱼体免疫方面的研究较少。Lin等[10]研究表明，高碳水化合物饲料在一定程度上抑制了大口黑鲈的先天免疫。然而，在团头鲂的研究表明，在饲料中加入高水平的GLU可以增强其非特异性免疫[16]。本试验中，当饲料碳水化合物水平从7%上升到21%时，斜带石斑鱼的肝脏AKP、SOD和LZM活性均逐渐升高，这说明饲料中适量添加碳水化合物可以提高石斑鱼免疫力；当饲料碳水化合物水平超过28%时，除肝脏AKP和LZM活性外，肝脏SOD活性开始下降；进一步说明饲料中碳水化合物水平过高可能在一定程度上抑制石斑鱼的免疫力。随着饥饿程度的加深，泥鳅(Missgurnus arguillicaudatus)肝糖原和肌糖原的含量减少，肝脏和肌肉AKP活性下降，肝脏和肌肉ACP活性则增强[75]，说明体内ACP活性与糖原含量存在一定负相关关系。本试验中，肝糖原和肌糖原含量均与饲料碳水化合物水平呈正相关，随着饲料碳水化合物水平的增加，肝脏ACP活性逐渐下降，进一步证明了这一结论。
4 结论① 饲料中适宜水平的碳水化合物可以改善斜带石斑鱼的生长性能，且对体成分、营养物质表观消化率、血浆生化指标及消化、免疫、代谢酶活性有一定影响，饲料中高碳水化合物水平将导致鱼体HSI、VSI及肌糖原、肝糖原含量升高。
② 本试验条件下，以SGR为评价指标，经二次回归曲线模型拟合后得出，斜带石斑鱼对饲料中碳水化合物的适宜需要量为28.50%。
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