选用256头28日龄的杜长大(杜洛克×长白×大白，Duroc×Landrace×Yorkshire)断奶仔猪，采用3因素2水平(2×2×2)试验设计，按体重相近原则随机分为8个处理，每个处理4个重复，每个重复8头仔猪，ABP、AMP、AP添加水平分别为0、800 mg/kg。试验设计见表1，处理1(即对照组)饲喂基础饲粮，处理2~8(即试验组)饲喂在基础饲粮中分别添加不同水平多糖的试验饲粮。试验第14天和第28天09:00每重复随机挑选1头猪,无菌前腔静脉采血,分别注入真空肝素钠抗凝管和真空管制成抗凝血和血清。采用噻唑蓝(MTT)法测定外周血淋巴细胞转化率。采用酶联免疫吸附测定试验(ELISA)测定血清细胞因子IL-1β、IL-2、IL-6、TNF、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)含量。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 试验设计 Table 1 Experimental design mg/kg 处理 Treatments 添加水平 Supplemental level 牛膝多糖 ABP 黄芪多糖 AP 白术多糖 AMP 1 0 0 0 2 800 0 0 3 0 800 0 4 800 800 0 5 0 0 800 6 800 0 800 7 0 800 800 8 800 800 800

表1 试验设计 Table 1 Experimental design mg/kg

试验多糖来源于西安天园生物制剂厂，ABP由果糖和葡萄糖组成，AMP主要成分为甘露聚糖和果聚糖，AP由葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖组成。ABP、AMP、AP有效含量分别为60%、60%和65%，折算后纯的3种多糖添加到饲粮中的量为800 mg/kg。

参照NRC(1998)仔猪营养需要量标准，并结合生产实践配制基础饲粮，其组成及营养水平见表2。

动物饲养试验在湖南省益阳市农业科学研究所沅江猪场内进行，采取自由采食、饮水，免疫消毒程序按猪场常规方法进行。

试验数据采用SAS 9.2软件的GLM过程进行析因分析，试验结果用平均值±标准差表示，用Duncan氏法进行多重比较，以P<0.05作为差异显著性判断标准。

由表3可知，试验处理对试验第14天和第28天时断奶仔猪的外周血淋巴细胞转化率有显著影响(P<0.05)，与对照组相比，单独或联合添加多糖组断奶仔猪的外周血淋巴细胞转化率都显著提高(P<0.05)。试验第14天时，ABP、AMP、AP两两合用较单独添加ABP或者AMP有提高淋巴细胞转化率的趋势，但差异不显著(P>0.05)，AMP与AP或ABP合用较单独添加AP有显著提高(P<0<0.05)。试验第28天时，ABP、AMP、AP两两合用较单独添加1种多糖的淋巴细胞转化率有所提高，但差异也不显著(P>0.05)。试验第14天和第28天时，3种多糖合用时淋巴细胞转化率显著高于单独添加1种多糖(P<0.05)，较两两合用组有不同程度提高(P>0.05)。试验第28天各组的淋巴细胞转化率与试验第14天相比均呈现下降趋势。析因分析表明，ABP、AMP、AP极显著提高了断奶仔猪外周血淋巴细胞转化率(P<0.01)，3种多糖两两或三者合用对断奶仔猪外周血淋巴细胞转化率有提高趋势(P>0.05)，但相互之间未体现出互作效应(P>0.05)。

淋巴细胞增殖是反映机体细胞免疫水平的一个重要指标^[6]。目前已有许多试验表明多糖可通过促进淋巴细胞转化和增殖等途径发挥免疫调节作用。陈清华等^[2]研究发现饲粮中添加ABP可以显著提高仔猪外周血淋巴细胞转化率和血清中TNF、IL-1β、IL-2、IL-6等细胞因子的含量，且存在一定的量效和时效关系。李宗锴等^[7]通过体外研究表明ABP能提高老年小鼠T淋巴细胞的增殖能力。李丽立等^[8]研究显示饲粮中单独添加白术纯多糖、复合粗多糖显著提高了早期断奶仔猪淋巴细胞转化率。陈洪亮等^[9]研究表明AP对雏鸡外周血T淋巴细胞转化功能有增强作用，且与对照组差异显著。毛晓峰^[10]研究表明AP显著地提高了断奶仔猪淋巴细胞转化率和IL-2的活性。范云鹏等^[11]研究表明，与对照组相比，AP组能显著促进鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖。本试验结果表明，单独或联合添加多糖组断奶仔猪的外周血淋巴细胞转化率与对照组相比都显著提高，3种多糖两两合用较单独添加1种多糖的淋巴细胞转化率有所提高，但差异不显著，3种多糖合用时淋巴细胞转化率显著高于单独添加1种多糖，较两两合用有不同程度提高。但3种多糖相互之间未体现出互作效应。这与等研究结果相类似，AP和ABP对应激仔猪外周血淋巴细胞增殖没有体现出互作效应。这可能由于3种多糖的特性和试验动物生理反应的复杂性造成，3种多糖对断奶仔猪是否具有互作效应仍需进一步研究。

细胞因子是由淋巴细胞、单核-巨噬细胞以及相关免疫细胞产生的具有免疫调节功能的一类蛋白类物质，是免疫系统重要的信息分子。近年来研究发现，多糖有促进细胞因子产生的作用，其中IL-2、IL-6、IL-1β、TNF、IFN-γ在免疫应答中充当着十分重要的角色。IL-2由活化的T淋巴细胞产生，又叫T细胞生长因子，具有广谱的免疫增强活性。IL-6在B细胞生长分化时起关键作用，又称为B细胞生长因子。IFN-γ主要介导TH1型反应，促进IL-2分泌释放，促进T细胞的分化增殖。TNF能活化单核细胞和巨噬细胞，提高其杀伤活性，也可增强T细胞、自然杀伤细胞等活性以及产生IL-1、IL-6等细胞因子。IL-1β能促进胸腺细胞、T细胞的活化、增殖和分化，增强B细胞功能以及刺激单核细胞核巨噬细胞产生IL-6和TNF。本试验测定了仔猪血清细胞因子IL-2、IL-6、IL-1β、TNF、IFN-γ的含量，结果显示，试验第14天和第28天，添加多糖组细胞因子IL-2、IL-1β、TNF、IFN-γ的含量显著高于对照组，虽然单独添加1种多糖时IL-6含量与对照组差异不显著，但也有一定程度提高，两两合用或三者合用时显著高于对照组。这表明3种多糖单独或联合使用均能在一定程度上促进仔猪细胞因子产生。这与近年来的一些同类研究结果基本一致：Li等^[12]报道饲粮中添加纯AMP显著提高了断奶仔猪血清中IL-1、TNF-α、INF-γ含量；Zhuge等^[13]报道ABP上调了外周血单个核细胞IL-2 mRNA表达；Fan等^[14]研究报道添加AP显著提高了鸡血清中IFN-γ和IL-2含量；Li等^[15]研究报道AP极显著地提高了小鼠脾淋巴细胞增殖和血清中IL-2含量，且存在一定的量效关系；Qiu等^[16]研究表明AP可有效促进血清中IL-2、IFN-γ的分泌；Zhu等^[17]研究表明ABP能提高老鼠血清中IFN-γ、TNF-α含量，增强TH1型免疫应答来控制疟疾的扩散；Jin等^[18]研究表明ABPS能显著上调老鼠脾脏IL-6 mRNA和TNF-α mRNA表达量；Guo等^[19]研究表明饲粮中补充ABP能调节细胞因子的释放，缓解了断奶仔猪的免疫应激；Chen等^[20]研究表明给仔猪补充ABP提高了肝脏、空肠黏膜和肠系膜淋巴结IL-1 mRNA转录水平。由此推论，饲粮中添加ABP、AP、AMP能提高仔猪血清中IL-1β、IL-2、IL-6、TNF、IFN-γ含量，促进淋巴细胞和单核细胞增殖，提高仔猪免疫性能。本试验中ABP、AMP、AP两两合用都较对照组在不同程度上提高了淋巴细胞增殖和细胞因子含量，3种多糖合用在一些指标上优于单独添加组，体现出一定的互作效应。3种多糖联合使用对提高试验第14天断奶仔猪血清IL-6含量具有显著的互作效应。ABP和AMP合用对提高试验第28天断奶仔猪血清TNF含量具有显著的互作效应。AP和AMP合用对提高试验第28天断奶仔猪血清IL-1β含量具有显著的互作效应。但3种多糖合用在某些指标上未能体现出互作效应,如在淋巴细胞增殖上并未体现出一定的互作效应，可能与它们的水平组合、试验的测定误差等因素有关，也可能因为本次试验3种多糖水平梯度少导致它们之间的相互作用不能很好地体现。

本试验还发现，与试验第14天相比，第28天的断奶仔猪外周血淋巴细胞转化率降低，并且IL-2、IFN-γ、IL-6含量也有降低趋势，这可能是因为多糖的免疫调节作用受时间影响，随着时间延长，细胞对多糖再次的刺激反应下降；也可能是因为在试验前14天，仔猪处于应激较强，免疫机能较弱期，添加多糖能迅速发挥免疫调节作用，而试验第15~28天时，仔猪免疫机能逐渐完善，吸收的营养物质可能主要用于生长。