抗生素残留^[1]、耐药性^[2]、污染环境^[3]等问题致使抗生素在部分国家被禁止用于饲料添加剂，凭借维护肠道菌群平衡、增强肠道屏障功能、改善宿主消化酶活性、提高宿主免疫功能、改善宿主生理状态等作用机理，益生菌成为热门的抗生素替代品之一。

目前，国内外应用较广泛的微生态益生菌有乳酸杆菌类、芽孢杆菌类和酵母菌类等。乳酸杆菌能产生乳酸、乳酸菌素和肽聚糖等，具有调节消化道功能、提高免疫力、改善机体营养状况等作用，是应用最广泛的益生菌制剂菌种之一，但其抗逆性差、不耐热，在胃酸、胆盐、高温或有氧环境下易失活而限制其应用^[4]。凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)不但具有乳酸杆菌的所有特性，还具有抗逆性强、耐酸、耐高温高压、易贮藏等芽孢杆菌所具有的优点，吸引越来越多研究者的关注。Zhou等^[5]报道凝结芽孢杆菌可显著提高广西黄鸡平均日增重(ADG)，降低料重比(F/G)，提高成活率，增大胸肌剪切力，并降低胸肌滴水损失。凝结芽孢杆菌对畜禽的影响的相关研究仅集中在生产性能方面，然而其提高生产性能的机理仍然不清楚。因此，本试验通过对血清生化指标、抗氧化功能的研究，进一步阐明凝结芽孢杆菌通过改善血清生化指标和抗氧化功能从而提高黄羽肉鸡的生产性能的机理，为其在黄羽肉鸡配合饲料中的应用提供相关理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验动物与试验设计

选用360羽1日龄黄羽肉鸡，随机分为4个组，每组6个重复，每重复15羽。Ⅰ组为对照组， 饲喂基础饲粮(基础饲粮组成及营养水平见表 1)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别在基础饲粮中添加100、200、300 mg/kg的凝结芽孢杆菌菌粉(活菌数为1×10⁹ CFU/g)。试验期为70 d。试验鸡由莆田广东温氏家禽有限公司提供，凝结芽孢杆菌菌粉由福建洛东生物技术有限公司提供。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) % 项目 Items 1~28日龄 1 to 28 days of age 29~70日龄 29 to 70 days of age 原料 Ingredients 玉米 Corn 58.00 67.00 豆粕 Soybean meal 27.00 18.00 膨化大豆 Expanded soybean 10.00 10.00 石粉 Limestone 1.00 1.00 预混料 Premix 4.001) 4.002) 合计 Total 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels3) 代谢能 ME/(MJ/kg) 11.87 12.17 粗蛋白质 CP 21.20 17.09 钙 Ca 1.02 0.86 总磷 TP 0.55 0.48 有效磷 AP 0.31 0.26 赖氨酸 Lys 1.12 0.82 蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.83 0.72 1)1~28日龄预混料为每千克饲粮提供The premix provided the following per kg of diet for aged from 1 to 28 days:Cu 10 mg,Fe 72 mg,Mn 78 mg,Zn 60.2 mg,I 0.40 mg,Se 0.24 mg,氯化胆碱 choline chloride 600 mg,VA 10 000 IU,VD3 2 600 IU,VE 26 mg,VK3 2.6 mg,VB1 2.6 mg,VB2 6.5 mg,VB6 2.6 mg,VB12 19.5 μg,烟酸 niacin 26 mg,泛酸钙 calcium pantothenate 13 mg,叶酸 folic acid 1.3 mg,生物素 biotin 104 μg。 2)29~70日龄预混料为每千克饲粮提供The premix provided the following per kg of diet for aged from 29 to 70 days:Cu 10 mg,Fe 72 mg,Mn 78 mg,Zn 60.2 mg,I 0.40 mg,Se 0.24 mg,氯化胆碱 choline chloride 600 mg,VA 9 000 IU,VD3 2 200 IU,VE 22 mg,VK3 2.2 mg,VB1 2.2 mg,VB2 5.5 mg,VB6 2.2 mg,VB12 16.5 μg,烟酸 niacin 22 mg,泛酸钙 calcium pantothenate 11 mg,叶酸 folic acid 1.1 mg,生物素 biotin 88 μg。 3)营养水平为计算值。Nutrient levels were calculated values.

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)

试验前对鸡舍进行全面消毒，试验鸡全期采用笼养方式饲养，24 h光照，自由采食、饮水，常规的日常管理，按正常免疫程序进行免疫接种。每日观察鸡群的生长状况并进行记录。 1.3 测定指标及方法 1.3.1 生长性能测定

28、70日龄，分别以重复为单位对试验鸡进行空腹称重，统计每天饲粮消耗量，计算1~28日龄和1~70日龄的平均日增重、平均日采食量(ADFI)和料重比。每天记录各组死亡情况，计算成活率。 1.3.2 屠宰性能测定

70日龄，各组每重复随机抽取体重中等的健康肉鸡2羽，进行屠宰性能的测定(屠宰前称活体重)，内容包括屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌率、胸肌率等，其测定方法参照《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》(NY/T 823—2004)。 1.3.3 血清生理生化指标测定

28、70日龄，各组每重复随机抽取体重中等的健康肉鸡2羽，翅膀采血5 mL，于4 000 r/min离心10 min，分离血清于1.5 mL离心管(2管)中，置-20 ℃冷冻保存，用于血清生化指标和抗氧化功能的测定。 1.3.3.1 血清生化指标测定

测定血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性及白蛋白(albumin,ALB)、总蛋白(total protein,TP)、尿素氮(urea nitrogen,UN)含量，分别采用2-氨基-2-甲基-1-丙醇(AMP)法、溴甲酚绿法、双缩脲法和脲酶连续监测法，按试剂盒说明书进行测定(均购自上海荣盛生物药业有限公司)。 1.3.3.2 血清抗氧化指标测定

选取总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量作为测定血清抗氧化功能即非特异性免疫的指标，分别采用羟胺法、比色法、钼酸铵法、硫代巴比妥酸(TBA)法，根据试剂盒操作说明进行测定(均购自南京建成生物工程研究所)。 1.4 数据处理与统计

应用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，差异显著后进行LSD多重比较，以P<0.01(差异极显著)，P<0.05(差异显著)作为差异显著性判断标准，结果用平均值±标准差(mean±SD)表示。 2 结果与分析 2.1 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡生产性能的影响 2.1.1 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡生长性能的影响

由表2可知，1~28日龄，各组平均日采食量差异均不显著(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组平均日增重比Ⅰ组分别不同程度地提高了0.40%(P＞0.05)、3.75%(P<0.05)、3.23%(P＞0.05)；Ⅲ组料重比显著低于Ⅰ组2.55%(P<0.05)，与其他2组无显著差异(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组成活率比Ⅰ组分别提高了1.15%、1.15%、2.30%，差异均不显著(P＞0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of Bacillus coagulans on growth performance of yellow broilers 项目 Items 平均日采食量 ADFI/g 平均日增重 ADG/g 料重比 F/G 成活率 Survival rate/% 1~28日龄 1 to 28 days of age Ⅰ 29.75±0.81 15.18±0.46b 1.96±0.04a 96.67±3.65 Ⅱ 29.70±0.68 15.24±0.30ab 1.95±0.05ab 97.78±3.44 Ⅲ 30.14±0.82 15.75±0.44a 1.91±0.02b 97.78±3.44 Ⅳ 30.52±0.85 15.67±0.48ab 1.95±0.02ab 98.89±2.72 1~70日龄 1 to 70 days of age Ⅰ 62.44±1.30 24.19±0.53b 2.58±0.07a 91.11±5.02b Ⅱ 63.28±1.88 24.85±0.88ab 2.55±0.05ab 95.55±3.44a Ⅲ 62.53±1.62 25.10±0.52a 2.49±0.07b 95.55±3.44a Ⅳ 64.30±1.96 25.18±0.81a 2.55±0.04ab 93.33±1.05ab 同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同小写字母或无字母表示差异不显著(P＞0.05)。下表同。 In the same column,values with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01),and with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05),while with the same small letter or no letter superscripts mean no significant difference (P＞0.05). The same as below.

表2 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of Bacillus coagulans on growth performance of yellow broilers

1~70日龄，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组平均日采食量比Ⅰ组分别增加了1.35%、0.14%、2.98%，但差异均不显著(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组平均日增重比Ⅰ组分别不同程度地提高了2.73%(P＞0.05)、3.76%(P<0.05)、4.09%(P<0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组料重比较Ⅰ组分别不同程度地降低了1.16%(P＞0.05)、3.49%(P<0.05)、1.16%(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组成活率比Ⅰ组分别不同程度地提高了4.87%(P<0.05)、4.87%(P<0.05)、2.44%(P＞0.05)。 2.1.2 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡屠宰性能的影响

由表3可知，与Ⅰ组相比，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组屠宰率、半净膛率、全净膛率、腿肌率均略有提高，但差 异均不显著(P＞0.05)；Ⅲ、Ⅳ组胸肌率分别显著提高了3.97%、3.85%(P<0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡屠宰性能的影响 Table 3 Effects of Bacillus coagulans on slaughter performance of yellow broilers % 组别 Groups 屠宰率 Dressed percentage 半净膛率 Half-eviscerated weight 全净膛率 Eviscerated weight 腿肌率 Percentage of leg muscle 胸肌率 Percentage of breast muscle Ⅰ 90.73±1.48 82.67±1.33 60.82±0.76 11.27±0.31 8.57±0.43b Ⅱ 90.88±1.29 82.77±1.02 60.83±1.46 11.40±0.39 8.63±0.42ab Ⅲ 91.00±1.29 82.91±1.31 60.90±1.56 11.52±0.38 8.91±0.42a Ⅳ 91.06±1.42 82.82±1.02 60.87±1.41 11.45±0.46 8.90±0.30a

表3 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡屠宰性能的影响 Table 3 Effects of Bacillus coagulans on slaughter performance of yellow broilers

由表4可知，28日龄，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清中碱性 磷酸酶活性比Ⅰ组分别显著提高了24.14%、24.62%、 19.70%(P<0.05)；各组血清白蛋白、总蛋白和尿素氮含量差异均不显著(P＞0.05)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组尿素氮含量均较Ⅰ组降低了2.5%(P＞0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡血清生化指标的影响 Table 4 Effects of Bacillus coagulans on serum biochemical index of yellow broilers 项目 Items 碱性磷酸酶 ALP/(U/L) 白蛋白 ALB/(g/L) 总蛋白 TP/(g/L) 尿素氮 UN/(mmol/L) 28日龄 28 days of age Ⅰ 2 191.06±404.35Bb 17.45±1.63 33.00±4.15 0.40±0.07 Ⅱ 2 719.88±295.53Aa 18.08±1.38 33.91±3.45 0.39±0.06 Ⅲ 2 730.50±134.58Aa 18.17±1.53 34.42±3.96 0.39±0.07 Ⅳ 2 622.72±418.52ABa 18.27±1.68 34.42±3.03 0.39±0.07 70日龄 70 days of age Ⅰ 1 874.27±156.58b 18.67±1.07b 37.82±1.72b 0.55±0.05Aa Ⅱ 1 905.17±132.19ab 19.10±0.57ab 38.50±1.57ab 0.51±0.06ABab Ⅲ 1 989.23±130.27a 19.50±0.71a 39.27±1.68a 0.46±0.06Bb Ⅳ 1 932.75±115.40ab 19.33±0.65a 38.67±1.67ab 0.48±0.06ABb

表4 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡血清生化指标的影响 Table 4 Effects of Bacillus coagulans on serum biochemical index of yellow broilers

70日龄，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清中碱性磷酸酶活性及白蛋白、总蛋白含量均比Ⅰ组有所提高，其中碱性磷酸酶活性分别不同程度地提高了1.65%(P＞0.05)、6.13%(P<0.05)、3.12%(P＞0.05)，白蛋白含量分别不同程度地提高了2.30%(P＞0.05)、4.45%(P<0.05)、3.54%(P<0.05)，总蛋白含量分别不同程度地提高了1.80%(P＞0.05)、3.83%(P<0.05)、2.25%(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清尿素氮含量比Ⅰ组分别不同程度地降低了7.27%(P＞0.05)、16.36%(P<0.01)、12.73%(P<0.05)。 2.3 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡血清抗氧化功能的影响

由表5可知，28日龄，与Ⅰ组比较，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡血清中T-AOC分别不同程度地提高了5.79%(P＞0.05)、27.15%(P<0.05)、14.16%(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡血清中SOD活性分别不同程度地提高了0.48%(P＞0.05)、11.90%(P<0.05)、6.75%(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡血清中CAT活性分别提高了14.04%、14.04%、8.77%(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肉鸡血清中MDA含量分别极显著降低了22.03%、37.24%、22.55%(P<0.01)。

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡血清抗氧化功能的影响 Table 5 Effects of Bacillus coagulans on serum antioxidant function of yellow broilers 项目 Items 总抗氧化能力 T-AOC/(U/mL) 超氧化物歧化酶 SOD/(U/mL) 过氧化氢酶 CAT/(U/mL) 丙二醛 MDA/(nmol/mL) 28日龄 28 days of age Ⅰ 12.08±3.05b 99.76±12.95b 0.57±0.17 5.72±1.12Aa Ⅱ 12.78±1.57ab 100.24±8.69b 0.65±0.17 4.46±1.26Bb Ⅲ 15.36±3.97a 111.63±14.13a 0.65±0.12 3.59±0.56Bb Ⅳ 13.79±3.72ab 106.49±6.58ab 0.62±0.20 4.43±0.95Bb 70日龄 70 days of age Ⅰ 16.82±2.39b 276.04±44.01b 0.68±0.26b 1.21±0.24a Ⅱ 17.22±2.34ab 278.01±46.55ab 0.85±0.32ab 1.08±0.25ab Ⅲ 18.85±1.78a 313.69±53.97a 0.95±0.36a 0.96±0.14b Ⅳ 18.82±1.86a 284.30±25.99ab 0.92±0.28ab 1.00±0.25b

表5 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡血清抗氧化功能的影响 Table 5 Effects of Bacillus coagulans on serum antioxidant function of yellow broilers

70日龄，与Ⅰ组比较，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清中T-AOC、SOD和CAT活性均有所提高，以Ⅲ组效果最好，均达到显著差异(P<0.05)，分别显著提高了12.07%、13.64%和39.71%(P<0.05)；Ⅱ组分别提高了2.38%、0.71%和25.00%，但均未达到显著差异(P＞0.05)，Ⅳ组分别不同程度地提高了11.89%(P<0.05)、2.99%(P＞0.05)和35.29%(P＞0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组血清MDA含量分别不同程度地减少了10.74%(P＞0.05)、20.66%(P<0.05)、17.36%(P<0.05)。 3 讨 论 3.1 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡生产性能的影响

本试验表明，在黄羽肉鸡饲粮中添加适量凝结芽孢杆菌可以有效地促进肉鸡生长，改善黄羽肉鸡的生产性能，这与现有的报道一致^[6]。刘磊等^[7]研究认为肉仔鸡饲粮中添加芽孢乳杆菌能改善肉仔鸡的料重比和死淘率；尹恒等^[8]研究表明凝结芽孢杆菌能降低建鲤的饲料系数，增加特定生长率。

凝结芽孢杆菌能产芽孢而耐受胃酸和胆汁等不利条件进入消化道定植，这是其发挥作用的重要前提^[9]。凝结芽孢杆菌能产乳酸^[10]，还可产生L-乳酸脱氢酶，有助于肠道内乳酸菌产生乳酸^[11]，降低pH，提高钙、磷的利用率^[12]，并促进蛋白酶原向蛋白酶的转化，促进营养物质的消化；另外，凝结芽孢杆菌可产生维生素、氨基酸、有机酸、未知生长因子等物质，为动物提供营养的同时还促进小肠的蠕动，改善肠道消化功能，为动物的生长发育提供有利条件^[13]。

屠宰率和全净膛率是衡量肉鸡肉用性能的主要指标，一般良好的肉用性能要求屠宰率达到80%，全净膛率达到60%^[14]。本试验各组肉鸡屠宰率均达到90%以上，全净膛率均达标。本试验结果表明，在黄羽肉鸡饲粮中添加200 mg/kg凝结芽孢杆菌菌粉，显著提高前期(1~28日龄)和全期的平均日增重，降低料重比，提高成活率和胸肌率，与Prieto等^[15]的报道一致。然而，凝结芽孢杆菌的作用效果可能与其使用剂量有关，并非剂量越高越好。过多的添加量在增加成本的同时，可能还会对肉鸡的生产性能产生负面作用，可能原因是过量的活菌进入动物肠道额外消耗更多的营养物质，从而影响动物对营养物质的吸收利用，周映华等^[16]也有这方面的报道。 3.2 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡血清生化指标的影响

碱性磷酸酶的活性是反映成骨细胞分化程度和功能状态的良好指标^[17]，活性高可促进骨胶原蛋白的形成和骨矿化；此外碱性磷酸酶也是小肠消化吸收功能发生变化的标志酶^[18]，除了能水解磷酸盐^[19]、参与脂肪吸收^[20]、跨细胞溶质运输^[21]外，还能防御致病菌脂多糖对肠道黏膜的损害^[22]。本试验结果表明，在黄羽肉鸡饲粮中添加凝结芽孢杆菌菌粉，可不同程度地提高碱性磷酸酶活性，其中以200 mg/kg添加量效果较好；同时，随着日龄的增长和机体的生长发育成熟，碱性磷酸酶活性下降，这同前人的报道^[23]一致。

血清总蛋白有运输营养物质、维持渗透压和酸碱平衡、参与体液免疫等重要功能。白蛋白是血清中重要的运输蛋白，主要由肝脏合成，具有运输内外源性物质、维持胶体渗透压稳定和胶体保护并稳定血液中免疫球蛋白等功能，当肝脏功能受损时，血清中白蛋白比例下降，其下降程度与肝受损程度正相关^[24]。本试验中，在黄羽肉鸡饲粮中添加凝结芽孢杆菌对血清中总蛋白、白蛋白含量均有提高作用，以200 mg/kg添加量效果较佳，这与韩伟等^[25]发现乳酸芽孢杆菌能显著提高断奶仔猪血清中总蛋白和白蛋白含量的结果一致；血清总蛋白含量随日龄的增长而增加，而白蛋白含量基本不变，这与刘光磊等^[26]的报道一致。

尿素氮是体内蛋白质分解代谢的主要产物之一，直接反映蛋白质代谢水平和营养情况，其含量越低表明氮的利用率越高，即蛋白质合成代谢加强，分解代谢降低^[27]。本试验中，添加凝结芽孢杆菌减少血清中尿素氮的含量，说明凝结芽孢杆菌有效促进肉鸡对饲粮中营养物质的吸收利用，特别是蛋白质的利用，改善黄羽肉鸡的生长性能。 3.3 凝结芽孢杆菌对黄羽肉鸡血清抗氧化功能的影响

由于肉鸡特有的营养和生理特点，其体内脂质含量相对较高，容易发生脂质过氧化反应，而过氧化产物对机体具有一定的伤害^[28]。血清中T-AOC、SOD、CAT活性和MDA含量是反映机体抗氧化功能的重要指标。T-AOC是衡量机体抗氧化功能的综合性指标，反映机体抗氧化酶系统和非酶促系统对外来刺激的代偿能力及机体自由基代谢状况^[29]。SOD是特异性消除超氧自由基的抗氧化酶类，主要防御过氧化作用引起的组织损伤^[30]。CAT可有效地催化分解机体代谢过程中产生的过氧化氢，抑制脂质过氧化，保护细胞免遭伤害^[31]。MDA是脂质过氧化作用的产物，其含量反映了机体脂质过氧化程度，间接反映细胞损伤程度^[30]，另外还可引起肠道内细菌和毒素移位，加重机体氧化应激^[32]。

凝结芽孢杆菌可以产生具有显著抗氧化活性的胞外多糖(exopolysaccharides，EPS)^[33]，EPS能清除体内二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、羟自由基和超氧阴离子自由基，从而提高机体抗氧化功能^[34]；此外，凝结芽孢杆菌可能通过直接或间接作用免疫细胞分泌各种细胞因子与免疫球蛋白，诱导抗氧化酶如SOD、CAT的合成，加速清除脂质过氧化产物如MDA，起到抗氧化作用。本试验结果表明，凝结芽孢杆菌通过增强黄羽肉鸡血清SOD、CAT活性而显著提高机体T-AOC，并使脂质过氧化产物MDA含量显著或极显著降低，从而有效保护黄羽肉鸡免受氧化应激。 4 结 论

综上所述，在黄羽肉鸡饲粮中添加200 mg/kg(2×10⁸ CFU/kg)凝结芽孢杆菌，可提高肉鸡血清中T-AOC，SOD、CAT、碱性磷酸酶活性及白蛋白、总蛋白含量，降低尿素氮和MDA含量，促进黄羽肉鸡对营养物质的消化吸收和抗病能力，从而提高肉鸡平均日增重和成活率，降低料重比，提高生产性能。