蛋氨酸是水产动物必需氨基酸中唯一的含硫氨基酸，是体内活性甲基和硫的主要来源。其参与水生动物体内甲基转移和肾上腺素、胆碱、肌醇的合成以及肝脏内磷脂的代谢，促进细胞增殖和动物生长。蛋氨酸在体内代谢生成聚胺，聚胺对动物细胞增殖具有非常重要的促进作用，同时还参与精胺、半精胺等以及与细胞分裂有关的化合物的合成^[1]。晶体蛋氨酸包括L-蛋氨酸和DL-蛋氨酸2种构型，其中L-蛋氨酸具有生物活性^[2]。近年来，由于鱼粉匮乏且价格飙升，水产饲料成本大幅上升，在饲料中寻求其他蛋白质源替代鱼粉已成为研究热点。对水产动物来说，大多数植物性蛋白质源中的蛋氨酸往往是限制性氨基酸^[3]，蛋氨酸的缺乏直接引起配合饲料中氨基酸不平衡，导致配合饲料利用率的降低以及蛋白质的浪费，甚至影响水产动物的健康。有研究表明，在配合饲料中添加蛋氨酸可提高鱼类的生长性能，降低饲料系数^{[4, 5]}。以大豆蛋白浓缩物完全替代鱼粉饲喂虹鳟的研究表明，饲料中添加蛋氨酸能有效改善虹鳟的生长性能，减少氮损失，磷排泄也得到了改善^[6]。在饲料中补充DL-蛋氨酸的研究表明，异育银鲫可有效利用外源DL-蛋氨酸，显著提高异育银鲫幼鱼的特定生长率和蛋白质沉积率^[7]，蛋氨酸在动物体内可以很快转换成胱氨酸，胱氨酸具有保肝解毒功能。此外，蛋氨酸不仅能促进水产动物的生长、发育，还能防止脂肪肝、花肝等疾病的产生，增加脂肪消化率^{[8, 9]}。

凡纳滨对虾(Litopenarus vannamei)，也称万氏对虾、南美白对虾、白肢虾，自20世纪90年代开始于我国各地开展人工养殖^[10]，具有生长快、适应性强、抗病能力强、对饲料营养要求低等优点，是当今世界养殖虾类产量最高的三大品种之一^[11]。全国海水养殖2012年凡纳滨对虾产量为762 494 t，2011年为665 588 t，同比增长14.56%；全国淡水养殖2012年凡纳滨对虾产量为690 474 t，2011年为659 961 t，同比增长4.66%^[12]。目前，已有报道指出低盐度(0.50～1.50 g/L)下凡纳滨对虾的蛋氨酸需要量是0.91%(占饲料蛋白质的2.52%)^[13]，而斑节对虾(Penaeus monodon)的蛋氨酸需要量是0.9%(占饲料蛋白质的2.4%)^[14]，小长臂虾(Palaemonetes varians)的蛋氨酸需要量是0.9%～1.1%(占饲料蛋白质的2.0%～2.4%)^[15]，克氏原螯虾的蛋氨酸需要量是0.94%(占饲料蛋白质的3.36%)^[16]。但尚未有正常盐度下凡纳滨对虾蛋氨酸需要量的相关报道。因此，本试验设计在相同的基础饲料中添加6个不同水平的蛋氨酸来饲喂凡纳滨对虾，以期获得饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾生长性能、营养成分、血液指标、氨基酸代谢酶活力以及抗氧化能力的影响，从而确定凡纳滨对虾幼虾的蛋氨酸需要量，为凡纳滨对虾氨基酸需要量的进一步研究提供科学依据，以更好地指导实际生产配制合理的凡纳滨对虾配合饲料。

以鱼粉和小麦蛋白粉为蛋白质源，鱼油和豆油为脂肪源配制6种等氮等脂的试验饲料(含粗蛋白质41.0%，粗脂肪7.5%)，饲料中蛋氨酸的添加水平分别为0、0.15%、0.30%、0.45%、0.60%、0.75%，实测蛋氨酸含量分别为0.59%、0.69%、0.86%、0.99%、1.10%、1.25%。试验饲料组成及营养水平见表1。饲料原料均粉碎后过80目筛，依据配方准确称量饲料原料，氨基酸及微量添加成分采取逐级扩大法混合均匀，然后添加豆油、鱼油和大豆卵磷脂以及30%左右的纯水，混匀后压制成粒径为1.0和1.5 mm的颗粒饲料。自然风干至含水量约10%，分组装入封口袋置于-20 ℃冷冻保存备用。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) % 项目Items 蛋氨酸含量 Met content/% 0.59 0.69 0.86 0.99 1.10 1.25 原料 Ingredients 小麦蛋白粉 Wheat gluten meal 15.00 15.00 15.00 15.00 15.00 15.00 鱼粉 Fish meal 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 糊精 Dextrin 35.00 35.00 35.00 35.00 35.00 35.00 鱼油 Fish oil 1.33 1.33 1.33 1.33 1.33 1.33 豆油 Soybean oil 1.33 1.33 1.33 1.33 1.33 1.33 必需氨基酸混合物 Essential amino acid mixture1) 4.65 4.65 4.65 4.65 4.65 4.65 非必需氨基酸混合物 Non-essential amino acid mixture2) 9.19 9.09 9.00 8.90 8.80 8.70 维生素预混料 Vitamin premix3) 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 矿物质预混料 Mineral premix4) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 氯化胆碱 Choline chloride 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 虾头粉 Shrimp head powder 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 纤维素 Cellulose 3.17 3.12 3.06 3.01 2.96 2.91 大豆卵磷脂 Soybean lecithin 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 维生素C磷酸盐 Vitamin C phosphate 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 晶体蛋氨酸 Crystalline Met 0.15 0.30 0.45 0.60 0.75 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels 干物质 DM 90.68 90.04 90.08 90.23 90.62 90.09 粗蛋白质 CP 41.07 41.14 41.37 41.06 41.74 41.01 粗脂肪 EE 7.54 7.52 7.50 7.51 7.50 7.52 粗灰分 Ash 7.50 7.69 7.38 7.70 7.83 7.67 蛋氨酸 Met 0.59 0.69 0.86 0.99 1.10 1.25 1)必需氨基酸混合物(占饲料的百分比)Essential amino acid mixture (percentage of diet)：精氨酸 Arg 1.214 4%，组氨酸 His 0.279 4%，异亮氨酸 Ile 0.340 9%，亮氨酸 Leu 0.417 3%，赖氨酸 Lys 0.935 9%，苯丙氨酸 Phe 0.451 7%，苏氨酸 Thr 0.690 0%，色氨酸 Trp 0.101 5%，缬氨酸 Val 0.172 0%。 2)非必需氨基酸混合物Non-essential amino acid mixture：天冬氨酸 Asp ∶ 甘氨酸 Gly=1 ∶ 1。 3)维生素预混料为每千克饲料提供Vitamin premix provided the following per kg of diets：泛酸钙 calcium pantothenate 120 mg，肌醇 inositol 200 mg，VK 60 mg，烟酸 nicotinic acid 100 mg，吡哆醇 pyridoxine 40 mg，VB2 50 mg，VB1 60 mg，VE 100 mg，VB12 0.1 mg，生物素 biotin 6 mg，叶酸 folic acid 10 mg，VA 5 000 IU，VD3 2 000 IU。 4)矿物质预混料为每千克饲料提供Mineral premix provided the following per kg of diets：C6H10CaO6·5H2O (99.5%) 77.83 mg，KCl (99.5%) 191.62 mg，MnSO4·7H2O (99%) 614.48 mg，NaCl (99.5%) 76.69 mg，FeC6H5O7·5H2O 6.857 1 mg，CuSO4·5H2O 10.204 1 mg，ZnSO4·7H2O 9.275 4 mg，C10H22N2O4S2Co 5.0 mg，MnSO4·H2O 6.289 3 mg，KI (0.99%) 1.703 4 mg，Na2SeO3 0.5 mg。

表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

饲养试验于广东恒兴集团国家(863)计划海水养殖种子工程南方基地营养车间进行，试验用凡纳滨对虾幼虾购自广东恒兴集团虾苗厂。养殖试验开始前，虾苗用商品饲料暂养2周。分组前停食24 h，挑选规格基本一致的个体720尾(初始体重约为0.34 g)，随机分放在500 L的玻璃钢养殖桶中，每桶放养40尾。每种试验饲料随机投喂3个养殖桶，每天投喂4次，投喂时间分别为07:00、12:00、17:00及22:00，日投喂量为其体重的6%～9%，早、晚投喂量为总投喂量的60%，投喂1 h后观察其摄食情况，以调整投喂量。试验用水采用砂滤的天然海水，由于对虾喜爱安静的环境，本试验采用静水养殖模式，前期每隔2 d换水1次，中、后期每天换水1次。试验期间，不间断充气以保持足够的溶解氧浓度(>6.0 mg/L)，水温为26～31 ℃，pH为7.6～7.8，盐度为29～31 g/L，养殖试验持续8周。

试验结束前24 h停止投喂。取样前，以每个养殖桶为单位称重并计数。每个养殖桶随机抽取5～8尾虾用于全虾营养成分分析，另随机抽取10尾虾，去除虾头、虾尾及虾壳后余下纯虾肉用于肌肉营养成分分析，分析方法参照AOAC(1995)^[17]。饲料及虾体样品中水分含量采用105 ℃常压干燥法测定；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法(总氮×6.25)测定；粗脂肪含量采用索氏抽提法测定，提取用有机试剂为石油醚；粗灰分含量采用550 ℃高温炉灼烧法测定。饲料的蛋氨酸含量采用日立L-8900氨基酸自动分析仪测定，具体操作方法参照Unnikrishnan等^[18]。

每个养殖桶另随机抽取5～8尾虾，用1 mL注射器从围心腔取血，置于1.5 mL的Eppendorf管中，4 ℃冰箱中静置过夜后5 000 r/min离心10 min，取上清液保存于-80 ℃备用，用以测定血清中总蛋白(total protein,TP)、尿素氮(urea nitrogen,UN)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)含量以及天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)、丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、精氨酸酶(arginase，ARG)活力。总蛋白、尿素氮、甘油三酯、总胆固醇含量由湛江市农垦医院使用日立7600-110型全自动生化分析仪进行检测；天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、超氧化物歧化酶活力采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定，试剂配制、样品前处理及操作方法严格按照操作说明书执行；精氨酸酶活力采用典型的夹心法酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定，基于经典酶联夹心技术原理，其试剂配制、样品前处理及操作办法严格按照操作说明书执行[预先包被的抗体为多克隆抗体，检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，磷酸盐缓冲液(PBS)或三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(TBS)洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关]。

蛋氨酸溶失率测定参照Cruz-Surez等^[19]的方法。随机选取1种试验饲料，称取5 g置于盛有500 mL养殖试验海水的烧杯中，分别浸泡30、60和90 min后取出烘干称重，粉碎测其蛋氨酸含量。

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析，先对数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，组间若有显著差异，再采用Duncan氏法进行多重比较，P<0.05表示差异显著。

由表2可知，凡纳滨对虾幼虾的成活率不受饲料中蛋氨酸含量的显著影响(P>0.05)。凡纳滨对虾幼虾的增重率、特定生长率、饲料效率和蛋白质效率随饲料中蛋氨酸含量的增加先升高后降低，当饲料中蛋氨酸含量为0.86%时上述指标达到最高值，并显著高于饲料中蛋氨酸含量为1.25%时(P<0.05)。饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾蛋白质沉积率的影响不显著(P>0.05)。以特定生长率为指标，通过二次回归模型得出凡纳滨对虾幼虾的蛋氨酸需要量为0.89%(图1)，占饲料蛋白质的2.16%。饲料中蛋氨酸的溶失率见表3，通过对蛋氨酸含量为0.99%的试验饲料进行分析，得知蛋氨酸在海水中浸泡30、60和90 min后的溶失率分别为11.41%、14.35%和18.46%。

图1(Figure 1)

Fig. 1

图1 饲料中蛋氨酸含量与凡纳滨对虾幼虾特定生长率的关系 Fig. 1 Relationship between dietary Met content and SGR of juvenile Pacific white shrimp

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾生长性能的影响(平均值±标准差) Table 2 Effects of dietary Met content on growth performance of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3) 项目Items 蛋氨酸含量 Met content/% 0.59 0.69 0.86 0.99 1.10 1.25 初始体重 IBW/g 0.340±0.002 0.340±0.001 0.339±0.002 0.340±0.003 0.339±0.001 0.339±0.001 终末体重 FBW/g 7.93±0.15ab 7.97±0.21ab 8.20±0.09b 8.10±0.03b 8.02±0.07ab 7.74±0.20a 增重率 WGR/% 2 233.33±27.25ab 2 242.55±59.43ab 2 317.94±23.86b 2 285.22±15.10ab 2 266.21±24.67ab 2 188.76±51.03a 成活率 SR/% 99.17±1.40 100.00±0.00 99.17±1.40 100.00±0.00 100.00±0.00 100.00±0.00 特定生长率 SGR/(%/d) 5.62±0.02ab 5.63±0.05ab 5.69±0.02b 5.66±0.01ab 5.65±0.02ab 5.59±0.04a 饲料效率 FE 0.68±0.01ab 0.68±0.02ab 0.70±0.00b 0.68±0.02ab 0.68±0.02ab 0.65±0.02a 蛋白质效率 PER/% 1.51±0.02ab 1.51±0.04ab 1.58±0.01b 1.52±0.04ab 1.51±0.05ab 1.44±0.06a 蛋白质沉积率 PPV/% 28.46±0.57 28.32±0.60 29.51±0.31 29.25±0.12 27.80±0.26 27.65±0.73 同行数据肩标不同字母表示有显著差异(P<0.05)。 Values in the same row with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05).

表2 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾生长性能的影响(平均值±标准差) Table 2 Effects of dietary Met content on growth performance of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3)

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 在海水中浸泡不同时间后蛋氨酸的溶失率(干物质基础) Table 3 Met dissolve-loss rate in seawater with different time (DM basis) % 项目Items 时间 Time/min 0 30 60 90 蛋氨酸含量 Met content 0.99 0.98 0.97 0.92 失重率 Weight loss rate 10.20 12.50 12.59 溶失率 Dissolve-loss rate 11.41 14.35 18.46

表3 在海水中浸泡不同时间后蛋氨酸的溶失率(干物质基础) Table 3 Met dissolve-loss rate in seawater with different time (DM basis)

由表4可知，饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾的全虾营养成分无显著影响(P>0.05)，对其肌肉水分、粗蛋白质、粗灰分含量亦无显著影响(P>0.05)，但显著影响肌肉粗脂肪含量(P<0.05)，表现为0.86%和0.99%组显著高于其他各组(P<0.05)，并与特定生长率呈正相关关系。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾全虾及肌肉营养成分的影响(平均值±标准差) Table 4 Effects of dietary Met content on nutritional components in whole body and muscle of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3) % 项目Items 蛋氨酸含量 Met content/% 0.59 0.69 0.86 0.99 1.10 1.25 全虾 Whole body 水分 Moisture 74.29±0.77 74.50±0.23 74.29±0.40 74.30±0.44 73.76±0.52 74.88±1.04 粗蛋白质 CP 18.48±0.03 18.49±0.03 18.37±0.31 18.64±0.09 18.49±0.16 18.63±0.02 粗脂肪 EE 2.53±0.25 2.45±0.03 2.50±0.10 2.33±0.08 2.66±0.15 2.39±0.37 粗灰分 Ash 3.54±0.14 3.75±0.08 3.89±0.40 3.72±0.18 3.61±0.01 3.82±0.21 肌肉 Muscle 水分 Moisture 73.87±0.02 74.15±0.56 74.10±0.86 74.38±0.09 73.71±0.33 74.30±0.24 粗蛋白质 CP 22.99±0.21 22.92±0.04 23.15±0.12 23.23±0.17 22.92±0.20 22.99±0.06 粗脂肪 EE 0.90±0.02a 0.95±0.11a 1.11±0.08b 1.10±0.03b 0.95±0.07a 0.88±0.01a 粗灰分 Ash 1.37±0.04 1.35±0.00 1.36±0.02 1.35±0.02 1.36±0.04 1.36±0.04

表4 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾全虾及肌肉营养成分的影响(平均值±标准差) Table 4 Effects of dietary Met content on nutritional components in whole body and muscle of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3)

由表5可知，饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾血清中总蛋白含量有显著影响(P<0.05)，在生长性能最好的0.86%组，其血清中总蛋白含量显著高于其他各组(P<0.05)，但饲料中蛋氨酸含量对血清中尿素氮、甘油三酯以及总胆固醇含量的影响不显著(P>0.05)。

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾血液指标的影响(平均值±标准差) Table 5 Effects of dietary Met content on blood indices of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3) 项目Items 蛋氨酸含量 Met content/% 0.59 0.69 0.86 0.99 1.10 1.25 总蛋白TP/(g/L) 104.67±11.06ab 111.50±4.95ab 162.67±9.40b 131.67±29.96ab 96.33±2.52a 87.33±19.30a 尿素氮 UN/(mmol/L) 0.83±0.15 0.77±0.15 0.80±0.06 0.83±0.06 0.80±0.10 0.80±0.20 甘油三酯 TG/(mmol/L) 1.48±0.05 1.38±0.17 1.53±0.23 1.36±0.21 1.59±0.07 1.30±0.20 总胆固醇 TC/(mmol/L) 1.33±0.06 1.23±0.25 1.50±0.30 1.23±0.38 1.57±0.12 1.37±0.15

表5 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾血液指标的影响(平均值±标准差) Table 5 Effects of dietary Met content on blood indices of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3)

由表6可知，1.25%组血清中天冬氨酸转氨酶活力显著低于其他各组(P<0.05)，同时其丙氨酸转氨酶活力显著低于除0.69%组外的其他各组(P<0.05)。0.86%、0.99%和1.10%组血清中超氧化物歧化酶活力显著高于0.59%、0.69%和1.25%组(P<0.05)。然而，饲料蛋氨酸含量对血清中精氨酸酶活力无显著影响(P>0.05)，但以0.86%组的活力最高。

表6

Table 6

表6(Table 6)

表6 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾血清中酶活力的影响(平均值±标准差) Table 6 Effects of dietary Met content on serum enzyme activities of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3) 项目Items 蛋氨酸含量 Met content/% 0.59 0.69 0.86 0.99 1.10 1.25 天冬氨酸转氨酶 AST/(U/mL) 43.19±2.41b 44.08±3.54b 47.97±0.52b 45.72±6.91b 44.54±3.72b 32.06±0.90a 丙氨酸转氨酶 ALT/(U/mL) 32.02±0.83a 36.08±3.12ab 39.93±2.31b 38.86±1.34b 37.89±2.66b 38.43±4.35b 超氧化物歧化酶 SOD/(U/mL) 337.28±13.30a 336.01±8.79a 390.28±3.91b 374.90±31.86b 379.11±3.79b 342.06±6.35a 精氨酸酶ARG/(U/L) 4.18±0.45 4.04±0.50 4.70±0.08 4.56±0.44 4.12±0.16 4.08±0.51

表6 饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾血清中酶活力的影响(平均值±标准差) Table 6 Effects of dietary Met content on serum enzyme activities of juvenile Pacific white shrimp (mean±SD,n=3)

蛋氨酸是含硫必需氨基酸，与生物体内各种含硫化合物的代谢密切相关。当饲料中缺乏蛋氨酸时，会引起动物食欲减退、生长减缓或停滞、肾脏肿大或肝脏铁堆积等，最后导致肝坏死或纤维化^[20]。本试验中，在未添加蛋氨酸的组中观察到凡纳滨对虾幼虾食欲减退、生长缓慢等，但尚没有导致肝胰腺坏死或纤维化，可能是不同的种类动物以及不同生长阶段对蛋氨酸的需要量不同，其最低耐受量也有所不同；另外，生长试验持续时间的不同也可能出现不同的结果。

本试验结果表明，随着饲料中蛋氨酸含量的增加，增重率和特定生长率先升高后降低，在饲料中蛋氨酸含量为0.86%时，增重率和特定生长率达到了最高值，当蛋氨酸含量继续增加时，增重率和特定生长率反而降低，同时蛋白质沉积率和成活率不受饲料中蛋氨酸含量的显著影响。本试验的结果证明蛋氨酸在凡纳滨对虾幼虾的生长中起重要作用。游离氨基酸的大量溶失成为寻求凡纳滨对虾氨基酸适宜添加量的主要障碍，严重影响着对虾氨基酸需要量的评估。本试验中通过对蛋氨酸含量为0.99%的试验饲料进行分析，得知蛋氨酸在海水中浸泡30、60和90 min后的溶失率分别为11.41%、14.35%和18.46%，这表明本试验所制备饲料中晶体氨基酸在水中的稳定性较好，可以保证饲料中晶体氨基酸的利用率。当饲料中蛋氨酸含量为0.86%时，可以满足凡纳滨对虾幼虾的正常生长，以特定生长率为指标，通过二次回归模型得出凡纳滨对虾幼虾的蛋氨酸需要量为0.89%，占饲料蛋白质的2.16%。已有的研究结果表明鱼类蛋氨酸需要量为饲料蛋白质的2%～3%^[21]，本试验所得结果在这一范围内。本试验确定的凡纳滨对虾蛋氨酸需要量(2.16%，占饲料蛋白质的百分比)与Millamena等^[14]报道的斑节对虾的蛋氨酸需要量(2.4%)相似；而低于怀明燕^[13]报道的凡纳滨对虾(2.52%)、Richard等^[22]报道的斑节对虾(2.9%)、韩阿寿等^[23]报道的斑节对虾(4.24%)、朱杰等^[16]报道的克氏原螯虾(3.36%)、叶金云等^[24]报道的中华绒螯蟹的蛋氨酸需要量(2.95%)。本试验结果低于低盐度条件下凡纳滨对虾的蛋氨酸需要量(2.52%)^[13]，导致这一结果的原因可能与饲料蛋白质源以及养殖环境不同有关。此外，不同水产动物的氨基酸需要量存在着一定的差异性，基础饲料成分、试验动物的发育阶段和个体大小、遗传因素、饲喂方式以及养殖环境等因素都可能影响其需要量。再者，饲料中胱氨酸如果不足，蛋氨酸会在体内能转化合成胱氨酸，而饲料中胱氨酸含量充足时，可能对蛋氨酸有节约效应。有学者研究表明，胱氨酸能替代斑点叉尾 饲料中60%的蛋氨酸^[25]以及虹鳟饲料中42%的蛋氨酸^[26]，但尚未见甲壳动物的相关研究，因此，凡纳滨对虾饲料中适宜的蛋氨酸和胱氨酸替代比例还需深入研究探讨。

随着饲料中蛋氨酸含量的增加，蛋白质效率和饲料效率呈先升高后降低趋势，当饲料中蛋氨酸含量为0.86%时，蛋白质效率达到最高值，这与已有的研究结果^{[14, 27, 28]}相似；饲料中蛋氨酸含量升高反而抑制了凡纳滨对虾幼虾的生长，并导致饲料利用能力的下降，可能是由于饲料中蛋氨酸含量过高后具有毒性作用^{[29, 30]}，但对凡纳滨对虾的成活率和蛋白质沉积率无显著影响。

饲料蛋氨酸含量对凡纳滨对虾幼虾全虾营养成分的影响不显著，但部分研究表明补充蛋氨酸可以有效改善养殖动物的生长性能，提高体蛋白质的沉积^{[26, 31, 32, 33]}。Ronnested等^[34]提出氨基酸不平衡会导致机体蛋白质合成降低，因此本试验中全虾营养成分不受影响可能是因为本试验基础饲料中蛋氨酸含量虽低但尚未影响其他氨基酸的代谢和利用，所以不会导致降低蛋白质的合成。饲料中蛋氨酸含量过高时，其他氨基酸并没有随之提高，会导致氨基酸不平衡而影响机体蛋白质合成。饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾肌肉水分、粗蛋白质、粗灰分含量无显著影响，但对其粗脂肪含量影响显著，肌肉中粗脂肪含量与特定生长率呈正相关，对虾生长速率快可能首先体现在肌肉脂肪沉积上。

饲料中蛋氨酸含量对凡纳滨对虾血清中总蛋白含量有显著影响，而对尿素氮、甘油三酯以及胆固醇含量的影响不显著，这可能与饲料中适量的蛋氨酸促进血清中蛋白质的合成有关，但全虾营养成分中粗蛋白质含量并无显著变化，而Zhou等^[35]指出饲料中蛋氨酸含量并不影响黑鲷血清中总蛋白含量。血清中的尿素氮是机体蛋白质代谢的主要终末产物，其含量反映着机体蛋白质代谢的状况，甘油三酯和胆固醇与机体脂肪代谢状况有关^{[31, 36]}，本试验中血清中尿素氮、甘油三酯以及胆固醇含量尚未因为饲料中蛋氨酸含量的不同而产生显著差异。本试验结果表明，饲料中蛋氨酸含量可能不会影响机体蛋白质和脂肪的代谢。

Xiao等^[37]曾报道饲料中添加不同水平的蛋氨酸对建鲤肌肉以及肝胰腺中天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶活力有显著影响，且与生长指标呈正相关。本试验中，凡纳滨对虾幼虾血清中天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶活力受饲料中蛋氨酸含量的显著影响，与生长趋势呈正相关，说明饲料中适宜含量的蛋氨酸不但有利于促进凡纳滨对虾幼虾的生长，还能一定程度地提高氨基酸代谢酶的活力，但这也影响了其心肌细胞以及肝胰腺的功能，说明饲料中高含量的蛋氨酸对凡纳滨对虾幼虾的生长和生理功能具有负面效应^[13]。

超氧化物歧化酶广泛存在于动物、植物和细菌组织中，是体内最重要的抗氧化酶之一^[38]。它可以催化超氧阴离子转化为过氧化氢和氧气，进而清除组织当中的超氧阴离子。超氧化物歧化酶在生物体的自我防御系统以及免疫系统中起着重要的作用。在本试验中，凡纳滨对虾幼虾血清中超氧化物歧化酶活力与特定生长率趋势一致，这表明饲料中适宜含量的蛋氨酸可以提高凡纳滨对虾幼虾血清中超氧化物歧化酶活力，增强机体的抗氧化能力、免疫能力以及防御能力。

精氨酸通过精氨酸酶途径水解后并通过鸟氨酸脱羧酶作用生成多胺，这条多胺合成路径可能是精氨酸增加淋巴细胞有丝分裂发生的机制^[38]。精氨酸酶途径调控炎症反应主要通过以下几个层次：1)生产鸟氨酸，有利于细胞再生及伤口愈合和修复；2)生产多胺，调控巨噬细胞的功能；3)调节精氨酸的利用率，从而降低一氧化氮的生成及减少部分精氨酸作为媒介转导成为其他物质^[40]。本试验结果表明，饲料中蛋氨酸含量对血清中精氨酸酶活力影响不显著，但以0.86%组的活力最高，说明饲料中适宜含量的蛋氨酸有利于促进凡纳滨对虾幼虾的生长，在调控炎症、修复创伤的同时增强机体的免疫能力。

以特定生长率为指标，通过二次回归方程得出凡纳滨对虾幼虾的蛋氨酸需要量为0.89%，占饲料蛋白质的2.16%。