由于抗生素添加剂在畜禽饲料中添加使用存在负面作用，人们开始不断寻求和研发无污染、低残留的绿色饲料添加剂来替代抗生素。酵母多糖和益生素的组合以其优良的生物学功能逐步得到人们的关注。酵母细胞壁富含酵母多糖。酵母多糖主要成分是葡聚糖和甘露聚糖。大量的报道证明有益微生物能促进酵母多糖的消化，酵母多糖又可促进有益菌的增殖、提高有益菌的竞争优势，其组合具益生菌和益生元的双重作用，能提高外源性活菌的生存率，延长其作用时间，刺激有益菌的定植和增殖，吸附病原菌，改善动物肠道微生物群落结构^{[ 1,2 ]}，二者能对细菌、真菌和病毒引起的畜禽疫病以及运输、转群、接种、气候变化等引起的应激反应产生非特异性免疫力^{[ 3 ]}，对动物起保健作用。

王辉田等^{[ 4 ]}报道在肉仔鸡饲粮中添加酵母细胞壁能显著提高新城疫抗体滴度、血清溶菌酶含量和T淋巴细胞比例。李志清^{[ 5 ]}研究发现肉仔鸡饲粮中添加β-葡聚糖可显著提高新城疫一免后7 d、二免后5 d血凝抑制(HI)抗体效价。吴纪经等^{[ 6 ]}通过鸡新城疫HI抗体水平和T细胞增殖的检测发现，以饮服或肌肉注射方式给艾维茵肉鸡补充酵母细胞壁，均可显著提高其体液免疫和细胞免疫水平。益生素又称微生态制剂或活菌制剂，是近年来针对抗生素药物产生的残留、抗药、致癌、致畸、污染等副作用而兴起的绿色添加剂^{[ 7,8 ]}。目前使用的活菌制剂主要有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌^{[ 9 ]}。阿玛琪^{[ 10 ]}通过在产蛋鸡饲粮中加入芽孢类益生素使得产蛋鸡的产蛋重、产蛋率有一定程度的提高，同时促进了产蛋鸡的肠道有益菌的增殖和免疫器官的发育。Ducle等^{[ 11 ]}报道，芽孢杆菌进入肠道后可作用于肠系膜淋巴结的淋巴组织，显著提高抗芽孢的免疫球蛋白G(IgG)和分泌型免疫球蛋白A(IgA)的水平。总之已有大量酵母细胞壁和益生素单独在饲料中应用的研究，但二者联合应用的组合效应及最佳组合剂量还未见报道。为此，本研究旨在针对其二者联合应用对蛋鸡生产性能、免疫功能的影响进行探讨，得出最佳组合剂量，为二者的科学联合应用提供试验依据。 1 材料与方法 1.1 酵母细胞壁和益生素

酵母细胞壁，选用英国联合食品集团产品[使用德国面包酵母菌种生产，其甘露寡糖和β-葡聚糖含量均≥(48±3) %]。

益生素，选用上海纽威产品(枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌1 ∶ 1混合，含量均≥1.0×10¹⁰ CFU/g)。 1.2 基础饲粮

基础饲粮参照NRC(1994)^{[ 12 ]}和《鸡的饲养标准》(NY/T 33—2004)^{[ 13 ]}，并结合海兰褐蛋鸡饲养手册配制。基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % 原料 Ingredients 含量 Content 营养水平 Nutrient levels3) 含量 Content 玉米 Corn 65.00 代谢能 ME/(MJ/kg) 11.58 大豆粕 Soybean meal 14.60 粗蛋白质 CP 15.42 麸皮 Bran 2.00 粗纤维 CF 3.61 鱼粉 Fish meal 8.00 赖氨酸 Lys 0.74 骨粉 Bone powder 1.00 蛋氨酸 Met 0.32 食盐 NaCl 0.35 胱氨酸 Cys 0.23 维生素预混料 Vitamin premix1) 0.05 钙 Ca 3.55 微量元素预混料 Trace mineral premix2) 1.00 磷 P 0.73 石粉 Limestone 8.00 硒 Se/(mg/kg) 0.15 合计 Total 100.00 1)每千克饲粮含有One kilogram of the diet contained as follows：VA 12 000 IU，VD3 3 000 IU，VE 20 IU，VK 2 mg，VB12 0.015 mg，VB1 1.5 mg，核黄素 riboflavin 4.5 mg，VB6 3.0 mg，生物素 biotin 0.1 mg，叶酸 folic acid 0.5 mg，烟酸 niacin 20 mg，泛酸 pantothenic acid 10.0 mg。 2)每千克饲粮含有One kilogram of the diet contained as follows：Mn 60.0 mg，Zn 50.0 mg，Fe 25.0 mg，Cu 5.0 mg，I 0.5 mg。 3)代谢能为计算值，其余为实测值。ME was a calculated value，while the others were measured values.

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) %

将19周龄健康的海兰褐蛋鸡512只，随机分成4组，每组4个重复，每个重复32只鸡，实行阶梯笼养。预试期1周,正试期8周,分别饲喂基础饲粮(对照组，A组)、基础饲粮+0.4 mg/kg酵母细胞壁+50 mL/t益生素(B组)、基础饲粮+0.8 mg/kg酵母细胞壁+100 mL/t益生素(C组)、基础饲粮+1.2 mg/kg酵母细胞壁+150 mL/t益生素(D组)。试验在福清文华蛋品有限公司鸡场进行;试验从2013年9月29日开始，在预试期按日统计产蛋量，根据实际情况对鸡群进行适当调整，使组间日产蛋量差异不显著(P>0.05)，同时逐渐换上试验饲粮。 1.4 测定指标和方法 1.4.1 生产性能

试验期间每日以重复为单位记录产蛋数、蛋重，并计算产蛋率、日产蛋量、平均蛋重，每周结1次料并计算日采食量、料蛋比。 1.4.2 免疫功能

测定新城疫抗体水平和淋巴细胞转化率：分别于正试期第1天免疫前、第14天和第28天时，每组每重复(笼)随机取1只鸡，翅静脉采血，不加抗凝剂，分离血清，参照文献^{[ 14 ]}采用微量HI试验测定新城疫抗体效价，抗体水平以log₂的平均值表示。翅静脉采血2 mL，并加抗凝剂，参照文献^{[ 15 ]}用淋巴细胞增殖试验[4-甲基偶氮唑盐(MTT)法]测定血液淋巴细胞转化率，结果以刺激指数(SI)表示。 1.5 数据统计与处理

试验数据在Excel 2003中建表，采用SPSS 11．0统计软件的one-way ANOVA过程进行单因素方差分析，LSD法进行组间多重比较。试验数据采用平均值±标准差表示。 2 结果与分析 2.1 不同剂量组合对海兰褐蛋鸡生产性能的影响

由表2可知，整个试验期各组间蛋鸡日采食量、平均蛋重没有显著差异(P>0.05)。与A组相比，B、C和D组蛋鸡日产蛋量均有不同程度的提高,其分别提高了2.76％(P>0.05)、6.22％(P<0.05)、2.26％(P>0.05)；产蛋率分别提高了2.83％(P>0.05)、6.19％(P<0.05)、2.27％(P>0.05)；料蛋比分别下降了3.83%(P<0.05)、6.70％(P<0.05)、2.87%(P>0.05)。

与B、D组相比，C组蛋鸡日产蛋量分别提高了3.36%(P<0.05)、3.86%(P<0.05)；产蛋率分别提高了3.27%(P<0.05)、3.84%(P<0.05)；料蛋比分别下降了2.99%(P>0.05)、3.94%(P<0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 蛋鸡生产性能 Table 2 Performance of laying hens 组别 Groups 日采食量 Daily feed intake/ [g/(只·d)] 日产蛋量 Daily egg production/ [g/(只·d)] 平均蛋重 Average egg weight/g 产蛋率 Laying rate 料蛋比 Feed/egg A 105.12±4.59 50.35±1.59a 56.51±1.28 89.11±1.18a 2.09±0.19a B 104.15±3.26 51.74±1.05a 56.47±1.31 91.63±2.13a 2.01±0.14b C 104.62±4.69 53.48±0.99b 56.51±1.18 94.63±1.35b 1.95±0.18b D 104.34±2.56 51.49±1.23a 56.50±1.09 91.13±2.41a 2.03±0.15a 同列数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。下表同。 In the same column,values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05)，while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05)，and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01)． The same as below．

表2 蛋鸡生产性能 Table 2 Performance of laying hens

由表3可知，试验第1天，各试验组与对照组(A组)间蛋鸡血清新城疫抗体效价均差异不显著(P>0.05)；试验第14天，与A组相比，B、C和D组均有不同程度的提高,其分别提高了3.92%(P<0.05)、6.17%(P<0.01)、3.14%(P<0.05)；试验第28天，与A组相比，B、C和D组均有不同程度的提高,其分别提高了6.87%(P<0.05)、9.94%(P<0.01)、6.99%(P<0.05)。与B、D组相比，C组试验第14天和第28天蛋鸡血清新城疫抗体效价均有提高，但差异不显著(P>0.05)。 2.2.2 血液淋巴细胞转化率

由表4可知，蛋鸡血液淋巴细胞转化率于试验第1天各试验组与对照组间均差异不显著(P>0.05)；试验第14天，与A组相比，B、C和D组均有不同程度的提高,其分别提高了3.83%(P<0.05)、6.56%(P<0.01)、3.28%(P<0.05)；试验第28天，与A组相比，B、C和D组均有不同程度的提高,其分别提高了3.89%(P<0.05)、7.22%(P<0.01)、4.44%(P<0.05)。与B、D组相比，C组试验第14天和第28天蛋鸡血液淋巴细胞转化率均有提高，但差异不显著(P>0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 蛋鸡血清新城疫抗体效价 Table 3 Serum antibody titers of Newcastle disease in laying hens log2 组别 Groups 第1天 The 1st day 第14天 The 14nd day 第28天 The 28th day A 6.89±0.34 8.92±0.11Aa 8.15±0.12Aa B 6.93±0.26 9.27±0.09ABb 8.71±0.07ABb C 6.75±0.21 9.47±0.20Bb 8.96±0.15Bb D 6.81±0.18 9.20±0.17ABb 8.72±0.19ABb

表3 蛋鸡血清新城疫抗体效价 Table 3 Serum antibody titers of Newcastle disease in laying hens log2

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 蛋鸡血液淋巴细胞转化率(刺激指数) Table 4 Lymphocyte transformation rate in blood of laying hens (SI) 组别 Groups 第1天 The 1st day 第14天 The 14nd day 第28天 The 28th day A 1.75±0.20 1.83±0.09Aa 1.80±0.17Aa B 1.77±0.19 1.90±0.15ABb 1.87±0.24ABb C 1.77±0.08 1.95±0.23Bb 1.93±0.13Bb D 1.80±0.22 1.89±0.26ABb 1.88±0.28ABb

表4 蛋鸡血液淋巴细胞转化率(刺激指数) Table 4 Lymphocyte transformation rate in blood of laying hens (SI)

本试验发现蛋鸡饲粮中额外添加酵母细胞壁和益生素(枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌)2种生物制剂不同剂量3种组合，虽然蛋鸡日采食量、平均蛋重没有显著改善，但不同剂量B、C、D 3种组合都能在一定程度上提高海兰褐蛋鸡的日产蛋量和产蛋率，同时降低料蛋比。3种剂量组合对海兰褐蛋鸡日产蛋量、产蛋率、料蛋比影响存在差异，C组合效果最佳。其原因主要归结为益生素可通过提高胃肠道中有益菌的数量，降低有害菌的数量，并能合成多种酶类，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，促进机体消化吸收，达到提高饲料利用和促生长的效果^{[ 16 ]}。很多研究也都表明酵母细胞壁对动物有促生长作用^{[ 17 ]}，其作用机理有以下2个方面：首先其改善了小肠的黏膜形态，绒毛长度与隐窝深度的比值增大，从而扩大了小肠绒毛的吸收面积，加大了对营养物质的吸收利用，从而提高了饲料转化率；其次，甘露寡糖可调节肠道微生物区系，促进有益菌的增殖，结合病原微生物，形成肠道内合适的微生物区系，从而提高动物的生长性能。甘露寡糖作为一种生长代谢的营养物质,可促进一些有益菌的生长繁殖,对一些致病菌则有抑制作用^{[ 18 ]}。故酵母细胞壁和益生素联合应用能提高有益菌在肠道内的成活率，改善益生菌的稳定性，并促进益生素发挥作用^{[ 19 ]}。 3.2 酵母细胞壁和益生素3种剂量组合对蛋鸡免疫功能的影响

酵母细胞壁和益生素3种剂量组合均能提升蛋鸡血清新城疫抗体效价和血液淋巴细胞转化率。在20世纪40年代，Pillemer博士首次发现并报道了酵母细胞壁中有一种物质具有提高免疫力的作用。之后，经过图伦大学Diluzio博士的进一步研究发现，酵母细胞壁中提高免疫力的物质是一种多糖——甘露寡糖，并从面包酵母中分离出这种物质。大量试验表明，β-葡聚糖可促进体内免疫球蛋白M(IgM)抗体的产生，以提高体液的免疫能力。益生素中的有益菌也是良好的免疫激活剂，能有效地提高干扰素和巨噬细胞的活性，通过产生抗体和提高噬菌活性等刺激免疫系统，激发机体体液免疫和细胞免疫，导致机体免疫力和抗病力的增强。杨玉荣等^{[ 20 ]}研究发现，在雏鸡饲粮中添加益生素对雏鸡的免疫系统有一定的影响，能够促进免疫器官的生长发育。酵母细胞壁和益生素的组合能够更好地抑制大肠杆菌、沙门氏菌的定植、帮助和维持寄主肠道菌群平衡，建立双歧杆菌的优势种群、保护动物肝脏、促进营养转化、刺激寄主免疫细胞的活性、增强免疫功能^{[ 21 ]}。本试验结果显示C组效果最佳，这与陈小兵等^{[ 22 ]}、Kumprecht等^{[ 17 ]}和周映华等^{[ 23 ]}试验结果一致，这可能是因为过量添加酵母细胞壁会引起后肠过度发酵，从而使动物发生轻微腹泻，影响动物对养分的吸收和利用，抑制动物生长，动物生产性能与免疫功能没有提高，反而略有下降，即过高的添加酵母细胞壁和益生素对蛋鸡生产性能和免疫功能不但没有进一步的改善作用，反而不及较低剂量组。 4 结 论

综合各项指标，在本试验条件下饲粮中按0.8 mg/kg酵母细胞壁+100 mL/t益生素剂量组合进行添加对提高蛋鸡生产性能和免疫功能效果最佳。