大豆黄酮具有弱的雌激素和抗雌激素作用，其活性组分染料木素和大豆黄酮在结构上与哺乳动物的雌激素β-雌二醇结构相似，都具有雌激素的活性基团——二酚羟基，它可与生物体内雌激素受体(ER)结合，诱导雌激素调控基因的表达，刺激细胞增殖和生长^[1]。同时，大豆黄酮还具有抗氧化、抗癌和提高机体免疫力等生物学功能，大豆黄酮和染料木素为多酚类物质，可与自由基反应使之生成相应的离子和分子，抑制自由基的产生，终止自由基的连锁反应；大豆黄酮和染料木素也可通过调节体内抗氧化酶活性影响机体抗氧化性能和免疫力^[2]。如皋黄鸡又称如皋鸡，是2009年10月通过国家畜禽遗传资源委员会审定的地方鸡种，产蛋率在21~24周龄急剧上升，31周龄达产蛋高峰，70%以上产蛋率可维持16周^[3]。产蛋后期蛋鸡体内雌激素水平下降，因此研究大豆黄酮对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响具有重要意义。在蛋鸡饲粮中添加大豆黄酮能够提高蛋鸡、蛋鸭、鹌鹑的产蛋率，降低料蛋比，增加平均蛋重等^{[4, 5, 6]}。本课题组顾欢等^[7]和蔡娟等^[8]研究发现产蛋后期蛋鸡饲粮中添加50 mg/kg大豆黄酮能极显著提高产蛋率，降低料蛋比，并能显著提高了蛋鸡血清总蛋白、磷、钙、总胆固醇含量。但大豆黄酮在地方蛋鸡上应用的研究报道较少，且有关大豆黄酮对繁殖器官发育和种蛋孵化率影响的研究鲜有报道。因此，本研究以45周龄如皋黄鸡蛋鸡为试验动物，在饲粮中添加不同剂量大豆黄酮，分别测定蛋鸡生产性能、正试期第12周末的繁殖器官发育状况以及正试期第13~14周龄的种蛋孵化率，旨在探讨饲粮中添加不同剂量大豆黄酮对产蛋后期蛋鸡生产性能、繁殖器官发育和种蛋孵化率的影响。 1 材料和方法 1.1 试验材料与动物

试验材料为大豆黄酮(4，7-二羟基异黄酮>97.5%)，白色粉末，四川广汉生化制品有限公司提供。试验动物为42周龄体况良好、产蛋率接近的如皋黄鸡。 1.2 试验设计

试验选用42周龄体况良好、产蛋率接近的健康如皋黄鸡蛋鸡2 448只，随机分成4个组，每个组6个重复，每个重复102只。对照组饲喂基础饲粮，试验组饲喂在基础饲粮中分别添加50、100和200 mg/kg大豆黄酮的试验饲粮，各组饲粮中大豆黄酮含量分别为59.78、118.27、152.77、247.26 mg/kg(测定值)。 1.3 试验饲粮与饲养管理

参照NRC(1994)标准配制饲粮，基础饲粮组成及营养水平见表1。试验鸡笼养，每笼2只，自由采食和饮水，常规饲养管理。试验分预试期和正试期，其中预试期2周，正试期14周(45~58周龄)。 1.4 测定指标和方法 1.4.1 生产性能

每天09:00准时收蛋，以重复为单位准确记录产蛋数和蛋重。每周末定时结料、称重，统计各重复的实际耗料量。根据饲养试验记录，整理统计各试验组产蛋率、平均蛋重(各重复所有鸡蛋的平均重量)、平均日产蛋重(平均每只鸡每日的产蛋重)、平均日采食量(平均每只鸡每日的采食量)和料蛋比。 1.4.2 繁殖器官发育

正试期第12周末，将鸡颈部放血致死，测量输卵管长度，称量输卵管、卵巢基部、排卵前卵泡、小黄卵泡和大白卵泡等脏器重量并计算各器官与体重的比值；量取输卵管长度；统计排卵前卵泡(直径>10 mm)、小黄卵泡(直径4~10 mm)、大白卵泡[直径2~(<4 mm)]数量。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 玉米 Corn 65.50 豆粕 Soybean meal 24.00 贝壳粉 Shell powder 5.80 石粉 Limestone 1.78 磷酸氢钙 CaHPO4 1.30 食盐 NaCl 0.30 50%氯化胆碱 50% choline chloride 0.20 DL-蛋氨酸 DL-Met 0.12 预混料 Premix 1.00 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels 代谢能 ME/(MJ/kg) 11.46 粗蛋白质 CP 16.13 钙 Ca 3.32 有效磷 AP 0.33 蛋氨酸 Met 0.33 赖氨酸 Lys 0.76 预混料可为每千克饲粮提供The premix provides the following per kg of the diet：VA 7 715 IU，VD3 2 755 IU，VE 8.8 IU，VK 2.2 mg，VB12 0.01 mg，VB2 4.41 mg，VB3 5.51 mg，VB 0.55 mg，烟酸 nicotinic acid 19.8 mg，叶酸 folic acid 0.28 mg，Mn 50 mg，Fe 25 mg，Cu 2.5 mg，Zn 50 mg，I 1.0 mg，Se 0.15 mg。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

1.4.3 孵化性能

正试期第12周末开始，输精，取14 d种蛋孵化，测定受精率、受精蛋孵化率、入孵蛋孵化率、健雏率等指标。 1.5 统计分析

数据经Excel 2003整理后，用SPSS 15.0统计软件进行分析，单因素方差分析(one-way ANOVA)检测组间差异显著性。P<0.05表示差异显著。 2 结 果 2.1 大豆黄酮对45~56周龄蛋鸡生产性能的影响

由表2可知，各试验组45~56周龄蛋鸡死亡率低于对照组，但未达到显著水平(P>0.05)。试验全期未见鸡只出现不适状况。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 大豆黄酮对45~56周龄蛋鸡死亡率的影响 Table 2 Effect of daidzein on mortality of laying hens from 45 to 56 weeks of age % 项目 Item 大豆黄酮添加水平 Daidzein supplemental level/(mg/kg) SEM P值 P-value 0 50 100 200 死亡率 Mortality 3.92 1.63 2.61 2.61 0.43 0.318 同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。 In the same row,values with the same or no letter superscripts means no significant difference (P>0.05),while with different letter superscripts means significant difference (P<0.05). The same as below.

表2 大豆黄酮对45~56周龄蛋鸡死亡率的影响 Table 2 Effect of daidzein on mortality of laying hens from 45 to 56 weeks of age

由表3可知，各试验组产蛋率、平均蛋重、平均日产蛋重、平均日采食量和料蛋比与对照组相 比较差异均不显著(P>0.05)。由此可见，在本试 验中，饲粮中添加50、100和200 mg/kg大豆黄酮不影响45~56周龄蛋鸡的生产性能。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 大豆黄酮对45~56周龄蛋鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of daidzein on performance of laying hens from 45 to 56 weeks of age 项目 Items 大豆黄酮添加水平 Daidzein supplemental level/(mg/kg) SEM P值 P-value 0 50 100 200 产蛋率 Laying rate/% 68.80 69.42 66.77 67.27 0.69 0.509 平均蛋重 Average egg weight/g 50.94 50.68 51.15 50.82 0.07 0.139 平均日产蛋重 Average daily egg weight/(g/只) 35.04 35.19 34.15 34.19 0.34 0.621 平均日采食量 Average daily feed intake/(g/只) 92.60 91.52 91.88 92.12 0.20 0.291 料蛋比 Ratio of feed to egg 2.65 2.61 2.69 2.70 0.03 0.584

表3 大豆黄酮对45~56周龄蛋鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of daidzein on performance of laying hens from 45 to 56 weeks of age

由表4可知，正试期第12周末，各试验组卵巢 指数和排卵前卵泡指数显著低于对照组(P<0.05)， 试验组组间比较差异不显著(P>0.05)；试验组其他繁殖器官发育指标与对照组相比较差异不显著(P>0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 大豆黄酮对56周龄蛋鸡繁殖器官发育的影响 Table 4 Effects of daidzein on reproductive organs development of laying hens at 56 weeks of age 项目 Items 大豆黄酮添加水平 Daidzein supplemental level/ (mg/kg) SEM P值 P-value 0 50 100 200 输卵管长度 Oviduct length/cm 60.75 64.53 59.55 60.29 0.64 0.016 输卵管长度体重比 Ratio of oviduct length to weight/(cm/kg) 44.20 45.34 42.16 43.17 0.53 0.213 排卵前卵泡数 Preovulatory follicle count 4.75 4.75 4.20 4.83 0.12 0.263 小黄卵泡数 Small yellow follicle count 18.92 17.83 14.70 17.50 0.85 0.403 大白卵泡数 Big white follicle count 24.33 24.83 21.90 22.00 1.35 0.833 输卵管指数 Oviduct index/% 3.09 3.18 2.80 3.09 0.06 0.188 卵巢指数 Ovary index/% 3.21a 2.54b 2.57b 2.47b 0.10 0.021 卵巢基部指数 Ovary base index/% 0.294 0.255 0.260 0.276 0.009 0.499 排卵前卵泡指数 Preovulatory follicle index/% 2.73a 2.12b 2.16b 2.05b 0.09 0.019 小黄卵泡指数 Small yellow follicle index/% 0.143 0.129 0.132 0.132 0.006 0.877 大白卵泡指数 Big white follicle index/% 0.019 0.020 0.019 0.018 0.001 0.960

表4 大豆黄酮对56周龄蛋鸡繁殖器官发育的影响 Table 4 Effects of daidzein on reproductive organs development of laying hens at 56 weeks of age

由表5可知，正试期13~14周，各试验组受精 蛋孵化率显著高于对照组(P<0.05)，50、200 mg/kg 大豆黄酮组的入孵蛋孵化率均显著高于对照组(P<0.05)，各试验组蛋鸡种蛋受精率和健雏率与对照组相比较差异不显著(P>0.05)。

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 大豆黄酮对57~58周龄蛋鸡鸡蛋受精率和孵化率的影响 Table 5 Effects of daidzein on egg fertility and hatchability of laying hens from 57 to 58 weeks of age % 项目 Items 大豆黄酮添加水平 Daidzein supplemental level/(mg/kg) SEM P值 P-value 0 50 100 200 受精率 Fertility 93.97 94.90 93.95 95.78 0.32 0.239 受精蛋孵化率 Hatchability of fertile eggs 88.08c 92.12a 90.77b 91.88ab 0.57 0.047 入孵蛋孵化率 Hatchability of setting eggs 83.63b 87.67a 85.74ab 88.46a 0.67 0.047 健雏率 Percentage of healthy chicks 99.88 99.55 99.15 99.09 0.13 0.134

表5 大豆黄酮对57~58周龄蛋鸡鸡蛋受精率和孵化率的影响 Table 5 Effects of daidzein on egg fertility and hatchability of laying hens from 57 to 58 weeks of age

大豆黄酮具有抗氧化、抗癌、提高机体免疫力等生物学功能，其作为一种植物雌激素能够提高蛋鸡、蛋鸭、鹌鹑的产蛋率^{[4, 5, 6]}。产蛋后期蛋鸡由于机体内源雌激素水平下降，大豆黄酮添加后效果尤为明显，周玉传等^[9]在415日龄绍兴鸭饲粮中添加5 mg/kg大豆黄酮，发现试验鸭产蛋率极显著提高；赵凤岐等^[10]在44周龄海兰褐蛋鸡饲粮中添加10和15 mg/kg大豆黄酮，发现试验蛋鸡产蛋率极显著提高；Ni等^[11]、Liu等^[12]也发现，在蛋鸡饲粮中添加10 mg/kg大豆黄酮能显著提高产蛋率；顾欢等^[7]在56周龄海兰褐蛋鸡饲粮中添加10、50和100 mg/kg大豆黄酮，发现50 mg/kg大豆黄酮组能显著提高蛋鸡产蛋率，10和100 mg/kg大豆黄酮组对蛋鸡产蛋率无显著影响。本研究结果表明，在如皋黄鸡饲粮中添加50、100和200 mg/kg大豆黄酮对45~56周龄蛋鸡产蛋率、平均蛋重、平均日产蛋重、平均日采食量和料蛋比均无显著影响。一方面可能由于，如皋黄鸡经扬州翔龙禽业发展有限公司引进后，对其产蛋性能进行了5个世代的选育，于2009年10月通过国家畜禽遗传资源委员会审定的地方鸡种^[3]，进化选育后其激素水平等比较稳定，繁殖器官发育相对成熟，大豆黄酮的可调控程度相对较低，品种特点决定其产蛋率受大豆黄酮(植物雌激素)的影响较小；另一方面可能由于，本研究中大豆黄酮的添加水平过高，适宜剂量大豆黄酮具有雌激素受体激动剂作用，增强雌激素分泌，上调了促性腺激素受体mRNA的表达量，促进了产蛋后期蛋鸡卵泡的发育^{[12, 13]}，而过高剂量的大豆黄酮起抗雌激素的作用，与雌激素竞争雌激素受体，降低雌激素分泌。本试验设计基于本课题组顾欢等^[7]和蔡娟等^[8]研究报道，50 mg/kg大豆黄酮组能显著提高产蛋后期海兰褐蛋鸡的产蛋率，提出假设即50 mg/kg大豆黄酮组能显著提高地方蛋鸡(如皋黄鸡)产蛋率，因此未设定低剂量试验组(小于50 mg/kg大豆黄酮组)。为进一步阐明本研究结果出现的原因，本课题组将设计试验，进一步研究低剂量大豆黄酮(小于50 mg/kg)对地方蛋鸡产蛋性能的影响。 3.2 大豆黄酮对56周龄蛋鸡繁殖器官发育的影响

雌禽生殖系统包括卵巢和输卵管2部分，卵巢包括基部和大量的卵泡，卵泡发育与产蛋性能密切相关^[14]。蔡娟等^[8]研究发现，大豆黄酮对56周龄蛋鸡排卵前卵泡数影响不显著；刘红云^[1]研究也发现，大豆黄酮对52周龄伊莎蛋鸡排卵前卵泡数影响不显著，这与本试验结果一致；但本研究结果中，试验组蛋鸡卵巢指数和排卵前卵泡指数显著低于对照组，这可能是由于排卵前卵泡已进入排卵队伍，数量相对恒定(4~5个)，每天其中1个排卵前卵泡进入输卵管形成鸡蛋，但由于大豆黄酮的添加，排卵前卵泡的发育时间受到影响，卵泡指数降低。刘红云^[1]研究结果显示大豆黄酮(10 mg/kg)显著增加了小黄卵泡数和大白卵泡数，而本试验结果与蔡娟等^[8]研究报道相同，发现小黄卵泡数和大白卵泡数未受大豆黄酮显著影响。这可能是因为用于本试验的蛋鸡为如皋黄鸡，由于持续定向选择其40周龄产蛋数，促进了性状有利基因的纯和与固定，减少了遗传方差，降低了遗传力^[3]，其开产日龄、开产体重、开产蛋重、40周龄产蛋数的遗传力均低于白耳鸡相应性状的遗传力^[15]，其卵泡发育相对成熟，受大豆黄酮的可调控程度相对较低。小黄卵泡数和大白卵泡数作为影响产蛋性能的重要因素，本试验中其数量未受大豆黄酮影响，因此未改变试验期蛋鸡产蛋率。

禽类输卵管不仅是运送卵子和受精的场所，同时也是形成蛋的卵白、壳膜、蛋壳、角质薄膜的场所^[14]。蔡娟等^[8]研究发现，大豆黄酮对输卵管长度无显著影响，但显著降低输卵管指数，显著提高了产蛋率。本研究发现，输卵管长度、长度体重比均未受大豆黄酮影响，这也可能因为用于本试验的蛋鸡为如皋黄鸡，其输卵管发育相对成熟，受大豆黄酮的可调控程度相对较低。 3.3 大豆黄酮对57~58周龄蛋鸡鸡蛋受精率和孵化率的影响

大豆黄酮对蛋鸡鸡蛋受精率和孵化率影响的研究报道极少。本研究发现，添加大豆黄酮能显著增加57~58周龄如皋黄鸡的受精蛋孵化率，添加50和200 mg/kg大豆黄酮能显著增加入孵蛋孵化率。这可能由于大豆黄酮具有抗氧化、增强免疫以及雌激素作用等功能有关，适宜剂量大豆黄酮具有雌激素受体激动剂，增强雌激素作用，上调了促性腺激素受体mRNA的表达量，能够促进了产蛋后期蛋鸡卵泡的发育^{[12, 13]}，大豆黄酮调控种蛋孵化的机制有待进一步研究。 4 结 论

① 本试验条件下，饲粮中添加50、100、200 mg/kg大豆黄酮，能显著提高蛋鸡受精蛋孵化率和入孵蛋孵化率。

② 大豆黄酮对45~56周龄如皋黄鸡生产性能和繁殖器官发育无不良影响。