2. 清远市龙发种猪有限公司, 英德 511500
2. Qingyuan Longfa pig breeding Co., Ltd., Yingde 511500, China
在规模化畜禽养殖产业中，畜禽在屠宰前须经历一系列的宰前应激，运输应激便是其中一种。运输应激是多种应激源(抓捕、装笼、运输、卸载和环境变化等)共同作用的结果[1]。研究表明，运输应激严重影响畜禽的生产性能、代谢水平、免疫力、抗氧化功能和肉品质等[2-4]。运输应激降低了动物福利，而动物福利一直备受关注，因此，提高动物福利，缓解运输应激对畜禽的影响尤为重要。饲粮中添加抗应激产品是解决运输应激的有效措施，目前抗应激产品主要有维生素类、矿物质和植物提取物等[5]。其中植物提取物抗应激产品具有绿色、安全和无残留等优点，是当前研究的热点。大量研究表明，植物提取物可作为抗应激产品缓解运输应激等应激源对动物机体的影响[6-8]。
据国家统计局统计，2019年全国柑橘种植面积达26 173 km2，产量达4 584.54万t，是种植面积最大、产量最多的国家。柑橘提取物富含黄酮类、多糖和有机酸等活性物质，具有抗菌、抗病毒和抗氧化等功能[9-11]。研究前期发现，饲粮中添加柑橘提取物可改善黄羽肉鸡运输后机体的代谢水平，调控激素分泌，提高抗氧化能力[2]。但对于饲粮中添加柑橘提取物是否可减少黄羽肉鸡运输后的体重损失、改善屠宰性能、提高肌肉抗氧化能力和肉品质还不得而知。鉴于此，本试验通过在饲粮中添加柑橘提取物，研究其对黄羽肉鸡运输后体重损失、屠宰性能、肌肉抗氧化能力和肉品质的影响，旨在为柑橘提取物在肉鸡运输应激的防治中提供参考依据。
1 材料与方法 1.1 试验设计试验选取1日龄快速型黄羽肉鸡母鸡360只，随机分成2组，每组6个重复，每个重复30只鸡。对照组饲喂玉米-豆粕型基础饲粮，柑橘提取物组饲喂在基础饲粮中添加10 mg/kg柑橘提取物(柑橘提取物由润森公司提供，是柑橘汁、柠檬汁、甘油和水的复合果汁，其中果汁含量为50%，经检测其主要有效成分为总黄酮2.48%、有机酸2.38%、多糖1.20%)的试验饲粮。基础饲粮参照NRC(1994)营养需要进行配制，制成颗粒料，基础饲粮组成及营养水平见表 1。试验期63 d，期间肉仔鸡自由采食和饮水，按正常饲养程序和免疫程序进行饲养管理和免疫接种。于63日龄时，试验鸡禁食不禁水12 h后，采用2×3因子试验设计，每个重复选6只鸡进行运输应激试验，分别运输0、2和4 h，运输条件参照前期发表的文章[2]，即：鸡笼尺寸(90 cm×60 cm×40 cm)，内装6只鸡，运输当天环境温度为11~21 ℃，车厢内的温度为20 ℃，相对湿度为70%，选用小型开放式运输车连续运输，运输路面均为柏油路，坡度少，平均车速约为60 km/h。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(饲喂基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (as-fed basis) |
HI8424型pH计(北京Hanna仪器科学技术有限公司)，CR-410型色差仪(日本美能达公司)，Instron 4411型嫩度仪(美国英斯特朗公司)，HH-4型恒温水浴锅(金坛市杰瑞尔电器有限公司)。
1.3 检测指标 1.3.1 体重损失运输前，称量每只鸡的活体重。运输2和4 h后，再称量每只鸡的活体重。
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屠宰性能相关指标的测定参照农业行业标准《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》(NY/T 823—2004)。
1.3.3 肌肉抗氧化指标肉鸡运输后颈静脉放血致死，取左侧胸肌用于测定肌肉抗氧化指标。样品处理方法与李贞明等[11]的一致，即：取部分胸肌样品，加10倍体积(m/V)的4 ℃生理盐水，在冰浴下匀浆，随后于4 000 r/min条件下离心，取上清，置于-80 ℃冰箱中保存，待测。按照试剂盒说明检测肌肉中总抗氧化能力(T-AOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.3.4 肉品质指标运输试验结束后，肉鸡进行屠宰，完整剥离左侧胸肌，去除周围脂肪组织等，分别测定pH、肉色、滴水损失和嫩度。具体操作步骤参照李贞明等[11]的方法。
pH：宰后45 min和24 h(4 ℃条件下保存)，选择3个相同部位，用pH计测定胸肌pH。
肉色：宰后45 min和24 h(4 ℃条件下保存)，选择3个相同部位，用色差仪测定胸肌亮度(L*)、红度(a*)和黄度(b*)。
滴水损失：取长×宽×厚约4 cm×3 cm×2 cm的肉块，称滴水前重，用铁丝勾住一端吊在吹气袋中。4 ℃条件储存，24 h后拭去肉块表面的水分，称滴水后重。用以下公式计算滴水损失。
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嫩度：取胸肌样品，4 ℃条件储存24 h后，将温度计插入胸肌样品中心处。置于80 ℃的恒温水浴锅中，待胸肌样品中心温度达到70 ℃，取出后，流水冷却。随后按肌纤维方向取直径约1 cm的肉条。用嫩度仪测定嫩度值。
1.4 数据统计分析体重损失、屠宰性能、肌肉抗氧化能力和肉品质的结果数据以单一鸡个体为统计单位，采用SPSS 18.0统计软件中GLM过程Univariate进行方差分析，采用Duncan氏法进行多重比较检验，数据均以平均值±标准误表示，P＜0.05表示差异显著。其中全模型包括饲粮处理(dietary treatment，DT)和运输时间(transportation time，TT)2个固定效应及二者互作效应(TT×DT)。
2 结果 2.1 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后体重损失的影响由表 2可知，饲粮处理与运输时间对快速型黄羽肉鸡的体重损失存在显著交互作用(P＜0.05)；与对照组相比，运输2和4 h后柑橘提取物组的体重损失显著降低(P＜0.05)；运输时间显著影响体重损失(P＜0.05)，随着时间的延长，体重损失越来越大(P＜0.05)。不同饲粮处理和运输时间对快速型黄羽肉鸡的始重和末重均无显著影响(P＞0.05)。
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表 2 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后体重损失的影响 Table 2 Effects of citrus extract on body weight loss of rapidly-growing yellow-feathered broilers after transportation stress |
由表 3可知，与对照组相比，运输0、2和4 h后柑橘提取物组快速型黄羽肉鸡的胸肌率和腿肌率均显著升高(P＜0.05)。不同饲粮处理和运输时间对快速型黄羽肉鸡的腹脂率无显著影响(P＞0.05)。
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表 3 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后屠宰性能的影响 Table 3 Effects of citrus extract on slaughter performance of rapidly-growing yellow-feathered broilers after transportation stress |
由表 4可知，与对照组相比，运输0、2和4 h后柑橘提取物组快速型黄羽肉鸡胸肌中的MDA含量显著降低(P＜0.05)；运输时间显著影响胸肌中的MDA含量(P＜0.05)，随着时间的延长，MDA含量显著升高(P＜0.05)。与对照组相比，运输2和4 h后柑橘提取物组快速型黄羽肉鸡胸肌中的GSH-Px活性显著升高(P＜0.05)；运输时间显著影响胸肌中的GSH-Px活性(P＜0.05)，随着时间的延长，GSH-Px活性显著降低(P＜0.05)。不同饲粮处理和运输时间对快速型黄羽肉鸡胸肌中的T-SOD活性和T-AOC均无显著影响(P＞0.05)。
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表 4 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后肌肉抗氧化能力的影响 Table 4 Effects of citrus extract on antioxidant capacity of muscle of rapidly-growing yellow-feathered broilers after transportation stress |
由表 5可知，饲粮处理和运输时间对快速型黄羽肉鸡胸肌的45 min亮度(L45 min*)和45 min红度(a45 min*)存在显著交互作用(P＜0.05)；与对照组相比，运输0、2和4 h后柑橘提取物组胸肌的L45 min*显著降低(P＜0.05)，而a45 min*显著升高(P＜0.05)；运输时间显著影响L45 min*和a45 min*(P＜0.05)，随着时间的延长，L45 min*显著升高(P＜0.05)，而a45 min*显著降低(P＜0.05)。与对照组相比，运输0、2和4 h后柑橘提取物组快速型黄羽肉鸡胸肌的剪切力显著降低(P＜0.05)；运输时间显著影响胸肌的剪切力(P＜0.05)，随着时间的延长，剪切力显著升高(P＜0.05)。不同饲粮处理和运输时间对滴水损失、pH45 min、pH24 h、24 h亮度(L24 h*)、24 h红度(a24 h*)、45 min黄度(b45 min*)和24 h黄度(b24 h*)均无显著影响(P＞0.05)。
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表 5 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后肉品质的影响 Table 5 Effects of citrus extract on meat quality of rapidly-growing yellow-feathered broilers after transportation stress |
运输应激会导致动物生产性能下降[12-13]。运输过程中，在各种应激源的作用下，动物机体的神经、内分泌和代谢水平均会发生变化，使其处于一种紧张兴奋、耗氧量和产热量增加的状态，一方面提高动物机体的适应性和抗应激能力，另一方面却使动物机体的体重下降和体温升高[14]。Gou等[3]研究发现，运输应激严重影响肉鸡的生长性能，运输时间越长，体重损失越大。Karaman[15]研究也发现，运输时间与肉鸡的体重损失呈正相关。本试验结果显示，对照组和柑橘提取物组肉鸡的体重损失与运输时间呈正相关，这与Gou等[3]和Karaman[15]的研究结果相一致。前期研究发现，饲粮中添加柑橘提取物可改善运输应激后肉鸡机体的代谢水平，可调控运输应激后肉鸡机体的激素分泌[2]。本试验结果显示，运输2和4 h后，对照组快速型黄羽肉鸡的体重损失显著高于柑橘提取物组，可能是因为饲粮中添加柑橘提取物使肉鸡机体内的代谢水平和激素分泌处于一个稳定平衡的状态，提高了肉鸡机体的抗应激能力，降低了运输应激的影响。
3.2 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后屠宰性能的影响屠宰性能是反映肉鸡生长性能的重要指标，可直接反映肉鸡可食部分的比例，其中胸肌率和腿肌率在肉鸡生产中占有重要地位。本试验结果显示，柑橘提取物组快速型黄羽肉鸡的胸肌率和腿肌率显著高于对照组，说明饲粮中添加柑橘提取物可改善黄羽肉鸡的屠宰性能，这与试验前期的研究结果[11]一致。本研究中，随着运输时间的延长，快速型黄羽肉鸡的体重损失增加。黄羽肉鸡的总体重损失主要包括身体本身的损失和排泄物的排放。排泄物造成的体重损失主要与禁食时间有关，本试验禁食12 h，因此，可排除这一因素。此外，运输应激对黄羽肉鸡的胸肌率、腿肌率和腹脂率无显著影响，这与Gou等[3]和Zhang等[16]的研究结果一致。由此可知，体重损失的部分可能是肉鸡机体的非胴体部分，也许与脱水有关。
3.3 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后肌肉抗氧化能力的影响在运输过程中，黄羽肉鸡处于应激状态下，其机体内呼吸作用加强，代谢紊乱，活性氧(reactive oxygen species，ROS)增多，ROS在线粒体内膜和基质中被进一步转化成氧化自由基[17]。一般情况下，黄羽肉鸡机体内的氧化自由基会被抗氧化酶等清除，但在运输应激状态下，黄羽肉鸡机体内氧化自由基产生与清除之间的动态平衡遭到破坏，多余的氧化自由基在机体内积累，对黄羽肉鸡的机体造成氧化损伤[18-19]。MDA是脂质过氧化的结果，其含量直接反映了氧化损伤的程度；GSH-Px是动物机体内过氧化氢等的清除剂，其活性直接反映了动物机体的抗氧化能力[20-21]。本试验结果显示，运输应激提高了快速型黄羽肉鸡机体内的MDA含量，并降低了GSH-Px活性，也就是说，运输应激严重影响了黄羽肉鸡机体的抗氧化能力。这与Zhang等[22]的研究结果一致。此外，本试验结果显示，饲粮中添加柑橘提取物可降低快速型黄羽肉鸡机体内的MDA含量，并提高GSH-Px活性，因此，柑橘提取物可提高黄羽肉鸡机体的抗氧化能力。研究表明，黄酮类、有机酸和多糖类物质具有较强的抗氧化能力[23-24]。而柑橘提取物中富含黄酮类、有机酸和多糖类等活性物质。也就是说，柑橘提取物提高黄羽肉鸡机体的抗氧化能力可能与其富含的黄酮类、有机酸和多糖类等活性物质有关，但具体作用机制还有待进一步研究。
3.4 柑橘提取物对快速型黄羽肉鸡运输应激后肉品质的影响滴水损失、剪切力、pH和肉色等指标是反映肉品质的重要指标。剪切力是肌肉嫩度的直观指标，两者呈负相关。本试验结果显示，运输应激提高了快速型黄羽肉鸡胸肌的剪切力，降低了肌肉的嫩度。可能是因为在应激状态下，黄羽肉鸡的呼吸作用加强，肌细胞内的能量消耗巨大，肌动蛋白和肌球蛋白合成的肌动球蛋白无法分开，导致黄羽肉鸡的肌肉收缩，剪切力加大，嫩度降低[25]。研究表明，多糖类物质可提高动物肝糖原的含量[26]。本试验结果显示，饲粮中添加柑橘提取物可降低快速型黄羽肉鸡胸肌的剪切力，提高肌肉的嫩度。可能是因为柑橘提取物富含多糖类物质，提高了黄羽肉鸡肝糖原的含量，为应激状态下的黄羽肉鸡提供了大量的能量，缓解了运输应激对肌肉嫩度的影响[26]。
肉色是直观反映肉品质的重要指标，一般来说，肌肉的L*越高，a*越低，两者呈负相关[27]。本试验结果显示，运输应激提高了快速型黄羽肉鸡胸肌的L45 min*，而降低了a45 min*。研究表明，肌肉的肉品质与其抗氧化能力有关[28-29]。在应激状态下，黄羽肉鸡机体的抗氧化能力下降，机体内的氧化自由基增多，对肌肉细胞造成氧化损伤，大量液体渗出细胞表面，造成胸肌的L45 min*升高，a45 min*降低[30]。本试验结果显示，饲粮中添加柑橘提取物可提高快速型黄羽肉鸡机体的抗氧化能力。同时，饲粮中添加柑橘提取物降低了黄羽肉鸡胸肌的L45 min*，并提高了a45 min*。这可能是因为柑橘提取物中的黄酮类、有机酸和多糖等活性物质与肌肉细胞的细胞膜结合，大量清除氧化自由基，降低脂质过氧化对肌肉细胞的伤害，从而减少液体渗出细胞表面，提高肉色，进一步改善肉品质。
在本试验中，3个阶段基础饲粮的价格分别约为3.12、3.09和3.01元/kg，饲粮添加10 mg/kg的柑橘提取物，使基础饲粮的价格约提高了0.02元/kg。根据前期试验结果可知，对照组3个阶段的料重比分别约为2.04、2.25和3.44；柑橘提取物组3个阶段的料重比分别约为1.93、2.16和2.84。由上可知，一只肉鸡生长1 kg，1~21日龄，对照组约花6.36元，柑橘提取物组约花6.06元；22~42日龄，对照组约花6.95元，柑橘提取物组约花6.72元；43~63日龄，对照组约花10.35元，柑橘提取物组约花8.60元。因此，饲粮中添加10 mg/kg柑橘提取物并不会降低黄羽肉鸡的经济效益，可作为抗应激产品应用于肉鸡生产中。
4 结论① 运输时间与体重损失成正相关，运输时间越长，体重损失越大；饲粮添加10 mg/kg柑橘提取物可显著降低黄羽肉鸡的体重损失。
② 饲粮添加10 mg/kg柑橘提取物可显著提高黄羽肉鸡的胸肌率和腿肌率。
③ 运输应激显著降低黄羽肉鸡机体的抗氧化能力；饲粮添加10 mg/kg柑橘提取物可显著提高黄羽肉鸡机体的抗氧化能力。
④ 运输应激显著影响黄羽肉鸡的肉品质；饲粮添加10 mg/kg柑橘提取物可显著改善黄羽肉鸡的肉品质。
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