玉米是我国主要储备粮品种之一，是饲料工业中使用最广泛的谷物。研究表明随着储存时间的延长，玉米品质以及营养发生退化^{[1, 2]}，尤其是由于玉米胚部不饱和脂肪酸含量高，而易发生氧化酸败^[3]。动物使用长期储存玉米会引发不良影响，本实验室前期研究表明，肉鸡饲粮中使用长期储存的玉米后，肉鸡抗氧化功能下降^[4]；同时崔小燕等^[5]研究发现，饲粮中使用长期储存玉米会降低肉鸡的免疫功能。因此缓解长期储存玉米的不良影响，对促进动物健康养殖意义重大。生产实践中，通常加入抗氧化剂防止饲料的氧化变质，以减缓对动物的氧化损伤。二丁基羟基甲苯(butylated hydroxytoluene，BHT)作为饲料工业中广泛使用的抗氧化剂，能清除自由基，防止饲料中不饱和脂肪酸等营养物质的氧化变质^[6]。维生素E作为天然的强效抗氧化剂，能清除自由基，阻断脂质过氧化反应，以应对氧化应激的不良影响^[7]。而茶多酚(tea polyphenol，TP)是新兴的抗氧化剂，具有抗氧化、清除自由基、增强免疫力等多种生物学功能^[8]。

陈玉米对动物产生的不良影响是否能通过添加抗氧化剂来缓解，目前还不清楚。因此，本试验选取粮库中储存3年的玉米，分别添加上述3种抗氧化剂进行全价饲粮的配制，旨在探究这3种抗氧化剂对肉鸭生长性能和抗氧化功能的影响，并确定出最适宜的抗氧化剂，为陈玉米的合理使用提供相应参考以及科学依据。

储存3年玉米来自于北京周边粮库，储存条 件符合GB/T 7415—2008标准(玉米的理化性质见表1)。呕吐毒素(GB/T 23503)、玉米赤霉烯酮(GB/T 23504)、黄曲霉毒素B₁(GB/T 5009.22)含量由谱尼测试(北京)公司检测。烟曲霉素B₁、烟曲霉素B₂含量采用高效液相色谱荧光检测法，由百奥明(上海)饲料添加剂公司检测。霉菌毒素含量低于国家与欧盟委员会2006/576/EC的标准。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 储存3年玉米的理化性质Table 1 Physicochemical property of maize storied for 3 years 项目 Items 含量 Content 项目 Items 含量 Content 水分 Mositure/% 12.5 亚油酸 C18∶2/% 1.25 容重 Unit weight/(g/L) 694 亚麻酸 C18∶3/% 0.03 粗蛋白质 CP/% 7.76 伏马霉素B1 Fumagillin B1/(μg/kg) 1 804 过氧化氢酶 CAT/(mg/g) 153.42 伏马霉素B2 Fumagillin B2/(μg/kg) 858 过氧化物酶 POD/[U/(g·min)] 237.98 黄曲霉毒素 Alatoxin/(μg/kg) ＜5 脂肪酸价 FAV/(mg/g) 0.529 赤霉烯酮 Zeranol/(μg/kg) ＜50 油酸 C18∶1/% 0.65 呕吐霉素 Vomitoxin/(μg/kg) ＜500

表1 储存3年玉米的理化性质 Table 1 Physicochemical property of maize storied for 3 years

选取体重均匀、健康的1日龄雄性北京鸭(北京市南口北京鸭育种中心)192只，采用单因素完全随机设计，分为4组，每组6个重复，每个重复8只。Ⅰ组(对照组)饲喂基础饲粮(不添加饲料抗氧化剂)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别饲喂在基础饲粮中添加120 mg/kg TP、维生素E和BHT的试验饲粮。TP纯度≥99%，杭州禾田生物技术有限公司提供；维生素E醋酸酯，有效含量≥50%，巴斯夫维生素有限公司提供；BHT纯度≥99.5%，德国朗盛有限公司提供。试验采用玉米-豆粕型饲粮(基础饲粮组成及营养水平见表2，抗氧化剂从麦饭石的比例中扣除)，参照NY/T 2122—2012《肉鸭饲养标准》，使用储存3年玉米作为能量原料配制成颗粒状全价饲粮。

表2表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) % 项目 Items 含量 Content 1～21日龄 1 to 21 days of age 22～42日龄 22 to 42 days of age 原料 Ingredients 玉米 Corn 61.00 61.00 豆粕 Soybean meal 25.30 18.00 面粉 Wheat flour 5.00 12.28 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 4.60 5.00 磷酸氢钙 CaHPO4 1.70 1.50 石粉 Limestone 1.20 1.10 食盐 NaCl 0.32 0.30 DL-蛋氨酸 DL-Met 0.16 0.12 L-赖氨酸盐酸盐 L-Lys·HCl 0.21 0.21 色氨酸 Trp 0.02 0.02 复合多维 Multi-vitamin supplement1) 0.02 0.02 复合矿物质 Multi-mineral supplement2) 0.20 0.20 氯化胆碱 Choline choride 0.20 0.20 麦饭石 Maifanite 0.07 0.06 合计 Total 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels3) 代谢能 ME/(MJ/kg) 11.82 12.37 粗蛋白质 CP 19.57 17.70 赖氨酸 Lys 1.01 0.90 蛋氨酸＋半胱氨酸 Met＋Cys 0.77 0.70 钙 Ca 0.99 0.86 有效磷 AP 0.45 0.40 1)复合多维为每千克饲粮提供 The multi-vitamin supplement provides the following per kg of diets：VA 12 500 IU，VD3 3 500 IU，VE 18.75mg，VK3 2.65 mg，VB2 6 mg，VB12 0.025 mg，生物素 biotin 0.032 5 mg，叶酸 folic acid 12 mg，D-泛酸 D-pantothenic acid 50 mg。 2)复合矿物质为每千克饲粮提供 The multi-mineral supplement provides the following per kg of diets：Fe (as ferrous sulfate) 80 mg，Cu (as copper sulfate) 6 mg，Zn (as zinc sulfate) 40 mg，Se (as sodium selenite) 0.15 mg，I (as potassium iodide) 0.35 mg。 3)营养水平为计算值。Nutrient levels are calculated values.

表2 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 2 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)

试验肉鸭采用网上饲养，乳头式饮水器供水，自由饮水，自由采食。24 h光照，保持舍内良好通风。试验期42 d。按照北京商品鸭饲养管理程序进行饲养管理。试验期间每天记录舍内温度、湿度的变化以及肉鸭死亡和淘汰情况。

在试验开始及肉鸭21和42日龄时，分别以重复为单位，对试验肉鸭进行空腹称重，记录初生重及21和42日龄体重，并统计前期和后期的耗料量，对死亡肉鸭以及淘汰肉鸭的耗料量进行校正，计算平均日采食量(average daily feed intake，ADFI)、平均日增重(average daily gain，ADG)以及料重比(feed/gain，F/G)。

肉鸭21和42日龄时，从每个重复随机选取1只，每组6只，通过颈静脉采血，置于一次性真空采血管中。室温放置1 h至全部凝集，3 000 r/min离心10 min，制备血清，置于-20 ℃保存。按照试剂盒(南京建成生物工程研究所)的方法，使用752紫外可见分光光度计(上海菁华仪器有限公司)检测总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)等抗氧化指标。

采用SPSS 20.0进行单因子方差分析(one-way ANOVA),并且使用Duncan氏法多重比较检验，以P＜0.05作为差异显著性判断标准，结果以平均值±标准差表示。 2 结 果 2.1 TP、维生素E、BHT对肉鸭生长性能的影响

由表3可知，与对照组相比，1～21日龄时，添加抗氧化剂后，ADFI以及ADG提高，维生素E能显著提高ADFI、ADG(P<0.05)，而TP和BHT对ADFI、ADG影响不显著(P>0.05)；22～42日龄时，TP和维生素E都能显著提高ADG(P<0.05)，分别提高了6.39%、6.90%，对ADFI无显著影响(P>0.05)；无论1～21日龄还是22～42日龄，TP、维生素E和BHT对F/G都没有显著影响(P>0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 TP、维生素E、BHT对肉鸭生长性能的影响Table 3 Effects of tea polyphenol,vitamin E and butylated hydroxytoluene on growth performance of meat ducks 项目 Items 日龄 Days of age 组别 Groups P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 平均日采食量 ADFI/g 1～21 99.25±2.92b 100.81±3.43b 105.07±1.64a 101.95±3.32ab 0.017 平均日增重 ADG/g 61.01±1.46b 61.05±1.26b 63.10±0.81a 61.92±1.15ab 0.021 料重比 F/G 1.63±0.02 1.65±0.30 1.67±0.02 1.65±0.04 0.105 平均日采食量 ADFI/g 22～42 236.59±15.05 248.31±11.69 254.84±17.04 246.68±7.83 0.160 平均日增重 ADG/g 85.93±4.38b 91.42±4.16a 91.86±3.21a 88.73±1.96ab 0.032 料重比 F/G 2.75 ±0.06 2.71±0.04 2.77±0.10 2.78±0.06 0.378 同行数据肩标无字母或者相同小写字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。 In the same row,values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05),while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表3 TP、维生素E、BHT对肉鸭生长性能的影响Table 3 Effects of tea polyphenol,vitamin E and butylated hydroxytoluene on growth performance of meat ducks

由表4可知，与对照组相比，TP能显著提高21和42日龄肉鸭血清的T-AOC(P<0.05)，显著提高42日龄血清CAT活性(P<0.05)；维生素E能显著提高42日龄血清CAT活性(P<0.05)，对血清T-AOC的影响不显著(P>0.05)；BHT能显著提高21日龄血清T-AOC以及21和42日龄血清CAT活性(P<0.05)；3种抗氧化剂对21日龄 血清MDA含量影响均不显著(P>0.05)，有降低 42日龄血清MDA含量的趋势(P=0.079)；3种抗氧化剂对血清GSH-Px、T-SOD活性的影响均不显著(P>0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 TP、维生素E、BHT对肉鸭血清抗氧化功能的影响Table 4 Effects of tea polyphenol,vitamin E and butylated hydroxytoluene on serum antioxidant function of meat ducks 项目 Items 日龄 Days of age 组别 Groups P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ 总抗氧化能力 21 1.07±0.14c 1.56±0.19a 1.15±0.14bc 1.33±0.18b <0.001 T-AOC/(U/mL) 42 1.41±0.44b 2.29±0.71a 1.27±0.33b 1.25±0.33b 0.003 丙二醛 21 3.36±0.35 2.76±0.45 2.93±0.62 3.07±0.55 0.248 MDA/(nmol/mL) 42 4.57±1.28 4.37±0.37 3.36±1.03 4.62±0.61 0.079 过氧化氢酶 21 13.59±4.46b 14.91±3.78b 16.21±5.17ab 22.60±7.49a 0.042 CAT/(U/mL) 42 9.97±3.11b 15.86±4.21a 21.78±4.25a 17.63±7.08a 0.004 谷胱甘肽过氧化物酶 21 521.90±7.34 475.59±50.04 494.24±57.69 554.91±84.20 0.119 GSH-Px/(U/mL) 42 621.93±45.17 581.34±36.45 580.86±47.58 621.97±22.22 0.122 总超氧化物歧化酶 21 210.29±15.51 184.45±53.41 177.04±22.09 192.60±36.45 0.412 T-SOD/(U/mL) 42 163.42±47.16 163.43±47.16 145.73±33.59 147.02±27.21 0.772

表4 TP、维生素E、BHT对肉鸭血清抗氧化功能的影响Table 4 Effects of tea polyphenol,vitamin E and butylated hydroxytoluene on serum antioxidant function of meat ducks

玉米陈化、品质劣变的主要原因是脂肪酸积累、过氧化物酶(POD)活性的降低^[9]等，同时脂肪酸价是目前评价玉米储存品质的重要指标。由表1可知本试验中选取的玉米为轻度不宜存(参照GB/T 20570—2006《玉米储存品质判定规则》)，并且储存3年玉米POD活性低于文献^[10]中储存0年的玉米。由此可知，本试验选取的玉米属于陈玉米。由于其来自于粮库，储存条件适宜，霉菌毒素的含量并不超标，因此本试验中肉鸭抗氧化功能改变显然是玉米自身营养成分的改变如脂肪酸氧化等所引起的。

陈玉米饲喂肉鸭后，机体摄入外源性自由基增多，血清抗氧化功能降低^[4]。研究表明饲粮中添加玉米油能显著提高肉鸡血清和肝脏的脂质过氧化水平，提高组织对于氧化损伤的易感性^[11]。由此肉鸭采食陈玉米饲粮后更易产生氧化损伤，这种损伤可能会引起采食量降低，体重降低，降低生长性能^[12]。本试验发现TP能显著提高22～42日龄肉鸭的ADG，维生素E能显著提高1～21日龄肉鸭ADFI、ADG以及22～42日龄ADG。这与很多研究结果相同，王妍琪等^[13]认为茶多酚和维生素E对1～3周热应激肉仔鸡的生长性能有一定促进作用，对试验全期生长性能影响不显著。Lu等^[14]将维生素E添加到含有3%氧化豆油以及3%不饱和脂肪酸的饲粮中，发现维生素E能提高1～42日龄肉鸡ADG，降低F/G，提高肉鸡的生长性能。这表明TP和维生素E作为强效的抗氧化剂能提高生长性能，它们可能是通过增强机体的抗氧化功能，缓解陈玉米对机体产生的氧化损伤。

T-AOC反映机体酶类以及非酶类的抗氧化防御系统对于外界刺激的代偿性作用，以及自由基的代谢状态，是评估机体抗氧化功能的综合性指标^[15]，比单一抗氧化指标更为重要。CAT能特异性分解体内过多的过氧化氢(H₂O₂)，以减少过氧化损伤，保护细胞膜的完整性。本试验发现TP能显著提高肉鸭血清的T-AOC以及CAT活性，维生素E能显著提高肉鸭血清CAT活性，BHT能显著提高肉鸭血清的T-AOC以及CAT活性。同时Hongqin^[16]发现添加TP和维生素E能使肉鸡的血清T-AOC显著升高，血清MDA含量降低，与本试验结果基本一致。这可能是由于维生素E和TP能提高血清CAT活性，有效地清除氧自由基^{[17, 18]}。TP、维生素E以及BHT都是酚类抗氧化剂，经常用于油脂的抗氧化，茶多酚对油脂的抗氧化活性高于维生素E以及BHT^{[19, 20]}。本试验也发现TP表现为较好的抗氧化活性，这可能是因为TP与过氧化自由基作用后所生成的惰性自由基比BHT、维生素E稳定。

GSH-Px以及SOD是酶类抗氧化剂中重要组成部分，能清除体内产生的自由基，减少机体损伤。MDA是脂质过氧化的产物，其含量反映机体脂质过氧化以及细胞损伤的程度。本试验发现3种抗氧化剂对血清GSH-Px、T-SOD活性及MDA含量无显著影响，只是在42日龄时对血清MDA含量有降低趋势。等^[21]在轻微氧化油脂中加入维生素E后，发现脂质过氧化指标得到了改善，但是对血清GSH-Px活性无显著影响，维生素E对血清GSH-Px活性的影响和本试验结果一致。这可能是由于本试验中选取储存3年的玉米脂肪酸价稍高，属于轻度不宜存，脂质过氧化的程度不高，不足以对血清GSH-Px、T-SOD活性以及MDA含量产生显著的影响。

① 陈玉米饲粮中添加TP和维生素E对肉鸭生长性能以及抗氧化功能均有不同程度的改善，BHT只改善了肉鸭的抗氧化功能。

② 陈玉米饲粮中添加TP效果最好。