从农业部长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站的毛皮动物生产基地随机选择健康后备种雄性水貂60只。

水貂目前没有统一的饲养标准，参照NRC(1982)^[11]水貂营养需要量配制繁殖期水貂基础饲粮，其组成及营养水平见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 膨化玉米 Extruded corn 48.36 黄花鱼 Corvina 16.49 鸡杂 Poultry offal 5.00 鸡蛋 Eggs 7.00 猪碎肉 Jarding pork 16.65 牛肝 OX-liver 5.00 食盐 NaCl 0.50 预混料 Premix1) 1.00 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels2) 代谢能 ME/(MJ/kg) 13.29 粗蛋白质 CP 36.53 粗脂肪 EE 16.67 钙 Ca 2.48 总磷 TP 1.28 锌 Zn/(mg/kg) 90.00 1)每千克预混料含有Contained the following per kg of premix：VA 1 000 000 IU，VD3 200 000 IU，VE 6 000 IU，VB1 600 mg，VB2 800 mg，VB6 300 mg，VB12 10 mg，VK3 100 mg，VC 40 000 mg，烟酸 niacin acid 4 000 mg，泛酸 pantothenic acid 1 200 mg，生物素 biotin 20 mg，叶酸 folic acid 80 mg，胆碱 choline 30 000 mg，Fe 8 200 mg，Mn 1 200 mg，Cu 50 mg，I 50 mg，Se 20 mg，Co 50 mg。 2)粗蛋白质、钙、总磷为测定值，其他为计算值。CP，Ca and TP were measured values, while others were calculated values.

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

将60只水貂随机分为5个组，每组12个重复，每个重复1只貂，各组间平均体重差异不显著 (P>0.05)。试验饲粮以一水硫酸锌(ZnSO₄·H₂O) 为锌源，Ⅰ组(对照组)饲喂基础饲粮，Ⅱ~Ⅴ组分别饲喂在基础饲粮中添加50、100、200、400 mg/kg锌(以锌元素计)的试验饲粮。另选用准备配种期雌性水貂150只，随机分成5组，分别为A、B、C、D、E组，配种时Ⅰ组雄性水貂配A组母貂，其他各组相应组别逐一对应。产仔时统计产仔母貂数，计算产仔率。预试期7 d，正试期120 d。

水貂均单笼(40 cm×40 cm×60 cm)饲养，每日07:30与15:30各饲喂1次，自由采食，自由饮水，每日记录实际采食量。试验从2011年11月26日至2012年3月25日在农业部长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站进行饲养试验。于2012年3月5日开始对水貂实施人工放对配种，采用“1+1+8”周期复配(即第1天初配、第2天连配、第9天复配)的配种方式。

正试期开始86 d后，每组挑选8只体重相近的水貂进行消化代谢试验，水貂消化代谢试验时间为2012年2月20日至2012年2月23日，共计4 d。采用全收粪法，消化代谢试验期间饲养管理与日常饲养管理完全相同。每天收集的尿液每100 mL中加入2 mL的10%硫酸溶液，加4滴甲苯用于防腐，保存于-20 ℃备用。每天收集的粪便称重后按鲜重的5%加入10%硫酸溶液，并加少量甲苯防腐，保存于-20 ℃备用。将4 d的尿液和粪便分别混合均匀后取样，其中粪样先在80 ℃下杀菌2 h，然后降到65 ℃烘干至恒重，磨碎过40目筛，制成风干样本，以备实验室分析。

样品分析：饲料及排泄物中的干物质含量测定采用103 ℃烘干法，参考GB/T 6435—2006^[12]；粗脂肪含量测定采用索氏浸提法，参考GB/T 6433—2006^[13]；粗蛋白质含量测定采用凯氏定氮法，参考GB/T 6432—1994^[14]。

干物质消化率(%)=[(干物质采食量-干物质排出量)/干物质采食量]×100；

蛋白质消化率(%)=[(蛋白质摄入量-蛋白质排出量)/蛋白质摄入量]×100；

脂肪消化率(%)=[(脂肪摄入量-脂肪排出量)/脂肪摄入量]×100；

氮沉积(g/d)=食入氮-粪氮-尿氮；

净蛋白质利用率(net protein utilization，NPU，%)=(氮沉积/食入氮)×100；

蛋白质生物学价值(biological value of protein，BV of protein，%)=[氮沉积/(食入氮-粪氮)]×100。

精液采集方法：用于配种的试验水貂在每次配种结束后0.5~1.0 h内，阴道采精1次。用滴管吸取少量生理盐水，在刚交配过的母貂阴道内(插入深度2～3 cm)轻轻取少量精液^{[15, 16, 17]}。

精子活力：在37 ℃环境下直线前进运动精子数占总精子数的百分率^[18]。取精液约25 μL置于载玻片上并加盖玻片，在37 ℃条件下，用显微镜(200～400倍)观察精子活力。

睾丸直径：卡尺测量2个睾丸合在一起的宽度。

结果以平均值±标准差表示，试验数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析，母貂产仔率采用Chi-square进行显著性检验，其他数据采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行差异显著性检验，其中P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。

由表2可见，Ⅰ组水貂精子活力极显著低于Ⅱ组和Ⅲ组(P<0.01)，显著低于Ⅴ组(P<0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组水貂精子活力差异不显著(P>0.05)；Ⅰ组水貂睾丸直径极显著小于Ⅱ组(P<0.01)，Ⅰ组水貂睾丸直径显著小于Ⅲ组(P<0.05)，Ⅴ组水貂睾丸直径显著小于Ⅱ组(P<0.05)；Ⅰ组公貂成功配种次数极显著小于Ⅲ组(P<0.01)，显著小于Ⅱ组和Ⅳ组(P<0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组公貂成功配种次数差异不显著(P>0.05)。母貂产仔率A组最低，B组最高，但是各组间差异不显著(P＞0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 饲粮锌添加水平对繁殖期雄性水貂繁殖性能的影响 Table 2 Effects of dietary zinc supplemental level on reproductive performance of reproducing male minks 项目 Items 组别 Groups Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 精子活力 Sperm motility 0.63±0.08Bb 0.81±0.14Aa 0.81±0.10Aa 0.72±0.12ABab 0.76±0.12ABa 睾丸直径 Testicular diameter/mm 21.52±2.62Bc 28.46±4.01Aa 26.40±4.83ABab 24.52±4.66ABabc 24.00±5.19ABbc 成功配种次数 Successful mating time 8.50±1.51Bb 10.40±1.90ABa 11.38±1.19Aa 10.50±1.72ABa 10.11±2.62ABab 母貂产仔率 Kidding rate of female minks/% 76.67 90.00 86.67 83.33 86.67 同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表2 饲粮锌添加水平对繁殖期雄性水貂繁殖性能的影响 Table 2 Effects of dietary zinc supplemental level on reproductive performance of reproducing male minks

由表3可见，各组之间水貂干物质采食量和脂肪消化率差异不显著(P>0.05)；Ⅲ组水貂干物质排出量显著高于Ⅰ组(P<0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组水貂干物质排出量差异不显著(P>0.05)；Ⅱ组水貂干物质消化率极显著高于Ⅴ组(P<0.01)，显著高于Ⅳ组(P<0.05)，Ⅲ组水貂干物质消化率显著高于Ⅴ组(P<0.05)；Ⅱ组和Ⅲ组水貂蛋白质消化率显著高于Ⅴ组(P<0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 饲粮锌添加水平对繁殖期雄性水貂干物质采食量、干物质消化率及营养物质消化率的影响 Table 3 Effects of dietary zinc supplemental level on DM intake, DM digestibility and nutrient digestibility of reproducing male minks 项目 Items 组别 Groups Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 干物质采食量 DM intake/g 78.78±25.64 91.76±17.92 108.99±22.92 96.92±28.84 94.45±31.69 干物质排出量 DM output/g 20.46±6.22b 22.81±3.37ab 30.76±6.15a 27.52±6.93ab 25.66±6.92ab 干物质消化率 DM digestibility/% 71.01±4.15ABabc 74.79±3.27Aa 73.32±2.44ABab 69.22±3.45ABbc 67.91±4.46Bc 蛋白质消化率 Protein digestibility/% 81.10±4.51ab 82.96±3.12a 82.70±4.17a 79.66±4.52ab 77.56±3.85b 脂肪消化率 Fat digestibility/% 82.08±3.64 84.30±3.46 84.07±1.78 85.09±1.80 82.77±3.53

表3 饲粮锌添加水平对繁殖期雄性水貂干物质采食量、干物质消化率及营养物质消化率的影响 Table 3 Effects of dietary zinc supplemental level on DM intake, DM digestibility and nutrient digestibility of reproducing male minks

由表4可见，各组之间食入氮、尿氮、氮沉积、净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值均差异不显著(P>0.05)；Ⅰ组水貂粪氮显著低于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05)，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组水貂粪氮差异不显著(P>0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 饲粮锌添加水平对繁殖期雄性水貂氮代谢的影响 Table 4 Effects of dietary zinc supplemental level on nitrogen metabolism of reproducing male minks 项目 Items 组别 Groups Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 食入氮 Nitrogen intake/(g/d) 6.18±2.02 6.61±1.93 7.91±2.67 7.61±2.26 6.44±3.26 粪氮 Fecal nitrogen/(g/d) 0.85±0.29b 1.00±0.16ab 1.19±0.25a 1.19±0.28a 0.89±0.25ab 尿氮 Urine nitrogen/(g/d) 4.15±1.15 5.02±1.76 5.44±0.55 5.31±2.00 4.18±1.89 氮沉积 Nitrogen deposition/(g/d) 1.18±1.77 0.59±0.73 1.27±1.75 1.11±0.56 1.38±1.47 净蛋白质利用率 NPU/% 23.11±23.79 8.65±10.00 10.82±24.63 15.09±9.45 9.95±8.99 蛋白质生物学价值 BV of protein/% 21.77±27.76 10.50±11.34 17.90±25.52 19.07±14.11 21.97±14.85

表4 饲粮锌添加水平对繁殖期雄性水貂氮代谢的影响 Table 4 Effects of dietary zinc supplemental level on nitrogen metabolism of reproducing male minks

锌是精子形成所必需的一种微量元素。刘惠芳^[19]报道，锌直接参与精子的生成、成熟、激活和获能过程，并能够延缓精子膜的脂质氧化、维持细胞膜结构的渗透性和稳定性，从而使精子保持良好的活力。Dissanayake等^[20]研究表明，锌与精液品质有关，精浆中锌的浓度显著影响精子密度、精子活力。Bjorndahl等^[21]研究表明，锌能通过抑制降解酶的活性来保护精子中脱氧核糖核酸免遭破坏，从而提高精液品质的稳定性。Yamaguchi等^[22]报道，锌是一种维护生殖细胞、促进精子形成、提高精子活力必需的微量元素。雄性动物缺锌时，生殖道内各种酶的活性降低，性激素分泌不足，引起生殖器官发育受阻、睾丸变小、支持细胞和间质细胞萎缩、性成熟时间延迟、第二性征不明显等^{[23, 24, 25]}。本试验结果表明，种公貂的饲粮中添加50和100 mg/kg锌精子活力与对照组相比有显著提高，当饲粮中添加200和400 mg/kg锌时对水貂精子活力没有显著的影响。王宏辉等^[26]研究表明，后备公猪的饲粮中添加120 mg/kg的锌，睾丸的长和宽与对照组相比可分别增加4和2 cm。Venge^[27]报道，水貂刚出生时睾丸的重量平均为0.004 g，到11月份增加至0.335 g。Onstad^[16]报道，从出生到11月份，睾丸的绝对重量增加相当缓慢，然后重量迅速增加，2月中旬时达到5 g以上。Heron等^[28]研究结果表明，繁殖期“小睾丸组”(两睾丸合在一起宽度平均为24.4 mm)和“大睾丸组”(32.4 mm)雄性水貂所配的母貂繁殖结果相比较，“小睾丸组”所配母貂不孕率(12.9%)明显高于“大睾丸组”(3.3%)。另据李忠宽等^[29]报道，在公貂2睾丸的重量低于2.0 g不能产生精子，精液品质好的公貂其睾丸较重，其范围在2.07～6.50 g。按Heron等^[28]提供的测量睾丸的方法，给每只公貂注射0.2 mL氯胺酮麻醉剂进行保定，但不使其完全麻醉，用卡尺测量2个睾丸合在一起的宽度。本试验结果显示，种公貂的饲粮中添加50和100 mg/kg的锌，睾丸的宽度与对照组相比可分别增加6.94和4.88 mm，表明饲粮中添加锌可以显著增加睾丸体积，进而降低所配种母貂的不受孕率。锌是促性腺激素和睾丸酮分泌不可缺少的物质，锌不足可影响促性腺激素的分泌，并能影响睾丸酮及其运输载体蛋白的合成。锌是黄体生成素(LH)与睾丸内受体结合的辅助因子，缺锌时受体的亲和力降低^[30]。Martin等^[31]的研究发现，缺锌动物的睾丸对LH的反应性较低，睾丸的锌浓度及睾酮水平均低于其他组。动物长时间锌缺乏可使血清睾酮及LH水平均明显降低。绪广林等^[32]的研究发现，缺锌组大鼠的血清睾酮水平明显低于锌含量正常组，对缺锌大鼠补锌后发现血清睾酮水平明显上升。锌还可升高血浆睾酮和二氢睾酮水平，低剂量锌摄入组前列腺组织中锌的水平降低，血清睾酮水平下降^[33]。谭中荣等^[34]的研究发现，血清睾酮水平与精液锌水平之间有密切相关，睾酮水平低下组的精液锌水平明显低于正常组。李忠宽等^[29]用性欲检测法评价公貂的繁殖性能，这种方法是根据整个配种期每只公貂成功交配的次数来估测公貂的性欲，其交配次数在10次或10次以上的为性欲强，在10次以下的为性欲弱。这些性欲弱的公貂是使很多母貂在繁殖期只得到1次交配的原因之一，因此直接影响母貂的胎产仔数。本试验中，饲粮锌添加水平为50～100 mg/kg时，公貂的精子活力、睾丸直径、成功配种次数较好。母貂产仔率没有受公貂饲粮锌添加水平的显著影响，但呈现出随着公貂饲粮锌添加水平的升高而先增加后降低的趋势。

NRC(1982)^[11]的营养标准中指出，水貂的采食量主要由食物的适口性和饲粮能量水平决定，并推荐锌的添加量为60 mg/kg。本试验饲粮能量水平基本一致，消除了由于能量水平对采食量的影响。本研究结果表明，饲粮锌添加水平对水貂采食量影响不显著，说明试验中各组试验饲粮适口性较好，消除了饲粮适口性造成的差异。Rossil等^[35]研究表明，饲粮锌水平对肉鸡采食量，饲料转化率影响不显著。蒋宗勇等^[36]在研究1～21日龄黄羽肉鸡锌需要量的研究中发现，添加80~120 mg/kg锌显著提高了平均日采食量。马七军等^[37]研究表明，补锌可以显著改善奶山羊对饲料干物质的消化率。任二军等^[38]在研究不同锌水平对育成期水貂的采食量和干物质消化率的影响中发现，饲粮锌水平对水貂采食量影响不显著，与本试验结果一致。饲粮锌水平对采食量的影响是否受试验动物的影响尚待进一步研究。任二军等^[38]报道，饲粮有机锌(蛋氨酸螯合锌)水平为75 mg/kg时育成期水貂的干物质消化率显著低于饲粮无机锌(ZnSO₄·7H₂O)水平为60 mg/kg时。本试验所用锌源为无机锌，饲粮锌添加水平为50~100 mg/kg时干物质消化率显著高于其他组，当饲粮锌添加水平超过100 mg/kg时，干物质消化率显著降低。本试验与任二军等^[38]的试验结果不同，是否是由不同锌源的生物学效价不同导致，更高锌添加水平对干物质消化率效果如何等问题尚待进一步研究证实。

任二军等^[38]和王淑明等^[39]在研究不同锌添加水平对水貂的营养物质消化率的影响中，发现饲粮锌的添加并没有对蛋白质和脂肪的消化率产生显著影响，这均与本试验结果基本一致。试验动物所处的时期及饲料原料在一定程度上都会影响蛋白质的表观消化率。此外，内源性氮(包括脱落的肠道细胞、肠道及胰腺消化酶)是粪氮的组成部分，在一定程度上也会影响蛋白质的表观消化率。饲粮锌添加水平是否对水貂的营养物质消化率有影响尚待进一步研究。

本试验结果表明，各组之间水貂的食入氮、尿氮、氮沉积、净蛋白质利用率、蛋白质生物学效价并无显著差异。通过氮平衡试验法所获得的净蛋白质利用率和蛋白质生物学价值指标比较客观地反映了饲料蛋白质转化为畜产品蛋白质的利用情况。索宝^[40]在内蒙古白绒山羊羯羊锌需要量的研究中，发现不同锌水平对绒山羊氮代谢没有影响，与本试验结果一致。Kerr等^[41]研究指出，随着摄入蛋白质的提高，尿氮也增加。本试验各组间繁殖期公貂的饲粮蛋白水平一致，摄入蛋白质随着饲粮锌添加水平的增加呈先增加后降低的趋势，食入氮的变化主要是由于采食量的不同所致。尿氮也随着饲粮锌添加水平的增加呈先增加后降低的趋势，但是各组尿氮差异不显著，这与Kerr等^[41]的研究结果相符合。Newell^[42]在研究水貂营养时指出，水貂约有80%的氮是通过尿液排出的。吴学壮等^[43]在研究铜对水貂生产性能和氮代谢的影响时指出，水貂尿氮排出量接近食入氮量的43%，水貂的净蛋白质利用率为25%，蛋白质生物学价值为40%。本试验中，各组水貂的尿氮排出量接近食入氮量的67%～75%，水貂的净蛋白质利用率为15%，蛋白质生物学价值为20%。这可能与水貂的饲粮组成有很大关系，吴学壮等^[43]在研究中采用的是干粉料，本试验中采用的是新鲜饲料，但是膨化玉米含量较多。动物维持自身需要一般只有当糖类代谢发生障碍时才由脂肪和蛋白质来供能，当糖类和脂肪摄入量都不足时，蛋白质的分解才会增加，尿氮排出量随蛋白质的分解增加而增加，净蛋白质利用率和蛋白质生物学价值相应降低；当糖类和脂肪摄入量充足时，净蛋白质利用率和蛋白质生物学价值相应提高。