烟酸是动物体内必需的一种水溶性维生素,研究表明,烟酸在维持动物正常生长、协调机体抗氧化、维持骨骼正常生长[1,2]及保持基因稳定性上必不可少[3],而且在奶牛抵抗热应激方面作用显著[4],近几年的研究还发现,烟酸在调节体内血脂水平方面具有重要作用,但在獭兔方面的研究甚少,其作用机理不明确,有待于进一步研究。我国还未正式出台完整的獭兔饲养标准,因此对獭兔烟酸需要量的研究具有重要意义。本文以生长獭兔为研究对象,探讨饲粮烟酸水平对其生长性能、毛皮品质、血脂代谢及血清抗氧化指标的影响,寻求獭兔饲粮中烟酸适宜水平,初步研究烟酸血脂代谢的作用机理,为我国制定獭兔饲养标准提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 试验饲粮
基础饲粮参照NRC(1977)家兔饲养标准配制而成,基础饲粮组成及营养水平见表1。在基础饲粮中分别添加0(对照组)、50、100、200 mg/kg烟酸,制成4种试验饲粮,加工成直径4~6 mm的颗粒饲料,通风干燥保存。4个组饲粮烟酸的实测含量分别为24.78、60.06、111.54和238.53 mg/kg。 1.2 试验设计与饲养管理
试验选用健康、平均体重为(1 860±144) g的3月龄獭兔160只,公母各占1/2,随机分成4组,每组40个重复,每个重复1只獭兔。分别饲喂以上4种饲粮,预试期7 d,正试期53 d。试验兔单笼饲养,试验期间早晚各喂1次,自由饮水,采用常规饲养管理和免疫程序,自然采光、通风。
![]() | 表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) |
在试验开始后第53天早晨空腹称重,每组随机抽取8只试验兔,立即心脏采血10 mL,一部分置于抗凝管中摇匀,静止,分离所得血浆分装于Eppendorf管中;另一部分37 ℃水浴40 min后,3 000 r/min离心15 min,分离所得血清分装于Eppendorf管中;Eppendorf管都置于-20 ℃冷冻保存,待测抗氧化功能和血液指标。
采血完成后将试验兔颈动脉放血屠宰,屠宰后的试验兔剥皮,用于毛皮质量分析。 1.4 测定指标与方法 1.4.1 生长性能指标
试验结束后,以重复为单位称量试验兔的体重,并统计全期的喂料量,计算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。 1.4.2 毛皮品质
试验兔剥皮后,沿着腹中线剖开,立即置于电子秤上称重,测其毛皮质量;毛皮平铺于托盘内,直尺垂直于毛皮测量被毛长度;软尺测量毛皮长和宽(长:尾根部到颈后部的长度;宽:背部宽度),计算毛皮面积;毛皮折叠,用游标卡尺测厚度,毛皮厚度为所测值的1/2。 1.4.3 血液指标
雌二醇(E2)含量采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定;总蛋白(TP)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量采用日本和光纯药工业株式会社提供的试剂盒测定,按说明书操作,并在日立7020型全自动分析仪上进行测定;甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、游离脂肪酸(NEFA)含量采用南京建成提供的试剂盒并严格按说明书操作测定。 1.4.4 血清抗氧化指标
血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量均在UV-2450型紫外可见分光光度计上测定,试剂盒购自南京建成生物工程研究所。 1.5 数据处理与分析
数据以平均值和均方根误差(R-MSE)表示,采用SAS 9.1统计软件中的GLM进行数据的方差分析,若有显著差异,则采用Duncan氏法进行数据的多重比较。 2 结 果 2.1 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔生长性能的影响
由表2可以看出,在初始体重无显著差异(P>0.05)的情况下,饲粮烟酸添加水平对ADG、ADFI、F/G均无显著影响(P>0.05),但是在50 mg/kg添加组ADG最大,F/G最小。
![]() | 表2 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary nicotinic acid supplemental level on growth performance of growing Rex rabbits (n=8) |
由表3可以看出,饲粮烟酸添加水平对毛皮重量、毛皮面积、被毛长度没有显著影响(P>0.05),但随着饲粮烟酸添加水平增加,被毛长度呈先降低后增加的趋势,在200 mg/kg添加组达到最大值;饲粮烟酸添加水平对毛皮厚度有显著影响(P<0.05),0 mg/kg添加组显著高于50、100、200 mg/kg添加组(P<0.05),100 mg/kg添加组和200 mg/kg添加组间没有显著差异(P>0.05)。
![]() | 表3 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔毛皮品质的影响 Table 3 Effects of dietary nicotinic acid supplemental level on fur quality of growing Rex rabbits (n=8) |
由表4可以看出,饲粮烟酸添加水平对血清CHO、HDL-C、NEFA含量有极显著影响(P<0.01),而对血清TP、TG、LDL及血浆E2含量均无显著影响(P>0.05)。其中,血清CHO含量在100 mg/kg添加组达到最低值,且100 mg/kg添加组极显著低于0、50、200 mg/kg添加组(P<0.01),0、50 mg/kg添加组显著低于200 mg/kg添加组(P<0.05),0 mg/kg添加组和50 mg/kg添加组间差异不显著(P>0.05);0 mg/kg添加组血清HDL-C含量极显著低于50、100、200 mg/kg添加组(P<0.01),50 mg/kg添加组和100 mg/kg添加组间差异显著(P<0.05)。随着饲粮烟酸添加水平增加血清NEFA含量呈极显著下降(P<0.01)。 2.4 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔血清抗氧化指标的影响
由表5可以看出,饲粮烟酸添加水平对血清GSH-Px、T-SOD活性和MDA含量均无显著影响(P>0.05)。
![]() | 表4 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔血脂代谢指标的影响 Table 4 Effects of dietary nicotinic acid supplemental level on blood lipid metabolism indices of growing Rex rabbits (n=8) |
![]() | 表5 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔血清抗氧化指标的影响 Table 5 Effects of dietary nicotinic acid supplemental level on serum antioxidant indices of growing Rex rabbits (n=8) |
烟酸是动物生长不可缺少的一种水溶性B族维生素,适量添加可促进动物生长,但长期过量添加也会引起一系列不良反应,可能出现心率增加、脂肪肝、生长抑制,严重时可导致死亡。由于兔方面烟酸添加水平的研究很少,在其他物种方面,刘国华等[5]以肉仔鸡为研究对象,发现烟酸对1~6周龄肉仔鸡的生长性能没有显著影响。Real等[6]的试验结果显示,随着饲粮烟酸添加水平的增加,猪的ADFI、ADG呈先增加后降低的趋势,在55 mg/kg添加组达到最佳,对F/G没有显著影响。本试验中,饲粮烟酸添加水平对试验兔ADG、ADFI、F/G没有显著影响,但从数据趋势上可以看出,随着烟酸添加水平增加,饲粮烟酸添加水平为50 mg/kg(饲粮烟酸实测含量为60.06 mg/kg)时ADG最高,F/G最低。 3.2 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔毛皮品质的影响
早前意大利发现糙皮病是一种营养性缺乏症,其症状表现为皮炎、腹泻和精神障碍,后来发现烟酸是糙皮病的防治因子。烟酸通过简单扩散进入肠黏膜,在黏膜中转化成烟酰胺,烟酰胺是辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)的重要组成部分,以NAD和NADP为辅酶的一些脱氢酶对于维持正常组织的完整性(特别是皮肤)起重要作用[7]。本试验中,饲粮烟酸添加水平对生长獭兔的毛皮重量、毛皮面积、被毛长度均没有显著影响,但从数据趋势上可以看出,随着饲粮烟酸添加水平增加,被毛长度先降低后增加,且在200 mg/kg添加组达到最大值;单从数据上看饲粮烟酸添加水平对毛皮厚度有显著影响,鉴于差异较小,且本试验数据皆是由鲜皮测量而来,而鲜皮具有较大伸缩性,所以,本试验认为毛皮厚度的微小差异可忽略不计。 3.3 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔血脂代谢指标的 影响
本试验中饲粮烟酸添加水平对血清TP含量影响不显著,但随着饲粮烟酸添加水平增加而呈上升的趋势,这与葛文霞[7]以21日龄肉仔鸡为研究对象发现在饲粮中添加60 mg/kg的烟酸血清中TP的含量有所提高的试验结果一致。
E2与胰岛素在脂肪合成过程中的作用相同,是促进脂肪合成的激素之一。外源激素可使未达性成熟的蛋鸡血脂含量升高,肝脂含量上升,提高饲粮烟酸添加水平(0、15、30、60和120 mg/kg的烟酸)可以使鸡血浆E2含量分别达31.89、29.07、26.02、22.84和24.81 pg/mL[8]。本试验中,随着饲粮烟酸添加水平增加血浆E2含量呈先降低后升高的趋势,并且在饲粮添加水平为50 mg/kg(饲粮烟酸实测含量为60.06 mg/kg)时达到最低值,该结果说明一定范围内饲粮烟酸水平能够抑制血浆E2含量从而抑制脂肪合成,与文杰等[9]的报道一致。
肝脏是脂肪合成和代谢的主要场所。LDL-C是将肝脏合成的内源性胆固醇转运到肝外组织,保证组织细胞对胆固醇的需求,HDL-C是从肝外组织将胆固醇转运到肝内进行代谢[10]。TG是一种能量储备物质,是NEFA和甘油结合形成的,具体烟酸是如何影响獭兔血脂代谢的还需进一步探讨。人类医学上,烟酸可以降低血清中CHO、TG、NEFA的含量[11,12,13,14],在临床上烟酸作为有效的调血脂药物[15,16],文杰等[9]研究也发现烟酸能降低血清CHO、NEFA含量。本试验条件下,饲粮烟酸添加水平对血清CHO含量影响极显著,100 mg/kg添加组极显著低于0、50和200 mg/kg添加组,且0、50和200 mg/kg添加组之间也有显著差异;对血清NEFA含量的影响极显著,随着饲粮烟酸添加水平增加,血清NEFA含量极显著下降,这与韩永利[17]在奶牛上的研究结果一致。饲粮烟酸添加水平对血清TG、LDL-C含量没有显著的影响,随着饲粮烟酸添加水平的增加,血清TG、LDL-C含量呈先降低后升高的趋势,都在50 mg/kg添加组达到最低值。饲粮烟酸添加水平对血清HDL-C含量影响极显著,0 mg/kg添加组极显著低于50、100和200 mg/kg添加组。朱泽远等[18]以21日龄樱桃谷鸭为研究对象,试验表明饲粮烟酸添加水平可能影响血清TG、LDL-C、HDL-C含量,但差异不显著,这与本试验结果不一致,可能是烟酸降低了载脂蛋白AⅠ(ApoA-Ⅰ)结合脂蛋白的分解代谢率来提高血清HDL-C含量,而ApoA-Ⅰ是与HDL-C结合在一起的[19],具体原因有待于进一步研究。
由此可说明,可通过增加血清HDL-C含量来降低胆固醇含量调节血脂,本试验条件下,饲粮烟酸添加水平为100 mg/kg(饲粮烟酸实测含量为111.54 mg/kg)时对3~5月龄生长獭兔血脂调节作用最大。 3.4 饲粮烟酸添加水平对生长獭兔血清抗氧化性能的影响
T-SOD、GSH-Px作为抗氧化系统中的重要酶系,其活性与机体清除自由基的能力呈正比,MDA是脂质过氧化反应链式终止阶段产生的小分子产物,其含量可以间接反映自由基的产生情况和机体组织细胞的脂质过氧化程度[21],而且机体中血清MDA含量作为判断机体内的氧化应激程度,较为敏感、准确及方法可操作性强。烟酸作为B族维生素主要以辅酶形式参与机体物质能量代谢,从而维持机体正常代谢和生理功能,作为抗氧化剂,可改善机体抗氧化能力,蒋亚军[20]以奶牛为研究对象,发现烟酸可以减少脂质过氧化物积聚,促进血清T-SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性提高,对血清MDA含量具有一定的降低作用,至于在獭兔上烟酸是否具有抗氧化功能目前还没有报道,本试验检测血清T-SOD、GSH-Px活性和MDA含量,初步探讨一下烟酸对獭兔抗氧化性的影响,结果表明,随着烟酸添加水平的增加,血清T-SOD和GSH-Px活性先升高后降低,血清MDA含量先降低后升高,说明烟酸在獭兔抗氧化方面有一定作用,但作用不显著。 4 结 论
综合本试验结果,3~5月龄生长獭兔饲粮烟酸适宜添加水平为100 mg/kg(饲粮烟酸实测含量为111.54 mg/kg)。
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