2. 湖南赛夫特生物科技有限公司, 长沙 410000
2. Hunan Saifute Bio-Technology Company Limited, Changsha 410000, China
丁酸是一种有机酸，能杀菌抑菌，同时它又是结肠的重要能量来源，能维持肠道健康，提高机体免疫力[1]，但丁酸呈液态，易挥发且有臭味，不利于实际生产[2]。因而丁酸盐(主要是丁酸钠)的出现很快引起关注，并得到广泛研究，然而丁酸钠有让饲养员难以忍受的脂臭味，且有研究表明口服丁酸盐吸收过快，到达肠道后段的量很少[3, 4]。而丁酸的前体物三丁酸甘油酯作为一种短链脂肪酸酯，在胃液中不分解，经肠道胰脂肪酶分解，释放较缓慢，且1 mol三丁酸甘油酯能产生3 mol丁酸。国内研究三丁酸甘油酯在动物生产上的应用较少，且主要集中在断奶仔猪上[5, 6]。国外研究发现，三丁酸甘油酯能促进肉鸡生长，改善胴体组成和肠道健康，提高机体免疫力[7, 8, 9]，但其在肠道的作用机理尚不清楚，且目前国内三丁酸甘油酯在肉鸡上的研究几乎未见报道。为此，本试验以艾维茵(Avian)肉鸡为研究对象，旨在探究三丁酸甘油酯对肉鸡生长性能、养分表观消化率、屠宰性能、肠道形态及微生物菌群的影响，为丁酸类产品的选择及其适宜添加量提供参考，为其在家禽生产上的推广应用提供理论依据。
三丁酸甘油酯：纯度≥90%，由湖南赛夫特生物科技有限公司提供。
基础饲粮参照NRC(1994)标准配制，其组成及营养水平见表1，各组试验饲粮均采用粉状饲料。
 | 表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) % |
选用刚出壳的健康艾维茵肉公鸡1 800羽，随机分为6组，每组6个重复，每个重复50羽。对照组饲喂基础饲粮，试验1~5组分别饲喂在基础饲粮中添加0.10%、0.15%、0.20%、0.30%、0.40%三丁酸甘油酯的试验饲粮。试验分1~21日龄(前期)和22~42日龄(后期)2个阶段，试验期42 d。采用网上平养，每个重复1栏，用红外灯育雏，自由采食，自由饮水，24 h光照，第1周温度为35 ℃，第2周为32~30 ℃，第3周为30~27 ℃，以后维持在18~25 ℃。各栏饲养条件基本一致。按鸡场常规的免疫程序进行免疫接种。
试验期间每天观察鸡只的健康状况，记录耗料量和死亡数，在第21天和第42天清晨，以重复(栏)为单位，对鸡群进行空腹称重，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和成活率(SR)。
在42日龄时从对照组和三丁酸甘油酯促生长效果最佳组的每个重复中选取体重相近的5只鸡分别放入代谢笼中进行代谢试验，试验期为5 d。记录每天的投料量和余料量，收集全部的粪尿，将收集的粪尿于65 ℃的烘箱中烘成半干样品待用。试验期间自由采食、饮水。饲料养分表观消化率的测定参照张丽英[10]主编的《饲料分析及饲料质量检测技术》。
饲养试验结束后，从对照组和三丁酸甘油酯促生长效果最佳组中选取体重相近的30羽鸡(每个重复5羽)，进行宰杀取样，测定屠体质量、全净膛质量、胸肌质量、腿肌质量与腹脂质量，并计算屠宰率、全净膛率、胸肌率、腿肌率与腹脂率。计算公式为：
屠宰率(％)=(屠体质量／活体质量)×100； 全净膛率(％)=(全净膛质量／屠体质量)×100； 胸肌率(％)=(胸肌质量／全净膛质量)×100； 腿肌率(％)=(腿肌质量／全净膛质量)×100； 腹脂率(％)=(腹脂质量／全净膛质量)×100。于42日龄饲养试验结束时，从对照组和三丁酸甘油酯促生长效果最佳组中的每个重复中随机抽选3只健康肉鸡，剪断颈静脉处死后立即剖腹，按组织学区分取十二指肠和空肠各2 cm，浸入生理盐水涮洗掉内容物后，再浸入布安氏(Bouin’s)固定液48 h后待用。检测方法采用常规石蜡切片，苏木精-伊红(HE)染色。测量肉鸡的十二指肠和空肠的绒毛高度与隐窝深度。
在十二指肠形态指标测定中试验肉鸡屠宰后，取出盲肠并结扎，用酒精棉球消毒各结扎口，于无菌操作台中对盲肠内容物进行10-8～10-5倍比稀释，每个样品4个稀释度，每个稀释度3个重复，采用平板菌落计数法进行细菌计数，测定肠道内容物中芽孢杆菌、乳酸菌及大肠杆菌的数量，以每克肠道内容物中细菌个数的对数lg(CFU/g)表示。其中，大肠杆菌、芽孢杆菌和乳酸菌的鉴别培养基分别采用结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)、葡萄糖胰蛋白胨琼脂(DTA)和乳酸细菌培养基(MRS)，均购自南京建成生物工程研究所。乳酸菌在厌氧条件下，30 ℃培养48 h；大肠杆菌和芽孢杆菌均在37 ℃培养18~24 h。培养结束后，对每个培养板上的菌落进行计数，根据菌群的形态、颜色等鉴别这3种细菌。大肠杆菌典型的菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm或更大。芽孢杆菌典型菌落应为近似圆形的白色菌落。乳酸菌典型菌落一般为白色或者淡蓝色。
试验数据用平均值±标准差表示，采用SPSS 11.5软件对多组比较进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，多重比较采用LSD法，2组比较采用独立样本t检验。
由表2可见，试验3组对肉鸡促生长效果优于其他各组，且对肉鸡前期的促生长效果要优于后期。与对照组相比，1~21日龄，试验2、3组肉鸡ADG分别提高了5.71%和8.13%(P<0.05)，试验2、3、4组肉鸡F/G分别降低了4.49%、7.05%和0.53%(P<0.05)；22~42日龄，试验3组肉鸡ADG提高了5.86%(P<0.05)，F/G降低了4.52%(P<0.05)；1~42日龄，试验3组肉鸡ADG提高了6.67%(P<0.05)，F/G降低了5.56%(P<0.05)。在肉鸡整个生长阶段，添加不同剂量三丁酸甘油酯对肉鸡的ADFI和SR均无显著影响(P>0.05)。
| 表2 三丁酸甘油酯对肉鸡生长性能的影响
Table 2 Effects of tributyrin on growth performance of broilers
|
由表3可见，与对照组相比，试验3组的粗脂肪和粗纤维的表观消化率分别显著提高了7.52%和8.90%(P<0.05)；粗蛋白质的表观消化率提高了2.58%，但差异不显著(P>0.05)。
| 表3 三丁酸甘油酯对肉鸡养分表观消化率的影响 Table 3 Effects of tributyrin on nutrient apparent digestibility of broilers % |
由表4可见，与对照组相比，试验3组有改善屠宰性能的趋势，但差异均不显著(P>0.05)。
| 表4 三丁酸甘油酯对肉鸡屠宰性能的影响 Table 4 Effects of tributyrin on slaughter performance of broilers % |
由表5可见，与对照组相比，试验3组肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度分别提高了11.83%和15.11%(P<0.05)；隐窝深度有变浅的趋势，但差异不显著(P>0.05)。
| 表5 三丁酸甘油酯对肉鸡肠道形态的影响 Table 5 Effects of tributyrin on intestinal morphology of broilers μm |
由表6可见，与对照组相比，试验3组肉鸡盲肠内容物中乳酸菌数量提高了13.22%(P<0.05)，大肠杆菌数量降低了8.99%(P<0.05)，芽孢杆菌数量变化不显著(P>0.05)，乳酸菌/大肠杆菌比值升高(P<0.05)。
| 表6 三丁酸甘油酯对肉鸡盲肠微生物菌群的影响 Table 6 Effects of tributyrin on cecum microbial flora of broilers lg(CFU/g) |
丁酸已被证明能促进畜禽生长和肠道健康，但其不同添加形式(丁酸盐、包膜丁酸盐、丁酸酯等)的效果及添加量存在很多争议。游金明等[11]发现饲粮添加0.05%和0.10%的丁酸钠能显著提高22~58日龄的仔猪ADG，并有提高ADFI的趋势。刘丽华等[12]发现饲粮添加0.025%、0.050%、0.100%丁酸钠能提高肉鸡1~14日龄的体增重，但对15~21日龄的体增重影响不大。Panda等[9]研究发现，饲粮添加0.40%和0.60%丁酸钠能显著提高肉鸡增重和饲料转化效率，但添加0.20%丁酸钠与对照组无显著差异。以上研究中能促进畜禽生长的丁酸钠的添加量各不相同，这可能与丁酸钠的纯度、动物品种及饲养环境等有关。另外很多学者认为丁酸盐在肠道吸收过快，而包膜丁酸和丁酸酯能缓释丁酸。董冠等[13]在饲料中添加0.10%、0.15%、0.20%、0.25%的粉剂丁酸钠和包膜丁酸钠，发现粉剂丁酸钠可提高猪的ADG，但对其ADFI和F/G无显著影响，而包膜丁酸钠可显著提高ADG，降低F/G。Smulikowska等[14]的研究表明，添加0.10%脂肪包膜丁酸钠能降低8~21日龄鸡的F/G，增加氮和有机物的表观消化率，但对粗脂肪的表观消化率无影响。刘统等[15]指出，饲粮添加0.20%三丁酸甘油酯与对照组相比，仔猪粗蛋白质、粗脂肪和粗纤维的表观消化率分别提高了5.84%、14.37%和16.70%。本试验中，与对照组相比，0.15%三丁酸甘油酯组能提高1~21日龄肉鸡ADG，降低1~21日龄F/G；0.20%三丁酸甘油酯组能提高1~21日龄及22~42日龄肉鸡ADG，降低1~21日龄及22~42日龄F/G；0.30%三丁酸甘油酯组能降低1~21日龄F/G；0.10%和0.40%三丁酸甘油酯组无显著变化。由此可见，三丁酸甘油酯对肉鸡前期的促生长效果要优于后期，肉鸡饲粮中添加0.20%三丁酸甘油酯的促生长效果要优于其他添加组，此结果与先前的研究报道基本一致。故三丁酸甘油酯在肉鸡饲粮中的添加量不宜过高或过低，本试验结果建议添加量为0.20%。
三丁酸甘油酯的促生长原因包括以下2方面：一方面，三丁酸甘油酯对动物的生理作用主要是丁酸的作用，能够为结肠提供能量，且极易从肠腔内吸收[16]；另一方面，三丁酸甘油酯与一般丁酸盐不同，一般丁酸盐在胃和前肠中就已被吸收，解决不了消化道后段的健康问题。而三丁酸甘油酯能顺利过胃，不被胃酸分解，在肠道中经过胰脂肪酶解后，释放出丁酸和甘油，在肠道后段发挥作用。
丁酸能为肠道提供能量，让肠道发育更好；同时丁酸又是一种酸化剂，能杀灭有害菌。崔蕾等[17]在肉鸡饲粮中分别添加0、0.025%、0.050%、0.075%丁酸钠，发现添加0.075%丁酸钠显著提高了21日龄仔鸡的十二指肠和空肠的绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度(V/C)，显著提高了42日龄仔鸡十二指肠绒毛高度。王纯刚等[18]发现，饲粮添加0.30%丁酸钠能使14日龄断奶仔猪隐窝深度变浅，提高V/C，极显著提高盲肠乳酸杆菌数量，有降低大肠杆菌数量的趋势。Panda等[9]研究表明，饲粮添加0.40%和0.60%丁酸钠能降低胃和十二指肠pH，减少胃和盲肠细菌数量，且2种剂量无显著差异，饲粮添加0.20%、0.40%和0.60%丁酸钠能显著增加十二指肠绒毛高度和隐窝深度。Lacorn等[4]为了将丁酸带到肠道后段，用菊粉包膜丁酸钠饲喂仔猪，发现菊粉包膜丁酸钠组回肠绒毛高度与比对照组提高了25%，而空肠绒毛高度和结肠隐窝深度无显著变化。Jerzsele等[19]发现，饲粮添加0.15%脂肪包膜丁酸钠可增加仔鸡绒毛高度，对V/C无影响。Piva等[20]发现，三丁酸甘油酯和乳糖醇共同添加能增加仔猪空肠绒毛高度，减少隐窝深度。三丁酸甘油酯还能使仔猪盲肠、十二指肠和空肠隐窝深度变浅[6]。总体看来，三丁酸甘油酯能增加肠道绒毛高度，减少隐窝深度，但对不同肠段效果不同；此外，它还能降低胃肠道pH，减少盲肠有害菌数量，提高盲肠有益菌数量。本试验中，0.20%三丁酸甘油酯组肉鸡十二指肠和空肠绒毛高度显著增长，隐窝深度有变浅的趋势，盲肠大肠杆菌数量减少，乳酸菌数量增加，与前人的研究结果一致。这充分说明，丁酸钠和三丁酸甘油酯均能有效改善肠道形态，调节肠道菌群，调控动物炎症刺激反应，促进肠道健康[21, 22]。但目前由于丁酸的添加形式和添加量不能统一，各种形式丁酸的具体作用机制也不明确，因此寻找更高效更稳定的丁酸类物质，延迟丁酸的释放，有待更深入研究。
① 饲粮添加三丁酸甘油酯能提高肉鸡生长性能，且前期效果优于后期，其中0.20%三丁酸甘油酯组效果最佳。
② 与对照组相比，饲粮添加0.20%三丁酸甘油酯肉鸡粗脂肪和粗纤维的表观消化率分别提高了7.52%和8.90%，十二指肠和空肠肠绒毛高度分别提高了11.83%和15.11%，盲肠内容物中乳酸菌数量提高了13.22%，大肠杆菌数量降低了8.99%。
③ 综上所述，肉鸡饲粮中三丁酸甘油酯适宜添加量为0.20%。
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