2. 青岛康大兔业发展有限公司, 国家农业农村部兔遗传育种与繁殖重点实验室, 青岛 266000;
3. 山东正宇兔业有限公司, 临沂 273400
2. Key Laboratory of Animal Genetics, Breeding and Reproduction of Ministry of Agriculture and Rural Affairs of the People's Republic of China, Qingdao Kangda Rabbit Industry Development Co., Ltd., Qingdao 266000;
3. Shandong Zhengyu Rabbit Industry Co., Ltd., Linyi 273400, China
高档功能性食品是指对人类身体某种或多种机能有益处、有足够营养效果且能改善健康状况或能减少患病的食品。基本特征包括：一是来自于天然成分；二是可以作为食物在日常饮食中食用；三是可被人体消化吸收且具有增强人体某些机能、改善身体和心理状况、延缓衰老甚至预防和治疗某些疾病等功能[1]。兔肉具有高消化率、高蛋白质、高赖氨酸、低脂肪、低能量、低胆固醇等特点，是高血压及心血管病患者的理想营养肉品，被认为是一种理想的功能性食品[2]。维生素E和硒是动物机体重要的抗氧化物质，二者相互协同，共同抵御氧化物质对机体的损伤。亚硒酸钠等传统无机硒源具有吸收率低、毒性高等缺点，且对环境产生污染；酵母硒属于优质的有机硒源，吸收率高，在满足动物对硒的生理需求后，还可以在动物体内储存。因此，在动物生产上使用有机硒取代无机硒具有重要生态意义。王旭等[3]研究报道，饲料中添加维生素E可显著提高香鱼仔稚鱼成活率及肝胰脏抗氧化酶活性。高海桐等[4]研究报道，饲粮中添加酵母硒能够显著提高猪肉的常规营养成分含量，改善猪肉的食用品质，提高贮藏品质。饲粮中联合添加酵母硒和维生素E可以提高肉鸡生长性能，改善肌肉品质，增强肌肉抗氧化能力[5]。张浩等[6]研究表明，饲粮中添加酵母硒有提高产蛋鸡生长性能和蛋品质的趋势，也有提高鸡蛋中硒富集效率的趋势。饲粮中添加0.3 mg/kg有机硒可提高湖羊的生长性能和肌肉品质，提高肌肉和器官中硒含量[7]。然而，近年来关于具有抗氧化功能的富硒兔肉等研究报道较少。因此，本试验以闽西南黑兔为研究对象，探讨饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔生长性能、屠宰性能、肌肉品质和抗氧化性能的影响，为开发功能性兔肉产品提供理论参考。
1 材料与方法 1.1 试验设计试验选用35日龄、体重相近、断奶的闽西南黑兔160只，随机分为4组，每组10个重复，每个重复4只(公母各占1/2)。Ⅰ组(对照组)饲喂基础饲粮，不额外添加维生素E和酵母硒；Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别在基础饲粮中添加100 mg/kg维生素E、0.15 mg/kg硒和100 mg/kg维生素E+0.15 mg/kg硒。维生素E添加形式为DL-α-生育酚乙酸酯(以α-生育酚计)，硒添加形式为酵母硒(以硒计)，添加量参考文献[8]。预试期5 d，正试期70 d。饲粮制成长度1.0~1.5 cm，直径约0.3 cm的全价配合颗粒饲料。基础饲粮配方参考De Blas等[9]，基础饲粮组成及营养水平见表 1。饲粮中α-生育酚和硒含量实测值见表 2。试验兔在封闭兔舍内每笼2只饲养，试验期间，试验兔每天饲喂2次，全程自由采食和饮水。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
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表 2 饲粮中α-生育酚和硒含量实测值(风干基础) Table 2 Measured values of α-tocopherol and selenium contents in diets (air-dry basis) |
试验结束当天，每个重复选取1只与该组平均体重相近的试验兔，心脏采集血液，分离血清样品，-20 ℃保存，用于血清抗氧化指标测定。同时，采集背腰最长肌(第1和第7腰椎之间)，测定肌肉物理性状、营养成分和抗氧化指标。
1.3 测定指标和方法 1.3.1 生长性能在试验正式开始(40日龄)和结束当日(110日龄)，称量每个重复肉兔重量。平均日增重(ADG)按每个重复肉兔重量除以试验天数和试验兔只数计算所得。平均日采食量(ADFI)按每个重复总采食量除以试验天数和试验兔只数计算所得。料重比(F/G)按总采食量除以总增重计算所得。
1.3.2 屠宰性能试验结束前1天晚上禁食12 h，试验结束当天每个重复选取1只与该组平均体重相近的试验兔屠宰，称重并记录宰前活重。颈部放血处死后，立即剥皮，在腕关节处去除前肢及在跗关节处去后肢，移走肠道及内容物和泌尿生殖器官后(保留头、气管、食管、胸腔器官、肝脏和肾脏及肾周脂肪)称重即为胴体重[10]；胴体重在第一颈椎处去头，同时去除气管、食管，并保留肝脏(摘去胆囊)、肾脏及肾周脂肪称重，即为半净膛胴重。半净膛胴胴体重去心脏、肝脏、肾脏及肾周脂肪后称重即为全净膛胴重，同时对心脏、肝脏(摘去胆囊)和肾脏进行称重，并分别除以宰前活重，计算屠宰率、半净膛屠宰率、全净膛屠宰率、心脏指数、肝脏指数和肾脏指数。
1.3.3 肌肉物理性状采集背腰最长肌测定pH、肉色[亮度(L*)、红度(a*)和黄度(b*)值]、剪切力、滴水损失、失水率和熟肉率，具体测定方法参考文献[11]。
1.3.4 肌肉营养成分肌肉中干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)和粗灰分(Ash)含量分别采用国家标准GB 5009.3—2016[12]、GB 5009.5—2016[13]、GB/T 14772—2008[14]和GB/T 9695.18—2008[15]测定。饲粮和肌肉中维生素E(α-生育酚、β-生育酚和γ-生育酚)含量采用国家标准GB/T 9695.30—2008[16]在液相色谱仪(Agilent，型号：1260)上测定。饲粮和肌肉中微量元素(铁、铜、锌、锰和硒)含量采用国家标准GB 5009.268—2016[17]在电感耦合等离子体质谱仪(Thermo，型号：iCAPQ)上测定。
1.3.5 血清和肌肉抗氧化指标血清和肌肉谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量以及总抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)分别使用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定(货号分别为A005、A001-1、A003-1和A015-3-1)。
1.4 数据处理采用SAS 9.1.3统计软件中的GLM程序进行数据的方差分析，采用Duncan氏法进行数据的多重比较，结果以平均值±标准差表示，P < 0.05为差异显著。
2 结果 2.1 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔生长性能的影响饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔生长性能的影响见表 3。由表可知，饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔终末体重、平均日增重、平均日采食量和料重比均无显著影响(P>0.05)。
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表 3 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔生长性能的影响 Table 3 Effects of dietary vitamin E and yeast selenium on growth performance of meat rabbits (n=10) |
饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔屠宰性能的影响见表 4。由表可知，饲粮中添加维生素E和酵母硒对宰前活重、胴体重、半净膛胴重、全净膛胴重、心脏重、肝脏重和肾脏重以及屠宰率、半净膛屠宰率、全净膛屠宰率、心脏指数、肝脏指数和肾脏指数均无显著影响(P>0.05)。
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表 4 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔屠宰性能的影响 Table 4 Effects of dietary vitamin E and yeast selenium on slaughter performance of meat rabbits (n=10) |
饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔肌肉物理性状的影响见表 5。由表可知，饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉肉色a*和b*值有显著影响(P < 0.05)；其中，Ⅳ组的肌肉肉色a*值显著高于对照组(P < 0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组的肌肉肉色b*值显著高于对照组(P < 0.05)。饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉pH、肉色L*值、剪切力、滴水损失、失水率和熟肉率均无显著影响(P>0.05)。
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表 5 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔肌肉物理性状的影响 Table 5 Effects of dietary vitamin E and yeast selenium on muscle physical properties of meat rabbits (n=10) |
饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔肌肉营养成分含量的影响见表 6。由表可知，饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉中DM、CP、EE和Ash含量均无显著影响(P>0.05)。
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表 6 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔肌肉营养成分含量的影响 Table 6 Effects of dietary vitamin E and yeast selenium on muscle nutrient contents of meat rabbits (n=10) |
饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉中α-生育酚含量有显著影响(P < 0.05)；其中，Ⅱ组和Ⅳ组肌肉中α-生育酚含量显著高于对照组(P < 0.05)。饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉中β-生育酚和γ-生育酚含量均无显著影响(P>0.05)。
饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉中铜、锰和硒含量有显著影响(P < 0.05)；其中，Ⅲ组和Ⅳ组肌肉中铜和锰含量显著低于对照组和Ⅱ组(P < 0.05)，Ⅲ组和Ⅳ组肌肉中硒含量显著高于对照组(P < 0.05)。饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉中铁和锌含量均无显著影响(P>0.05)。
2.5 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔抗氧化性能的影响饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔抗氧化性能的影响见表 7。由表可知，饲粮中添加维生素E和酵母硒对血清中GSH-Px活性、MDA含量和T-AOC有显著影响(P < 0.05)；其中，Ⅲ组和Ⅳ组血清中GSH-Px活性显著高于对照组(P < 0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血清中MDA含量显著低于对照组(P < 0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组血清中T-AOC显著高于对照组(P < 0.05)。饲粮中添加维生素E和酵母硒对血清中SOD活性无显著影响(P>0.05)。
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表 7 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔抗氧化性能的影响 Table 7 Effects of dietary vitamin E and yeast selenium on antioxidant capacity of meat rabbits (n=10) |
饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉中SOD活性、MDA含量和T-AOC有显著影响(P < 0.05)；其中，Ⅳ组肌肉中SOD活性显著高于对照组(P < 0.05)，Ⅳ组肌肉中MDA含量显著低于对照组(P < 0.05)，Ⅱ组和Ⅳ组肌肉中T-AOC显著高于对照组(P < 0.05)。饲粮中添加维生素E和酵母硒对肌肉中GSH-Px活性无显著影响(P>0.05)。
3 讨论 3.1 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔生长性能和屠宰性能的影响维生素E是一类脂溶性维生素，包括了α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚及三烯酚等，主要参与动物前列腺素的合成、血液凝固、稳定细胞膜结构和调节免疫反应，是机体重要的抗氧化成分。维生素E缺乏主要导致肉兔肌肉发育不良和繁殖性能下降，妊娠母兔流产率和死胎率增加[18]。Oriani等[19]在61日龄肉兔饲粮中添加0、60、150或375 mg/kg α-生育酚醋酸酯，连喂4周，发现期对肉兔生长性能没有产生显著影响。同样，Eiben等[20]研究发现，在最后7周的育肥期内，饲粮中添加150 mg/kg维生素E和饲粮中添加60 mg/kg维生素E饲喂的育肥兔之间生长性能不存在显著差异。张伟等[21]研究表明，在生长肉兔饲粮中添加不同水平的维生素E不能改变其生长性能，然而富含维生素E的饲粮(200 mg/kg)能够减少种公兔自由基的产生并提高精液品质(精子成活率、精子膜的完整性和精子活力等)，能够提高种兔繁殖性能[22]。本研究结果发现，饲粮中单独添加维生素E或联合添加酵母硒对育肥兔生长性能均无显著影响，与上述研究结果基本一致。
在大多数畜种中，微量元素硒与维生素E密切相关。硒是GSH-Px重要组成部分，该酶具有清除代谢过程中形成的过氧化物作用。Dokoupilová等[23]研究报道，在35日龄的肉兔饲粮中添加0.12和0.50 mg/kg硒(添加形式为酵母硒)，饲喂4周，并不影响其生长性能、饲料转化率和出栏率等。Marounek等[24]研究表明，饲喂硒含量为0.08或0.40 mg/kg饲粮的肉兔生长性能之间不存在显著差异。同样，Mattioli等[25]研究报道，在生长兔饲粮中添加0.46 mg/kg硒饲喂7周，也不会影响肉兔生长性能。Zhang等[26]研究发现，饲粮中硒添加水平对断奶至2月龄肉兔生长性能无显著影响。本研究结果发现，饲粮中单独添加酵母硒或联合添加维生素E对肉兔生长性能均无显著影响，与上述研究结果基本一致。
肉兔屠宰性能与生长性能密切相关。Castellini等[27]报道，在整个育肥期(35~85日龄)单独和联合补充饲喂添加维生素E(50和200 mg/kg)饲粮和维生素C(500和1 000 mg/L)饮水的肉兔的屠宰性状没有显著差异。本研究有关屠宰性能的结果与Castellini等[27]报道基本一致。其他研究也表明，肉兔育肥期的屠宰性能并不受饲粮维生素E和硒水平的影响[20, 24-26]。
3.2 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔肌肉品质的影响兔肉富含不饱和脂肪酸，肉兔全价配合饲料中维生素、硒等抗氧化剂的使用可以提高肉兔肌肉品质。殷启润等[28]研究表明，饮用维生素C溶液可显著增加肉鸡胸肌的肉色a*值，可在一定程度上维持肌红蛋白的含量。刘公言等[29]研究报道，饲粮中添加维生素B6能够降低肉兔的肉色L*值，提高肉色a*和b*值，对改善肌肉颜色具有重要意义。Gao等[30]研究发现，饲粮中添加维生素E能够缓解氧化应激，改善肌肉品质。然而，Kim等[31]研究发现，饲粮中添加维生素E或硒对肌肉pH没有显著影响。Corino等[32]研究表明，饲粮中添加α-生育酚乙酸酯能够稳定生肉的颜色。这可是因为饲粮中添加α-生育酚乙酸酯后肌肉中α-生育酚等抗氧化成分含量增加，进而改善肌肉颜色。
近年来，人们对饲粮中添加维生素E和硒对α-生育酚及硒在组织中的沉积、肉质特性、抗氧化能力和兔肉货架期的影响进行了相关试验，结果表明，α-生育酚在兔肉中富集是非常有效的，并且与饲粮的添加水平有较强的相关性[33-34]。Tres等[35]研究报道，每千克饲粮中添加100 mg α-生育酚乙酸酯可以使兔肉中α-生育酚含量增加3倍。另外大量研究表明，育肥兔饲粮中添加硒可使肌肉中硒含量增加2~4倍[23, 25, 36]。本研究结果表明，饲粮中添加维生素E和酵母硒能够增加肌肉中的α-生育酚和微量元素硒含量，且二者联合添加效果比单独使用效果更佳。
3.3 饲粮中添加维生素E和酵母硒对肉兔抗氧化性能的影响本研究发现，饲粮中添加维生素E和酵母硒等抗氧化剂可以提高肉兔机体抗氧化性能。Castellini等[37]研究报道，饲粮中额外补充0.5 mg/kg硒并不能提高肉兔血清维生素E含量。育肥兔饲粮中补充0.1 mg/kg有机硒能够使兔肉中硒含量显著增加，然而当饲粮硒水平高于0.1 mg/kg时，它既不影响兔肉的GSH-Px活性，也不影响兔肉的氧化稳定性[23]。对于家禽和反刍动物等其他物种，饲喂含硒的不饱和脂肪酸藻类来源的抗氧化物质，且与维生素E联合使用，可对机体内的氧化稳定性产生积极的协同效应[38-39]。然而，肉兔机体组织在清理过氧化物时，对硒的依赖性小于其他哺乳动物。Lee等[40]报道，肉兔存在的大部分GSH-Px并没有用硒作辅助因子。另外，Erdélyi等[41]在肉兔的肝脏、肾脏、生殖器官和肌肉等也没有观察到硒与GSH-Px之间的任何关系。因此，与其他动物比较，肉兔在降低组织的氧化负荷上可能更多地依赖维生素E，而较少地依赖硒，其具体作用机理有待于进一步研究。
4 结论饲粮中添加维生素E和酵母硒对闽西南黑兔生长性能和屠宰性能无显著影响，但能够提高机体抗氧化性能，改善肌肉颜色，增加肌肉α-生育酚和硒含量，提高兔肉的营养价值。
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