2. 福建农林大学动物科学学院, 福州 350002
2. College of Animal Sciences, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China
丁氨丙磷的化学名称为(1-丁氨基-1-甲基)乙磷酸，其分子结构式见图1，是一种无味的白色晶体粉末状、易溶于水的有机磷酸化合物。丁氨丙磷是一种新型代谢促进剂和免疫增强剂，它具有提高机体代谢功能、促进饲料转化率和增重、提高抗应激能力和机体免疫力的功能。丁氨丙磷有很强的抗氧化作用，即使在很低浓度下也能有效地抑制脂肪的自身氧化[1]，参与机体的中间代谢过程，加强能量代谢，加快蛋白质合成和促进动物生长以及在应激状况下能稳定各项生理生化指标[2]。丁氨丙磷可用于寄生虫病、细菌和病毒性疾病及其他慢性消耗性疾病的辅助治疗，能加快病情的好转，缩短康复时间。其副作用少，口服注射均可，是一种极具开发前景的药物。
近些年来，随着我国养禽业的不断发展，阻碍养禽业发展的因素也日益突出[3]。其中，夏季高温引起的热应激，导致家禽的免疫功能下降，引发一系列疾病，严重影响养禽业的发展[4]。因此，研究如何提高鸡群抗应激能力、免疫力和生长性能，显得尤为重要。2000年以来，丁氨丙磷在猪场和经济动物中的应用报道的文章时有发表，但在家禽上的应用报道甚少。为此，本试验分别用0.9%的生理盐水、10%的国产丁氨丙磷溶液和拜耳的科特壮(Catosal ，德国拜耳公司生产，主要成分为丁氨丙磷)溶液对随机分配的3组黄羽公肉雏进行注射，通过观察生长性能和免疫机能比较国产和进口的丁氨丙磷的效果，为今后在家禽上广泛应用提供准确、可靠的科学依据。
 | 图1 丁氨丙磷的分子结构式
Fig.1 Molecular formula of butafosfan |
1日龄黄羽肉雏鸡180羽，来源于三明永安金圣农牧有限公司，随机分为3组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组)，每组6个重复，每个重复10羽。Ⅰ组为对照组，肌肉 注射生理盐水，Ⅱ组肌肉注射国产丁氨丙磷溶液， Ⅲ组肌肉注射进口丁氨丙磷溶液。分3次注射，第1次于1日龄注射0.2 mL/羽，第2次于21日龄注射0.5 mL/羽，第3次于49日龄注射1.0 mL/羽。试验期56 d。
10%国产丁氨丙磷溶液：由山东六和药业有限公司提供(20081108)。
10%进口丁氨丙磷溶液： Catosal ，由四川拜耳动物保健有限公司提供(KP05B850/062008)。
白细胞介素2(IL-2)和白细胞介素6(IL-6)试剂盒：购于北京英华生物技术研究所(生产批号20090825)。
试验鸡采用单层式笼养，进雏前所有用具和地面进行清扫，然后放入鸡舍，用福尔马林和高锰酸钾密闭熏蒸消毒。饲养管理参照文献[5]执行。初始舍内温度为33 ℃，之后每周降低2～3 ℃，直至4周末为21～22 ℃时保持不变。光照逐渐减弱，从初始的每天23 h，逐渐减少至自然光照，保持良好的通风，自由饮水和采食，不同阶段喂饲相应的全价料。按照常规免疫程序(表1)进行免疫。
 | 表1 肉仔鸡免疫程序 Table 1 Immune program of broilers |
称量试验前每组动物的初始体重和试验结束时每组动物的期末体重，同时记录各组每天的耗料量，计算平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)、平均日增重(average daily gain，ADG)及料重比(feed/gain，F/G)；观察并计算试验期间的发病率(incidence，IN)和死亡率(mortality rate，MR)。
于56日龄，从各试验组中分别随机挑选12羽，称重，处死，解剖，取脾脏、胸腺和法氏囊，称重。器官指数=器官重量(mg)/体重(g)。
于28日龄和56日龄，从各组中分别随机挑选12羽，翅下采血，分离血清。用间接血凝法测定血清中新城疫和H5亚型禽流感抗体水平。用放射性免疫技术测定血清中IL-2和IL-6含量。
于28日龄和56日龄，从各组中分别随机挑选12羽，翅下抗凝采血，取抗凝血0.1 mL加入1.8 mL TC199培养液中，同时加入植物血凝素(PHA)0.1 mL，混匀，置37 ℃温育72 h，每天摇动1次；取出，吸去大部分上清液，加入8.3 g/L NH4Cl 4 mL，混匀，37 ℃水浴10 min；2 000 r/min离心5 min，弃上清；取沉淀物加5 mL固定液，室温放置10 min，离心，弃上清，取2～3滴沉淀物于冰冷并带有水分的载玻片上，均匀铺开，迅速吹干，用姬姆萨染液染15 min；水洗、干燥、油镜检查；观察200个淋巴细胞，计数其中的转化细胞数。按下面公式计算淋巴细胞转化率：
淋巴细胞转化率(%)=(转化的淋巴细胞/ 200)×100。数据以平均值±标准差(mean±SD)表示，采用SPSS 16.0软件进行统计分析，差异显著时进行LSD多重比较，以P<0.01(差异极显著)和P<0.05(差异显著)作为差异显著性判断标准。
由表2可见，全程(1~56日龄)肉仔鸡平均日采食量Ⅱ组和Ⅲ组均比Ⅰ组显著性增加(P<0.05)，同时，平均日增体重Ⅱ组比Ⅰ组显著性提高(P<0.05)，Ⅲ组则比Ⅰ组极显著性提高(P<0.01)，但是3组间料重比差异不显著(P>0.05)。可见，肉仔鸡注射丁氨丙磷溶液，可提高鸡的日增重和采食量，但是不能影响料重比，说明丁氨丙磷溶液对肉仔鸡具有促生长作用，但不能有效提高饲料转化率。
| 表2 丁氨丙磷溶液对肉仔鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of butafosfan solution on growth performance of broilers |
由表3可见，试验结束(56日龄)时，Ⅲ组和Ⅱ组间肉仔鸡发病率差异不显著(P＞0.05)，但都极显著低于Ⅰ组(P＜0.01)；死亡率Ⅲ组和Ⅱ组间差异也不显著(P＞0.05)，但都显著低于Ⅰ组(P＜0.05)。结果表明，肉仔鸡注射丁氨丙磷溶液可显著降低雏鸡的发病率和死亡率，改善生长状况。可见，丁氨丙磷溶液具有降低肉仔鸡发病率和死亡率，进口和国产的作用差异不显著。
| 表3 丁氨丙磷溶液对肉仔鸡发病率及死亡率的影响 Table 3 Effects of butafosfan solution on disease incidence and mortality rate of broilers % |
由表4可见，试验结束时，Ⅲ组肉仔鸡胸腺器官指数显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.05)，Ⅱ组胸腺器官指数与Ⅰ组差异不显著(P＞0.05)。而脾脏器官指数和法氏囊指数Ⅲ组和Ⅱ组均显著高于Ⅰ组(P＜0.05)，Ⅱ组胸腺器官指数与Ⅲ组差异不显著(P＞0.05)。由以上结果可见，丁氨丙磷溶液能促进肉仔鸡免疫器官的发育，进口丁氨丙磷溶液对胸腺、脾脏和法氏囊均有显著效果，而国产丁氨丙磷溶液只对脾脏和法氏囊效果显著。
| 表4 丁氨丙磷溶液对肉仔鸡免疫器官指数的影响 Table 4 Effects of butafosfan solution on immune organ indices of broilers mg/g |
由表5可见，28日龄和56日龄时，Ⅱ组和Ⅲ组肉仔鸡血清中新城疫(克隆30)弱毒苗的抗体水平均极显著高于对照组(P＜0.01)，Ⅱ组和Ⅲ组之间差异不显著(P＞0.05)。
28日龄和56日龄时，Ⅲ组肉仔鸡血清中H5亚型禽流感疫苗的抗体水平极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.01)，Ⅰ组和Ⅱ组之间差异不显著(P＞0.05)。可见，注射丁氨丙磷溶液可提高肉仔鸡新城疫(克隆30)弱毒苗的抗体水平，且国产的丁氨丙磷溶液效果与进口的丁氨丙磷溶液相同，但仅有进口的丁氨丙磷溶液才能提高H5亚型禽流感疫苗的抗体水平。
| 表5 丁氨丙磷溶液对肉仔鸡血清中抗体水平的影响 Table 5 Effects of butafosfan solution on serum antibody levels of broilers |
由表6可见，28日龄时，Ⅲ组肉仔鸡血液中淋巴细胞转化率极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.01)，Ⅱ组血液中淋巴细胞转化率显著高于Ⅰ组(P＜0.05)；56日龄时，Ⅱ组血液中淋巴细胞转化率与Ⅰ组差异不显著(P＞0.05)，Ⅲ组血液中淋巴细胞转化率极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P＜0.01)。可见，丁氨丙磷溶液对肉仔鸡外周血淋巴细胞转化率具有促进作用，且进口丁氨丙磷溶液的效果比国产丁氨丙磷溶液稳定。
| 表6 丁氨丙磷溶液对肉仔鸡血液中淋巴细胞转化率的影响 Table 6 Effects of butafosfan solution on blood lymphocyte transformation rate of broilers |
由表7可见，28日龄时，Ⅱ组肉仔鸡血清中IL-2含量显著高于Ⅰ组(P＜0.05)，Ⅲ组血清中IL-2含量极显著高于Ⅰ组(P＜0.01)，显著高于Ⅱ组(P＜0.05)；56日龄时，Ⅲ组血清中IL-2含量显著高于Ⅰ组(P＜0.05)，而Ⅲ组与Ⅱ组差异不显著(P＞0.05)，Ⅱ组与Ⅰ组也差异不显著(P＞0.05)。
28日龄和56日龄时，各组肉仔鸡血清中IL-6含量均未能表现出显著性差异(P＞0.05)。
可见，丁氨丙磷主要通过影响外周血中IL-2含量来进一步改善机体免疫功能的，进口的丁氨丙磷溶液效果更明显，但对IL-6含量也无显著影响。
| 表7 丁氨丙磷溶液对肉仔鸡血清中IL-2和IL-6含量的影响 Table 7 Effects of butafosfan solution on serum IL-2 and IL-6 contents on broilers |
Catosal是由德国拜耳公司研制开发的一种有机磷酸化合物，是一种与维生素B12的合剂，具有促进代谢、增强免疫以及抗应激等功效。其适用于各种动物的营养不良、饲养管理不当或疾病引起的代谢紊乱、幼畜生长不良、产后疾病以及免疫功能下降和各种应激反应等；同时亦可用于寄生虫病、传染病和其他慢性消耗性疾病的辅助治疗上，能与其他化学治疗药物产生协同作用，加快机体康复[6]。
在本试验中，丁氨丙磷溶液组肉仔鸡的生长状况比对照组(Ⅰ组)要好，发病率极显著低于对照组(P＜0.01)，死亡率也显著降低(P＜0.05)，说明了丁氨丙磷能增强肉仔鸡的抗病能力，降低发病率。早在20世纪70年代，国外一些学者研究表明，丁氨丙磷能促进机体合成代谢，加快动物的同化作用，增强机体的免疫功能，从而提高动物的抗病能力，降低各类疾病的发生率[7, 8]。
Halama[9]研究表明，Catosal溶液组鸡的增重率比对照组增加8.6%，饲料报酬提高7.7%，具有明显的促生长和提高饲料转化率的作用。哈斯苏荣等[6]也有相同的报道，复方丁氨丙磷溶液能在一定程度上提高平均日增重和饲料转化率(P>0.05)，从而存在改善肉仔鸡生长性能的趋势。在复方丁氨丙磷溶液中，还含有维生素B12，虽然维生素B12在动物体内的需要量很低，但它在动物的许多代谢环节中均起着非常重要的作用，如能预防巨幼红细胞性贫血，促进动物生长和提高饲料利用率，通过参与甲基的生成和传递，影响脂肪和碳水化合物的代谢等[10]。然而，本次试验却发现，注射丁氨丙磷溶液虽然可以促进肉仔鸡生长，但是却不能提高其饲料转化率，其可能与本次试验使用的剂量较低有关。
机体接种某种疫苗后特异性抗体含量的高低，可反映机体免疫力的强弱，也可反映机体抵抗特异性抗原能力的强弱。在本试验中，丁氨丙磷溶液组肉仔鸡血清新城疫(克隆30)弱毒苗的抗体水平极显著高于对照组(P＜0.01)，而血清中的H5亚型禽流感疫苗的抗体水平进口丁氨丙磷溶液组极显著高于国产丁氨丙磷溶液组和对照组(P＜0.01)；在外周血液的淋巴细胞转化试验中，除56日龄时国产丁氨丙磷溶液组的淋巴细胞转化率与对照组差异不显著(P>0.05)外，其他均显著或极显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01)。这说明丁氨丙磷溶液不仅对抗体形成细胞具有明显影响，且能促进提高机体的抗体水平，这与哈斯苏荣等[11]的研究结果相一致。
单核巨噬细胞的机能状态是反映机体免疫功能的重要指标之一，它不仅参与机体非特异性免疫防御，而且也是特异性免疫应答中的一类关键细胞，广泛参与免疫应答、免疫效应和免疫调节。单核巨噬细胞的吞噬功能是反映机体非特异性免疫机能的主要指标[12, 13]。白细胞介素是一组主要由单核细胞产生的细胞因子，在细胞的激活、增殖和分化中起重要的调节作用[14]。在本试验中，进口丁氨丙磷溶液组肉仔鸡血清中IL-2含量显著或极显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01)，而国产丁氨丙磷溶液组与对照组差异不显著(P>0.05)，说明进口丁氨丙磷溶液能刺激活化单核细胞、促进其产生细胞因子——IL-2和IL-6，从而增强机体的免疫力，但国产丁氨丙磷溶液在此方面的作用不明显。
免疫器官指实现免疫功能的器官和组织，主要包括中枢免疫器官(胸腺、法氏囊和骨髓)和周围免疫器官(淋巴结、脾脏、扁桃体等)。中枢免疫器官发生在胚胎期早期，来自骨髓的原始淋巴干细胞在中枢免疫器官中接受激素或激素样物质的刺激，或由于这些器官所提供的微环境，最终分化、成熟为具有免疫活性的T细胞和B细胞。周围免疫器官是免疫活性细胞定居及增殖的场所，也是这些细胞产生抗体及发育成致敏淋巴细胞以及发挥免疫应答的重要部位。肥大细胞分布在各个免疫器官中，可作为“哨兵”监视细菌的入侵，并启动针对病原菌的免疫反应。体外试验表明，肥大细胞能吞噬和清除细菌[15]；体内试验也显示肥大细胞缺失小鼠抵御细菌感染的能力明显下降[16]。肥大细胞与病毒直接作用的研究较少，但肥大细胞的分布特点和受体组成使肥大细胞成为病毒攻击的靶细胞[17, 18]。在本试验中，除国产丁氨丙磷溶液组肉仔鸡胸腺指数与对照组差异不显著(P>0.05)外，其他肉仔鸡的免疫器官均显著大于对照组(P＜0.05)。这说明了丁氨丙磷溶液能促进免疫器官的生长发育，促进免疫细胞的成熟分化。哈斯苏荣等[11]对小鼠口服复方丁氨丙磷溶液的研究结果表明，复方丁氨丙磷溶液是通过增强机体非特异性防御机能和特异性细胞免疫反应以及特异性体液免疫功能来增强机体免疫功能的。本试验结果与之一致，即丁氨丙磷溶液不仅能增强细胞免疫作用，还能提高体液免疫功能。
① 丁氨丙磷溶液可显著提高肉仔鸡平均日增重和平均日采食量，同时能显著降低肉仔鸡发病率和死亡率，但对料重比无显著影响。
② 除国产丁氨丙磷溶液对肉仔鸡胸腺指数无显著影响外，丁氨丙磷溶液能显著提高肉仔鸡器官指数，促进免疫器官的发育。
③ 丁氨丙磷溶液能促进机体对疫苗的特异性免疫应答，提高血液中抗体水平；同时，能够促进机体的非特异性功能，提高外周血液中淋巴细胞的转化率，其主要通过提高血清中IL-2的含量。
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