蛋白质是水产动物最重要的营养物质之一，也是饲料成本的主要决定因素，其中鱼粉是被公认的优质蛋白质源。近几年来，因不良气候因素的影响，加上海洋环境污染和渔业资源的过渡捕捞，使得鱼粉的产量大幅度下降，价格日渐上涨^[1]。因此，寻求降低水产配合饲料中鱼粉用量的研究以及合理利用价格相对低廉的其他动植物蛋白质原料部分或全部替代鱼粉^{[2, 3]}已成为水产饲料工业的一个重要研究课题。

中华鳖(Trionyx sinensis)，又名“中国鳖”，俗称甲鱼、 团鱼等，是我国传统名贵水产品。伴随着近年来中华鳖养殖业的发展，迫切需要研制、开发出中华鳖的系列专用饲料，以适应养鳖产业的发展需求。近年来，国内外学者已开展了蚕蛹、发酵豆粕、玉米蛋白粉、肉骨粉等动植物蛋白质源在水产动物饲料中替代鱼粉的研究^{[4, 5, 6]}。目前，有关中华鳖饲料蛋白质源开发利用的研究还颇为缺乏，从而制约了中华鳖环保型全价饲料的研制和推广应用。因此，本试验选取了蚕蛹、发酵豆粕、玉米蛋白粉、肉骨粉4种蛋白质饲料原料，测定中华鳖幼鳖对这4种饲料原料中粗蛋白质和氨基酸的表观消化率，通过评价中华鳖幼鳖对不同饲料蛋白质源的消化利用率，为开发适用于中华鳖的人工配合饲料提供试验依据，同时也可补充、丰富具有两栖习性的爬行动物可消化氨基酸的基础资料。

试验用鳖购自江苏省盐城市亭湖郊区甲鱼养殖场，为个体健康、反应灵活、大小规格一致的中华鳖幼鳖，平均体重为(120.0±1.5) g。

中华鳖的饲养和管理参考何蓉等^[7]的方法。将150只试验用鳖随机分成5组，每组设3个重复，每个重复10只，以重复为单位放在15个室内养殖箱中，养殖箱箱体规格为底面直径80 cm，箱高1 m，水深20～40 cm，箱体呈圆柱形。每箱悬挂3片渔网供幼鳖攀悬。试验用水是经盐城工学院室内养殖试验室北水泥储水池(长、宽各1 m，高2 m)中完全充分曝气后的自来水，溶解氧浓度大于5.0 mg/L，水的pH范围是7～8。每天保持不断充气增氧并排污，每次排污在投喂饲料前进行，每隔3天换水1次，每次换水量约为1/3。经过1周时间的暂养驯化和全程5周不断采样收集到满足试验所需足量粪便样品。试验期间水温25～30 ℃。

中华鳖基础饲料组成及营养水平见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 白鱼粉 White fish meal 40.0 发酵豆粕 Fermented soybean meal 10.0 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 4.0 玉米干酒糟及其可溶物 Corn DDGS 4.0 肉骨粉 Meat-bone meal 4.0 血粉 Blood meal 3.0 面粉 Wheat flour 10.0 小麦 Wheat 12.0 鱼油 Fish oil 2.0 豆油 Soybean oil 2.0 乌贼膏 Squid paste 2.0 蚯蚓粉 Earthworm powder 1.0 虾壳粉 Shrimp shell meal 1.0 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 2.0 多维 Vitamins 1.0 多矿 Minerals 1.0 黏结剂 Cement 0.5 食盐 NaCl 0.5 合计 Total 100.0 营养水平 Nutrient levels 水分 Moisture 8.08 粗蛋白质 Crude protein 44.47 粗脂肪 Crude fat 9.72 粗灰分 Ash 13.99 每千克饲料含有Contained the following per kg of the diet：VE 70 mg，VK 6 mg，VA 14 000 IU，VD3 3 200 IU，VB1 5 mg，VB2 25 mg，VB6 20 mg，VB12 0.5 mg，烟酸 nicotinic acid 180 mg，叶酸 folic acid 5 mg，肌醇 inositol 1 000 mg，生物素 biotin 2.5 mg，泛酸钙 calcium pantothenate 50 mg，Fe 25 mg，Cu 3 mg，Mn 15 mg，I 0.6 mg，Mg 0.7 mg。

表1 基础饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)

试验用饲料原料由盐城天邦饲料科技有限公司提供，包括蚕蛹、发酵豆粕、玉米蛋白粉、肉骨粉。配制4种试验饲料，试验饲料由基础饲料和1种饲料原料组成，前者占70％，后者占30％。饲料原料经过粉碎后过80目筛，均匀混合后采用逐级放大法加入0.5%三氧化二铬(Cr₂O₃)作为外源指示剂，充分混合后使用饲料制粒机制成粒径为2 mm的颗粒饲料，室温风干至恒重，密封冷藏备用。4种饲料原料的常规营养成分和氨基酸组成见表2。 1.3 饲养管理与粪便收集

基础饲料组饲喂基础饲料，其他4组分别饲喂1种试验饲料。每天08:00和17：00各投喂1次，按照中华鳖体重的3%～5%投喂。投喂过后等待1 h后用捞网回收饲料残饵，再等待3 h后用虹吸法将粪便收集到之前备好的培养皿内，在烘箱中于65 ℃烘干后放入自封袋，在试验室冰柜中-15 ℃条件下冷冻保存，连续收集约30 d，直到收集到足量的粪样用于生化分析。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 4种饲料原料的常规营养成分及氨基酸组成(干物质基础) Table 2 Common nutritional components and amino acid composition of four kinds of feed ingredients (DM basis) % 项目 Items 蚕蛹 Silkworm chrysalis 发酵豆粕 Fermented soybean meal 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 肉骨粉 Meat-bone meal 干物质 DM 93.12 88.84 91.67 95.14 粗蛋白质 Crude protein 54.80 49.49 61.93 47.37 粗脂肪 Crude fat 25.38 2.14 2.50 9.96 粗灰分 Ash 5.25 6.52 1.49 35.60 天冬氨酸 Asp 4.82 4.89 3.21 2.65 苏氨酸 Thr 2.15 1.71 1.94 1.11 丝氨酸 Ser 2.14 2.08 2.87 1.40 谷氨酰胺 Gln 5.61 8.27 13.35 4.92 甘氨酸 Gly 2.61 1.76 1.39 6.36 丙氨酸 Ala 2.62 2.15 5.09 3.64 半胱氨酸 Cys 0.24 0.29 0.41 0.08 缬氨酸 Val 2.44 1.99 2.46 1.53 蛋氨酸 Met 2.13 0.33 1.32 0.53 异亮氨酸 Ile 2.04 1.96 2.14 0.97 亮氨酸 Leu 3.10 3.23 9.28 2.30 酪氨酸 Tyr 2.81 1.38 2.63 0.77 苯丙氨酸 Phe 2.69 2.32 3.70 1.58 赖氨酸 Lys 2.77 2.21 0.96 1.69 组氨酸 His 1.64 1.40 1.31 0.83 精氨酸 Arg 2.36 3.01 1.60 2.77

表2 4种饲料原料的常规营养成分及氨基酸组成(干物质基础) Table 2 Common nutritional components and amino acid composition of four kinds of feed ingredients (DM basis)

按照AOAC(1995)^[8]中方法分析饲料原料、饲料和中华鳖粪便样品中水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量；饲料和粪便中Cr₂O₃含量用Furukawa等^[9]的方法测定；按照文献^[10]的方法，采用Biochrom 20型氨基酸自动分析仪测定饲料原料、饲料和中华鳖粪便样品中16种氨基酸(除色氨酸、脯氨酸外)的含量。

所得试验数据均以平均值±标准误(mean±SE)表示，用SPSS 19.0分析软件经单因素方差分析(one-way ANOVA)后，若存在显著差异，则采用Duncan氏法进行多重比较，差异显著性水平为P<0.05。

经过5周的室内养殖试验，中华鳖幼鳖对4种饲料原料中粗蛋白质的表观消化率存在差异。由表3可知，除玉米蛋白粉外，其他3种饲料原料中粗蛋白质的表观消化率均达到85%以上，其中以肉骨粉最高，显著高于玉米蛋白粉、蚕蛹和发酵豆粕(P<0.05)，蚕蛹和发酵豆粕之间差异不显著(P>0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 中华鳖幼鳖对4种饲料原料中粗蛋白质的表观消化率 Table 3 Apparent digestibility of crude protein in four kinds of feed ingredients for juvenile soft-shelled turtle (Trionyx sinensis) 饲料原料 Feed ingredients 粗蛋白质表观消化率 Apparent digestibility of crude protein 蚕蛹 Silkworm chrysalis 85.75±0.27b 发酵豆粕 Fermented soybean meal 86.34±1.67b 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 75.98±3.42c 肉骨粉 Meat-bone meal 90.57±0.77a 同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。 Values in the same column with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05).

表3 中华鳖幼鳖对4种饲料原料中粗蛋白质的表观消化率 Table 3 Apparent digestibility of crude protein in four kinds of feed ingredients for juvenile soft-shelled turtle (Trionyx sinensis)

由表4可知，对于中华鳖幼鳖，不同饲料原料间同种氨基酸的表观消化率差异很大。比较同种饲料原料不同氨基酸的表观消化率，玉米蛋白粉中16种氨基酸的表观消化率均高于90%；肉骨粉中16种氨基酸的表观消化率均低于90%，其中以半胱氨酸(Cys)最低；发酵豆粕中酪氨酸(Tyr)的表观消化率最高，组氨酸(His)的表观消化率最 低；蚕蛹中蛋氨酸(Met)的表观消化率最高，甘氨 酸(Gly)的表观消化率最低。4种饲料原料中总氨基酸表观消化率，玉米蛋白粉为96.56%，蚕蛹为92.44%，二者显著高于发酵豆粕和肉骨粉(P<0.05)；此外，肉骨粉的总氨基酸表观消化率显著低于其他3种饲料原料(P<0.05)。不同饲料原料中，中华鳖幼鳖对玉米蛋白粉中除Cys外的各种氨基酸的表观消化率均显著高于发酵豆粕和肉骨粉(P<0.05)，同时对蚕蛹中各种氨基酸的表观消化率也较高。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 中华鳖幼鳖对4种饲料原料中氨基酸的表观消化率 Table 4 Apparent digestibility of amino acids in four kinds of feed ingredients for juvenile soft-shelled turtle (Trionyx sinensis) 项目 Items 蚕蛹 Silkworm chrysalis 发酵豆粕 Fermented soybean meal 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 肉骨粉 Meat-bone meal 天冬氨酸 Asp 93.17±0.96a 88.02±1.28b 96.67±1.69a 80.22±0.71c 苏氨酸 Thr 92.14±1.31ab 87.63±1.46bc 95.07±2.32a 84.40±2.29c 丝氨酸 Ser 92.03±0.96b 88.71±1.34b 96.99±1.11a 82.61±0.31c 谷氨酰胺 Gln 93.13±0.66b 90.99±1.07b 97.30±0.50a 83.20±0.92c 甘氨酸 Gly 88.72±0.74b 87.47±1.11bc 95.88±1.18a 82.49±1.36c 丙氨酸 Ala 89.02±0.58b 86.49±1.44bc 96.92±0.50a 83.67±1.45c 半胱氨酸 Cys 92.29±1.63a 91.04±1.01a 97.37±1.75a 65.07±3.33b 缬氨酸 Val 91.35±0.55b 86.31±1.10c 96.03±1.17a 84.42±1.81c 蛋氨酸 Met 99.34±0.33a 90.67±11.47ab 99.10±3.95a 83.59±1.05b 异亮氨酸 Ile 88.38±0.95b 88.87±0.96b 96.27±2.12a 85.43±1.05b 亮氨酸 Leu 92.20±0.91b 85.27±1.72c 97.15±0.80a 84.25±1.89c 酪氨酸 Tyr 93.62±0.34ab 92.04±0.58b 96.63±1.37a 85.70±1.06c 苯丙氨酸 Phe 91.82±0.49b 87.58±1.03c 97.69±0.81a 84.66±2.13c 赖氨酸 Lys 94.54±0.12a 86.47±0.43b 94.97±1.79a 83.54±2.13b 组氨酸 His 92.80±0.26a 80.10±1.97b 94.79±2.28a 79.71±3.83b 精氨酸 Arg 94.56±0.28a 88.71±0.93b 96.18±1.93a 86.74±1.95b 总氨基酸 Total AA 92.44±0.41a 87.90±0.76b 96.56±0.40a 82.48±0.81c 同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。 Values in the same row with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05).

表4 中华鳖幼鳖对4种饲料原料中氨基酸的表观消化率 Table 4 Apparent digestibility of amino acids in four kinds of feed ingredients for juvenile soft-shelled turtle (Trionyx sinensis)

董晓慧等^[13]研究表明，水产动物饲料蛋白质源中营养物质的表观消化率受到试验环境、试验动物种类及生长阶段、粪便收集的方式和外源指示剂种类的影响。本试验采用虹吸法收集中华鳖幼鳖的粪便，克服了用解剖法或挤压法收集粪便所引起的人为干扰试验动物生理活动的弊端^[14]。本试验采用Cr₂O₃来作为外源指示剂测定表观消化率。Austreng等^[15]证实Cr₂O₃和三氧化二钇(Y₂O₃)适合测定表观消化率，国内外水产营养学研究普遍采用Cr₂O₃作为外源指示剂测定水产动物的表观消化率，并且陈建明等^[16]也做了相关试验证实。与此同时，试验饲料的配制遵循了“70%基础饲料+30%待测饲料原料”的原则，能充分给中华鳖幼鳖正常生长提供所需要的各种营养物质^[17]，既保证了饲料营养成分组成的平衡，满足试验幼鳖的健康正常生长所需，也保证了表观消化率测定的科学性、准确性。

饲料原料中蛋白质的质量是影响鱼类营养的首要因子，而水产动物对其中蛋白质和氨基酸的消化率是判断饲料原料能否被利用的重要指标^[18]。本试验结果表明，中华鳖幼鳖对肉骨粉中粗蛋白质的表观消化率最高，达到90.57%，这可能与中华鳖偏肉食的食性有关，中华鳖自身摄食的蛋白质中主要以动物蛋白质为主，因此对动物性原料中蛋白质的利用率较高。该现象与有些报道是相近的，如Zhou等^[19]比较团头鲂对动物性蛋白质原料和非动物性蛋白质原料表观消化率时发现，团头鲂对非动物性蛋白质原料的表观消化率要显著高于动物性蛋白质原料，进一步说明水产动物对饲料中蛋白质的消化率与其食性有关。中华鳖幼鳖对蚕蛹和发酵豆粕中粗蛋白质也表现出较高的利用率(粗蛋白质表观消化率分别为85.75%、86.34%)，这与刘玉良等^[20]和纪文秀等^[21]对青鱼和花鲈的研究结果相近，表明这2种饲料原料中的蛋白质均可被中华鳖幼鳖较好地消化吸收。本试验中发酵豆粕中粗蛋白质和总氨基酸的表观消化率分别为86.34%和87.90%，这与Zou等^[22]的研究结果相一致，其研究表明发酵豆粕仅能替代中华鳖饲料中5%的鱼粉，添加9.4%的发酵豆粕即显著降低其生长和饲料效率。由表3可知，玉米蛋白粉中粗蛋白质的表观消化率最低，与雷武等^[23]报道的长吻鱿(Leiocassis longirostris)对玉米蛋白粉中粗蛋白质的表观消化率很低的结果相吻合。研究表明，在饲料原料中，玉米蛋白粉因缺乏赖氨酸，导致当玉米蛋白粉代替鱼粉比例高于20%时，大菱鲆(Scophthatmus maximus)^[24]和黄条 (Seriola quinqueradiata)^[25]的蛋白质、必需氨基酸和能量的表观消化率明显下降。为了均衡氨基酸含量，可将富含赖氨酸的发酵豆粕与玉米蛋白粉同时使用。本试验结果表明，中华鳖幼鳖对蚕蛹中粗蛋白质和各氨基酸的表观消化率均较高，且其氨基酸组成合理，比例平衡，必需氨基酸的含量高，是较为出色的蛋白质饲料原料，但是储存不易夏季容易滋生蝇虫。肉骨粉作为蛋白质饲料原料，中华鳖幼鳖对其各氨基酸的表观消化率均较低，然而对其粗蛋白质的表观消化率则较高，可能与肉骨粉中氨基酸的平衡性较差有关，具体原因有待于今后进一步深入研究。

蚕蛹可作为中华鳖幼鳖的优质动物性蛋白质源，发酵豆粕可作为中华鳖幼鳖较好的植物性蛋白质源。