2. 重庆市梁平区农业农村委员会, 重庆 400020;
3. 重庆市水产技术推广总站, 重庆 401147
2. Agricultural and Rural Committee of Liangping District, Chongqing 400020, China;
3. Chongqing Aquatic Technology Promotion Station, Chongqing 401147, China
如何改善养殖鱼类的品质,尤其是淡水养殖鱼类,是当前饲料生产者和营养学家共同面对的难题。众所周知,养殖环境和饲料营养均会影响养殖鱼类的品质[1]。目前,从饲料营养的角度改善水产养殖动物的肉质,已引起大家的重视。豆渣是豆浆或豆腐加工过程的副产品,在我国乃至亚洲资源十分丰富,因富含多种生物活性物质和膳食纤维,近年受到广泛地关注[2]。我们前期研究表明,发酵豆渣可以改善大口黑鲈(Micropterus salmoides)的形体指标,降低脏体比(VSI),同时还能改善鱼体肝功能和肠道健康[3-4]。大鳞鲃(Barbus capito)因生长速度快、抗逆性强、肉质鲜美而成为我国重要的淡水经济养殖鱼类[5],近年来,由于养殖密度和环境问题,导致其养殖品质下降[6]。为此,本试验以大鳞鲃为研究对象,探讨发酵豆渣对其品质的影响,以期为鱼类健康养殖和品质调控提供依据。
1 材料与方法 1.1 试验设计豆渣来自重庆市梁平区豆筋生产的副产物,采用赵鹏飞[3]的方法进行发酵处理(以干物质为基础,发酵豆渣粗蛋白质含量为18.6%,粗脂肪含量为4.2%,粗灰分含量为4.9%,粗纤维含量为19.5%)。以鱼粉、鸡肉粉、豆粕、棉籽粕和菜籽粕为蛋白质源,以豆油为脂肪源配制基础饲料。在基础饲料中分别添加0(对照组)和6%的发酵豆渣,通过调整豆粕的用量来平衡粗蛋白质含量,配制成2种等氮等脂的试验饲料(粗蛋白质含量为34%,粗脂肪含量为6.0%),试验饲料组成及营养水平见表 1。饲料原料粉碎均过80目筛,混合均匀后,制成3.0 mm的浮性颗粒饲料。
试验鱼选用当年培育的体质健壮、规格整齐的大鳞鲃[平均体质量为(50.00±1.28) g],随机分成2组,每组3个重复,每个重复10 000尾。在重庆市梁平区池塘内循环养殖系统(22 m×5 m×3 m)中饲养大鳞鲃90 d,日投饲率为体质量的3%~5%,每天07:00、12:00以及18:00各投喂1次。饲养期间,水温27~30 ℃,pH 6.7~7.3,溶解氧含量>5.8 mg/L,氨氮含量<0.58 mg/L。
1.3 样品制备与分析 1.3.1 样品制备2020年10月21日从循环养殖系统中随机抽取30尾(体质量为1 100~1 200 g),鲜鱼运输至实验室分析。逐一测量每尾鱼的体长、体重,在冰盘上解剖并分离出内脏团、肝脏、肠脂后称重,用于形体指标的测定。同时,去皮取其背部肌肉,一部分用于肌肉物理特性检测,另一部分则研碎混匀,其中新鲜肌肉用于pH测定;剩余肌肉60 ℃烘干,用于氨基酸及脂肪酸含量测定。
1.3.2 常规营养成分分析肌肉样品采用105 ℃烘干恒重法测定(参考GB 5009.3—2010);粗灰分含量采用550 ℃高温灼烧法测定(参考GB 5009.4—2010);粗蛋白质含量采用微量凯氏定氮法测定(参考GB 5009.5—2010);粗脂肪含量采用索氏抽提法测定(参考GB/T 5009.6—2003)。
1.3.3 氨基酸分析烘干后肌肉样品先采用GB/T 15399—1994中的氧化酸解法进行处理,然后按照GB/T 5009.124—2003方法用日立自动氨基酸分析仪L-8800型测定氨基酸含量。
1.3.4 脂肪酸分析肌肉脂肪提取采用氯仿-甲醇法[7],脂肪甲酯化参考KOH-甲醇酯化法[8]。定性分析肌肉脂肪酸采用Sigma公司标准脂肪酸进行定性分析鉴定脂肪酸组分,用面积归一化方法计算脂肪酸组成组成。色谱分析条件:气相色谱仪为Agilent 7820A GC,色谱柱为100 m×0.32 mm×0.25 μm,柱箱温度为190 ℃,以6 ℃/min程序升温至240 ℃,进样温度230 ℃,载气为高纯氮气(N2),流量25 mL/min。
1.3.5 肌肉质构及理化特性分析质构测定:将肌肉样品切成厚20 mm×15 mm×15 mm的小块。采用TAXTplus质构仪(英国SMS公司),使用直径6 mm的圆柱形探头,对样品进行2次压缩质地剖面分析(TPA)测试,分析大鳞鲃肌肉的硬度、弹性、胶黏度、内聚性、咀嚼性和回复性。探头测试前下行速度为3 mm/s,测试速度为l mm/s,压缩50%,停留5 s。每尾大鳞鲃取其背部相同部位肌肉3块进行测定。
pH测定:用pH=4和pH=7标准液校正(精确到0.01)pH计。取大鳞鲃背部肌肉,剪碎后加入10 mL的0.15 mol/L氯化钾(KCl)溶液,然后用高速组织捣碎机捣碎匀浆,再用pH计测定,读取pH1;4 ℃冰箱中储藏24 h后,同法测其pH2,计算降低值。
滴水损失测定:取大鳞鲃背部肌肉切成3 cm×1 cm×1 cm小块,称重后置于充气的塑料袋中(肉块悬挂于中心而不接触周围薄膜),在4 ℃冰箱中吊挂48 h后称重,以肌肉样品质量损失百分比表示。
1.3.6 抗氧化分析大鳞鲃肌肉中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性以及总蛋白(TP)和丙二醛(MDA)含量的测定按照试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书步骤操作完成。
1.4 计算公式式中:W为鱼体质量(g);L为体长(cm);Wv为内脏重(g);Wh为肝脏重(g);Wi为肠脂重(g);W0为贮前质量(g);Wt为贮后质量(g)。
1.5 数据统计所有数据采用统计软件SPSS 20.0中的独立样本t检验进行组间比较,描述性统计值用平均值±标准误表示,P<0.05为具有显著性差异。
2 结果 2.1 发酵豆渣对大鳞鲃形体指标和肌肉组成的影响由表 2可知,与对照组相比,添加6%发酵豆渣能够显著降低大鳞鲃的脏体比、腹脂比和肌肉粗脂肪含量(P<0.05);而肥满度、肝体比以及肌肉水分、粗蛋白质和粗灰分含量均无组间差异(P>0.05)。
由表 3可知,与对照组相比,饲料中添加发酵豆渣显著影响大鳞鲃肌肉的氨基酸含量,显著提高肌肉氨基酸总量(∑TAA)和必需氨基酸总量(∑EAA)(P<0.05),尤其是显著提高了谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)、精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)含量(P<0.05)。
由表 4可知,与对照组相比,饲料中添加发酵豆渣显著影响大鳞鲃肌肉的脂肪酸含量,提高肌肉多不饱和脂肪酸(PUFA)含量,主要表现在棕榈酸(C16 ∶ 0)、亚油酸(C18 ∶ 2)、花生四烯酸(C20 ∶ 4)以及二十二碳六烯酸(DHA)含量显著升高(P<0.05);相反,饲料中添加发酵豆渣显著降低肌肉油酸(C18 ∶ 1)含量(P<0.05)。
由表 5可知,发酵豆渣组大鳞鲃肌肉的硬度、弹性、胶黏度、咀嚼性以及回复性均显著高于对照组(P<0.05),而滴水损失则显著低于对照组(P<0.05)。肌肉内聚性和pH降低值不存在组间差异(P>0.05)。
由表 6可知,与对照组相比,饲料中添加发酵豆渣可以显著提高大鳞鲃肌肉T-SOD活性(P < 0.05),显著降低MDA含量(P < 0.05),而CAT活性组间无显著差异(P>0.05)。
本试验结果显示,饲料中添加发酵豆渣可以显著降低大鳞鲃脏体比,这可能是降低腹脂比所致。这与在大口黑鲈[3]和鲫鱼[9]上的研究结果一致。在仓鼠[10]和小鼠[11]的研究中发现,饲料中添加豆渣能提高肝脏中甾醇14a-去甲基化酶(CYP51)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因的表达,从而降低肝脏的脂肪沉积。众所周知,一方面,豆渣发酵后增加其可溶性膳食纤维(SDF)含量,减少不可溶性膳食纤维(IDF)含量[12];另一方面,发酵豆渣中含有丰富的黄酮类物质,可以有效降低动物肠道刷状缘膜上二糖酶活性[13],调节糖脂代谢,降低脂肪的沉积。这些结果表明,豆渣有利于改善动物脂肪代谢,降低肠系膜脂肪的沉积。
本试验还发现,发酵豆渣可以提高大鳞鲃肌肉氨基酸含量,尤其是提高肌肉中鲜味和呈味氨基酸的含量,从而增强鱼体的风味与鲜美程度。同样,在猪上的研究也发现发酵豆渣能够提高猪肉中鲜味氨基酸的含量[14]。豆渣经酿酒酵母、枯草芽孢杆菌和乳酸菌等益生菌发酵后,会通过上调糖酵解而增加氨基酸产量[15]。这可能是大鳞鲃饲喂发酵豆渣后肌肉中氨基酸含量增加的原因。此外,发酵豆渣还能够调控大鳞鲃肌肉的脂肪酸含量,显著增加PUFA及二十二碳六烯酸(DHA)含量,说明豆渣发酵后可以改善肌肉的品质,进而提高其营养价值。这可能与豆渣发酵时产生大量的短链脂肪酸(SCFAs)有关,其作用机制值得进一步研究。当然饲料组成是影响养殖鱼类营养组成的关键因素,在大口黑鲈[5]、日本沼虾[16]和黑鲷[17]上也有类似的研究结果。
通常用肌肉的质构特性、滴水损失和抗氧化能力来评价鱼肉的品质。质构特性主要包括硬度、弹性、内聚性、胶黏度、咀嚼性和回复性,是肌肉重要的物理特性,影响肌肉口感。本试验结果显示,饲料中添加发酵豆渣可以显著增强大鳞鲃肌肉的质构特性,说明发酵豆渣能够使鱼肉更紧实,口感更富有弹性和嚼劲。滴水损失反映肌肉原有的储水能力,而氧化反应则是影响滴水损失的关键因素[18]。本研究发现,发酵豆渣能显著降低大鳞鲃肌肉滴水损失,这与肌肉中T-SOD活性增强、MDA含量下降有关。先前的研究表明发酵豆渣能增强鱼体抗氧化活性,从而表现出清除自由基的能力[15]。这可能是因为发酵豆渣中含有异黄酮、多糖和总酚等生物活性物质,具有很强的抗氧化作用,能够清除过氧化产物,从而增强了大鳞鲃的抗氧化活性[19]。在大口黑鲈[3-4]上的研究发现发酵豆渣能够提高鱼体的抗氧化能力,同样在对鲫鱼[9]和日本沼虾[16]上也有类似的报道。这些结果表明,改善肌肉的质构特性,提高抗氧化能力,进而延长其货架寿命。
4 结论饲料中添加发酵豆渣可以有效改善大鳞鲃肌肉的营养组成、肌肉质地、理化特性和抗氧化能力。这说明发酵豆渣作为养殖鱼类品质的改良剂是可行的,其在不同养殖鱼类中的适宜添加水平还值得进一步探讨。
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