动物营养学报    2020, Vol. 32 Issue (5): 2326-2341    PDF    
酵母水解物对青鱼幼鱼生长性能、肌肉品质及肝胰脏抗氧化指标和组织形态的影响
蒋敏敏1,2 , 叶金云2 , 邵仙萍2 , 林一帆2 , 吴成龙2 , 姜黎君2 , 岑欣诺2 , 周歧存1     
1. 宁波大学海洋学院鱼类营养研究室, 宁波 315211;
2. 水生动物繁育与营养国家地方联合工程实验室, 浙江省水生生物资源养护与开发技术研究重点实验室, 中国水产科学研究院水生动物繁育与营养重点实验室, 湖州师范学院生命科学学院, 湖州 313000
摘要: 本试验旨在研究饲料中添加不同水平酵母水解物(YHY)对青鱼(Mylopharyngodon piceus)幼鱼生长性能、全鱼及肌肉氨基酸组成以及肝胰脏抗氧化指标和组织形态的影响。在基础饲料中分别添加0、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%的YHY,配制成6种等氮等能的试验饲料[分别命名为YHY0(对照)、YHY0.5、YHY1.0、YHY1.5、YHY2.0和YHY2.5]。选择初始体重为(5.53±0.14)g的青鱼幼鱼720尾,随机分为6组,每组4个重复,每个重复30尾鱼,在室内循环水系统中进行为期8周的养殖试验。结果表明:1)青鱼幼鱼的特定生长率(SGR)呈先上升后下降的趋势,蛋白质效率(PER)上升后逐渐平缓。YHY1.5和YHY2.0组SGR显著高于对照组(P < 0.05),且与YHY2.5组相比无显著差异(P>0.05);YHY1.5、YHY2.0和YHY2.5组PER显著高于对照组(P < 0.05)。2)饲料中添加不同水平YHY对青鱼幼鱼全鱼的干物质、粗蛋白质和粗灰分含量无显著影响(P>0.05)。全鱼粗脂肪含量呈上升趋势,在YHY2.5组达到最大,显著高于对照组(P < 0.05)。YHY添加水平对青鱼幼鱼肌肉的干物质、粗蛋白质和粗脂肪含量无显著影响(P>0.05)。YHY2.0和YHY2.5组肌肉粗灰分含量显著高于对照组(P < 0.05)。3)与对照组相比,饲料中添加YHY显著增加了青鱼幼鱼全鱼以及肌肉中的必需氨基酸以及呈味氨基酸含量(P < 0.05),同时,显著提高了肌肉中各种氨基酸的氨基酸价(AAS)、化学价(CS)以及必需氨基酸指数(EAAI)(P < 0.05)。4)青鱼幼鱼肝胰脏总抗氧化能力(T-AOC)及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性均呈先升高后降低的变化趋势。在YHY添加水平为1.5%时,青鱼幼鱼肝胰脏的T-AOC及T-SOD活性均达到最高,显著高于对照组(P < 0.05)。YHY对青鱼幼鱼肝胰脏过氧化氢酶(CAT)活性无显著影响(P>0.05),有利于改善肝胰脏细胞空泡化现象。综上所述,基于SGR和PER的数据分析,在饲料中添加1.57%~2.02%的YHY能提高青鱼幼鱼的生长性能,同时,YHY能提高青鱼幼鱼全鱼及肌肉的氨基酸含量、肝胰脏抗氧化指标,改善肌肉品质,并且不会对青鱼幼鱼的肝胰脏组织形态产生不良影响。
关键词: 酵母水解物    青鱼    生长性能    氨基酸    肌肉品质    肝胰脏抗氧化酶    组织形态    
Effects of Yeast Hydrolysate on Growth Performance, Muscle Quality, Hepatopancreases Antioxidant Indexes and Tissue Morphology of Juvenile Black Carp (Mylopharyngodon piceus)
JIANG Minmin1,2 , YE Jinyun2 , SHAO Xianping2 , LIN Yifan2 , WU Chenglong2 , JIANG Lijun2 , CEN Xinnuo2 , ZHOU Qicun1     
1. Laboratory of Fish Nutrition, School of Marine Sciences, Ningbo University, Ningbo 315211, China;
2. National-Local Joint Engineering Laboratory of Aquatic Animal Genetic Breeding and Nutrition, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Aquatic Resources Conservation and Development, Key Laboratory of Aquatic Animal Genetic Breeding and Nutrition of Chinese Academy of Fishery Sciences, College of Life Sciences, Huzhou University, Huzhou 313000, China
Abstract: This experiment was conducted to estimate the effects of dietary levels of yeast hydrolysate (YHY) on growth performance, whole body and muscle amino acid composition, hepatopancreases antioxidant indexes and tissue morphology of juvenile black carp (Mylopharyngodon piceus). The YHY of 0, 0.5%, 1.0%, 1.5%, 2.0% and 2.5% were added to a basic diet, and six isonitrogenous and isoenergetic diets were prepared[named YHY0 (control), YHY0.5, YHY1.0, YHY1.5, YHY2.0 and YHY2.5, respectively]. A total of 720 juvenile black carps with an initial average body weight of (5.53±0.14) g were randomly divided into six groups with four replicates per group and 30 black carps per replicate. The experiment was carried out in the circulating water system for 8 weeks. The results showed as follow:1) the specific growth rate (SGR) of juvenile black carp increased first and then decreased, and the protein efficiency (PER) increased and then gradually smooth. YHY1.5 and YHY2.0 groups had significantly higher SGR compared with the control group (P < 0.05), and there was no significant difference compared with the YHY2.5 group (P>0.05); PER in the YHY1.5, YHY2.0 and YHY2.5 groups was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). 2) Dietary different levels of YHY had no significant influences on dry matter, crude protein and ash contents of whole body (P>0.05). The crude lipid of whole body showed an upward trend and reached the maximum in the YHY2.5 group, which was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). Dietary different levels of YHY had no significant influence on day matter, crude protein and crude lipid contents of juvenile black carp muscle (P>0.05). The ash contents in the YHY2.0 and YHY2.5 groups was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). 3) The essential amino acids and flavor amino acids contents of whole body and muscle in all supplemental groups were significantly higher than those in control group (P < 0.05). At the same time, the amino acid score (AAS), chemical score (CS) and essential amino acid index (EAAI) were significantly improved with the increasing supplementation level of YHY (P < 0.05). 4) The total antioxidant capacity (T-AOC) and total superoxide dismutase (T-SOD) activity of juvenile black carp were increased firstly and then decreased. And the T-AOC and T-SOD activity in the 1.5% group reached the highest, which was significantly higher than that in the control group (P < 0.05). There was no significant influence on catalase (CAT) activity in hepatopancreases of juvenile black carp (P>0.05). Dietary YHY different level could improve the lipid deposition of hepatopancreases. In conclusion, based on the data analysis of SGR and PER, dietary YHY supplemental levels of 1.57% to 2.02% can significantly improve the growth performance, and at the same time, the YHY can improve the whole body and muscle amino acid composition, the quality of muscle and the hepatopancreases antioxidant enzyme activity of juvenile black carp. YHY does not adversely affect the hepatopancreases tissue morphology of juvenile black carp.
Key words: yeast hydrolysate    Mylopharyngodon piceus    growth performance    amino acid    muscle quality    hepatopancreases antioxidant enzymes    tissue morphology    

青鱼(Mylopharyngodon piceus)俗称乌青、螺蛳青等,因其具有生长快、产量高、肉质鲜美等特点,深受广大消费者的喜爱,是我国传统淡水养殖的“四大家鱼”之一。天然水域中的青鱼以摄食螺蛳、蚌和蚬为主,是典型的肉食性鱼类[1]。青鱼养殖产量逐年增加,2018年青鱼养殖年产量已达到69.13万t[2]。然而,由于集约化养殖的发展,水域污染加剧,同时天然饵料越来越匮乏,严重制约了青鱼养殖业的发展,因此,人工配合饲料及其质量已经成为解决青鱼养殖的关键性技术问题[3]

酵母水解物(yeast hydrolysate,YHY)采用新鲜啤酒酵母为原料,经除杂、自溶、酶解、喷雾干燥等工艺精制而成[4],YHY富含β-葡聚糖、核苷酸、甘露寡糖(MOS)等免疫刺激物以及丰富的B族维生素、游离氨基酸、矿物质等营养物质[4-5],这些物质可以促进机体生长,增强动物免疫力,因此,YHY可以作为一种功能性饲料添加剂。YHY在欧洲鳇(Huso huso)[6]、大口黑鲈(Micropterus salmoides)[7]、金头鲷(Sparus aurata L.)[8]、南亚野鲮(Labeo rohita)[9]、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[10]等养殖鱼类中的应用效果已有研究,这些研究表明,YHY可以促进鱼类的生长、提高非特性免疫力,但是YHY在青鱼幼鱼中的应用效果还未见报道。

青鱼的蛋白质[3, 11]、脂肪[12]、可消化糖类[13]等营养需求的研究已有基本定论,近年来,对青鱼的营养研究主要集中在饲料的消化率[14]、鱼粉替代比例[15]、维生素适宜水平[16-17]等,而对青鱼幼鱼配合饲料中的功能性添加剂研究少见报道。因此,本试验旨在研究饲料中添加不同水平的YHY对青鱼幼鱼生长性能、肌肉品质、肝胰脏抗氧化指标及组织形态的影响,以期为YHY在青鱼幼鱼配合饲料中的应用提供理论依据,促进青鱼养殖业的可持续发展。

1 材料与方法 1.1 试验材料及饲料

YHY由浙江某生物科技股份有限公司提供,选择粗蛋白质含量大于45%、发酵代数低、感官新鲜、有啤酒香味、无异味的啤酒酵母泥,经脱苦、水解、喷雾干燥等工艺制备成YHY。YHY粗蛋白质含量为45.8%,粗灰分含量为6.6%,水分含量为4.5%,粗纤维含量为0.74%,粗脂肪含量为2.88%,无氮浸出物含量为39.48%,氨基酸态氮含量为2.1%,酸溶蛋白质含量为32.8%,β-葡聚糖含量为22.6%,甘露聚糖含量为9.87%,游离氨基酸总和为12.3%。

以鱼粉、血粉为动物蛋白质源,豆粕、菜籽粕、花生粕、玉米蛋白粉为植物蛋白质源;鱼油及豆油为脂肪源,用糊精和面粉来平衡饲料能量水平,YHY的添加水平分别为0、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%。用玉米蛋白粉来调整饲料粗蛋白质水平,配制成6种等氮等能的青鱼试验饲料[分别命名为YHY0(对照)、YHY0.5、YHY1.0、YHY1.5、YHY2.0、YHY2.5],试验饲料组成及营养水平见表 1,试验饲料氨基酸组成见表 2。按照表 1将各饲料原料均粉碎过60目筛,按配方比例准确称重,充分混匀,其中维生素和矿物质等微量原料采用逐级扩大法混合,混合均匀的饲料原料采用双螺杆挤条机制成粒径为2 mm的颗粒饲料,放置于40 ℃烘箱中风干,最后将饲料成品密封后保存于-20 ℃冰箱中备用。

表 1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)  
表 2 试验饲料氨基酸组成(干物质基础) Table 2 Amino acid composition of experimental diets (DM basis)  
1.2 养殖管理

试验鱼购于菱湖一养殖场,在湖州师范学院循环式水产养殖系统试验基地进行养殖试验。在正式养殖试验前,用未添加YHY的对照饲料驯化1周,使鱼种逐渐适应养殖环境。暂养结束后,选取规格相近、体质健壮、初始体重为(5.53±0.14) g的青鱼鱼种720尾,随机分为6组,每组4个重复,每个重复30尾鱼,养殖于24个500 L内循环试验缸(直径×高:90 cm×80 cm)中。

在养殖试验期间,每天08:30、12:30、16:30定时、定点饱食投喂,日投喂率为鱼体重的2%~6%,视水温、摄食和鱼种生长情况作适当调整,投饵1 h后清除残饵,每日换水量为水缸的1/4~1/3。试验期间,水温为(26±2)℃,自然光照,24 h持续充气,溶氧含量>5.0 mg/L,pH为7.2~7.6,养殖期为8周。

1.3 样品采集及指标分析 1.3.1 样品采集

在养殖试验结束后,进行24 h饥饿处理,将每缸鱼全部捞出,用MS-222麻醉,统计尾数并称重,分别计算特定生长率、蛋白质效率等生长性能指标。每缸随机取8尾鱼,取其全部肝胰脏保存于-80 ℃冰箱中,用于肝胰脏抗氧化指标分析;另取2尾鱼,取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm大小的肝胰脏组织,放置于4%多聚甲醛中固定,用于石蜡切片制作。剥离鱼背部侧线以上的肌肉,装入编号塑封袋中,并放置于-20 ℃冰箱中保存,用于肌肉常规营养成分和氨基酸组成的测定。另随机取8尾全鱼放置于-20 ℃冰箱中保存,用于全鱼常规营养成分和氨基酸成分的测定。

1.3.2 常规营养成分测定

试验饲料、全鱼及肌肉干物质含量采用失重法测定,于105 ℃烘干至恒重;粗蛋白质含量采用凯氏定氮法(Kjeltec-8200,FOSS,丹麦)测定;粗灰分含量采用马弗炉550 ℃灼烧法测定;粗脂肪含量采用索氏抽提法(乙醚为抽提液)测定;粗纤维含量采用滤袋技术(A200i,ANKOM)测定。

1.3.3 肝胰脏抗氧化指标的测定

肝胰脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。

1.3.4 氨基酸成分的测定

试验饲料、全鱼和肌肉的氨基酸组成采用日立8900全自动氨基酸测定仪(Hitachi L-8900,Hitachi, 日本)测定。

1.3.5 肝胰脏组织形态的观察

肝胰脏样品送至杭州厚爱生物科技有限公司进行石蜡切片的制作,然后显微镜观察。

1.3.6 生长指标计算公式
1.3.7 肌肉营养品质评定方法

根据联合国粮食与农业组织(FAO)以及世界卫生组织(WHO)推荐的必需氨基酸(EAA)每克氮氨基酸评分标准模式(mg/g N, 干物质基础)[18]和全鸡蛋蛋白质模式氨基酸模式(mg/g N, 干物质基础)[19]对青鱼肌肉营养价值进行评价,氨基酸价(AAS)、化学价(CS)和必需氨基酸指数(EAAI)按以下公式[20]计算:

式中:1,2,…,n为不同种氨基酸;N1N2,…Nn分别为青鱼肌肉中各氨基酸含量(mg/g N);M1M2,…Mn分别为鸡蛋蛋白质相应氨基酸的含量(mg/g N)[20]

1.4 数据统计与分析

数据均以平均值±标准误表示,采用SPSS 20.0统计软件对所得数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA),若差异达到显著水平,则进行Turkey’s多重比较,显著水平为P<0.05。

2 结果与分析 2.1 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼生长性能的影响

图 1图 2可知,YHY1.5和YHY2.0组SGR和PER均显著高于对照组(P < 0.05)。同时,随着YHY添加水平的增加,SGR呈先上升后下降趋势,PER上升后稳定,且SGR在YHY添加水平为2.0%时达到最高,PER在YHY1.5组达到最高。

数据柱标注不同字母表示差异显著(P < 0.05)。下图同。 The data columns with different letters mean significant difference (P < 0.05). The same as below. 图 1 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼特定生长率的影响 Fig. 1 Effects of dietary YHY supplemental level on SGR of juvenile black carp
图 2 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼蛋白质效率的影响 Fig. 2 Effects of dietary YHY supplemental level on PER of juvenile black carp

建立二次回归曲线可知(图 3),青鱼幼鱼SGR的回归方程为:y=-0.049 3x2+0.199 2x+2.348 9(R2=0.823 9),通过回归方程计算可得青鱼幼鱼的SGR达到最优时,YHY的添加水平为2.02%;通过青鱼幼鱼PER的线性方程:y1=25.463x+176.67(R2=0.995 4),y2=-0.97x+218.27(R2=0.294),可得YHY的添加水平为1.56%时,PER达到最优(图 4)。综上所述,根据SGR和PER数据分析,青鱼幼鱼配合饲料中YHY的适宜添加水平为1.57%~2.02%。

图 3 饲料中YHY添加水平和青鱼幼鱼特定生长率的二次曲线关系 Fig. 3 Quadratic relationship between dietary YHY supplemental level and SGR of juvenile black carp
图 4 饲料中YHY添加水平和青鱼幼鱼蛋白质效率的二次曲线关系 Fig. 4 Quadratic relationship between dietary YHY supplemental level and PER of juvenile black carp
2.2 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼全鱼和肌肉常规营养成分的影响

表 3可知,与对照组相比,饲料中添加不同水平的YHY对青鱼全鱼的干物质、粗蛋白质和粗灰分含量均无显著影响(P>0.05)。随着YHY添加水平的增加,青鱼幼鱼全鱼中的粗脂肪含量呈现上升的趋势,YHY0.5~YHY2.0组粗脂肪含量与对照组相比无显著差异(P>0.05),YHY2.5组粗脂肪含量显著高于对照组(P < 0.05)。

表 3 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼全鱼和肌肉常规营养成分的影响(湿重基础) Table 3 Effects of dietary YHY supplemental level on composition of whole body and muscle of juvenile black carp (wet weight basis)  

各YHY添加组肌肉干物质、粗蛋白质以及粗脂肪含量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。青鱼幼鱼肌肉粗蛋白质以及粗脂肪含量均呈先上升后下降的趋势,粗蛋白质含量在YHY1.0组达到最大,粗脂肪含量在YHY2.0组达到最大。饲料中添加YHY对青鱼幼鱼肌肉粗灰分含量有显著影响(P < 0.05),随着YHY添加水平的增加,肌肉粗灰分含量呈显著上升趋势,且YHY2.0和YHY2.5组的肌肉粗灰分含量显著高于对照组(P < 0.05)。

2.3 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼全鱼氨基酸组成的影响

表 4可知,饲料中添加YHY对青鱼幼鱼全鱼中的甘氨酸(Gly)和脯氨酸(Pro)含量无显著影响(P>0.05)。在9种EAA中,各YHY添加组之间无显著差异(P>0.05),但显著高于对照组(P < 0.05),并呈先上升后下降的趋势。随着YHY添加水平的增加,氨基酸总量(TAA)呈现上升后下降的趋势,且YHY添加组TAA显著高于对照组(P < 0.05)。YHY添加组EAA含量与对照组相比显著升高(P < 0.05)。必需氨基酸占总氨基酸比值(EAA/TAA)大于40%,必需氨基酸与非必需氨基酸比值(EAA/NEAA)均大于70%,且YHY添加组均显著高于对照组(P < 0.05)。此外,饲料中添加YHY对青鱼幼鱼全鱼中的呈味氨基酸(DAA)含量无显著影响(P>0.05)。

表 4 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼全鱼氨基酸组成的影响(干物质基础) Table 4 Effects of dietary YHY supplemental level on amino acid composition of whole body of juvenile black carp (DM basis)  
2.4 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肌肉氨基酸组成的影响

表 5可知,YHY0.5、YHY1.0、YHY1.5组肌肉EAA含量均显著高于对照组(P < 0.05),除精氨酸(Arg)、蛋氨酸(Met)外,各YHY添加组之间无显著差异(P>0.05)。Arg含量呈先上升后下降的趋势,YHY2.5组显著低于YHY0.5组(P < 0.05)。随着YHY添加水平的增加,青鱼幼鱼肌肉TAA和EAA含量呈先上升后下降的趋势,且均在YHY0.5、YHY1.0和YHY1.5组达到最高。EAA/TAA大于40%,EAA/NEAA均大于60%,YHY2.0和YHY2.5组EAA/TAA以及EAA/NEAA均显著高于对照组(P < 0.05)。饲料中添加YHY对青鱼幼鱼肌肉DAA含量有显著影响(P < 0.05),YHY0.5和YHY1.0组肌肉DAA含量显著高于对照组(P < 0.05)。

表 5 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肌肉氨基酸组成的影响(干物质基础) Table 5 Effects of dietary YHY supplemental level on amino acid composition of muscle of juvenile black carp (DM basis)  
2.5 青鱼幼鱼肌肉的营养价值评价

表 6为2种评价模式的EAA组成。由表 7可知,根据AAS评价标准,苏氨酸(Thr)的评分最低,其次是缬氨酸(Val),因此,第一限制性氨基酸为Thr,第二限制性氨基酸为Val,各氨基酸在YHY添加组中的AAS评分均显著高于对照组(P < 0.05);根据CS评价标准,其第一、第二限制性氨基酸分别为缬氨酸(Val)和蛋氨酸+半胱氨酸(Met+Cys),饲料中添加YHY显著提高了氨基酸的CS评分(P < 0.05)。同时,随着YHY添加水平的升高,YHY添加组肌肉EAAI显著高于对照组(P < 0.05),表明饲料中添加YHY可以改善青鱼幼鱼肌肉蛋白质品质。

表 6 2种评价模式的必需氨基酸组成 Table 6 Two modes of evaluation of essential amino acid composition
表 7 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肌肉必需氨基酸组成的评价 Table 7 Effects of dietary YHY supplemental level on evaluation of EAA composition in muscle of juvenile black carp
2.6 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏抗氧化指标的影响

图 5~图 7可知,肝胰脏T-AOC和T-SOD活性呈先升后下降的趋势,且均在添加水平为1.5%时达到最大值,且显著高于对照组(P < 0.05)。饲料中添加YHY对青鱼幼鱼肝胰脏CAT活性无显著影响(P>0.05)。

图 5 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏总抗氧化能力的影响 Fig. 5 Effects of dietary YHY supplemental level on total antioxidant capacity in hepatopancreases of juvenile black carp
图 6 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏总超氧化物歧化酶活性的影响 Fig. 6 Effects of dietary YHY supplemental level on total superoxide dismutase activity in hepatopancreases of juvenile black carp
图 7 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏过氧化氢酶活性的影响 Fig. 7 Effects of dietary YHY supplemental level on catalase activity in hepatopancreases of juvenile black carp
2.7 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏组织形态的影响

图 8可知,YHY0、YHY0.5以及YHY1.0组中可见明显的脂肪沉积,部分肝细胞核溶解或缺失,空泡较多,肝细胞肿胀。随着YHY添加水平的增加,空泡化现象有所改善,细胞核位于细胞中央且清晰可见,细胞界限明显,细胞呈椭圆形或多边形。

图 8 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏组织形态的影响(HE染色) Fig. 8 Effects of dietary YHY supplemental level on hepatopancreases tissue morphology of juvenile black carp (HE staining, 400×)
3 讨论 3.1 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼生长性能的影响

在本试验中,SGR呈先升高后降低的趋势,PER呈升高后稳定的趋势,SGR在添加水平为1.5%和2.0%时达到最高,显著高于对照组。试验结果表明,饲料中添加一定量的YHY可以显著提高青鱼幼鱼的生长性能。曾本和等[21]报道,YHY的添加水平为1.3%和1.7%时,加州鲈(Micropterus salmoides)的SGR以及PER显著高于对照组。Hassaan等[22]研究表明,饲料中添加15 g/kg YHY可显著提高尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus L.)的SGR和PER。Yuan等[23]研究表明,YHY在饲料中部分替代鱼粉对建鲤(Cyprinus carpio var. Jian)幼鱼生长性能产生了积极影响。这可能是由于YHY中所富含的β-葡聚糖、氨基酸、核苷酸及甘露寡糖等营养物质的消化吸收,从而提高了鱼体生长性能[5, 7, 24]。然而,在Jarmołowicz等[25]的研究中发现,在饲料中添加YHY对欧洲鲈鱼(Sander lucioperca)的SGR及PER不会产生显著影响。时博等[26]研究发现,在饲料中添加5 g/kg YHY时,对大口黑鲈的SGR无显著影响。试验结果的不同,可能是由于研究物种、饲料配方、YHY来源的不同所造成。

此外,本试验结果表明,当YHY超过一定添加水平时,SGR有下降的趋势,这表明过量的YHY可能会影响青鱼幼鱼的生长性能。类似地,与对照组相比,添加2%的酵母益生元显著提高了星斑川鲽幼鱼的增重率、SGR以及摄食率,但是比1.6%添加组有所下降,这可能是因为2%的添加水平中寡糖含量过高,引起肠道微生物过度的发酵,从而使得动物轻微腹泻,影响了养分的吸收和利用[27]。Yuan等[23]报道指出,与3%替代比例相比,饲料中YHY替代7%鱼粉会显著降低建鲤的生长性能。同样地,在饲料中添加2 000 mg/kg YHY时,草鱼的SGR有下降的趋势,且鱼体蛋白质、脂肪沉积率也有所下降,表明高水平YHY不能进一步改善草鱼的生长性能,这可能是由于饲料中添加过量的YHY会引起草鱼的免疫反应过度,使得用于生长的能力或营养素减少[28]。在青鱼幼鱼饲料中添加YHY对青鱼幼鱼的生长性能所产生的影响尚未见报道,具体原因有待进一步考证。

3.2 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼全鱼和肌肉常规营养成分的影响

本试验结果发现,饲料中添加YHY对青鱼幼鱼肌肉中的干物质、粗蛋白质以及粗脂肪含量无显著影响,粗灰分含量呈显著升高趋势;对全鱼的干物质、粗蛋白质、粗灰分含量无显著影响,但全鱼粗脂肪含量显著高于对照组,且呈上升趋势。然而,在尼罗罗非鱼鱼苗(Oreochromis niloticu)的研究中发现,饲料中添加酿酒酵母会显著增加鱼体粗蛋白质及粗灰分含量,其粗脂肪含量则显著下降[29]。酿酒酵母替代鱼粉不影响细鳞鲳(Piaractus mesopotamicus)全鱼干物质、粗蛋白质及粗脂肪含量,但粗灰分含量显著下降[30]。在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)以及欧洲鳇(Huso huso)的研究中发现,饲料中添加酿酒酵母对鱼体组分无显著影响[6, 10]。Lunger等[31]指出,随着饲料中酵母源蛋白替代鱼粉的比例增加,军曹鱼(Rachycentron canadum)肌肉粗蛋白质含量下降,粗灰分含量增加。鱼体粗蛋白质与脂肪含量的变化,可能与肌肉中蛋白质和脂肪的合成和沉积速率,或者生长速率的变化有关[30]

3.3 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼全鱼和肌肉氨基酸组成的影响

目前,对青鱼氨基酸需要量的研究仅见赖氨酸和Met,当饲料中赖氨酸水平为2.41%时,青鱼夏花鱼种具有最大增重率;当Met含量为1.57%时,青鱼鱼种增重率最大[3]。在本试验中,添加组全鱼的EAA(除Arg)显著高于对照组,Arg含量呈先上升后下降趋势,与对照组相比差异显著;肌肉添加组的EAA含量则均显著高于对照组。试验结果表明,YHY的添加能够改善青鱼幼鱼全鱼及肌肉氨基酸组成,促进鱼体内氨基酸的沉积。

3.4 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肌肉营养品质评价的影响

根据FAO/WHO理想模式显示,氨基酸组成EAA/TAA在40%左右,EAA/NEAA达到60%以上,表示其蛋白质的质量较好[32]。本试验结果显示,青鱼幼鱼的全鱼以及肌肉的EAA/TAA均达到40%以上以及EAA/NEAA均达到60%以上,且显著高于对照组。因此,本试验结果表明,饲料中添加YHY能够提高鱼体蛋白质的质量。本试验中,青鱼幼鱼肌肉中的Glu、Asp以及Ala含量占呈味氨基酸总量的70%以上,说明饲料中添加YHY可显著提高青鱼幼鱼的鲜味,这与陈春燕等[33]的研究结果类似。也有研究表明,YHY替代鱼粉不会影响对虾肌肉的氨基酸营养价值以及鲜味[34]。同时,从AAS、CS以及EAAI来看,添加YHY可提高青鱼幼鱼肌肉蛋白质品质。

酵母细胞内容物中富含小肽,经水解得到释放,能够被机体直接吸收利用[35-36],加快蛋白质的吸收,促进生长[36];同时,小肽与游离氨基酸之间的相互独立吸收机制,可消除游离氨基酸之间的竞争,促进其氨基酸的吸收,提高蛋白质的利用率[37-38]。王际英等[39]研究表明,饲料中添加小肽能够提高星斑川鲽(Platichthys stellatus)幼鱼肌肉中部分氨基酸含量,在一定程度上提高鱼肉品质。随小肽添加比例的增加,鲤(Cyprinus carpio)肌肉中的EAA和呈味氨基酸含量呈上升趋势,且有效地提高了肌肉中肌苷酸(IMP)的含量,表明小肽可促进蛋白质的合成,提高肉质以及鲜味[40]

3.5 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏抗氧化指标的影响

T-AOC和T-SOD、CAT活性作为机体重要的抗氧化酶,可以有效地清除氧自由基对机体的危害,保护细胞免受损伤,提高机体免疫力[3, 41]。本研究显示,青鱼幼鱼肝胰脏中的T-AOC和T-SOD活性均呈先升高后下降的趋势,均在YHY1.5组达到最高,与对照组相比差异显著,但各添加组之间肝胰脏CAT活性无显著性差异。本试验结果表明,饲料中添加一定水平的YHY可以增强青鱼幼鱼的抗氧化能力。Yang等[42]研究表明,摄食含有1%干酵母饲料的凡纳滨对虾肝胰脏中SOD、CAT活性、血清及肌肉中的T-AOC活性较高。苗新等[43]报道,饲料中添加300 mg/kg核苷酸可显著提高血清中T-SOD活性和T-AOC。随着小肽添加水平的升高,星斑川鲽(Platichthys stellatus)肝胰脏中的SOD活性在各组间虽无显著性差异,但呈先上升后下降的趋势,并在1.0%组达到最高;同时,在1.0%和1.5%组,星斑川鲽血清中的T-AOC显著升高[39]

酵母中的β-葡聚糖含量丰富,因其具有免疫、抗氧化等作用而被广泛应用于畜禽和水产动物饲料中[44-45]。在齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti Tchang)[46]、攀鲈(Anabas testudineus) [47]、南美白对虾(Litopenaeus vannamei)[48]等水产动物研究中证实,β-葡聚糖有利于提高机体非特异性免疫相关酶活性以及抗氧化酶活性。在星斑川鲽幼鱼[39]、牙鲆幼鱼(Paralichthys olivaceus)[49]、凡纳滨对虾[50]等研究中表明,饲料中添加小肽可增强机体抗氧化能力。酵母水解物经破壁处理,释放酵母细胞内容物,使其中的B族维生素、小肽、β-葡聚糖、核苷酸、甘露寡糖等免疫刺激物的功效性得到最大利用,从而增强了水产动物机体非特异性免疫力[51-54]

3.6 饲料中YHY添加水平对青鱼幼鱼肝胰脏组织形态的影响

对肝胰脏组织形态进行评价,可以作为判断肝胰脏有无病变以及病变程度的依据。在本研究中,与对照组相比,YHY1.5和YHY2.0组肝胰脏组织形态相对较好,空泡现象减少,说明饲料中适量添加YHY有助于减轻青鱼幼鱼肝胰脏脂肪沉积。这可能是因为YHY中所含有的小肽、β-葡聚糖、核苷酸、甘露寡糖等免疫刺激物提高了肝胰脏的抗氧化能力,使得脂肪沉积现象有所改善。这与李潇等[55]的研究结果类似,啤酒酵母粉替代25%或50%鱼粉显著减少了牛蛙[Rana (Lithobates) catesbeiana]肝胰脏的脂肪沉积,有利于肝胰脏健康。Panagiotidou等[56]研究表明,饲料中添加YHY可显著改善鲈鱼(Dicentrarchus labrax)肝胰脏脂肪变性现象。在饲料中添加15 g/kg YHY,尼罗罗非鱼幼鱼肝胰脏中的转氨酶活性较低,表明肝功能得到改善,并且在显微镜中观察到肝胰脏以及肠道组织结构正常,不会对肝胰脏及肠道组织产生负面影响[22]。同时,在欧洲鲈鱼的饲料中添加不同比例的甘露寡糖对肝胰脏形态的影响结果中发现,随着甘露寡糖添加比例的增加,肝细胞的形状逐渐规则,脂质空泡化现象减少,细胞核逐渐向细胞中央移动,在4‰添加比例尤为显著[54]。饲料中添加50 mg/kg的YHY可通过免疫多糖类物质加强草鱼免疫力,改善草鱼肝功能[57]。但在草鱼饲料中添加2 000 mg/kg YHY,使得草鱼肝胰脏脂肪含量高于对照组,并且显著高于1 000 mg/kg试验组,表明添加高水平YHY可能会导致鱼体产生脂肪肝,但结果还有待进一步证明[28]

4 结论

综上所述,饲料中添加YHY可显著提高青鱼幼鱼的生长性能、全鱼及肌肉氨基酸含量、血清非特异性免疫酶活性以及肝胰脏抗氧化指标,同时,饲料中添加YHY不会对青鱼幼鱼的肝胰脏组织形态产生不良影响。根据生长性能的数据分析,青鱼幼鱼饲料中YHY的适宜添加水平为1.57%~2.02%。

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