十二指肠灌注亮氨酸对奶牛胰腺外分泌功能及血液指标的影响见表3及表4。由表3可知，十二指肠灌注亮氨酸不影响胰液分泌量、pH、总蛋白质分泌浓度和合成速率(P>0.05)。不同亮氨酸灌注水平间，胰腺α-淀粉酶分泌浓度和合成速率差异极显著(P<0.01)。随亮氨酸灌注水平升高，胰腺α-淀粉酶分泌浓度(U/L;U/g prot)呈先升高后下降再升高变化规律，胰腺α-淀粉酶合成速率(U/h)先升高后下降，均在29.5 μmol/(kg·h)灌注水平时为最大。由表4可知，十二指肠灌注不同水平的亮氨酸均可显著提高血浆胰岛素和胆囊收缩素浓度(P<0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 十二指肠灌注亮氨酸对奶牛胰腺外分泌功能的影响 Table 3 Effects of duodenal infusion of leucine on pancreatic exocrine secretion in dairy cows 项目 Items 亮氨酸灌注水平 Leucine infusion level/ P值 P-value 0 29.5 59.1 88.6 胰液分泌量 Secretion of pancreatic juice/(mL/h) 110.59±5.94 120.67±4.18 107.94±3.47 108.59±3.93 0.157 pH 7.26±0.02 7.22±0.03 7.21±0.02 7.25±0.02 0.337 胰液总蛋白质 Total protein of pancreatic juice 分泌浓度 Secretion concentration/(mg/mL) 5.20±0.19 5.57±0.28 5.80±0.19 5.25±0.12 0.173 合成速率 Production rate/(mg/h) 658.09±30.25 715.55±30.86 649.05±20.46 672.99±24.76 0.297 α-淀粉酶 α-amylase 分泌浓度 Secretion concentration/(105 U/L) 2.58±0.06b 2.76±0.03c 2.31±0.07a 2.81±0.04c <0.01 分泌浓度 Secretion concentration/(104 U/g prot) 5.78±0.20bc 6.20±0.21c 4.67±0.17a 5.23±0.15ab <0.01 合成速率 Production rate/(104 U/h) 2.96±0.15a 3.42±0.12b 2.64±0.09a 3.01±0.11a <0.01 同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P＞0.05)，不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。下表同。 In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P＞0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P＜0.05). The same as below.

表3 十二指肠灌注亮氨酸对奶牛胰腺外分泌功能的影响 Table 3 Effects of duodenal infusion of leucine on pancreatic exocrine secretion in dairy cows

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 十二指肠灌注亮氨酸对奶牛血浆指标的影响 Table 4 Effects of duodenal infusion of leucine on plasma parameters in dairy cows pmol/L 项目 Items 亮氨酸灌注水平 Leucine infusion level/ P值 P-value 0 29.5 59.1 88.6 胰岛素浓度 Insulin concentration 76.21±1.61a 83.29±2.96b 82.87±3.82b 84.38±2.46b 0.038 胆囊收缩素浓度 Cholecystokinin concentration 4.47±0.22a 5.80±0.32b 5.61±0.46b 5.32±0.51b 0.046

表4 十二指肠灌注亮氨酸对奶牛血浆指标的影响 Table 4 Effects of duodenal infusion of leucine on plasma parameters in dairy cows pmol/L

本试验中，不同亮氨酸灌注水平奶牛胰液平均分泌量为(111.95±8.96) mL/h。营养物质对奶牛胰液分泌量的影响已有较多报道，奶牛单位体重胰液平均分泌速率为0.23~0.60 mL/(kg·h)^{[18, 19, 20]}。本研究中单位体重胰液平均分泌速率为0.52 mL/(kg·h)，在之前研究结果范围内。有研究指出反刍动物受十二指肠食糜刺激分泌胰液，十二指肠灌注葡萄糖或淀粉可显著提高反刍动物胰液分泌，但灌注酪蛋白并无影响^[19]。本试验中不同亮氨酸灌注水平胰液分泌量差异不显著，与之前研究结果相似。亮氨酸作为调控蛋白质合成重要营养调控因子，相关研究主要集中于单胃动物，且亮氨酸可促进骨骼肌、肝脏及胰腺等组织器官蛋白质合成^{[6, 7, 8, 9]}。本试验表明，十二指肠灌注亮氨酸对胰腺总蛋白质合成速率影响不显著，表明亮氨酸对单胃动物和反刍动物机体蛋白质合成调控作用可能不同。

胰腺分泌的α-淀粉酶是小肠淀粉主要的降解酶，其分泌不足会限制小肠淀粉利用^[1]。而亮氨酸可调控胰腺酶分泌和淀粉酶的活性。Hashimoto等^[13]给小鼠饲喂亮氨酸，结果显示亮氨酸显著降低了胰腺淀粉酶活性及相关mRNA表达。本研究中随亮氨酸灌注水平升高，胰腺α-淀粉酶合成速率呈先升高后回落的变化规律。

胰岛素作为胰腺分泌的一种内分泌素，其对蛋白质合成调控作用结果不一 。对肉牛真胃灌注酪蛋白试验结果显示，酪蛋白灌注显著提高了胰腺α-淀粉酶合成及分泌，且血浆胰岛素浓度升高^[19]。同时本课题组也发现亮氨酸可使山羊血浆胰岛素浓度显著上升^[24]。胆囊收缩素也被认为是调控蛋白质分泌重要因子，其浓度与胰腺α-淀粉酶合成分泌关系密切^{[25, 26]}。体外试验也证明胆囊收缩素分泌增强可刺激肉牛胰腺细胞分泌α-淀粉酶^[27]。本试验灌注亮氨酸后显著提高了奶牛血浆胰岛素和胆囊收缩素浓度，表明二者可能参与亮氨酸调控胰腺淀粉酶的合成分泌过程。然而亮氨酸灌注水平较高时，胰腺α-淀粉酶合成速率受限，可能是由合成α-淀粉酶相关氨基酸不足引起的。

Yin等^[7]对饲喂低蛋白质饲粮的仔猪补饲亮氨酸，发现亮氨酸可显著促进机体蛋白质合成，但显著降低了血液缬氨酸、苏氨酸及丙氨酸等氨基酸浓度，其调控作用不能持久。相关试验也得到类似结果，且当继续灌注复合氨基酸后，亮氨酸对机体蛋白质合成的促进作用得以持续 。支链氨基酸(亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸)经支链氨基转氨酶作用可形成不同支链氨基酮酸，脱氢后进入三羧酸循环。然而，过量的亮氨酸可激活酮酸脱氢酶，后者催化缬氨酸和异亮氨酸脱羧反应，会大幅降低血浆中缬氨酸和异亮氨酸含量^[30]。另外，过量灌注 亮氨酸也会降低机体对其他氨基酸的吸收^{[11, 29]}。本试验中亮氨酸灌注水平较高时 ，α-淀粉酶合成速率(U/L)比低灌注 组有明显回落，究其原因可能是动物循环系统相关氨基酸含量降低，导致α-淀粉酶合成底物减少，合成速率受限。综上，提高奶牛小肠淀粉消化率还需从平衡氨基酸营养研究入手，完善奶牛小肠理想氨基酸模式^{[31, 32]}。

① 十二指肠灌注亮氨酸可通过刺激胰岛素和胆囊收缩素分泌调控奶牛胰腺α-淀粉酶的合成速率，二者存在剂量效应。

② 本试验条件下，促进奶牛胰腺α-淀粉酶合成速率的最佳亮氨酸灌注水平为29.5 μmol/(kg·h)。