硒是动物体必需的微量矿物元素之一，是一些重要抗氧化酶和含硒蛋白的必需组成部分，能够清理动物体内氧自由基，抑制过氧化脂质的产生，具有抗氧化、抗应激、增强机体免疫力等生物学功能[1]。目前国内常见畜禽饲粮的补硒来源主要是无机硒(硒酸盐、亚硒酸盐)和有机硒(酵母硒、蛋氨酸硒)。诸多研究表明，有机硒能提高畜禽生长和抗氧化性能，改善免疫功能和蛋品质[2-4]；且与无机硒相比，有机硒在增加畜禽机体脏器硒含量、蛋品质保鲜储存、蛋品质和抗氧化能力等方面取得的效果更佳[5-6]，在生产实践中应用更为广泛。Markovic等[7]研究表明，饲粮中添加酵母硒可以提高肉鸡的抗氧化能力，改善生长性能、胴体性能和蛋品质。张旭等[8]和邓萍等[9]研究表明，饲粮中添加适宜水平的亚硒酸二葡萄糖酯能显著提高蛋鸭的产蛋性能、蛋品质和抗氧化能力。然而，目前关于亚硒酸二葡萄糖酯对肉鸭生长发育及健康安全性的研究还未见报道。因此，本试验以临武鸭为试验对象，通过饲喂添加不同水平亚硒酸二葡萄糖酯的饲粮，研究其对7~35日龄临武鸭生长性能、免疫器官指数、血清生化和抗氧化指标的影响，为亚硒酸二葡萄糖酯在肉鸭饲料生产中的应用提供参考依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料试验所用亚硒酸二葡萄糖酯购买于湖南某生物科技有限公司，硒含量为2 000 mg/kg。
1.2 试验设计与饲粮试验选用300羽7日龄体况相近的临武鸭，随机分为5组，每组6个重复，每个重复10只鸭。对照组(Ⅰ组)饲喂基础饲粮，不额外补充硒源；试验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组)分别在基础饲粮中添加0.10、0.20、0.30和0.40 mg/kg的亚硒酸二葡萄糖酯(以硒计)。基础饲粮参照本研究室制定的地方标准《临武鸭营养需要》配制，并根据《中国饲料成分及营养价值》(2019年第30版)表计算营养水平，基础饲粮组成及营养水平见表 1。各组饲粮实测硒含量见表 2。试验期28 d。
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表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
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表 2 各组饲粮实测硒含量(风干基础) Table 2 Measured selenium content in diets of different groups (air-dry basis) |
试验于湖南省畜牧兽医研究所水禽试验场进行。试验前对鸭舍和器具进行消毒，试验鸭采用网上小间饲养，小间规格为1.80 m×1.00 m，各重复均匀分布于鸭舍，自由采食和饮水，每日观察并记录试验鸭生长状况和饲料消耗，其他饲养管理按照常规程序进行。
1.4 测定指标 1.4.1 生长性能分别于试验开始和结束前1天20:00断料供水，次日08:00以重复为单位空腹称重。试验期间以重复为单位记录试验鸭每天的投料量和剩余料量，计算始重(IW)、末重(FW)、平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。
1.4.2 血清生化和抗氧化指标试验结束后，每个重复随机选取体重相近、采食正常、无怪癖、健康的试验鸭1只，禁食12 h后，采翅下静脉血4 mL，静置40 min后，3 500 r/min离心15 min，分离并收集血清，-20 ℃下保存备用。利用全自动生化分析仪(URIT-8000，美国优利特公司)检测血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(UN)和尿酸(UA)含量以及谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性。采用比色法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.4.3 硒含量测定按照GB 5009.93—2017[10]方法处理饲粮和血清样品，采用氢化物原子荧光光谱法(TAS-990AFG原子吸收分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司)测定硒含量。
1.4.4 免疫器官指数采血完毕后，颈部放血致死试验鸭，分离出法氏囊、胸腺和脾脏，并记录其重量，计算免疫器官指数：
免疫器官指数(g/kg)=免疫器官重(g)/宰前活重(kg)。
1.5 数据处理试验数据用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析，通过Duncan氏法进行多重比较，显著水平为P < 0.05。各组试验结果均用“平均值±标准差”表示。
2 结果 2.1 亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭生长性能的影响由表 3可知，饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭生长性能无显著影响(P>0.05)。
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表 3 亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭生长性能的影响 Table 3 Effects of selenite diglucose on growth performance of Linwu ducks aged from 7 to 35 days |
由表 4可知，饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数均无显著影响(P>0.05)。
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表 4 亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭免疫器官指数的影响 Table 4 Effects of selenite diglucose on immune organ indexes of Linwu ducks aged from 7 to 35 days |
由表 5可知，Ⅴ组血清TG含量显著低于Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ组(P < 0.05)。血清硒含量随饲粮亚硒酸二葡萄糖酯添加水平增加而升高，Ⅴ组血清硒含量最高，显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组(P < 0.05)。饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭其他血清生化指标无显著影响(P>0.05)。
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表 5 亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭血清生化指标的影响 Table 5 Effects of selenite diglucose on serum biochemical indexes of Linwu ducks aged from 7 to 35 days |
由表 6可知，血清GSH-Px活性和GSH含量随饲粮亚硒酸二葡萄糖酯添加水平增加而升高(P < 0.05)，Ⅴ组血清GSH-Px活性和GSH含量最高，显著高于Ⅰ和Ⅱ组(P < 0.05)；Ⅳ组血清GSH-Px活性和GSH含量显著高于Ⅰ组(P < 0.05)。饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭血清SOD活性、MDA含量和T-AOC无显著影响(P>0.05)。
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表 6 亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭血清抗氧化指标的影响 Table 6 Effects of selenite diglucose on serum antioxidant indexes of Linwu ducks aged from 7 to 35 days |
硒是畜禽生长发育所必需的一种微量元素，缺硒可以影响动物机体体内生长激素合成，从而影响机体的生理代谢和生长发育[11]。随着关于有机硒源开发和利用的研究增多，其对畜禽生长性能的结果存在很大差异。诸多研究表明，饲粮中添加适宜水平的有机硒对畜禽生长性能有明显的改善作用[12-14]。范淳[15]在研究酵母硒对肉仔鸡的添加效应及生物学效价发现，基础饲粮(硒含量为0.04 mg/kg)中添加0.10~0.20 mg/kg的酵母硒能改善缺硒肉鸡(试验前2周饲喂缺硒饲粮)的生长性能。Ahmadi等[16]有关纳米硒的研究结果与之相似。但宋清华等[17]和朱宏娟[18]报道，以蛋氨酸硒为硒源，基础饲粮(硒含量为0.13 mg/kg)中添加0.15、0.30 mg/kg硒对良凤花肉鸡平均日增重和料重比均无显著影响。Oliveira等[19]研究认为，以酵母硒形式在饲粮中添加0.15、0.30、0.45、0.60 mg/kg硒对科宝肉鸡生长性能无显著影响，饲粮硒水平只要达到0.15 mg/kg就可以维持机体正常生长，与NRC(1994)[20]推荐量一致。本试验条件下，饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭生长性能未产生显著影响，与上述研究的结论一致。
适量的硒能促进免疫器官的生长发育，硒缺乏或过量均可对免疫器官的生长发育产生影响。崔保安等[21]和袁艺森[22]在研究硒对雏鸡、雏鸭的免疫功能影响时发现，饲粮中添加硒能显著提高雏禽的免疫器官指数。王巧莉[23]在研究酵母硒对肉鹅的生物学效应时发现，酵母硒添加水平为0.30 mg/kg时，能显著提高3、6和9周龄肉鹅的免疫器官指数。李建柱等[24]研究发现，饲粮中添加不同硒源均能显著提高1~9周龄淮南麻鸭的免疫器官指数。但Niu等[25]研究发现，基础饲粮(硒含量为0.10 mg/kg)中添加0.20、0.40 mg/kg蛋氨酸硒对肉鸡胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数均未产生显著影响。本试验结果显示，饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭免疫器官指数未产生显著影响，与田耀耀等[26]、Rao等[27]的研究结果一致。
有关有机硒对家禽生长性能和免疫器官指数影响的研究结论差异的原因可能主要是基础饲粮的硒含量不同。当饲粮缺硒较为明显时，添加有机硒能改善家禽的生长发育，而当基础饲粮硒含量基本满足机体所需后，额外添加硒对生长发育影响较小[15]。本试验基础饲粮中的硒含量(0.15 mg/kg)已能够满足试验鸭生长和免疫器官发育对硒的需要。而试验动物品种、生长阶段和饲养环境等差异也会使研究结果不同。另据报道，种禽饲粮中添加硒能增加蛋中的硒含量，以使雏禽从卵黄囊中获得较高的硒在体内贮存[28-30]。本试验试验鸭7日龄开始添加有机硒，这也可能是造成补硒效果不明显的原因。
3.2 亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭血清生化指标的影响畜禽血清生化指标能反映其机体健康及代谢状况，其中血清TC和TG含量的高低可以反映机体脂类的吸收代谢及利用情况，其含量越低，说明机体对脂肪的利用率越高[24]，对动物的健康有重要的参考价值。硒具有脂蛋白调节功能，机体缺硒血清TC和TG含量会升高[22]。郭磊磊[31]和杨清丽[32]研究发现，饲粮中添加纳米硒能降低小鼠和蛋鸡血清TC和TG含量。本研究结果表明，饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯能降低7~35日龄临武鸭血清TG含量，与上述研究结果基本一致。这说明亚硒酸二葡萄糖酯具有降血脂作用，其作用机理有待进一步深入研究。硒经十二指肠吸收进入血液后，与血液中的α-球蛋白和β-球蛋白结合，最后通过血液转运到各组织中[33]。有研究表明，随饲粮硒水平的上升，动物组织中可获得更多的硒储备[34]。本试验中，血清硒含量随饲粮中亚硒酸二葡萄糖酯添加水平上升而增加，0.40 mg/kg添加水平组血清硒含量最高，与赵亚伟等[35]和贾雪婷等[36]的研究结果一致。综合血清生化各项指标，7~35日龄临武鸭饲粮中亚硒酸二葡萄糖酯适宜添加水平为0.40 mg/kg。
3.3 亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭血清抗氧化指标的影响硒作为体内重要的必需微量元素，直接参与机体重要抗氧化酶——GSH-Px的组成，它能催化有毒的过氧化物还原为无害的羟基化合物，从而保护生物膜不被氧化降解，保护细胞膜结构和功能完整[18]。缺硒会导致GSH-Px活性下降，造成机体内过氧化物和过氧化脂质含量升高。饲粮中添加硒能显著提高蛋鸡血清GSH-Px活性[37]。Cai等[38]发现饲粮中添加0.30~0.50 mg/kg的纳米硒可显著提高肉仔鸡血清GSH-Px活性、GSH含量，抑制自由基的产生。张大为等[39]研究发现，饲粮硒水平为0.30~0.60 mg/kg时能显著提高固始鸡血清和肝脏GSH-Px活性，并降低血清和肝脏MDA含量。王巧莉[23]和王娜等[40]的研究结果也与上述结果类似。本试验研究结果显示，饲粮中添加亚硒酸二葡萄糖酯能提高7~35日龄临武鸭血清GSH-Px活性和GSH含量，且0.40 mg/kg添加水平组血清GSH-Px活性和GSH含量最高。综合考虑，7~35日龄临武鸭饲粮中添加0.40 mg/kg的亚硒酸二葡萄糖酯(以硒计)可获得最佳的抗氧化能力。
4 结论饲粮(硒含量为0.15 mg/kg)中添加亚硒酸二葡萄糖酯对7~35日龄临武鸭生长性能和免疫器官发育未产生不良影响，但能降低血清TG含量，并能提高机体抗氧化能力。综合各项指标，7~35日龄临武鸭饲粮中亚硒酸二葡萄糖酯适宜添加水平为0.40 mg/kg(以硒计)。
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