随着养殖业规模化的发展，大肠杆菌、沙门氏菌、寄生虫等病原体引起的疾病已经成为现代家禽业的多发病。目前，控制禽病仍主要以药物治疗为主，但药物防治面临着2大问题：一是病原体耐药性；二是药物残留[1]。因此寻求新型抗生素替代物已经成为畜牧兽医科研工作者的重要任务之一。葡萄原花青素(grape procyanidins,GPC)是一种来源丰富的有代表性的植物多酚，在葡萄的皮、籽中含量丰富，其由儿茶素、表儿茶素和表儿茶素没食子酸3种单体[2]，通过C4→C8或C4→C6键结合成为不同聚合度的原花青素分子[3]。大量研究发现GPC在抗氧化[4,5]、心血管保护[6,7]、细胞保护[8,9]等方面表现出极佳功效。近年来，畜牧学者发现，GPC在提高胴体品质[10,11]、改善胃肠道微生物区系[12]等方面极具意义，而其在肉仔鸡免疫调节方面的优良功效也引起了人们的关注。McDougald等[13]研究发现，饲粮中添加2%圆叶葡萄渣(MP)，可以显著降低球虫引起的肠道损伤评分；Wang等[14]报道GPC可以改善柔嫩艾美尔球虫造成的生长受阻，并且有助于治疗因柔嫩艾美尔球虫引起的并发症。由于球虫病以细胞免疫为主，可见GPC对肉鸡的细胞免疫具有调节作用，细胞免疫主要通过各种细胞群体发挥作用，包括胸腺依赖性淋巴细胞(T细胞)、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞等，其中起主导作用的是T细胞。肠道是鸡球虫致病的主要场所，由于肠道作为机体重要免疫器官和消化器官的特殊性，球虫的入侵势必引起黏膜损伤，进而导致免疫低下、细菌感染等继发病，因此研究GPC是否能通过激活机体先天性免疫，预防球虫病及其继发病的发生，具有重要意义。此外，球虫感染后肠道γδ T细胞数量迅速增多[15,16]，黏膜γδ T细胞在调控肠道炎症感染过程中也发挥着关键性作用[17,18]，因此可知γδ T细胞可能是球虫免疫的重要因素。新近研究发现，植物多酚中的原花青素是能够以抗原非依赖性激活γδ T细胞的极为有效的因子[19]，研究GPC对γδ T细胞的增殖影响极具价值。
近年来玉米价格上涨，在小麦主产区养殖企业逐渐以小麦替代玉米作为能量饲料。小麦和玉米中均含有50%~75%的淀粉，小麦淀粉消化速率快于玉米淀粉[20]。食品中的淀粉缓慢消化和吸收可减少餐后血糖水平增加，利于机体健康。有研究发现，多酚物质可降低机体采食小麦淀粉等食物引起的血糖快速升高，维持血糖相对稳态，利于机体健康发育[21,22]；摄入富含多酚的谷物食品或混合食用富含原花青素的浆果比采食普通小麦食品，机体内血糖含量更易趋于平衡[23,24]。根据卢德勋先生“营养活性物质组学”的观点[25]，某一营养功能活性是源自于天然存在的各种营养物质之间的相互作用与人工配合的各种营养活性物质的优化组合，及其整体功能，而非仅单一物质的功能。可见，GPC与小麦具有组合效应。但目前为止关于GPC在小麦-豆粕型饲粮中的应用效果尚未见报道。本课题组前期研究表明，玉米型饲粮与GPC的组合具有较好的免疫活性，但对肉鸡的生长性能无显著影响[26]。因此，本试验旨在研究GPC与小麦型饲粮组合效应对肉仔鸡生长性能、免疫机能的影响，以期为其在肉仔鸡生产中的应用提供参考依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料GPC由天津市尖峰天然产物研究开发有限公司提供，原花青素含量99.47％；其中寡聚原花青素(OPC)65.19％，原花青素单体9.88％，多聚原花青素24.93％。
RPMI-1640培养基购自Gibco公司。伴刀豆球蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)均购自Sigma公司，分别用RPMI-1640培养液配成1 mg/mL，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，-20 ℃分装保存。
四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自Sigma公司，用pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)溶解，配制成5 mg/mL浓度，0.22 μm微孔滤膜过滤除菌，4 ℃保存。
鼠抗鸡CD3-PE、鼠抗鸡TCR2-FITC单克隆抗体购自Southern Biotech公司。
二甲基亚砜(DMSO)购自于Sigma公司，淋巴细胞分离液购自于军事医学科学院。
主要仪器有：Epcis Elite型流式细胞仪(美国Beckman-Coulter公司)、酶标仪、二氧化碳(CO2)培养箱(Thermo公司)。
1.2 试验设计与试验饲粮试验选用240只1日龄科宝-500(Cobb-500)健康公雏，随机分为4个组，每组6个重复，每个重复10只。试验期42 d，分为前期(1~21日龄)和后期(22~42日龄)2个阶段。
在参照NRC(1994)和NY/T 33—2004的基础上，配制小麦-豆粕型饲粮，4组饲粮分别在基础饲粮中添加0(对照)、7.5、15.0和30.0 mg/kg的GPC。基础饲粮组成及营养水平见表1。
1.3 饲养管理单层网上笼养，自然光照加人工补光，光照强度为30 lx，1~7日龄每天光照24 h，8日龄后光照制度为光照23 h ∶ 黑暗1 h。鸡舍温度第1周33~35 ℃，之后每周下降2 ℃。肉仔鸡自由采食和饮水，常规免疫。
1.4 测定指标及方法 1.4.1 生长性能试验前称雏鸡初始体重，分别于试验的第21天、第42天09:00之前，以重复为单位称空腹体重，记录试验鸡每天的耗料量，统计肉仔鸡1～21日龄、22～42日龄耗料量，计算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。
1.4.2 淋巴细胞转化率和γδ T细胞比例淋巴细胞转化试验参照Mosmann[27]方法，略有修改。翅静脉采血，肝素钠抗凝，立即将抗凝血用D-Hanks液作1 ∶ 1稀释，离心管中加入1 mL淋巴细胞分离液，之后慢慢加入2倍体积的稀释血液，使之平铺于分离液上，4 ℃、1 800×g 离心30 min，可见液体分层:上层为血浆，中层为分离液，下层为红细胞和粒细胞。在上层和中层之间的界面上可见薄层混浊带，即为淋巴细胞和单核细胞的混合物，取约1 mL的中间白细胞层，加入3~5倍体积的RPMI-1640培养液，洗涤3次，每次4 ℃、2 500 r/min离心10 min，弃上清。然后将细胞悬浮于RPMI-1640完全培养液，台盼蓝染色，计数活细胞数(>95%)，调整细胞浓度为1× 107个/mL。将细胞植于96孔细胞培养板，每孔 加入190 μL的细胞悬液，随后分别加入10 μL PBS、ConA(终浓度45 μg/mL)或LPS(终浓度25 μg/mL)，PBS作为对照组，ConA组作为T细胞转化组，LPS作为囊依赖淋巴细胞(B细胞)转化组。培养体系为200 μL，将板置于5% CO2，40 ℃ CO2培养箱中，培养56 h，之后每孔轻轻吸弃上清100 μL，加入100 μL不含小牛血清的RPMI-1640培养液，同时加入初浓度5 mg/mL MTT溶液10 μL，继续于培养箱中培养4 h。培养结束后，每孔加入100 μL DMSO，待紫色结晶完全溶解后，酶联免疫检测仪570 nm波长下测定吸光度(OD)值。
 | 表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) |
外周血淋巴细胞γδ T细胞亚群的测定，参照张海军等[26]方法。21、42日龄时，每个重复分别选用1只平均体重的鸡，翅静脉采集外周抗凝血，密度梯度离心法提取淋巴细胞。淋巴细胞提取后，调整细胞数使其浓度达到1×107个/mL，用流式细胞仪的双色标记法测定CD3+、TCR2细胞。各单抗的标记如下：CD3-PE，TCR2-FITC。用EPICS ELITE型(美国Beckman-Coulter公司)的流式细胞仪检测，488 nm激光激发，FSvSS设门，先测定同型对照管，确定各荧光通道的电压值，然后测定相应标本管，应用EXPO32专业软件分析得到各种数据及散点图。计算TCR2细胞比例。
1.4.3 免疫器官指数分别于21、42日龄，每个重复选取与平均体重相近的肉仔鸡(事先空腹12 h)称重，翅静脉采血后颈静脉放血致死，迅速剖腹取出法氏囊、胸腺、脾脏，剔除脂肪及结缔组织，用滤纸轻轻吸干血水后称重(精确到0.001 g)。
免疫器官指数(g/kg)=组织器官湿重(g)/体重(kg)。 1.4.4 碳粒廓清指数42日龄时，每重复随机抽取1只鸡，从右侧翅静脉注射0.2 mL的印度墨汁，于2和10 min分别从左侧翅静脉采血20 μL溶于2 mL质量分数为0.1％的Na2CO3溶液中。静置1 h后，分光光度计680 nm波长下比色，记录OD值A。注射15 min后将鸡放血处死，取肝和脾并称重，计算廓清指数(K)和吞噬指数(a)。
K=(lgA1-lgA2)/(t2-t1);
a=K1/3×体重/(肝重+脾重)。
式中，A1、A2分别代表先后2次所采血样测得的吸光度值，t2-t1代表2次采血时间间隔。
1.4.5 血清溶菌酶浓度分别在21、42日龄采集静脉血制备血清。血清溶菌酶浓度测定采用比浊法，参照Kreukniet等[28]的方法，略有修改。将溶壁微球菌溶于菌溶剂中，移液枪轻轻吹打，使之充分混匀，保证菌液在560 nm波长测得的OD值在0.5~0.8范围内；将溶菌酶标准品用双蒸水配制成1.5、2.0、3.0、4.0、6.0 μg/mL 5个浓度；96孔板植板，加200 μL双蒸水作为调零孔，之后将每个浓度植入20 μL，并于浓度孔加入200 μL的菌溶液，将板置于41 ℃水浴锅中，于15、30、45、60 min时，在560 nm波长分别测定OD值，对每个标准品浓度计算出OD值和时间的回归系数，根据回归系数和标品浓度做出标准曲线。样品测定同上，对每个样品计算吸光度和时间的回归系数，在标品标准曲线上查出对应的溶菌酶浓度。
1.5 数据处理采用SPSS 16.0软件的one-way ANOVA程序进行统计分析，Duncan氏法进行多重比较，以P＜0.05为差异显著性标准。数据以“平均值±标准差”表示。
2 结 果 2.1 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡生长性能的 影响由表2可知，1~21日龄各组之间生长性能无显著差异(P>0.05)。肉仔鸡21日龄末体重、1~21日龄的平均日增重、平均日采食量、料重比和死亡率不受GPC与小麦型饲粮组合的影响(P>0.05)。各组之间，以15.0 mg/kg GPC组合组平均日增重、料重比较佳，该组死亡率数值也略低。
| 表2 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of combination between GPC and wheat-based diet on growth performance of broiler chicks |
22~42日龄期间，肉仔鸡的生长性能受GPC与小麦型饲粮组合效应影响。肉仔鸡42日龄末体重，各组之间虽无统计学之显著差异(P>0.05)，但7.5、15.0 mg/kg GPC组合组肉仔鸡末体重上高于对照组。GPC与小麦型饲粮组合显著降低肉仔鸡的平均日采食量，较对照组低12~19 g(P<0.05)。料重比方面，7.5、15.0 mg/kg GPC组合组料重比显著低于对照组(P<0.05)，30.0 mg/kg GPC组合组与对照组无显著差异(P>0.05)。死亡率方面，各组之间比较接近，在3.33%~6.66%之间，无显著差异(P>0.05)。
1~42日龄期间，各组平均日增重在55~57 g之间，比较接近。平均日采食量方面，GPC与小麦型饲粮组合组较对照组低约8~10 g(P<0.05)。料重比方面，GPC与小麦型饲粮组合均显著低于对照组(P<0.05)，以15.0 mg/kg GPC组合组最优。各组肉仔鸡全期死亡率数值在6.66%~8.33%之间，无显著差异(P>0.05)。
2.2 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡免疫机能的 影响 2.2.1 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡免疫器官指数的影响由表3可知，21日龄时，30.0 mg/kg GPC组合组肉仔鸡胸腺指数显著高于其他组(P<0.05)，各组脾脏指数和法氏囊指数虽无显著差异(P>0.05)，但随着GPC添加水平增加有升高趋势(P> 0.05)。7.5、15.0 mg/kg GPC组合组免疫器官指数与对照组无显著差异(P>0.05)。
| 表3 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡免疫器官指数的影响 Table 3 Effects of combination between GPC and wheat-based diet on the immune organ index of broiler chicks g/kg |
42日龄时，就胸腺指数而言，30.0 mg/kg GPC组合组显著高于对照组和15.0 mg/kg GPC组合组(P<0.05)，7.5 mg/kg GPC组合组显著高于对照组(P<0.05)，但7.5、15.0 mg/kg GPC组合组差异不显著(P>0.05)。30.0 mg/kg GPC组合组脾脏指数也显著高于其他组(P<0.05)，但7.5、15.0 mg/kg GPC组合组与对照组之间差异不显著(P>0.05)。肉仔鸡法氏囊指数各组间差异不显著(P>0.05)。
2.2.2 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡外周血淋巴细胞的影响由表4可知，21日龄时，肉仔鸡T细胞和B细胞转化率各组间无显著差异(P>0.05)，但GPC与小麦型饲粮组合组均略高于对照组；7.5 mg/kg GPC组合组γδ T细胞比例有高于其他组的趋势(P>0.05)。
42日龄时，GPC与小麦型饲粮组合可促进肉仔鸡淋巴细胞增殖。7.5、15.0 mg/kg GPC组合组T细胞转化率显著高于对照组和30 mg/kg GPC组合组(P<0.05)，7.5、30.0 mg/kg GPC组合组B细胞转化率显著高于对照组和15.0 mg/kg GPC组合组(P<0.05)。外周血γδ T细胞数量各组无显著差异(P>0.05)，但7.5 mg/kg GPC组合组数值略高。
| 表4 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡外周血淋巴细胞的影响 Table 4 Effects of combination between GPC and wheat-based diet on the peripheral lymphocyte of broiler chicks |
由表5可知，就廓清指数而言，30.0 mg/kg GPC组合组显著低于对照组和7.5 mg/kg GPC组合组(P<0.05)，对照组和7.5、15.0 mg/kg GPC组合组之间无显著差异(P>0.05)，但7.5 mg/kg GPC组合组数值略高于对照组；吞噬指数方面，7.5 mg/kg GPC组合组显著高于其他组(P<0.05)，30.0 mg/kg GPC组合组显著低于其他组(P<0.05)。
| 表5 GPC与小麦型饲粮组合对42日龄肉仔鸡吞噬细胞活性的影响 Table 5 Effects of combination between GPC and wheat-based diet on phagocytic activity of broiler chicks at 42 days of age |
由表6可知，21日龄时，与对照组相比，15.0、30.0 mg/kg GPC组合组显著升高了血清溶菌酶浓度(P<0.05)；7.5 mg/kg GPC组合组一定程度上 提高了溶菌酶浓度，但与对照组相比差异不显著 (P>0.05)；GPC与小麦型饲粮组合组之间无显著差异(P>0.05)。
| 表6 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡血清溶菌酶浓度的影响 Table 6 Effects of combination between GPC and wheat-based diet serum lysozyme concentration of broiler chicks μg/mL |
42日龄时，15.0 mg/kg GPC组合组溶菌酶浓度显著高于其他组(P<0.05)，其他组间差异不显著(P>0.05)。
本试验中，GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡前期生长性能无显著影响，但显著改善生长后期的生长性能，该结果表明该组合效应发挥作用具有剂量-时间累积效应，即需要一定剂量和持续的添加时间才可发挥促生长功效。7.5、15.0 mg/kg GPC组合组促生长作用较好，30.0 mg/kg GPC组合组虽也有作用，但较前二者稍差，表明较高剂量GPC与小麦型饲粮组合不利于肉仔鸡生长，此结果可能与单宁干扰肠道营养物质吸收有关。
张变英等[29]用小麦加木聚糖酶替代玉米时发现，玉米基础饲粮组生长性能好于小麦加酶饲粮组。与前人在玉米型饲粮中添加GPC研究[10, 12, 26]不同，GPC应用于小麦型饲粮对肉仔鸡生长性能效果更好。这提示小麦型饲粮与GPC对肉仔鸡生长性能具有正组合效应。该结果可能与植物多酚和小麦饲粮基质组分相互作用调控饲粮的能量缓释有关。缪铭等[30]将小麦粉、水溶性多糖、葡萄皮提取物等混合制成缓释能量食品，可实现谷物食品餐后血糖平缓释放，并可维持饱腹感，利于机体健康。这与丁雪梅等[31]和Andersen等[21]的研究相似。本试验中GPC与小麦型饲粮的组合促使肉仔鸡采食量降低，此可能与血糖稳态的维持和饲粮缓慢消化释放葡萄糖所致的饱腹感维持有关。小麦淀粉比玉米淀粉更易促进血糖升高[20]，多酚类物质可通过调节机体胰岛细胞功能维持机体血糖平衡[32]。GPC与小麦型饲粮组合促进机体生长潜能发挥是否与上述原因有关，有待于进一步研究。
3.2 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡免疫器官发育的影响免疫器官指数是评价家禽免疫力的重要指标。王金全等[33]报道，小麦型饲粮加木聚糖酶对免疫器官发育影响不显著；张变英等[29]比较玉米型饲粮与小麦加酶饲粮也发现，二者对免疫器官指数差异不显著。这提示玉米型饲粮和小麦型饲粮可能对免疫器官发育影响差异不大。张海军等[26]在玉米型饲粮中添加GPC，发现这个组合对免疫器官指数影响不显著。但本研究发现7.5、15.0 mg/kg 2个GPC添加水平与小麦型饲粮组合对肉仔鸡42日龄免疫器官指数有提高趋势。而且30.0 mg/kg GPC组合组与对照组相比，极显著地升高了胸腺和脾脏指数。这表明，GPC与小麦型饲粮可能产生正组合效应，促进免疫器官指数的提高。
3.3 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡淋巴细胞的 影响淋巴细胞转化率是评价细胞免疫功能的重要指标之一，淋巴细胞在体外试验体系中的转化反应与增殖程度已成为衡量机体免疫功能状态的有效指标[34]。丁雪梅等[31]报道，小麦型饲粮添加木聚糖酶后，44日龄肉仔鸡淋巴细胞转化率显著升高；本试验表明，7.5 mg/kg GPC与小麦型饲粮的组合显著提高了42日龄肉仔鸡的T淋巴细胞转化率，这与该剂量组合提高了42日龄胸腺指数结果一致；同时，30.0 mg/kg GPC组合组与对照组相比，显著提高B细胞转化，这与该剂量提高脾脏指数相一致。这提示GPC与小麦型饲粮的组合对淋巴细胞转化率有正作用。同时以上结果说明不同剂量GPC与小麦型饲粮的组合，促进T淋巴细胞或B细胞增殖的效果不同，防制细胞免疫或体液免疫为主的疾病时所需GPC的剂量应有所不同，对此有待进一步探讨。但GPC与其他饲粮类型的组合效应是否对淋巴细胞也有较好效果，目前尚不得知，值得研究。
γδ T细胞是近20年人们新认识的1种T细胞亚群，其在机体出现异常变化时做出的反应比αβ T细胞更为迅速。植物多酚中的原花青素是近年来发现的能够以抗原非依赖性激活γδ T细胞的最为有效的因子[19]。本研究表明，该组合效应具有增加γδ T淋巴细胞亚群比例的趋势，与张海军等[26]在玉米型饲粮与GPC组合效应研究相似。小麦型饲粮与GPC的组合未显著影响正常饲养肉仔鸡(无应激源)外周血γδ T细胞的数量和比例，此结果与前人研究发现GPC未促进静息γδ T细胞的增殖活性相一致。Holderness等[19,35]发现GPC对处于免疫启动状态的γδ T细胞本身增殖活性并无影响，当再次受到刺激时其增殖活性才呈现数倍地增加。这提示小麦型饲粮中添加GPC可激活家禽黏膜上皮和外周血中的γδ T细胞，在受到球虫等病原体入侵时，γδ T细胞可迅速增殖，参与初级免疫。
3.4 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡吞噬细胞活性的影响单核吞噬细胞系统是机体非特异性免疫系统的重要组成部分，可迅速清除异己物质，维持机体内环境稳定。吞噬细胞可以吞噬、杀伤病菌，因此，吞噬细胞是机体免疫的第一道防线。本研究发现小麦型饲粮添加15.0 mg/kg GPC显著提高了肉仔鸡吞噬细胞吞噬能力。Park等[36]研究发现玉米型饲粮添加原花青素饲喂数周后，白莱航鸡外周血单核细胞数目显著增加；Tayer等[37]发现1.5%GPC与玉米型饲粮组合可显著提高吞噬细胞比率，调节肉鸡免疫功能。上述研究与本试验较为一致。另外，本试验30.0 mg/kg GPC组合组显著降低了廓清指数和吞噬指数，该组合可能抑制吞噬细胞活力。这提示不同剂量GPC与小麦型饲粮组合，对吞噬细胞活性影响不同。
3.5 GPC与小麦型饲粮组合对肉仔鸡血清溶菌酶浓度的影响溶菌酶是单核细胞、中性粒细胞和巨噬细胞等产生的可溶解细菌的碱性低分子蛋白质，是构成机体非特异性免疫功能因素之一，机体的溶菌酶可以催化水解大肠杆菌和葡萄球菌的糖苷键[38]。本试验表明，15.0 mg/kg GPC与小麦型饲粮组合可提高肉仔鸡血清溶菌酶的浓度。高的溶菌酶浓度提示，GPC可促进吞噬细胞活化和对抗原的呈递作用，从而增强机体的抗菌免疫作用。已有大量体外研究表明，GPC对大肠杆菌[39]和金黄色葡萄球菌等[40]多种有害微生物有抑制作用，Viveros等[12]发现肉鸡饲粮中添加葡萄渣和葡萄籽提取物，能有效调整肠道微生态区系，提高肠道的微生物学多样性。但就不同类型饲粮与GPC组合效应对肉仔鸡溶菌酶浓度的影响尚乏研究。
4 结 论肉仔鸡小麦型饲粮中添加适量GPC(7.5~15.0 mg/kg)组合效应显著，可促进生长，提高免疫器官指数和淋巴细胞转化率，增强吞噬细胞吞噬活性。
| [1] | 蒋金书.动物原虫病学[M]. 北京:中国农业大学出版社, 2000. ( 1)
|
| [2] | 宋立江, 狄莹, 石碧.植物多酚研究与利用的意义及发展趋势[J]. 化学进展, 2000, 12(2):162-170. (1)
|
| [3] | BI S, HASLAM E, HE X Q.Gelatin-polyphenol interaction[J]. Journal of American Leather Chemists Association, 1995, 89(4):98-104. (1)
|
| [4] | SHI J, YU J, POHORLY P E, KAKUDA Y.Polyphenolics in grape seeds-Biochemistry and functionality[J]. Journal of Medicinal Food, 2003, 6(4):291-299. (1)
|
| [5] | GONZÁLEZ-PARAMÁS A M, ESTEBAN-RUANO S, SANTOS-BUELGA C, et al.Flavanol content and antioxidant activity in winery byproducts[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2004, 52(2):234-238. (1)
|
| [6] | DEMIRKAYA E D E, AVCI A A A, KESIK V K V, et al.Cardioprotective roles of aged garlic extract, grape seed proanthocyandin, and hazelnut on doxorubicin-induced cardiotoxicity[J]. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, 2009, 87(8):633-640. (1)
|
| [7] | ZHANG X Y, LI W G, WU Y J, et al.Amelioration of doxorubicin-innduced myocardial oxidative stress and immunesuppression by grape seed proanthocyandins in tumourbearing mice[J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2005, 57(8):1043-1052. (1)
|
| [8] | RAY S D, WONG V, RINKOVSKY A, et al.Unique organoprotective properties of a novel IH636 grape seed proanthocyanidin extract on cadmium chloride-induced nephrotoxicity, dimethylnitrosamine (DMN)-induced splenotoxicity and MOCAP-induced neurotoxicity in mice[J]. Research Communications in Molecular Pathology and Pharmacology, 2000, 107(1/2):105-128. (1)
|
| [9] | SHAPIRA N.Nutritional approach to sun protection:a suggested complement to external strategies[J]. Nutrition Reviews, 2010, 68(2):75-86. (1)
|
| [10] | BRENES A, VIVEROS A, GOÑI I, et al.Effect of grape pomace concentrate and vitamin E on digestibility of polyphenols and antioxidant activity in chickens[J]. Poultry Science, 2008, 87(2):307-316. (2)
|
| [11] | GOÑI I, BRENES A, CENTENO C, et al.Effect of dietary grape pomace and vitamin E on growth performance, nutrient digestibility, and susceptibility to meat lipid oxidation in chickens[J]. Poultry Science, 2007, 86(3):508-516. (1)
|
| [12] | VIVEROS A, CHAMORRO S, PIZARRO M, et al.Effects of dietary polyphenol-rich grape products on intestinal microflora and gut morphology in broiler chicks[J]. Poultry Science, 2011, 90(3):566-578. (3)
|
| [13] | MCDOUGALD L R, HOFACRE C, MATHIS G, et al.Enhancement of resistance to coccidiosis and necrotic enteritis in broiler chickens by dietary muscadine pomace[J]. Avian Diseases, 2008, 52(4):646-651. (1)
|
| [14] | WANG M L, SUO X, GU J H, et al.Influence of grape seed proanthocyanidin extract in broiler chickens:effect on chicken coccidiosis and antioxidant status[J]. Poultry Science, 2008, 87(11):2273-2280. (1)
|
| [15] | BESSAY M, LE VERN Y, KERBOEUF D, et al.Changes in intestinal intra-epithelial and systemic T-cell subpopulations after an Eimeria infection in chickens:comparative study between E.acervulina and E.tenella[J]. Veterinary Research, 1996, 27(4/5):503-514. (1)
|
| [16] | SWINKELS W J, POST J, CORNELISSEN J B, et al.Immune responses to an Eimeria acervulina infection in different broilers lines[J]. Veterinary Immunology and Immunopathology, 2007, 117(1/2):26-34. (1)
|
| [17] | INAGAKI-OHARA K, CHINEN T, MATSUZAKI G, et al.Mucosal T cells bearing TCR Gammadelta play a protective role in intestinal inflammation[J]. The Journal of Immunology, 2004, 173(2):1390-1398. (1)
|
| [18] | SHIBATA K, YAMADA H, HARA H, et al.Resident Vδ1+ γδ T cells control early infiltration of Neutrophils after Escherichia coli infection via IL-17 production[J]. The Journal of Immunology, 2007, 178(7):4466-4472. (1)
|
| [19] | HOLDERNESS J, HEDGES J F, DAUGHENBAUGH K, et al.Response of Gammadelta T Cells to plant-derived tannins[J]. Critical Reviews in Immunology, 2008, 28(5):377-402. (3)
|
| [20] | 洪雁, 顾娟, 顾正彪.体内外实验测定荞麦淀粉消化特性[J]. 食品科学, 2010, 31(5):293-297. (2)
|
| [21] | HOLT S, JONG V D, FARAMUS E, et al.A bioflavonoid in sugar cane can reduce the postprandial glycaemic response to a high-GI starchy food[J]. Asia Pacific Journal of Clinical Nutrition, 2003, 12:S66. (2)
|
| [22] | HANHINEVA K, TÖRRÖNEN R, BONDIA-PONS I, et al.Impact of dietary polyphenols on carbohydrate metabolism[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2010, 11(4):1365-1402. (1)
|
| [23] | ANDERSEN G, KOEHLER P, SOMOZA V.Postprandial glucose and free fatty acid response is improved by wheat bread fortified with germinated wheat seedlings[J]. Current Topics in Nutraceutical Reseacher, 2008, 6(1):15-21. (1)
|
| [24] | TÖRRÖNEN R, KOLEHMAINEN M, SARKKINEN E, et al.Berries reduce postprandial insulin responses to wheat and rye breads in healthy women[J]. Journal of Nutrition, 2013, 143(4):430-436. (1)
|
| [25] | 卢德勋.系统动物营养学的进展和展望[J]. 饲料工业, 2013, 34(1):2-8. (1)
|
| [26] | 张海军, 徐磊, 岳洪源, 等.葡多酚对肉鸡生产性能和免疫机能的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2012, 39(3):99-103. (5)
|
| [27] | MOSMANN T.Rapid colorimetric assay for cellular growth and cytotoxicity assays[J]. Journal of Immunological Methods, 1983, 65(1/2):55-63. (1)
|
| [28] | KREUKNIET M B, NIEUWLAND M G B, VAN DER ZIJPP A J, et al.Phagocytic activity of two lines of chickens divergently selected for antibody production[J]. Veterinary Immunology and Immunopathology, 1995, 44(3/4):377-387. (1)
|
| [29] | 张变英, 王芳, 张红岗, 等.小麦替代玉米对肉仔鸡生产性能、免疫器官、血液指标和全肠食糜黏度的影响[J]. 中国畜牧兽医, 2011, 38(3):28-34. (2)
|
| [30] | 缪铭, 江波, 周榴明, 等.一种对谷物食品缓释能量特性的调控方法[P]. 中国专利:CN 102077849 B.2012-08-22. (1)
|
| [31] | 丁雪梅, 张克英.小麦-豆粕型日粮添加木聚糖酶对艾维茵肉鸡免疫指标、肠道形态和微生物菌群的影响[J]. 动物营养学报, 2009, 21(6):931-937. (2)
|
| [32] | HANHINEVA K, TÖRRÖNEN R, BONDIA-PONS I, et al.Impact of dietary polyphenols on carbohydrate metabolism[J]. International Journal of Molecular Sciences, 2010, 11(4):1365-1402. (1)
|
| [33] | 王金全, 蔡辉益, 陈宝江, 等.小麦日粮中添加木聚糖酶对肉仔鸡生产性能、免疫、消化器官发育和血液代谢激素水平的影响[J]. 河北农业大学学报, 2005, 28(1):73-77. (1)
|
| [34] | KIM H M, HAN S B, OH G T, et al.Stimulation of humoral and cell mediated immunity by polysaccharide from mushroom Phellinus linteus[J]. International Journal of Immunopharmacology, 1996, 18(5):295-303. (1)
|
| [35] | HOLDERNESS J, JACKIW L, KIMMEL E, et al.Select plant tannins induce IL-2Rα upregulation and augment cell division in gammadelta T cells[J]. The Journal of Immunology, 2007, 179(10):6468-6478. (1)
|
| [36] | PARK I J, CHA S Y, KANG M, et al.Effect of proanthocyanidin-rich extract from Pinus radiata bark on immune response of specific-pathogen-free White Leghorn chickens[J]. Poultry Science, 2011, 90(5):977-982. (1)
|
| [37] | TAYER M, NOBAKHT A, PISHJANGH J.Effects of different levels of green grape (Vitis vinifera) leaves on performance, carcass traits, blood biochemical and immunity parameters of broilers[J]. International Research Journal of Applied and Basic Sciences, 2012, 3(1):103-111. (1)
|
| [38] | MELNICK D A, NAUSEEF W M, MARKOWITZ S D, et al.Biochemical analysis and subcellular localization of a neutrophil-specific antigen, PMN-7, involved in the respiratory burst[J]. The Journal of Immunology, 1985, 134(5):3346-3355. (1)
|
| [39] | LAI Y F, YINRONG L U, AMY B H, et al.The structure of cranberry proanthocyanidins which inhibit adherence of uropathogenic P-fimbriated Escherichia coli in vitro[J]. Phytochemistry, 2000, 54(2):173-181. (1)
|
| [40] | 刘胜贵, 张祺麟, 李娟.显齿蛇葡萄提取物体外抑菌试验的研究[J]. 氨基酸和生物资源, 2006, 28(2):12-14. (1)
|