2. 山西省生态畜牧产业管理站, 太原 030001;
3. 山西省忻州市畜禽繁育工作站, 忻州 034000
2. Shanxi Province Ecology and Livestock Industry Management Station, Taiyuan 030001, China;
3. Livestock and Poultry Breeding Workstation of Xinzhou City in Shanxi Province, Xinzhou 034000, China
我国有着极其丰富的秸秆资源，根据2010年我国农业部《全国农作物秸秆资源调查与评价报告》报道，全国农作物秸秆资源量为8.20亿t(以风干样计，含水量为15％)，其中玉米秸秆为2.65亿t[1]，玉米秸秆的利用现状处于传统利用模式向现代利用模式的转变阶段，只有30%左右的玉米秸秆得到有效利用。秸秆资源的不合理利用造成巨大的资源浪费，还引起了严重的环境污染[2]。因此，如何提高秸秆利用成为研究的热点。玉米秸秆消化能低、粗蛋白质含量低、粗纤维含量高，这是秸秆作为动物饲料的瓶颈问题。针对生产中粗饲料质量低劣、饲料消化率低、氮磷排放高且严重制约肉牛生产水平的现状，目前常用膨化、碱化、氨化、发酵等方法对玉米秸秆进行处理[3]。这些处理操作相对复杂，周期相对较长[4]，因此，生物发酵技术(如酶处理等)以及瘤胃厌氧真菌纤维素酶的开发利用[5]成为热点中的焦点。目前，研究表明在饲粮中直接饲喂或添加纤维素酶能提高牛采食量[6]、改善瘤胃发酵类型[7]和提高生产性能[8, 9]。但是纤维素酶受温度、pH、酶用量和底物浓度的影响，直接添加或饲喂很难控制这些条件[10]，同时还易受瘤胃微生物发酵和瘤胃排空等生理活动的影响。因此，本试验采取用纤维分解酶处理玉米秸秆后再饲喂肉牛，以获得饲料质量控制和品质改进技术及低碳饲料加工调制模式；通过研究纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛瘤胃发酵、养分消化代谢以及氮、磷、甲烷排放和血清生化指标的影响，旨在探讨纤维分解酶处理玉米秸秆的最适添加量，以期为肉牛生产提供理论依据和技术指导。
收获果穗后将玉米秸秆从离地5 cm处收割，用切割机切成2～3 cm长备用。选择4个窖，在装窖前，将其打扫干净，窖底铺一层塑料薄膜，逐层填充15～20 cm厚的玉米秸秆段，并逐层喷洒提前配制好的占秸秆重量0、0.5%、1.0%和1.5%的纤维分解酶(FibrozymeTM，纤维素酶和木聚糖酶活性分别为31.0和43.4 U/g)悬浮液，踩实后继续填充，水分控制在45%左右。如此直到装满并高出窖口70 cm，在上面盖塑料布薄膜压实。在室温(20～25 ℃)下发酵15 d。
选用12月龄左右、体况良好、体重近似的西门塔尔牛36头，随机分为4组，每组9头牛。对照组饲喂基础饲粮(混合精料+玉米秸秆；精粗比45∶ 55)，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别以0.5%、1.0%和1.5%的纤维分解酶处理玉米秸秆替代基础饲粮中的玉米秸秆。饲养试验预试期10 d，正试期60 d。饲养试验结束后每组随机抽取3头牛进行为期10 d的消化代谢试验。试验于2012年8月至2012年10月在山西省五台县佛贤畜牧有限公司肉牛场进行。
试验饲粮按照《肉牛营养需要和饲养标准》[11]配制，其组成及营养水平见表1。饲粮的精粗比为45∶ 55。试验牛单槽饲养，精粗混合饲喂，每日07：00和19：00饲喂。自由采食，自由饮水。
 | 表1 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础)
Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %
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饲养试验期间逐日详细记录采食量和剩草料量，每天按比例采集精料与玉米秸秆样品，测定初水分后保存备用。在饲养试验开始和结束(第60天)时，于早晨饲喂前颈静脉采血。用含肝素钠的10 mL真空采血管采集血样。采集血样后将采血管置于冰块上送到兽医室，于4 ℃、1 000×g离心15 min分离血清，-20 ℃冷冻保存。
消化代谢试验期间逐日收集每头牛的尿样、粪样。用量筒测量体积并记录排尿量，尿样按尿量2%比例采集，低温保存，每期试验结束后混合均匀。粪样分别放置到带盖的塑料桶中，于每日07：00称量并记录日排泄粪量，然后按2%比例采集粪样2份，其中1份鲜粪定氮，另1份于65～70 ℃测定初水后制成风干样品，试验结束后混合均匀。同时消化代谢试验期间采用呼吸面具采气装置[12]进行气体采集。每天采气4次，06:00(代表饲前1 h)、12:00(代表日间休息状态)、20:00(代表饲后1 h)和24:00(代表夜间休息)，每次采集10 min[13]。根据4个时间点气体产量计算单位时间平均产气量，再计算24 h量。消化代谢试验期的最后2 d，在饲喂前(07：00)及采食后3、6、9 h采用负压装置，利用胃管采集瘤胃液200 mL，用4层纱布过滤，立即用Startorius Basic pH Meter PB-20型酸度计测定pH，1 000×g离心10 min后取上清液，在-40 ℃冷冻保存。
采用氧化镁直接蒸馏法测定氨态氮浓度[14]。取瘤胃液1 mL，加入0.2 mL 25%偏磷酸溶液，混合均匀，冰水浴中放置30 min后于2 797×g离心10 min，然后取上清液，用GC102AF气相色谱仪测定总挥发性脂肪酸浓度以及各组分浓度。色谱柱为φ4 mm×2 m玻璃柱，固定相PEG-20M，涂布浓度为3%，载体为Chromsorb WAW DMCS；色谱柱温160 ℃，汽化室温度200 ℃；空气压力0.12 MPa，氢气压力0.06 MPa，氮气压力0.08 MPa；氮气(载气)流速30 mL/min，氢气流速60 mL/min，空气流速360 mL/min；灵敏度10-10，衰减16；进样量1 μL。瘤胃液乳酸浓度采用酶法测定，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，操作严格按试剂盒说明书进行。
采用试验室常规方法[15, 16]测定饲粮及粪样中初水分、干物质、有机物、粗蛋白质、粗脂肪、粗纤维、磷、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量并计算无氮浸出物含量。养分消化率计算公式为：
饲粮某养分消化率(%)=100×(食入饲粮中某养分-粪中某养分)/食入饲粮中某养分。食入氮、粪氮、尿氮用半微量凯氏定氮法测定；可消化氮和沉积氮计算公式为：
可消化氮=食入氮-粪氮； 沉积氮=食入氮-粪氮-尿氮。甲烷浓度利用GC-2010气相色谱仪进行分析，检测器为离子火焰化检测器(FID)；色谱柱为φ3 mm×2 m的5分子筛色谱柱；工作柱温90 ℃，进样口温度100 ℃，检测器工作温度150 ℃，载气为高纯氮气，流速23 mL/min；氢气流速40 mL/min，空气流速400 mL/min；进样量1 mL。
饲粮、粪样、尿样中能值采用XYR-1C微机氧弹式热量计测定[17]。二氧化碳和氧气浓度采用1906型工业气体分析仪进行测定，用以计算产热量。各能量计算公式为：
采食总能=采食量×饲粮能； 粪能=粪量×粪能； 尿能=尿量×尿能； 消化能=食入能-粪能； 甲烷能=0.039 6×甲烷； 代谢能=食入能-粪能-尿能-甲烷能； 产热量＝16.18×氧气+ 5.02×二氧化碳-2.17×甲烷-5.99×尿氮[18]； 沉积能=食入能-粪能-尿能-甲烷能-产热量。血清甘油三酯、葡萄糖、总胆固醇、白蛋白、总蛋白和尿素氮的浓度及谷草转氨酶、碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶的活性采用比色法测定，所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
试验数据应用SPSS 17.0统计分析软件的one-way ANOVA进行方差分析和LSD多重比较。
由表2可见，与对照组相比，试验Ⅰ组玉米秸秆、混合精料及总采食量无显著差异(P>0.05)，试验Ⅲ组显著高于试验Ⅰ组和对照组(P<0.05)。
由表3可见，试验各组之间瘤胃液pH和乙酸浓度差异不显著(P>0.05)；试验Ⅱ和Ⅲ组总挥发性脂肪酸、丙酸、丁酸和氨态氮浓度均显著高于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05)；试验Ⅱ和Ⅲ组乙酸/丙酸和乳酸浓度显著低于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05)。
| 表2 纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛干物质采食量的影响 Table 2 Effects of corn straw fermented by cellulase on dry matter intake in beef cattle kg/d |
| 表3 纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛瘤胃发酵的影响 Table 3 Effects of corn straw fermented by cellulase on ruminal fermentation in beef cattle |
由表4可见，试验Ⅱ和Ⅲ组干物质、有机物、粗蛋白质、粗脂肪、无氮浸出物、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维消化率均显著高于对照组(P<0.05)，但与试验Ⅰ组差异不显著(P>0.05)。
由表5可见，试验各组间采食总能、粪能和尿能以及产热量差异均不显著(P>0.05)；试验Ⅱ组消化能显著高于对照组(P<0.05)，但与试验Ⅰ和Ⅲ组差异不显著(P>0.05)；试验Ⅱ与Ⅲ组甲烷能显著低于对照组与试验Ⅰ组(P<0.05)；试验Ⅱ组代谢能、沉积能以及沉积能/消化能均显著高于对照组(P<0.05)，但与试验Ⅰ和Ⅲ组差异不显著(P>0.05)。
由表6可见，试验各组之间粪氮和尿氮差异不显著(P>0.05)；试验Ⅱ与Ⅲ组食入氮、可消化氮和沉积氮均显著高于对照组与试验Ⅰ组(P<0.05)。
| 表4 纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛饲粮养分消化率的影响 Table 4 Effects of corn straw fermented by cellulase on nutrient digestibility of diets in beef cattle % |
| 表5 纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛饲粮能量平衡的影响
Table 5 Effects of corn straw fermented by cellulase on energy balance of diets in beef cattle
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| 表6 纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛饲粮氮平衡的影响
Table 6 Effects of corn straw fermented by cellulase on nitrogen balance of diets in beef cattle g/d
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由表7可见，试验Ⅱ与Ⅲ组氮排泄/食入氮、磷排泄/食入磷和甲烷排放量均显著低于对照组和试验Ⅰ组(P<0.05)。
由表8可见，试验开始时，试验各组间各项血清生化指标差异均不显著(P>0.05)。试验结束时，试验Ⅱ和Ⅲ组血清甘油三酯、葡萄糖、白蛋白浓度和谷草转氨酶活性均显著高于对照组与试验Ⅰ组(P<0.05)，试验各组间血清总胆固醇、尿素氮浓度以及碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶活性差异不显著(P>0.05)。
| 表7 纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛氮、磷和甲烷排放的影响
Table 7 Effects of corn straw fermented by cellulase on emissions of nitrogen, phosphorus and methane in beef cattle
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| 表8 纤维分解酶处理玉米秸秆对肉牛血清生化指标的影响
Table 8 Effects of corn straw fermented by cellulase on serum biochemical parameters in beef cattle
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经过纤维分解酶的处理，饲粮中纤维素含量降低，葡萄糖、寡糖含量增加，同时粗蛋白质含量增加，这样饲粮营养价值提高，适口性提高，故试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的采食量都比对照组高，其中试验Ⅲ组显著高于对照组，这在肉牛育肥中发挥着重要的作用。
纤维分解酶处理后饲粮的粗蛋白质含量增加，中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量降低，瘤胃微生物对其利用情况和发酵产物也随之改变[19]。Nadeau等[20]研究纤维分解酶、菌剂、甲酸处理果园草和苜蓿后饲喂羔羊对采食量和消化率的影响，发现经纤维分解酶处理的饲草饲喂后羊瘤胃pH和乙酸浓度显著降低，乳酸浓度升高，但是本试验中乙酸浓度、pH无显著变化，可能是由于饲粮营养成分不同和采集瘤胃液方法不同所致。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的总挥发性脂肪酸、丙酸、丁酸、氨态氮浓度提高是由于外源纤维酶的作用使瘤胃中碳水化合物的消化得到了提高。乙酸浓度各组之间差异不显著，可能与瘤胃微生物利用短链脂肪酸活动加强有关。有研究表明，玉米青贮使用纤维素复合酶后，氨态氮浓度降低[21]，而本试验中氨态氮浓度升高，可能是酶添加量和底物的不同使得瘤胃微生物发酵和利用过程达到的平衡点不同所致。
一般来说，瘤胃内微生物会产生酶消化粗饲料，外源酶的添加不仅不会破坏或抑制内源酶，还能帮助和促进动物的消化吸收[22]。体外消化试验证明，用纤维分解酶处理饲料作物使得干物质消化率、有机物含量及消化率都显著提高[23]，中性洗涤纤维消化率提高[24]，这与研究中试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组养分消化率都不同程度提高的结果一致。添加纤维分解酶后，除了直接降解纤维素促进其分解低分子质量化合物外，还可与其他酶共同作用以提高反刍动物对饲料的分解和消化。
本试验中，对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间的采食总能、粪能、尿能、产热量差异不显著，据此可知每组牛的基础代谢活动差异不大。外源酶的添加使得饲粮的营养成分提高，牛对饲粮的消化率都有所提高，所以试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组消化能、代谢能、沉积能、沉积能/消化能提高，与之前的报道[8]一致，瘤胃发酵情况的改善使得甲烷排放量减少，所以甲烷能减少。
本试验中，对照组、试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间的粪氮、尿氮差异不显著，说明肉牛的基础代谢情况基本一致。纤维分解酶的添加使得牛瘤胃发酵活动加强，瘤胃内氨态氮、挥发性脂肪酸浓度升高，这刺激瘤胃微生物的增殖，同时瘤胃微生物利用瘤胃发酵产物氨基酸、氨态氮、挥发性脂肪酸等原料合成微生物蛋白质，因此，沉积氮可以间接反映瘤胃的发酵效果、瘤胃中细菌(包括纤维菌)的数量和活性，这是纤维酶能够提高反刍动物生产性能的一个重要原因。
有研究表明，纤维分解酶的添加使得氮排泄/食入氮、磷排泄/食入磷降低[23]，这与本试验结果一致，说明添加纤维分解酶后，氮、磷的生物利用率提高，这不但提高饲粮的消化率，而且也提供了减轻畜牧业对环境污染的良策。消化道发酵是反刍动物甲烷的最大生物来源[25]，而甲烷排放量受很多因素的影响，如饲喂方式、饲粮精料水平、动物的采食量、碳水化合物类型以及某些添加剂[26]。对牛来说，甲烷的产生会造成很大的能量损失量，约占进食总能的6%[27]或消化能的12%[28]，目前有很多方法可减少甲烷排放，如粉碎饲料、添加不饱和脂肪酸、添加离子载体、粪便处理等，其中在实际生产中降低每头牛的甲烷排放量是更为积极的措施[29]。有体外研究报道，饲草添加纤维素酶温育24 h后甲烷排放量无显著变化[30]，与本试验结果不一致，可能由于处理时间的不同造成的。在试验中甲烷排放量较之前的研究[31, 32, 33]多，可能是由于精粗比的差异、碳水化合物类型不同、季节有别等造成的。
正常情况下，在神经-体液-免疫系统的调控下，机体达到稳态，此时其理化特性及其组成成分的数量和性质处于相对恒定状态，即各项指标在一个适宜的范围内波动，这将为细胞提供适宜的生存环境，也是维持生命的必要条件。而本试验所得数据均在参考数据范围内[34]，说明纤维分解酶的处理是正效应。甘油三酯和总胆固醇浓度的增减可作为脂类代谢和肝功能指标，葡萄糖、白蛋白和总蛋白浓度的增减作为糖和蛋白质代谢的指标，本试验中，添加纤维分解酶后，甘油三酯和总胆固醇浓度增加，这表明纤维分解酶的添加提高了脂类代谢水平；葡萄糖、白蛋白和总蛋白浓度增加，说明纤维分解酶的添加提高了饲粮糖和蛋白质代谢水平，这与养分消化率测定结果一致。尿素氮浓度差异不显著，说明机体氮存留没有明显的变化。转氨酶是一个很重要的指标，在正常范围内其变化可反映氨基酸代谢的变化，超出正常范围表明肝脏和心脏可能有所损伤[35]，本试验中谷草转氨酶活性升高，但均在正常范围内，说明纤维分解酶的处理使得氨基酸代谢作用增强。血清碱性磷酸酶是动物机体重要的酶，其活性不仅反映动物体内成骨细胞活性及骨生成状况，同时也反映钙、磷代谢情况；碱性磷酸酶活性增高表明软骨细胞的分化能力增强[36]，本试验结果表明，各组间碱性磷酸酶活性没有显著差异，对钙、磷代谢无不良影响。当少量组织坏死时，乳酸脱氢酶即释放入血，而使其在血液中的活性升高，本试验中各组间乳酸脱氢酶活性差异不显著，说明纤维分解酶的处理是正效应。
综合以上各项指标，当处理玉米秸秆的纤维分解酶添加量为1.0%时，瘤胃发酵得到显著改善，饲粮养分消化率显著提高，能量及氮利用率提高，氮、磷和甲烷排放降低。
| [1] | 全国农作物秸秆资源调查与评价报告.北京:农业部科技教育司,2010[J]. ( 1)
|
| [2] | 史海涛,杨军香,田雨佳,等.玉米秸秆营养价值的开发利用——未充分开发利用的廉价资源[J]. 中国奶牛,2012(17):3-11. (1)
|
| [3] | 陈玉香,陈静,佟金,等.提高玉米秸秆饲用价值方法的研究进展[J]. 农机化研究,2012,34(1):7-13. (1)
|
| [4] | 庄乾明.秸秆青贮、氨化、微生物发酵3种方法的比较及其相关性的研究[J]. 草食家畜,1999(1):40-41. (1)
|
| [5] | 周烈,周燕,安培培,等.瘤胃厌氧真菌纤维素酶的研究与开发进展[J]. 动物营养学报,2010,22(3):536-543. (1)
|
| [6] | KNOWLTON K F,MCKINNEY J M,COBB C.Effect of a direct-fed fibrolytic enzyme formulation on nutrient intake,partitioning,and excretion in early and late lactation Holstein cows[J]. Journal of Animal Science,2002,85:3328-3335. (1)
|
| [7] | GIRALDO L A,TEJIDO M L,RANILLA M J,et al.Influence of direct-fed exogenous fibrolytic enzymes on ruminal fibrolytic activity in sheep[J]. Options Mediterranéennes,2009,85:297-302. (1)
|
| [8] | ATRIAN P,AGHDAM SHAHRYAR H.Effects of fibrolytic enzyme treated alfalfa on performance in Holstein beef cattle[J]. European Journal of Experimental Biology,2012,2(1):270-273. (2)
|
| [9] | KUNG L,Jr,COHEN M A,RODE L M,et al.The effect of fibrolytic enzymes sprayed onto forages and fed in a total mixed ratio to lactating dairy cows[J]. Journal of Dairy Science,2002,85(9):2396-2402. (1)
|
| [10] | 张鹤,佟心洁,庞春生,等.纤维素酶酶解玉米秸秆新型蒸煮浆的工艺研究[J]. 现代食品科技,2012,28(2):182-186. (1)
|
| [11] | 冯仰廉.肉牛营养需要和饲养标准[M]. 北京:中国农业大学出版社,2000:19-26. (1)
|
| [12] | 郭城.家畜能量代谢试验采气装置的研制[J]. 中国人民解放军兽医大学学报,1982,2(2):192-198. (1)
|
| [13] | 郭城.家畜气体能量代谢试验采气方法的研究[J]. 中国畜牧杂志,1984,20(3):7-9. (1)
|
| [14] | 杨胜.饲料分析及饲料质量检测技术[M]. 北京:北京农业大学出版社,1993:16-35. (1)
|
| [15] | 杨凤.动物营养学[M]. 2版.北京:中国农业出版社,2000. (1)
|
| [16] | VAN SOEST P J,ROBERTSON J B,LEWIS B A.Methods for dietary fiber,neutral detergent fiber,and non-starch polysacharides in relation to animal nutrition[J]. Journal of Dairy Science,1991,74(6):3583-3597. (1)
|
| [17] | 袁缨.动物营养学试验教程[M]. 北京:中国农业大学出版社,2006. (1)
|
| [18] | 王成杰,汪诗平,周禾.放牧家畜甲烷气体排放量测定方法研究进展[J]. 草业学报,2006,15(1):113-116. (1)
|
| [19] | FON F N,NSAHLAI I V.Seasonality of fibrolytic enzyme activity in herbivore microbial ecosystems[J]. African Journal of Biotechnology,2012,11(67):13123-13130. (1)
|
| [20] | NADEAU E M,RUSSELL J R,BUXTON D R.Intake,digestibility,and composition of orchardgrass and alfalfa silages treated with cellulase,inoculant,and formic acid fed to lambs[J]. Journal of Animal Science,2000,78:2980-2989. (1)
|
| [21] | 陈鑫珠,张文昌,张建国,等.纤维素酶对象草玉米秸秆混合青贮品质的影响[J]. 家畜生态学报,2011,32(6):46-50. (1)
|
| [22] | VAN DE VYVER W F J,USENI B A.Digestion and microbial protein synthesis in sheep as affected by exogenous fibrolytic enzymes[J]. South African Journal of Animal Science,2012,42(1):488-492. (1)
|
| [23] | KNOWLTON K F,TAYLOR M S,HILL S R,et al.Manure nutrient excretion by lactating cows fed exogenous phytase and cellulase[J]. Journal of Dairy Science,2007,90:4356-4360. (2)
|
| [24] | BERNARD J K,CASTRO J J,MULLIS N A,et al.Effect of feeding alfalfa hay or Tifton 85 bermudagrass haylage with or without a cellulase enzyme on performance of Holstein cows[J]. Journal of Dairy Science,2010,93:5280-5285. (1)
|
| [25] | KEBREAB E,JOHNSON K A,ARCHIBEQUE S L,et al.Model for estimating enteric methane emissions from United States dairy and feedlot cattle[J]. Journal of Animal Science,2008,86(10):2738-2748. (1)
|
| [26] | 赵一广,刁其玉,邓凯东,等.反刍动物甲烷排放的测定及调控技术研究进展[J]. 动物营养学报,2011,23(5):726-734. (1)
|
| [27] | JOHNSON K A,JOHNSON D E.Methane emissions from cattle[J]. Journal of Animal Science,1995,73(8):2483-2492. (1)
|
| [28] | 冯仰廉.反刍动物营养学[M]. 北京:科学出版社,2004. (1)
|
| [29] | 冯仰廉,李胜利,赵广永,等.牛甲烷排放量的估测[J]. 动物营养学报,2012,24(1):1-7. (1)
|
| [30] | GIRALDO L A,CARRO M D,RANILLA M J,et al.Influence of fibrolytic enzymes on in vitro methane production and rumen fermentation of a substrate containing 60% of grass hay[J]. Livestock Research for Rural Development,2007,19(12):257-261. (1)
|
| [31] | LOVETT D K,STACK L J,LOVELL S,et al.Manipulating enteric methane emissions and animal performance of late-lactation dairy cows through concentrate supplementation at pasture[J]. Journal of Dairy Science,2005,88(8):2836-2842. (1)
|
| [32] | ECKARD R J,GRAINGER C,DE KLEIN C A M.Options for the abatement of methane and nitrous oxide from ruminant production:a review[J]. Livestock Science,2010,130(1/2/3):47-56. (1)
|
| [33] | 孙斌,龚飞飞,邵伟,等.新疆不同季节荷斯坦干乳牛与泌乳牛甲烷24小时排放及排放量变化的研究[J]. 中国奶牛,2013(3):28-31. (1)
|
| [34] | 王俊东.兽医药实验室检验技术[M]. 北京:中国农业科学技术出版社,2005. (1)
|
| [35] | 汪水平,王文娟,左福元,等.中药复方对山羊的影响:Ⅲ瘤胃纤维降解酶及血清酶活性[J]. 中国畜牧杂志,2012,48(21):56-60. (1)
|
| [36] | TETLOW L C,WOOLLEY D E.Histamine stimulates the proliferation of human articular chondrocytes in vitro and is expressed by chondrocytes in osteoarthritic cartilage[J]. Annals of the Rheumatic Diseases,2003,62(10):991-994. (1)
|