核黄素(riboflavin)又称维生素B₂，在动物机体内转化为黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)，通过参与构成各种黄素酶的辅基，在生物氧化过程中作为递氢体，与糖、脂肪和蛋白质的代谢密切相关，具有提高蛋白质沉积，提高饲料利用率，促进动物正常发育等功能^[1]。王鑫等^[2]对五龙鹅的研究表明，饲粮添加5.0 mg/kg维生素B₂对5~16周龄五龙鹅的屠宰率、胸肌率、腿肌率、腹脂率、亮度(L^*)值、红度(a^*)值、剪切力及血清甘油三酯和胆固醇含量均有显著影响。饲粮中添加维生素B₂能改善1~21日龄黄羽肉鸡的产蛋性能和免疫器官指数，提高机体的抗氧化能力^[3]。唐静等^[4]研究表明，核黄素的缺乏会显著降低北京鸭的产蛋性能及血浆抗氧化功能。Levin等^[5]的研究也表明核黄素的缺乏会导致细胞膜流动性和功能的改变，从而降低细胞应对氧化损伤的能力。目前对于水禽核黄素的试验研究较少，使得当前实际产蛋中蛋鸭核黄素的使用缺乏足够的试验依据，多数添加水平过高，造成饲料成本的增加和浪费。本试验拟依据龙岩山麻鸭产蛋特点，通过向饲粮中添加不同水平核黄素，综合比较其对蛋鸭产蛋性能、蛋品质、血液生化及抗氧化指标影响，探索核黄素在蛋鸭上的应用效果，为核黄素在产蛋上的应用提供科学依据。

试验采用单因子完全随机试验设计，将504只健康的22周龄福建龙岩山麻鸭按体重一致的原则，随机分为7个组，每组6个重复，每个重复12只。各组核黄素添加水平分别为0(Ⅰ组)、3(Ⅱ组)、6(Ⅲ组)、9(Ⅳ组)、12(Ⅴ组)、15(Ⅵ组)、18 mg/kg(Ⅶ组)。试验期12周，单笼饲养。育雏期和育成期按常规饲养和免疫程序免疫接种。试验期间每天记录07：00、14：00和20：00的温度、湿度及天气情况。

采用玉米-豆粕型基础饲粮，参照本课题组研究结果，代谢能、粗蛋白质、氨基酸及钙水平保持一致。基础饲粮组成及营养水平见表1。饲粮核黄素含量依照GB/T 14701—2002检测。

试验期间，根据采食状况调整饲料饲喂量，保证试验鸭采食量一致。准确记录试验鸭每日蛋重、产蛋数量、畸形蛋[蛋过小，形状不规则，蛋壳异常(软壳蛋、螺纹、麻壳、砂壳等)]数量和重量，计算产蛋率、平均蛋重、日采食量、料蛋比及日产蛋重。

试验进行8周后，每周采集蛋样。每个重复采集4枚蛋，用于测定蛋形指数、蛋壳强度、哈氏单位、蛋白高度、蛋黄色泽及蛋黄重。蛋形指数用数显游标卡尺量出其纵径和横径测算蛋形指数(蛋形指数=纵径/横径)；蛋壳强度、哈氏单位、蛋白高度和蛋黄色泽由ORKA全自动蛋品分析仪(EA-01，ORKA Food Technology)和强度仪(EFR-01)测定，测定在48 h内完成。分离蛋黄并称重，计算蛋黄比例。

试验进行12周后，每个重复中随机抽取2只试验鸭，翅静脉采血15 mL于抗凝采血管中，其中5 mL立即测定血液T淋巴细胞增殖率及红细胞谷胱甘肽还原酶活性系数(EGRAC)，剩余10 mL在4 ℃下3 000 r/min离心制备血浆。测定血浆中核黄素、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、皮质醇、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量及总超氧化物岐化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。采用噻唑兰(MTT)法测定血液T淋巴细胞增殖率。EGRAC参考Nichoalds^[6]的方法进行测定。血浆中核黄素含量检测参考韦京豫等^[7]的检测方法。血浆中GSH、GSSG含量及T-SOD活性采用紫外可见光分光光度仪(Biomate 5)检测，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 玉米 Corn 59.800 豆粕 Soybean meal 17.000 小麦麸 Wheat bran 3.300 纤维素 Cellulose 2.456 大豆浓缩蛋白 Soybean protein concentrate 6.300 磷酸氢钙 CaHPO4 1.512 石粉 Limestone 8.100 DL-蛋氨酸 DL-Met 0.162 L-赖氨酸盐酸盐 L-Lys·HCl 0.070 食盐 NaCl 0.300 预混料 Premix1) 1.000 合计 Total 100.000 营养水平 Nutrient levels2) 代谢能 ME/(MJ/kg) 10.890 粗蛋白质 CP 17.680 赖氨酸 Lys 0.936 蛋氨酸 Met 0.437 蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.743 钙 Ca 3.740 总磷 TP 0.700 可利用磷 AP 0.364 核黄素 Riboflavin/(mg/kg) 1.320 1)预混料为每千克饲粮提供 The premix provided the following per kg of the diet: VA 12 000 IU，VD3 2 000 IU，VE 26 mg，VK3 1.0 mg，VB1 3.0 mg，VB6 6.0 mg，VB12 0.03 mg，氯化胆碱 choline chloride 500 mg，泛酸钙 calcium pantothenate 28.5 mg，叶酸 folic acid 0.6 mg，烟酸 nicotinic acid 50 mg，生物素 biotin 0.15 mg，Fe 50 mg，Cu 10 mg，Mn 90 mg，Zn 90 mg，I 0.50 mg，Se 0.40 mg。 2)粗蛋白质和核黄素为实测值，其余营养水平为计算值。CP and riboflavin were determined values,while the other nutrient levels were calculated values.

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

试验鸭采血后放血致死。打开腹腔，取出肝脏-80 ℃冻存，乙醚抽提法测定肝脏脂肪含量。利用紫外可见光分光光度仪检测肝脏中GSH-Px、黄嘌呤氧化酶(XOD)和T-SOD活性，试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

数据采用SAS 9.12统计软件进行单因素方差分析，对F检验显著的效应采用Duncan氏法进行均数多重比较，差异显著水平为P<0.05。

如表2所示，饲粮核黄素水平对蛋鸭产蛋率、平均蛋重、日采食量、料蛋比及日产蛋重均无显著影响(P>0.05)，但随饲粮核黄素水平的增加，蛋鸭产蛋率有先升高后下降的趋势。当饲粮核黄素水平为6 mg/kg(Ⅲ组)时，产蛋率、平均蛋重、日产蛋重均达到最大值，料蛋比最低，但各组间差异不显著(P>0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭产蛋性能的影响 Table 2 Effects of dietary riboflavin level on laying performance of laying ducks in cage 项目 Items 组别 Groups SEM P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ 产蛋率 Laying rate/% 85.70 86.55 91.22 90.78 90.55 91.39 89.36 0.02 0.29 平均蛋重 Average egg weight/g 67.42 67.37 67.75 66.83 67.44 67.33 66.52 0.51 0.66 日采食量 Daily feed intake/(g/d) 145.49 146.61 147.21 146.41 147.53 147.27 146.43 0.87 0.70 料蛋比 Feed/egg 2.56 2.55 2.40 2.44 2.44 2.41 2.49 0.05 0.18 日产蛋重 Daily egg weight/(g/d) 57.74 58.23 61.82 60.69 61.04 61.53 59.47 1.30 0.19 同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same row,values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05),while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表2 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭产蛋性能的影响 Table 2 Effects of dietary riboflavin level on laying performance of laying ducks in cage

如表3所示，饲粮核黄素水平对蛋鸭蛋形指数、蛋壳强度、蛋黄重、蛋黄比例均无显著影响(P>0.05)。随饲粮核黄素水平的升高，哈氏单位和蛋白高度先升高后下降，Ⅲ组哈氏单位显著高于Ⅰ、 Ⅴ和Ⅵ组(P<0.05)，Ⅲ组蛋白高度显著高于Ⅰ、 Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ组(P<0.05)。随饲粮核黄素水平的升高蛋黄色泽呈先升高后下降的趋势(P=0.08)，以饲粮核黄素水平(X)和蛋黄色泽(Y)进行回归分析，回归方程为Y=-0.001 55X²+0.001 04X+4.661 (P=0.036 7)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭蛋品质的影响 Table 3 Effects of dietary riboflavin level on egg quality of laying ducks in cage 项目 Items 组别 Groups SEM P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ 蛋形指数 Eggshell index 1.36 1.35 1.37 1.35 1.37 1.36 1.35 0.01 0.80 蛋壳强度 Eggshell strength/kg 4.06 4.00 4.10 4.11 3.99 4.19 4.02 0.16 0.97 哈氏单位 Haugh unit 69.55b 70.84ab 75.01a 71.06ab 67.93b 68.02b 71.22ab 1.52 <0.05 蛋白高度 Albumen height/mm 5.63b 5.82ab 6.26a 5.73b 5.51b 5.42b 5.70b 0.16 <0.05 蛋黄色泽 Yolk colour 4.67b 4.83ab 4.83ab 4.89ab 5.14a 5.06a 4.99ab 0.11 0.08 蛋黄重 Yolk weight/g 22.15 22.31 22.26 22.26 22.21 22.36 21.96 0.35 0.99 蛋黄比例 Yolk rate/% 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.32 0.004 0.82

表3 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭蛋品质的影响 Table 3 Effects of dietary riboflavin level on egg quality of laying ducks in cage

如表4所示，饲粮核黄素水平对血液T淋巴细胞增殖率有显著影响(P<0.05)，随饲粮核黄素水平的升高，血液皮质醇、E2和FSH含量先升高 后降低，分别在Ⅳ、Ⅲ、Ⅲ组达到最大值，但饲粮核 黄素水平对血液皮质醇和E2含量影响不显著(P>0.05)，对血液FSH含量影响显著(P<0.05)。饲粮核黄素水平对血液核黄素含量和EGRAC影响显著(P<0.05)，EGRAC先下降后升高，且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组显著低于Ⅰ组(P<0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭血液生化指标的影响 Table 4 Effects of dietary riboflavin level on blood biochemical parameters of laying ducks in cage 项目 Items 组别 Groups SEM P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ T淋巴细胞增殖率 T lymphocyte proliferation rate/% 0.20b 0.36ab 0.34ab 0.45a 0.60a 0.48a 0.49a 0.11 <0.05 皮质醇 Cortisol/(ng/mL) 38.05 57.74 63.46 68.98 52.66 55.53 35.16 10.97 0.28 雌二醇 E2/(ng/L) 200.39 238.95 288.24 271.20 240.18 266.02 196.58 26.96 0.09 卵泡刺激素 FSH/(mIU/mL) 4.43bc 6.16abc 8.78a 8.34ab 6.64abc 8.04a 4.38c 1.35 <0.05 核黄素 Riboflavin/(mmol/L) 1.18b 2.18a 2.23a 2.42a 2.26a 2.38a 2.29a 0.28 <0.05 红细胞谷胱甘肽还原酶活性系数 EGRAC 1.19a 0.98b 1.04b 1.02b 1.12ab 1.07ab 1.12ab 0.05 <0.05

表4 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭血液生化指标的影响Table 4 Effects of dietary riboflavin level on blood biochemical parameters of laying ducks in cage

如表5所示，饲粮核黄素水平显著影响血浆及肝脏大多数抗氧化指标(P<0.05)。Ⅱ、Ⅲ组血浆T-SOD活性显著低于Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组(P<0.05)；血浆GSH-Px活性呈先升高后下降的趋势，但各组差异不显著(P>0.05)；Ⅵ组血浆GSH含量显著高于 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(P<0.05)；各组血浆GSSG含量差异不显著(P>0.05)。Ⅰ、Ⅱ组肝脏T-SOD活性显著低于Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组(P<0.05)；各组肝脏GSH-Px活性差异不显著(P>0.05)；Ⅱ、Ⅲ组肝脏XOD活性显著高于Ⅰ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ组(P<0.05)，Ⅰ组最低。

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭抗氧化指标的影响 Table 5 Effects of dietary riboflavin level on antioxidant parameters of laying ducks in cage 项目 Items 组别 Groups SEM P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Ⅶ 血浆超总氧化物歧化酶 Plasma T-SOD/(U/mL) 89.53bc 86.01c 85.43c 91.94bc 104.38a 101.04a 96.31ab 2.92 <0.01 血浆谷胱甘肽过氧化物酶 Plasma GSH-Px/(U/mL) 2 560.66 2 667.60 2 713.70 2 840.30 2 766.50 2 346.20 2 055.70 276.50 0.44 血浆还原型谷胱甘肽 Plasma GSH/(mg/L) 18.00b 15.26b 17.25b 15.13b 20.46ab 26.43a 22.07ab 2.51 <0.05 血浆氧化型谷胱甘肽 Plasma GSSG/(μmol/L) 13.95 15.9 11.99 11.67 10.16 13.34 8.26 2.06 0.21 肝脏总超氧化物歧化酶 Liver T-SOD/(U/mg prot) 248.80c 248.29c 279.09ab 261.57bc 276.13ab 298.91a 297.41a 8.75 <0.01 肝脏谷胱甘肽过氧化物酶 Liver GSH-Px/(U/mg prot) 72.27 77.71 80.85 86.03 74.70 81.48 89.67 4.49 0.10 肝脏黄嘌呤氧化酶 Liver XOD/(U/g prot) 15.91c 19.99a 19.85a 17.33bc 18.16ab 17.50bc 16.56bc 0.67 <0.01

表5 饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭抗氧化指标的影响 Table 5 Effects of dietary riboflavin level on antioxidant parameters of laying ducks in cage

本试验中饲粮核黄素水平对蛋鸭产蛋性能影响不显著，但当饲粮核黄素水平为6 mg/kg时，平均蛋重、日产蛋重均达到最大值。以往研究与本试验结果不尽相同。霍思远等^[8]研究结果表明，饲粮中添加10 mg/kg核黄素能显著提高笼养生长期蛋鸭的产蛋性能，调节激素代谢及促进免疫器官的生长发育。而在蛋种鸡方面，陈雷等^[9]在饲粮中添加10.8、14.4 mg/kg的维生素B₂对蛋鸡产蛋性能影响不显著。任转龙等^[10]对蛋鸡的研究中，随饲粮中核黄素添加水平增加(2.2、7.7、13.2 mg/kg)，平均蛋重显著提高，但对产蛋率、料蛋比和平均日采食量无显著影响。而陈艳珍^[11]研究中，每只蛋鸡在饲粮中添加核黄素1.5 mg/d能显著提高产蛋率、采食量和平均蛋重。赵凯等^[12]在京黄肉种鸡和京白蛋种鸡饲粮中每只蛋鸡添加核黄素2.5 mg/d，产蛋率和种蛋受精率较对照组有所提高，料蛋比有所下降，但差异不显著。核黄素参与了生物氧化中氢的传递，是众多氧化酶系统中的辅酶，促进了机体蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸的代谢，在一定程度上有利于机体的生长发育和产蛋性能的提高，但可能由于物种及添加水平的不同，本试验中核黄素的添加并未对蛋鸭的产蛋性能表现出显著的改善作用。

哈氏单位是用来评定蛋白品质，表示浓厚蛋白稀薄化程度的单位^[13]，是评价蛋品新鲜度的重要指标。本试验在基础饲粮中添加6 mg/kg的核黄素可以显著提高哈氏单位，而陈艳珍^[11]的研究中发现添加核黄素可使哈氏单位提高1.8%，但差异不显著。蛋黄的色泽深浅主要取决于饲粮中叶黄素、胡萝卜素等成分的多少^[14]，不同品种家禽蛋黄中类胡萝卜素的沉积情况也不同。王景成等^[15]的报道中指出，抗氧化剂对类胡萝卜素能起到保护作用。而郑诚等^[16]报道中也证明肉鸡饲粮中使用抗氧化剂不但减少了饲料叶黄素的损失，同时可显著提高肉鸡皮肤的着色效果。核黄素可能通过其抗氧化功能对蛋黄的着色成分起到保护作用，此外，蛋黄中浅黄的颜色有一部分也来自核黄素。陈雷等^[9]也在蛋鸡饲粮中添加高水平核黄素，结果表明鸡蛋中核黄素含量显著增加。因此，饲粮核黄素水平也可能通过对蛋黄中核黄素含量的调控来影响蛋黄颜色，但调控原理仍需进一步研究。

本试验结果表明，未添加核黄素组(Ⅰ组)血浆核黄素含量显著低于其他组，而EGRAC显著高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组。Frank等^{[17, 18]}研究表明，EGRAC能够反映机体核黄素状况和全血中谷胱甘肽还原酶被FAD饱和的程度，并被研究者作为评定组织中核黄素营养状况的重要生化指标。在一定范围内，EGRAC越高，表明组织核黄素的营养状况越差，反之亦然。蒋守群等^[19]研究结果与本试验结果一致，核黄素未添加组EGRAC显著高于其他各组。梁惠芳等^[20]研究结果也表明核黄素缺乏引起大鼠EGRAC升高。因此，本试验中未添加核黄素组核黄素营养状况最差，而其他各组间差异不显著，核黄素添加水平不低于3 mg/kg即可维持蛋鸭核黄素营养需要。张建海等^[21]研究表明，添加核黄素可提高机体的抗感染能力和免疫力，并可提高肉仔鸡产蛋性能。这与本试验中T淋巴细胞增殖率随核黄素添加水平的升高而增加的结果相一致。核黄素在细胞内参与维持GSH含量，当核黄素缺乏时，肝细胞线粒体内谷胱甘肽还原酶活性下降，使得生物膜中不饱和脂肪酸发生氧化，破坏生物膜完整性，进而影响细胞免疫功能。本试验中饲粮核黄素水平可能对机体免疫功能有一定影响，但仍需进一步研究。

本试验中核黄素的添加显著提高了血液及肝脏中抗氧化指标，表明核黄素的添加显著提高了蛋鸭机体的抗氧化能力。以往众多研究也得出了相同的试验结果。任延铭等^[22]对育成期蛋鸭研究表明，饲粮核黄素水平的增加显著降低了过氧化氢酶(CAT)活性，但对总抗氧化能力(T-AOC)无显著影响。王艳辉等^[23]研究报道，饲粮中添加10～20 mg/kg核黄素显著提高蛋雏鸭血浆中T-AOC、T-SOD、GSH-Px活性和肝脏CAT、GSH-Px活性，显著降低丙二醛(MDA)含量。蒋守群等^[19]研究表明，饲粮添加核黄素显著提高血浆中谷胱甘肽含量，改善试验鸡的产蛋性能和免疫器官指数，提高机体的抗氧化能力。核黄素可以保护组织以免受到氧化损伤^[24]，是GSH-Px的辅基成分，参与细胞内GSH和GSSG之间的转化^[5]，维持细胞中GSH含量的相对稳定，维持细胞正常抗氧化功能。因此，核黄素缺乏可能导致机体抗氧化功能受到抑制，本试验中饲粮中核黄素添加水平不低于12 mg/kg时，可以获得较好的抗氧化功能。

① 饲粮核黄素水平为6 mg/kg时，蛋鸭可以获得较好的产蛋率、日产蛋重、料蛋比及蛋品质。

② 提高饲粮核黄素水平可显著提高蛋鸭机体抗氧化能力，且添加水平不低于12 mg/kg时，抗氧化能力较好。