2. 四川农业大学动物营养研究所, 雅安 625014
2. Institute of Animal Nutrition, Sichuan Agricultural University, Ya'an 625014, China
鱼粉是水生动物最主要的蛋白质源[1]。然而,随着水产养殖业的迅猛发展,鱼粉需求量大幅度增加,供应量严重不足,开展用其他蛋白质原料替代鱼粉的研究已成为水产饲料营养研究的热点[2]。在水产动物配合饲料生产中,常规的植物蛋白质源主要以膨化豆粕、花生粕、玉米蛋白粉和大豆浓缩蛋白等原料为主,因具蛋白质含量高、抗营养因子含量低等特点,是水产动物饲料的重要蛋白质源[3,4]。目前,关于单一植物蛋白质源替代鱼粉对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长性能和养分表观消化率的影响已有研究[5,6,7,8]。然而,研究表明,单一植物蛋白质原料替代鱼粉时,由于具有氨基酸不平衡[9,10]、存在抗营养因子[11]和改变饲料中酸碱性[12]等不足,降低了养殖动物的生长性能和对营养物质的利用率。因此,研究者认为,用植物复合蛋白质源替代鱼粉可在一定程度上克服单一植物蛋白质源由于氨基酸不平衡对对虾生长性能及养分消化率的不利影响[13]。
目前,有关植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾的生长和饲料利用率影响的研究已有报道。研究表明,用豆粕、玉米蛋白粉、发酵玉米可溶性物的复合物替代60%以上的鱼粉[14]、用豆粕、玉米蛋白粉的复合物替代9%的鱼粉[15]、用大麦发酵物和小麦面筋的混合物替代66%的鱼粉[16],均对凡纳滨对虾的增重、饲料利用和成活率无显著影响。可见,在凡纳滨对虾饲料中,用植物蛋白质复合物可部分替代鱼粉而对其生长和饲料利用率无显著影响。此外,作者的前期相关研究结果也表明,膨化豆粕、花生粕和玉米蛋白粉作为单一植物蛋白质源,可分别替代38%、17%和45%的鱼粉而对凡纳滨对虾的生长性能和养分表观消化率无显著影响[17]。
因此,本试验拟结合作者前期的研究结果[17],通过利用膨化豆粕、花生粕和玉米蛋白粉这3种植物蛋白质源的复合效应,探讨可否进一步提高替代鱼粉的比例,以期为植物蛋白质复合物在对虾饲料中的应用提供理论依据和数据参考。 1 材料与方法 1.1 试验饲料的配制
根据作者前期对膨化豆粕、花生粕和玉米蛋白粉等单一蛋白质源替代鱼粉的研究结果[17],试验以0、3.91%、7.82%、11.73%、15.64%和23.46%的植物蛋白质复合物(膨化豆粕 ∶ 花生粕 ∶ 玉米蛋白粉=38% ∶ 17% ∶ 45%)分别替代饲料中0(对照)、10%、20%、30%、40%和60%的鱼粉,配制成6种等氮等能饲料;并根据凡纳滨对虾对氨基酸的需要量[1],添加L-赖氨酸(98%)、DL-蛋氨酸(98%)、L-苏氨酸(98%)和L-精氨酸(98%),以平衡各饲料中的赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和精氨酸的含量(表1)。在配制试验饲料过程中,各种原料粉碎过60目筛,按表1的配方准确称量各种饲料原料,微量成分添加后采取逐级扩大法混合均匀,再添加30%左右的水分,再次混匀后,压制成粒径为1.0和1.5 mm的颗粒饲料。风干后,用自封袋密封,放于-20 ℃冰柜中保存备用。
![]() | 表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) % |
试验虾为广东粤海饲料股份有限公司湛江东海岛种苗场培育的凡纳滨对虾苗。选择初始体重为(0.52±0.01) g的健康对虾苗720尾,随机分为6组,每组设3个重复,以重复为单位随机放入18个0.38 m3的玻璃纤维钢桶中,每桶40尾。每组随机投喂1种试验饲料。 1.3 饲养管理
试验在广东海洋大学东海岛海洋生物研究基地室内养殖系统中进行。每天按体重的8%~10%投喂,分别在07:00、11:30、17:30和21:00各投喂1次。试验用水为经过沉淀、过滤的海水,每天观察对虾的摄食、蜕壳、生长情况并记录投喂量、水温、pH、盐度、溶氧等水质参数,每周定期测定水中氨氮含量。试验期间水温为28.5~30.0 ℃,海水盐度为26.5~28.0,试验期间连续充氧,溶氧浓度>6.8 mg/L,pH为7.8~8.2,氨氮含量低于0.03 mg/L。试验期为56 d。 1.4 粪便收集和样品采集
参考Lin等[18]的方法收集粪便,参照杨奇慧等[5]的方法采集待测样品。 1.5 测定指标 1.5.1 生长、饲料利用相关指标及肝体指数计算公式 增重率(WGR,%)=100×(终末体重-初始体重)/初始体重; 特定生长率(SGR,%/d)=100×(ln终末体重-ln初始体重)/投喂天数; 成活率(SR,%)=100×试验结束时虾尾数/试验开始时虾尾数; 饲料系数(FCR)=摄食量/(终末体重-初始体重); 蛋白质效率(PER,%)=100×体增重/蛋白质摄入量; 蛋白质沉积率(PRR,%)=100×蛋白质沉积量/蛋白质摄入量; 肝体指数(HSI,%)=100×肝胰腺重/体重。 1.5.2 体成分分析
参照AOAC(1995)[19]的方法,分别测定全虾样品中的水分、粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和磷含量。其中:水分含量是在105 ℃恒温烘箱中烘干至恒重后测得;粗蛋白质含量采用自动凯氏定氮仪(2300-Auto-Analyzer,Foss Tecator,Sweden)测定;粗脂肪含量采用自动脂肪测定仪(Soxtec System 2050,Foss Tecator,Sweden)测定;粗灰分含量是在550 ℃马福炉中灼烧12 h后测得;磷含量采用等离子发射光谱(ICP)仪[IRIS Advantage (HR),102 Thermo Jarrell Ash,103 Woburm,USA]测定。 1.5.3 血清生化指标测定
血清总蛋白、葡萄糖、总胆固醇和甘油三酯含量的测定均参照杨奇慧等[5]的方法。 1.5.4 血清非特异性免疫酶活性测定
血清一氧化氮合成酶(nitric oxide synthetase,NOS)、酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)和超氧化物歧化酶(surperoxide dismutase,SOD)活性测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,测定方法参照试剂盒说明书进行,并参照杨奇慧等[5]的方法进行改进。 1.5.5 表观消化率计算公式
参考Pond等[20]的方法,分别计算饲料中干物质以及蛋白质、氨基酸、脂肪和能量的表观消化率: 干物质的表观消化率(%)=100×[1-(DCr/FCr)]; 某营养素的表观消化率(%)=100×[1-(F/D)×(DCr/FCr)]。
式中:F是粪便中某营养素的含量;D是饲料中某营养素的含量;DCr是饲料中三氧化二铬(Cr2O3)的含量;FCr是粪便中Cr2O3的含量。 1.6 数据处理与分析
结果用平均值±标准差(mean±SD)表示。采用SPSS 13.0统计软件对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA),并结合Duncan氏法进行多重比较,检验组间的差异显著性,P<0.05表示差异显著。 2 结 果 2.1 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾生长的影响
植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾生长的影响见表2。
![]() | 表2 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾生长的影响 Table 2 Effects of replacement of fish meal with plant protein mixture on growth of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) |
增重率:10%组最高,与20%组差异不显著(P>0.05),显著高于对照组及30%、40%和60%组(P<0.05);60%组最低,显著低于其余各组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
特定生长率:10%组最高,与对照组差异不显著(P>0.05),显著高于40%和60%组(P<0.05);60%组最低,显著低于其余各组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
成活率:各组的成活率均在95.83%~96.66%之间,组间差异不显著(P>0.05)。 2.2 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料利用和肝体指数的影响
植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料利用和肝体指数的影响见表3。
![]() | 表3 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料利用和肝体指数的影响 Table 3 Effects of replacement of fish meal with plant protein mixture on feed utilization and hepatopancreas-somatic index of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) |
饲料系数:10%组最低,与对照组差异不显著(P>0.05),显著低于其余各组(P<0.05);60%组最高,显著高于其余各组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
蛋白质沉积率:10%组最高,与对照组和20%组差异不显著(P>0.05),显著高于30%、40%和60%组(P<0.05);60%组最低,显著低于其余各组(P<0.05);40%组显著高于60%组(P<0.05),显著低于其余各组(P<0.05);30%组显著高于40%和60%组(P<0.05),显著低于10%组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
蛋白质效率:10%组最高,与对照组、20%组差异不显著(P>0.05),显著高于30%、40%和60%组(P<0.05);60%组最低,显著低于其余各组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
肝体指数:40%和60%组显著高于30%组(P<0.05),其余各组间差异不显著(P>0.05)。 2.3 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾体成分的影响
植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾体成分的影响见表4。
![]() | 表4 植物蛋白质复合物替代鱼粉对全虾体成分的影响(干物质基础) Table 4 Effects of replacement of fish meal with plant protein mixture on body composition of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei)(DM basis) % |
水分含量:40%组最高,60%组次之,二者显著高于对照组和30%组(P<0.05),与10%和20%组差异不显著(P>0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
粗蛋白质含量:60%组最低,30%组次之,二者显著低于其余各组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
全虾粗脂肪、粗灰分和磷含量:各组间差异不显著(P>0.05)。 2.4 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾血清生化指标的影响
植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾血清生化指标的影响见表5。
![]() | 表5 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾血清生化指标的影响 Table 5 Effects of replacement of fish meal with plant protein mixture on serum biochemical indexes of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) |
总蛋白含量:10%组最高,显著高于40%和60%组(P<0.05),与对照组及20%、30%组差异不显著(P>0.05);60%组最低,与40%组差异不显著(P>0.05),显著低于其余各组(P<0.05);30%组与40%组、对照组差异不显著(P>0.05),显著高于60%组(P<0.05),显著低于10%和20%组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
葡萄糖含量:10%组最高,显著高于40%和60%组(P<0.05),与对照组及20%、30%组差异不显著(P>0.05);60%组最低,显著低于对照组及10%、20%组(P<0.05),与30%、40%组差异不显著(P>0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
总胆固醇含量:10%组最高,与对照组和20%组差异不显著(P>0.05),显著高于30%、40%和60%组(P<0.05);60%组最低,与40%组差异不显著(P>0.05),显著低于其余各组(P<0.05);40%组显著低于对照组和10%组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
甘油三酯含量:40%组最高,60%组次之,对照组最低,对照组显著低于40%和60%组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。 2.5 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾血清非特异性免疫酶活性的影响
植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾血清非特异性免疫酶活性的影响见表6。
![]() | 表6 植物蛋白质复合物替代鱼粉蛋白对凡纳滨对虾血清非特异性免疫酶活性的影响 Table 6 Effects of replacement of fish meal with plant protein mixture on the activities of non-special immune enzymes in serum of Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) |
植物蛋白质复合物替代不同比例鱼粉对凡纳滨对虾血清ACP和AKP活性有显著影响(P<0.05),对血清SOD和NOS活性无显著影响(P>0.05)。
ACP活性:10%组最高,与20%组差异不显著(P>0.05),显著高于其余各组(P<0.05);60%组最低,与30%、40%组差异不显著(P>0.05),显著低于其余各组(P<0.05);对照组显著低于10%和20%组(P<0.05),显著高于40%和60%组(P<0.05),与30%组差异不显著(P>0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
AKP活性:10%组与对照组差异不显著(P>0.05),显著高于其余各组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
SOD和NOS活性:各组间差异不显著(P>0.05)。 2.6 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料中干物质、蛋白质、脂肪和能量表观消化率的影响
植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料中干物质、蛋白质、脂肪和能量表观消化率的影响见表7。
![]() | 表7 植物蛋白质复合物替代鱼粉对饲料中干物质、蛋白质、脂肪和能量表观消化率的影响 Table 7 Effects of replacement of fish meal with plant protein mixture on the apparent digestibility of dry matter,protein,lipid and energy in diets for Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) % |
干物质表观消化率:10%组最高,与对照组、20%组差异不显著(P>0.05),显著高于30%、40%和60%组(P<0.05);60%组最低,与40%组差异不显著(P>0.05),但二者均显著低于其余各组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
蛋白质表观消化率:10%组最高,与对照组、20%组差异不显著(P>0.05),显著高于30%、40%和60%组(P<0.05);60%组最低,与40%组差异不显著(P>0.05),但二者均显著低于其余各组(P<0.05);对照组显著高于30%、40%和60%组(P<0.05),与20%组差异不显著(P>0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
脂肪表观消化率:以对照组最高,与10%和20%组差异不显著(P>0.05),显著高于其余各组(P<0.05);60%组最低,与40%组差异不显著(P>0.05),但二者均显著低于其余各组(P<0.05);30%组显著低于对照组及10%、20%组(P<0.05),显著高于40%和60%组(P<0.05);其余各组间差异不显著(P>0.05)。
能量表观消化率:随替代比例的增加呈下降趋势,除对照组与10%组以及10%与20%组差异不显著(P>0.05)外,其余各组间差异显著(P<0.05)。 2.7 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料中氨基酸表观消化率的影响
植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料中氨基酸表观消化率的影响见表8。
![]() | 表8 植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾饲料中氨基酸表观消化率的影响 Table 8 Effects of replacement of fish meal with plant protein mixture on the apparent digestibility of amino acids in diets for Pacific white shrimp (Litopenaeus vannamei) |
必需氨基酸:9种必需氨基酸的表观消化率均以对照组最高,60%组最低;各氨基酸的表观消化率均表现为60%组显著低于对照组(P<0.05)。除蛋氨氨酸、亮氨酸和异亮氨酸外,其余氨基酸的表观消化率均为对照组显著高于10%组(P<0.05)。蛋氨酸的表观消化率表现为对照组与10%和20%组差异不显著(P>0.05),但显著高于其余各组(P<0.05);异亮氨酸的表观消化率表现为对照组显著高于60%组(P<0.05),与其余各组差异不显著(P>0.05);亮氨酸的表观消化率表现为对照组显著高于40%和60%组(P<0.05),与其余各组差异不显著(P>0.05)。
非必需氨基酸:7种非必需氨基酸的表观消化率均以对照组最高,与10%和20%组差异不显著(P>0.05),显著高于其余各组(P<0.05)。 3 讨 论
由本试验结果可知,用植物蛋白质复合物替代40%的鱼粉对凡纳滨对虾的生长无显著影响。目前,有关凡纳滨对虾饲料中植物蛋白质复合物替代鱼粉的研究已有报道。研究表明,用豆粕、玉米蛋白粉、发酵玉米可溶性物(40% ∶ 35% ∶ 25%)的复合物替代60%以上的鱼粉[14],用豆粕、玉米蛋白粉(39.52% ∶ 4.84%)的复合物替代9%的鱼粉[15],用大麦发酵物和小麦面筋(1 ∶ 1)的混合物替代66%的鱼粉[16],对其生长均无显著影响。然而,当用大麦发酵物和小麦面筋(1 ∶ 1)的混合物[16]以及豆粕、玉米蛋白粉、发酵玉米可溶性物(40% ∶ 35% ∶ 25%)的复合物分别替代100%的鱼粉时,凡纳滨对虾则表现出生长和饲料利用率降低[14]。同时,研究认为,植物蛋白质复合物高比例替代鱼粉引起水产动物生长和饲料利用率降低的主要原因之一是饲料中必需氨基酸组成不平衡[14,17]。然而,在本试验中,通过添加晶体氨基酸使各组饲料中4种限制性氨基酸(赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和精氨酸)的总量达到平衡,但平衡氨基酸后并不能改善对虾的生长性能。分析其原因可能是,虽然添加晶体氨基酸平衡了各饲料中氨基酸的总量,但晶体氨基酸与原料中蛋白质结合态的氨基酸在对虾肠道中的吸收并不同步,故未能促进对虾生长性能的提高[1]。
已有研究表明,饲料中养分的表观消化率随着植物蛋白质源替代鱼粉比例的增加而降低[21]。从本试验结果可知,当植物蛋白质复合物替代30%的鱼粉时,凡纳滨对虾饲料中干物质、蛋白质、脂肪和能量表观消化率均显著降低。有关对虾的研究表明,用大麦发酵物和小麦面筋粉(1 ∶ 1)的混合物分别替代凡纳滨对虾饲料中0、33%、66%和100%的鱼粉,当替代比例高于66%时,饲料中干物质和蛋白质的表观消化率显著降低[16]。通过分析饲料养分表观消化率,并结合表2和表3的结果可知,凡纳滨对虾生长性能的降低可能是由饲料中蛋白质、脂肪、氨基酸及能量表观消化率的降低所致。
同时,从表8可知,植物蛋白质复合物替代60%鱼粉的组各种氨基酸的表观消化率均显著低于对照组。研究表明,用豆粕和啤酒酵母的复合物替代鱼粉,澳大利亚红螯虾(Cherax quadricarinatus)尾肌中蛋氨酸和胱氨酸的含量随着替代比例的增加而降低,肌肉中含硫氨基酸的沉积率与饲料蛋白质的组成相关,而且会降低必需氨基酸指数[22]。然而,Tidwell等[23]的研究则发现,用豆粕和玉米酒精糟替代鱼粉对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)肌肉的必需氨基酸指数无显著影响,这与本试验结果及澳大利亚红螯虾中的研究结果[22]不一致,其原因有待进一步研究。
从血清生化指标检测结果看,植物蛋白质复合物替代鱼粉比例为40%时,血清总胆固醇含量,ACP、AKP活性显著降低。可见,提高饲料中植物蛋白质复合物替代鱼粉的比例也会通过影响血清生化指标和非特异性酶活性而影响凡纳滨对虾的生长、饲料利用及养分表观消化率。但是,有关植物蛋白质复合物替代鱼粉对凡纳滨对虾非特异性免疫效应的影响机制,仍需进行深入的研究。 4 结 论
结合生长、饲料利用和养分表观消化率结果,在蛋白质水平为40%、鱼粉含量为30%的凡纳滨对虾基础饲料中,植物蛋白质复合物(膨化豆粕 ∶ 花生粕 ∶ 玉米蛋白粉=38% ∶ 17% ∶ 45%)替代20%的鱼粉较适宜。
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