铜是动物生长过程中必需的微量元素之一,在机体造血、新陈代谢、生长繁殖、维持生产性能、增强机体抵抗力等方面具有不可替代的作用。铜最重要的生理作用之一是作为体内各种氧化酶的辅助因子,以辅酶形式参与氧化磷酸化、黑色素合成、铁和胺类代谢、毛发形成等生理代谢过程[1]。
Cromwell等[2]研究报道,在断奶仔猪上不同化学形式的铜盐的生物学效价存在差异,有机铜如甘氨酸铜和柠檬酸铜的生物学效价比无机铜如硫酸铜和氧化铜的生物学效价高。Stansbury等[3]研究报道,在生长猪上有机铜的生物学效价和促生长效果优于无机铜,并且在低水平下就可以达到较好的效果,可减少铜的排泄对环境所造成的污染。已有大量研究表明铜对畜禽具有促生长作用[4, 5]。此外,研究还表明赖氨酸铜对猪生长性能的促进作用要优于硫酸铜[6, 7];相对于硫酸铜而言,较低水平的柠檬酸铜即可有效促进肉鸡的生长[8]。
关于铜对毛皮动物生长的研究报道,甘伯中[9]研究得出添加100或200 mg/kg硫酸铜可提高毛兔生长性能和毛的增长速度;李道林[10]在综合分析铜对獭兔生长、血液生化指标及肝脏中铜沉积等指标影响的基础上,表明蛋氨酸铜的生物学效价高于硫酸铜;白玉妍等[11]通过在乌苏里貉基础饲粮中添加蛋氨酸铜,得出蛋氨酸铜可促进毛皮质量的提高;Aulerich等[12]研究得出适宜的铜水平可促进水貂的生长和毛皮发育,在生长期添加200 mg/kg硫酸铜组的体重较100 mg/kg硫酸铜组显著增加;Bush等[13]和Aulerich等[14]研究均表明饲喂高铜饲粮能增加水貂毛皮的色素沉着,使毛色有变暗的趋势;Mejborn[15]研究得出水貂饲粮中含铜5.1 mg/kg时可满足其正常生长和毛皮发育的需要;李光玉等[16]报道铜在毛皮动物饲粮中建议添加水平为4~6 mg/kg;吴学壮等[17]通过研究饲粮中添加不同水平硫酸铜对水貂生长性能、营养物质消化率及氮代谢的影响,建议在水貂育成期饲粮中硫酸铜添加水平为32 mg/kg。有关适宜银狐生长的铜源形式的文献报道较少,因此本试验拟研究不同铜源对银狐生长性能、营养物质消化率及血液生化指标的影响,旨在探究促进育成期银狐生长的适宜铜源,为养殖生产中合理添加铜源提供理论指导。
银狐基础饲粮配制参考NRC(1982)狐貂营养需求标准[18],其组成及营养水平见表1。在基础饲粮中添加不同形式的铜源配制4种试验饲粮,各铜源的添加水平以铜计,均为30 mg/kg,试验饲粮中铜添加水平是依据促毛皮动物生长的铜剂量[17],并根据大型银狐养殖场区生产实际确定。
| 表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % |
本试验在中国农业科学院特产研究所毛皮动物试验基地完成。选取40只75日龄、平均体重为(3 315±11) g的健康雌性银狐,随机分成4组,每组设10个重复,每个重复1只银狐。4组银狐分别饲喂在基础饲粮中添加142.9 mg/kg甘氨酸螯合铜(Ⅰ组)、171.4 mg/kg蛋氨酸螯合铜(Ⅱ组)、125.0 mg/kg硫酸铜(Ⅲ组)、88.2 mg/kg柠檬酸铜(Ⅳ组)的试验饲粮,各试验饲粮的添加水平以铜计均为30 mg/kg。其中,甘氨酸螯合铜和蛋氨酸螯合铜均是由氨基酸与铜离子以特定摩尔比螯合而成的氨基酸螯合物,前者铜含量≥21%,后者铜含量≥17.5%,购自上海德邦牧业有限公司;柠檬酸铜是有机铜形式,铜含量≥34%,硫酸铜含有5个结合水,铜含量≥24%,购自上海华亭化工厂有限公司。
试验动物单笼饲养。试验从2011年8月17日开始至2011年10月7日结束,预试期7 d,正试期45 d,每天08:00和15:00各饲喂1次,自由饮水。
预试期每天准确称量、记录饲喂量和剩余料量,计算采食量,观察动物健康和采食状况。试验开始19 d后,从2011年9月5日至8日进行消化代谢试验,每组选择8只采食和排便正常、体况接近的银狐进行消化代谢试验。消化代谢试验共进行4 d,利用自制的粪盘进行全粪收集,收集粪样中加入少量10% H2SO4固氮,65 ℃烘干,粉碎后过40目筛保存备用。
基础饲粮及粪样中常规营养成分的测定参考文献[19]的方法,铜含量采用微波消解-火焰原子吸收法测定。血清总蛋白(TP)含量采用双缩脲法测定,尿素氮(UN)含量采用二乙酰一肟法测定,白蛋白(ALB)含量采用溴甲酚绿法测定,超氧化物歧化酶(SOD)和铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)活性采用抽提法测定,以上血清指标测试均采用南京建成试剂盒通过分光光度计测定;血清碱性磷酸酶(ALP)活性采用中生北控试剂盒(速率法)测定;血清铜蓝蛋白(CP)含量采用罗氏试剂盒(免疫比浊法)测定;免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量采用罗氏双试剂试剂盒(免疫比浊法)测定。
试验数据采用Excel 2003进行整理,结果以平均值±标准差表示。采用SAS 8.0软件中GLM程序对数据进行统计分析,多重比较采用Duncan氏法进行,其中P<0.01为差异极显著,P<0.05为差异显著,P>0.05为差异不显著。
由表2可知,不同铜源对育成期雌性银狐的末重有显著影响(P=0.030 9),Ⅱ和Ⅳ组显著高于Ⅲ组(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);不同铜源对育成期雌性银狐的平均日增重有显著影响(P=0.046 6),Ⅳ组显著高于Ⅲ组(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);不同铜源对育成期雌性银狐的平均采食量无显著影响(P=0.401 2),Ⅳ组略高于其他各组,Ⅲ组最低。不同铜源对育成期雌性银狐的料重比有显著影响(P=0.043 5),Ⅳ组显著低于Ⅱ组(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05)。
| 表2 不同铜源对育成期雌性银狐生长性能的影响 Table 2 Effects of different copper sources on growth performance of female silver foxes during growth period |
由表3可知,不同铜源对育成期雌性银狐的干物质采食量无显著影响(P=0.268 8),Ⅳ组略高于其他各组,Ⅲ组最低;不同铜源对育成期雌性银狐的干物质排出量有显著影响(P=0.027 1),Ⅱ组显著高于Ⅲ组(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);不同铜源对育成期雌性银狐的干物质消化率无显著影响(P=0.182 9)。不同铜源对育成期雌性银狐的蛋白质采食量无显著影响(P=0.307 4),Ⅱ组略高于其他各组,Ⅲ组最低;不同铜源对育成期雌性银狐的蛋白质排出量有显著影响(P=0.029 8),Ⅱ组显著高于Ⅲ组(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);不同铜源对育成期雌性银狐的蛋白质消化率无显著影响(P=0.739 2)。不同铜源对育成期雌性银狐的脂肪采食量有显著影响(P=0.049 3),Ⅳ组显著高于Ⅲ组(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);不同铜源对育成期雌性银狐的脂肪排出量无显著影响(P=0.255 7),Ⅳ组略高于其他各组,Ⅲ组最少;不同铜源对育成期雌性银狐的脂肪消化率无显著影响(P=0.614 0),Ⅰ组略高于其他各组,Ⅳ组最低。
| 表3 不同铜源对育成期雌性银狐营养物质消化率的影响
Table 3 Effects of different copper sources on nutrient digestibility of female silver foxes during growth period
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由表4可知,血清总蛋白、尿素氮、IgG、IgM、铜蓝蛋白含量及碱性磷酸酶活性各组间差异不显著(P>0.05)。不同铜源对育成期银狐的血清白蛋白含量有显著影响(P=0.038 0),Ⅳ组显著高于其他3组,其他3组间差异不显著(P>0.05);不同铜源对育成期银狐的血清SOD活性有显著影响(P=0.012 0),Ⅰ组显著高于Ⅱ和Ⅲ组(P<0.05),其他组间差异不显著(P>0.05);不同铜源对育成期银狐的血清Cu/Zn-SOD活性有极显著影响(P=0.004 7),Ⅰ和Ⅲ组极显著高于Ⅱ组(P<0.01),与Ⅳ组间差异不显著(P>0.05)。
| 表4 不同铜源对育成期雌性银狐血液生化指标的影响
Table 4 Effects of different copper sources on blood biochemical parameters of female silver foxes during growth period
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柠檬酸铜组育成期雌性银狐的末重、平均日增重均高于其他组,且料重比低于其他各组,表明柠檬酸铜在促进银狐生长性能上优于其他形式铜源。硫酸铜组育成期雌性银狐的末重和平均日增重均为最低,与柠檬酸铜组间具有显著差异,虽与甘氨酸螯合铜和蛋氨酸螯合铜组未达到显著性差异,但均低于上述2组,表明在雌性银狐育成期添加相同水平铜的前提下,无机铜源的促生长作用不及有机铜源和氨基酸螯合铜源,这与大量文献报道相一致。Dove[20]报道,与硫酸铜相比,柠檬酸铜在对猪促生长效应方面同效或更有效,低剂量的有机铜可发挥高剂量的无机铜的促生长效果;李家奎等[21]试验表明,122.5 mg/kg蛋氨酸螯合铜对20~40 kg 猪的促生长效果与250 mg/kg硫酸铜无显著差异;黄志坚等[22]研究表明,猪对低剂量的蛋氨酸螯合铜的利用率要比硫酸铜高;齐广海等[23]研究报道,与硫酸铜相比,虽在鸡的生长性能方面柠檬酸铜的影响不显著,但其对蛋壳品质有改善作用,对降低鸡蛋和肝脏胆固醇含量方面表现出良好的效果。
刘国文等[24]研究报道,高铜可使猪肠壁变薄,并通过影响内分泌系统改善饲粮中营养物质的可消化性,增强吸收功能。研究报道,高铜可增加饲料利用效率5%~20%[25],提高猪日增重[26]。Luo等[27]研究报道,高铜能提高猪胃、肠道内某些酶的活性,从而提高营养物质消化率。冷向军等[28]研究报道,高铜可提高断奶仔猪对脂肪的消化率。Pau等[29]研究报道,高铜通过刺激猪下丘脑分泌神经肽Y激素,进而引起猪采食量增加。本试验中添加的铜水平(30 mg/kg)未达到高铜水平,这可能是导致不同铜源对营养物质采食量和其消化率未产生显著影响的原因。
血清白蛋白是由肝脏合成的,其主要是作为一种储存蛋白质,随时修补组织和提供能量。血清尿素氮是蛋白质与氨基酸在动物体内代谢的最终产物,饲粮中蛋白质和氨基酸含量可直接影响血清尿素氮含量[30, 31]。本试验中,柠檬酸铜组育成期雌性银狐血清白蛋白含量显著高于其他各组,各组尿素氮含量虽未达到显著差异,但柠檬酸铜组略高于其他各组。出现上述结果可能是由于饲喂柠檬酸铜饲粮的银狐日增重较快,导致体内蛋白质合成代谢增强,分解代谢减弱,机体在摄入充足的营养物质的情况下,在维持正常生长代谢时,血清白蛋白作为营养储备含量增加,流入代谢途径含量减少,增加了蛋白质沉积,因而导致血清尿素氮含量增加[32]。动物机体在缺乏铜情况下,血液免疫球蛋白[IgG、IgM、免疫球蛋白A(IgA)]含量降低,动物抵抗外界的免疫能力下降,本试验设计的铜水平超出NRC(1982)[18]推荐量,能够满足动物生长对铜的需要量,不同铜源间在促进动物机体免疫能力方面无显著性影响。血液中总蛋白含量在一定程度上代表饲粮中蛋白质的营养水平及动物对蛋白质的消化吸收程度,当体内蛋白质的合成作用增强、氮的沉积增强时,血液中总蛋白含量增加[33]。本试验中不同铜源对育成期雌性银狐的蛋白质消化率无显著性影响。血清中碱性磷酸酶活性高低可反映出动物的生长速度和生产性能,提高血液中碱性磷酸酶活性有利于提高动物的日增重[34],本试验不同铜源对育成期雌性银狐血清碱性磷酸酶活性虽未达到显著水平,但柠檬酸铜组的最高,与该组平均日增重较高相一致,此结果与文献报道结论相似。
铜蓝蛋白是由肝脏合成的一种含铜酶的α-糖蛋白,主要负责把铜从肝脏运输到各组织以供机体利用。吸收进入体内的铜由血浆铜蓝蛋白、血浆白蛋白及其他的铜结合物运送至全身,血清铜蓝蛋白作为一种含铜的蛋白,其活性也可以作为衡量动物机体铜营养需要量的指标[35]。黄志坚等[22]研究报道,在基础饲粮中添加不同铜源对血清中铜蓝蛋白含量无显著影响。本试验结果与该文献报道一致。但也有相反结论,高凤仙等[5]研究了氨基酸铜、硫酸铜和碱式氯化铜对猪生长性能和血液生化指标的影响,结果表明氨基酸铜可显著提高血清铜蓝蛋白含量。本试验中各组均添加30 mg/kg的铜,高于NRC(1982)[18]铜的推荐量,完全能够满足机体生长需要,机体在不缺铜的情况下,肝脏储存铜来为机体备用,运输到机体其他组织利用量减少,这可能是导致各组铜蓝蛋白含量差异不显著的原因。SOD活性对动物机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要作用,此酶能清除超氧阴离子自由基,保护细胞免受损伤。铜是Cu/Zn-SOD催化活性中心的组成部分,与Cu/Zn-SOD活性密切相关。Hawk等[36]报道,铜缺乏时机体SOD活性降低,可引起机体组织损伤。本试验中,柠檬酸铜和甘氨酸螯合铜组的血清SOD和Cu/Zn-SOD活性高于蛋氨酸螯合铜和硫酸铜组,说明在雌性银狐育成期柠檬酸铜和甘氨酸螯合铜较蛋氨酸螯合铜和硫酸铜更有利于保护机体组织细胞免受损伤。
在本试验条件下,综合考虑生长性能指标、营养物质消化率及血液生化指标,得出雌性银狐育成期饲粮适宜铜源为柠檬酸铜。
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