2. 山西农康新拓科技发展有限公司, 阳曲 030100;
3. 山西省畜牧兽医学校, 太原 030024;
4. 山西省生态畜牧产业工作站, 太原 030008
2. Shanxi Nongkangxintuo Technology Development Co., Ltd., Yangqu 030100, China;
3. Shanxi Animal Husbandry and Veterinary School, Taiyuan 030024, China;
4. Shanxi Ecological Animal Husbandry Industry Workstation, Taiyuan 030008, China
贵妃鸡作为优质的肉蛋兼用型禽类，具有耐粗饲、抗病力强等特点，且其生产的蛋具有高蛋白质、低胆固醇等优点。共轭亚油酸(conjugated linoleic acid, CLA)具有抗癌[1]、降胆固醇[2]、抗氧化[3]、改善肉品质[4]和改善生产性能[5]等功能。刘雪兰等[6]研究发现，CLA对海兰白蛋鸡生产性能无显著影响，饲粮中添加1% CLA能使蛋壳强度显著提高。李晓轩等[7]在固始鸡的研究中表明，饲粮中添加CLA能显著降低蛋黄总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量，且添加量为2%时还可以改善蛋黄色泽。孙晓军等[8]研究表明，饲粮中添加CLA可使蛋黄中丙二醛(MDA)含量显著降低。Chamruspollert等[9]研究发现，蛋黄中CLA的富集量与饲粮中CLA的添加量有关。刘雪兰等[10]在海兰白蛋鸡饲粮中添加CLA发现，蛋黄中CLA的富集量随着CLA添加量的增加而增加。郑洲等[11]研究发现，CLA对家禽生产性能无显著影响，但蛋黄中有CLA富集。王生辉[12]在海兰褐蛋鸡饲粮中添加CLA发现，CLA添加量为2%时，蛋黄中CLA的富集量达到最高，合理添加可以得到富含CLA的鸡蛋。目前，人们对CLA的报道主要集中在海兰褐、海兰白等蛋鸡中，关于CLA在贵妃鸡中的应用研究尚未报道。因此，本试验旨在研究饲粮中添加CLA对贵妃鸡生产性能、蛋品质、血清和蛋黄生化指标、抗氧化能力以及蛋黄中CLA富集量的影响，为CLA在贵妃鸡生产中的应用提供理论依据，以开发强化CLA的贵妃鸡鸡蛋。
1 材料与方法 1.1 试验动物和材料本试验所用贵妃鸡由山西省养殖技术试验基地提供。CLA购买于青岛某生物有限公司，纯度为80.6%，其中2种主要异构体c9, t11-CLA和t10, c12-CLA含量分别为38.1%和39.4%。
1.2 试验设计和饲粮试验选取360只63周龄、健康的贵妃鸡，随机分为5个组，每组6个重复，每个重复12只。对照组饲喂基础饲粮+4%大豆油；CLA组分别饲喂在对照组饲喂基础上添加1%、2%、3%和4% CLA的饲粮，并分别以相应的CLA添加量等量替换大豆油。试验预试期7 d，正试期42 d。基础饲粮参照《鸡饲养标准》(NY/T 33—2004)[13]配制，其组成及营养水平见表 1。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
饲养试验在山西省太原市阳曲县山西省养殖技术试验基地进行，在良好的饲养管理条件下，采用3层阶梯式笼养，每个重复3个鸡笼，每笼4只鸡，重复之间相隔1个空鸡笼。试验每天07：00和15：00各喂料1次，人工光照16 h/d，每天记录产蛋数、蛋重、给料量和剩料量。
1.4 检测指标及方法 1.4.1 生产性能以重复为单位，每天记录产蛋数、给料量和剩料量，计算平均蛋重、平均日采食量、产蛋率和料蛋比。计算公式如下：
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收集试验第42天的鸡蛋，每个重复选取3枚蛋，用多功能蛋品质分析测定仪(EA-01，以色列ORKA公司)测定蛋重、蛋白高度、蛋黄颜色和哈氏单位；用蛋壳强度仪(EFR-01，以色列ORKA公司)测定蛋壳强度；将蛋壳膜剥离后称重，记录蛋壳重量；用数显千分尺(青岛澳海源国际贸易有限公司)分别测量剥离膜的蛋壳锐端、钝端和中间的厚度，计算三者平均值，记录蛋壳厚度。
1.4.3 血清和蛋黄生化指标在试验结束时，每个重复随机选取3只鸡，由翅下静脉采血5 mL，静置后，以3 000 r/min、离心10 min，取上清液置于-80 ℃冰箱保存备用[14]，用于测定血清生化指标。蛋黄使用冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)冻干成蛋黄冻干粉，准确称取蛋黄冻干粉，按重量(g) ∶体积(mL)=1 ∶ 9的比例，加入9倍体积的匀浆介质(无水乙醇)，冰水浴条件下机械匀浆，2 500 r/min、离心10 min，取上清液用于测定蛋黄生化指标。用酶标仪(ELx808，美国伯腾仪器有限公司)测定总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量，试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所，并严格按照试剂盒说明书操作。
1.4.4 血清和蛋黄抗氧化指标取血清和蛋黄待测液测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物酶(CAT)活性和总抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量，试剂盒均购自于南京建成生物工程研究所，并严格按照试剂盒说明书操作。
1.4.5 蛋黄CLA富集量首先进行脂肪酸的提取：称取0.1~0.2 g蛋黄冻干粉，加入25 mL带盖玻璃试管中。将8 mL氯仿-甲醇溶液和1 mL浓度为2 μg/mL内标溶液(C17 ∶ 0)加入到玻璃试管振荡后静置1~2 h后，用不含脂肪的滤纸过滤。用氯仿-甲醇溶液冲洗2次，转移到20 mL带盖玻璃试管中。加入4 mL 0.04% MgCl2溶液混匀静置，直至分层。弃上清液，加入氯仿-甲醇-0.04% MgCl2溶液混匀，分层后，弃上清液并用氮气吹干。再经甲酯化后用气相色谱仪(GC-8960，山东瑞津仪器有限公司)测定蛋黄中CLA含量。蛋黄中CLA含量委托青岛拜恩检测技术服务有限公司测定。
1.5 数据统计分析采用Excel 2019记录试验数据，使用SPSS 22.0进行单因素方差分析，并采用Duncan氏法进行多重比较。以P < 0.05表示差异显著，P < 0.01表示差异极显著。试验数据均以“平均值(mean)±标准差(SD)”表示。
2 结果 2.1 CLA对贵妃鸡生产性能的影响由表 2可知，与对照组相比，1% CLA组和4% CLA组贵妃鸡平均日采食量极显著降低(P < 0.01)，4% CLA组产蛋率显著降低(P < 0.05)，1% CLA组、2% CLA组和3% CLA组料蛋比显著提高(P < 0.05)，饲粮添加CLA对平均蛋重无显著影响(P>0.05)。
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表 2 CLA对贵妃鸡生产性能的影响 Table 2 Effects of CLA on performance of royal chickens |
由表 3可知，与对照组相比，饲粮添加CLA有提高贵妃鸡蛋壳强度的趋势(P=0.060)，4% CLA组蛋黄重量极显著降低(P < 0.01)，4% CLA组蛋黄颜色显著低于1% CLA组(P < 0.05)；饲粮添加CLA对蛋壳重量、蛋重、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位无显著影响(P>0.05)。
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表 3 CLA对贵妃鸡蛋品质的影响 Table 3 Effects of CLA on egg quality of royal chickens |
由表 4可知，与对照组相比，2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡血清TG含量极显著降低(P＜0.01)；各CLA组血清LDL-C含量极显著降低(P＜0.01)，且2% CLA组和4% CLA组最低；2% CLA组血清HDL-C含量极显著提高(P＜0.01)；饲粮添加CLA对血清T-CHO含量无显著影响(P>0.05)。
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表 4 CLA对贵妃鸡血清生化指标的影响 Table 4 Effects of CLA on serum biochemical indices of royal chickens |
由表 5可知，与对照组相比，各CLA组贵妃鸡蛋黄T-CHO含量极显著降低(P＜0.01)，且4% CLA组最低；饲粮添加CLA对蛋黄TG含量无显著影响(P>0.05)。
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表 5 CLA对贵妃鸡蛋黄生化指标的影响 Table 5 Effects of CLA on egg yolk biochemical indices of royal chickens |
由表 6可知，与对照组相比，3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡血清T-AOC极显著降低(P＜0.01)，且3% CLA组最低；1% CLA组血清SOD活性极显著提高(P＜0.01)，3% CLA组和4% CLA组血清SOD活性极显著降低(P＜0.01)；4% CLA组血清GSH-Px活性极显著提高(P＜0.01)；各CLA组血清MDA含量极显著降低(P＜0.01)；2% CLA组和3% CLA组血清CAT活性极显著提高(P＜0.01)，且2% CLA组最高。
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表 6 CLA对贵妃鸡血清抗氧化指标的影响 Table 6 Effects of CLA on serum antioxidant indices of royal chickens |
由表 7可知，与对照组相比，2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡蛋黄T-AOC以及SOD和CAT活性极显著提高(P＜0.01)，且4% CLA组最高；各CLA组蛋黄GSH-Px活性极显著升高(P＜0.01)，且3% CLA组最高；各CLA组蛋黄MDA含量极显著降低(P＜0.01)，且2% CLA组最低。
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表 7 CLA对贵妃鸡蛋黄抗氧化指标的影响 Table 7 Effects of CLA on egg yolk antioxidant indices of royal chickens |
由表 8可知，与对照组相比，2% CLA组贵妃鸡蛋黄中CLA的富集量极显著升高(P＜0.01)，4% CLA组蛋黄中CLA的富集量极显著降低(P＜0.01)。
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表 8 CLA在贵妃鸡蛋黄中的富集量 Table 8 CLA enrichment in egg yolk of royal chickens |
CLA作为一种营养素由天然植物提取而来，具有抗癌、促进脂肪氧化分解以及降血脂等作用。Shang等[15]在褐矮母鸡饲粮中添加CLA发现，饲粮添加1% CLA可以提高平均日采食量和产蛋率。Chamruspollert等[9]研究发现，饲粮中添加5% CLA显著降低62周龄白莱航蛋鸡平均日采食量。本试验结果表明，与对照组相比，1% CLA组和4% CLA组贵妃鸡平均日采食量极显著降低，4% CLA组产蛋率显著降低，这与Chamruspollert等[9]研究62周龄白莱航蛋鸡的结果基本一致。各组饲粮能量和蛋白质水平相同，1% CLA组和4% CLA组平均日采食量极显著降低，可能是因为饲粮中CLA的添加量影响了饲粮适口性；而4% CLA组产蛋率显著降低可能与4% CLA组平均日采食量降低有关。本试验中，1% CLA组、2% CLA组和3% CLA组料蛋比显著提高，且2% CLA组最高，这与胡艳等[16]的结果一致；各组平均蛋重无显著差异，但随着饲粮CLA添加量的增加有下降趋势，这与刘雪兰等[6]的研究结果相同，这可能与周龄、品种和采食量降低有关。
3.2 CLA对贵妃鸡蛋品质的影响刘雪兰等[6]研究发现，在海兰白蛋鸡饲粮中添加1% CLA能显著提高蛋壳厚度。Shang等[15]在褐矮母鸡饲粮中添加CLA发现，蛋黄和蛋壳重随着饲粮CLA添加量的增加而线性下降。王生辉[12]研究表明，在海兰褐蛋鸡饲粮中添加2%和4% CLA组蛋壳强度高于对照组。本试验结果表明，与对照组相比，4% CLA组蛋黄重量极显著降低，这与前人研究结果一致；2% CLA组和4% CLA组蛋壳强度有提高趋势，这与王生辉[12]研究结果一致；3% CLA组和4% CLA组蛋壳厚度有降低趋势，这可能与CLA添加量有关[16]，或者与4% CLA组贵妃鸡采食量降低，导致从饲粮中获取钙源减少有关。
3.3 CLA对贵妃鸡血清和蛋黄生化指标的影响产蛋期蛋鸡的脂质代谢更加活跃，蛋鸡脂质代谢与机体健康和产蛋性能密切相关。Nicolosi等[17]在仓鼠血清脂代谢研究中发现，CLA可以显著降低仓鼠血清T-CHO和TG含量。Yamasaki等[18]研究发现，CLA对小鼠肝脏和腹脂中TG含量有显著降低作用。李晓轩等[7]研究表明，随着固始鸡饲粮中CLA添加量的增加，血清T-CHO和TG含量显著降低。本试验结果表明，与对照组相比，各CLA组贵妃鸡血清T-CHO含量无显著差异；2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组血清TG含量均极显著降低，这与李晓轩等[7]的研究结果一致；2% CLA组血清HDL-C含量极显著提高，各CLA组血清LDL-C含量极显著降低，这与齐晓龙[3]的研究结果相同；血清T-CHO含量变化结果与前人研究结果不同，可能与CLA添加量以及试验动物品种和日龄有关。
王生辉[12]研究发现，2%和4% CLA能显著降低海兰褐蛋黄T-CHO含量。Yin等[19]研究表明，2.5% CLA对矮小型褐壳蛋鸡蛋黄T-CHO含量呈显著降低趋势。本试验结果显示，与对照组相比，各CLA组蛋黄T-CHO含量极显著降低，蛋黄TG含量无显著差异，这与前人研究结果一致。饲粮中添加CLA降低了蛋黄T-CHO含量可能是CLA抑制了卵母细胞卵黄生成受体(OVA)的基因表达，减少了极低密度脂蛋白(VLDL)的沉积量，降低了OVA的生成，进而降低蛋黄中胆固醇含量[20]。
3.4 CLA对贵妃鸡血清和蛋黄抗氧化指标的影响产蛋鸡的脂质代谢异常旺盛会引起脂质过氧化，对机体造成破坏，进而引发各种疾病。齐晓龙[3]研究发现，饲粮中添加CLA显著提高海兰褐蛋鸡血清SOD和GSH-Px活性，显著降低血清MDA含量。吴国玲[21]研究表明，在褐壳蛋鸡饲粮中添加2% CLA显著提高血清T-AOC和GSH-Px活性；随着CLA添加量的增加，血清SOD活性呈先上升后下降趋势；饲粮添加2% CLA显著降低血清MDA含量。本试验结果表明，随着CLA添加量的增加，贵妃鸡血清T-AOC和SOD活性呈先上升后下降趋势，在添加量为1%时最高；与对照组相比，4% CLA组血清GSH-Px活性极显著升高，血清MDA含量极显著降低；2% CLA组和3% CLA组血清CAT活性极显著升高。上述结果与前人研究结果基本一致，表明CLA能够提高贵妃鸡机体抗氧化能力，但血清中抗氧化酶活性并不是随着添加量的增加而无限升高，这可能与机体免疫机能有关[21]。
孙晓军等[8]研究表明，在海兰白蛋鸡饲粮中添加CLA(0.5%~2.0%)可使蛋黄中SOD活性线性提高；2.0% CLA显著降低蛋黄MDA含量，显著提高蛋黄GSH-Px活性。本试验结果表明，与对照组相比，2% CLA组、3% CLA组和4% CLA组贵妃鸡蛋黄T-AOC以及SOD和CAT活性极显著提高；各CLA组蛋黄GSH-Px活性极显著升高，蛋黄MDA含量极显著降低。这与前人研究结果具有相似性，表明CLA可增强机体清除自由基的能力，而是否具有直接清除自由基作用，以及其提高抗氧化酶活性的量效关系、作用机理和有效活性成分等还有待于进一步研究[8]。
3.5 CLA在贵妃鸡蛋黄中的富集量CLA既是人和动物不可缺少的脂肪酸之一，又是人和动物无法合成的一种物质，必须从食物中摄取，这使得有关增加CLA在食物中含量的研究日益引起人们的关注。Chamruspollert等[9]研究发现，蛋黄中CLA的富集量随着基础饲粮中CLA添加量的增加而增加，当饲粮中添加5% CLA时，蛋黄中可富集340 mg/kg左右CLA。刘雪兰等[10]在海兰白蛋鸡饲粮中添加CLA表明，饲粮CLA添加量在1%~6%时，蛋黄中CLA的富集量在10 d左右达到最高，可富集692 mg/kg CLA。尚秀国[22]研究发现，矮小型褐壳蛋鸡饲粮中添加5% CLA，蛋黄中可富集630 mg/kg左右CLA。Schäfer等[24]研究发现，饲粮中添加2% CLA，蛋黄中可富集400 mg/kg左右CLA。大量研究表明，饲粮中CLA添加量越高，蛋黄中CLA的富集量就越高，但不会持续增高。本试验中，随着饲粮CLA添加量的增加，蛋黄中CLA的富集量呈先升高后降低趋势，在添加量为2%时达到最高，在蛋黄中的富集量在1 439 mg/kg左右，这与前人研究海兰白和矮小型褐壳蛋鸡蛋黄中CLA的富集量相差甚大。由此可推测，贵妃鸡可能更易富集CLA，添加量过高时可能会出现富集量降低现象。
4 结论① 饲粮中CLA添加量过高(3%和4%)时会影响贵妃鸡的生产性能，饲粮添加2% CLA可提高蛋壳强度，降低血清和蛋黄中胆固醇含量，提高抗氧化能力，且在蛋黄中CLA的富集量最高。
② 在不影响生产性能的前提下，饲粮中添加2% CLA能更好地在蛋黄中富集CLA，以生产CLA强化鸡蛋。
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