豆粕作为家禽的主要蛋白质来源不仅可提供丰富的可消化氨基酸，还能提供一定数量的可消化磷。因此，准确评定肉鸡饲粮中豆粕磷的消化率是合理配制家禽饲粮的基础。与磷的表观消化率相比，考虑了动物内源磷损失的真消化率更能真实准确地反映出动物对磷的生物学利用效率^{[1, 2, 3]}。线性回归法和差量法是测定养分真消化率的主要方法，在早期研究中已被广泛用于磷和氨基酸真消化率的测定^{[4, 5, 6, 7]}。虽然前期已有大量研究报道了肉鸡饲粮中豆粕的磷真消化率，但不同试验结果之间的差异较大，导致上述差异的主要原因可能在于不同试验之间饲粮钙磷比和磷真消化率的测定方法有所不同，从而影响了待测饲料原料的磷真消化率评定^{[8, 9, 10, 11]}。本试验通过使用线性回归法和差量法，研究了钙磷比对肉鸡饲粮豆粕中磷真消化率测定的影响，为标准化磷真消化率测定时的饲粮钙磷比以及合理使用饲料原料磷真消化率测定结果用于饲料配制提供参考。

试验采用3×3因子完全随机区组设计，9个半纯合饲粮包含3个钙磷比(1.0、1.5和2.0)和3个水平的豆粕(30.00%、43.00%和56.00%)。饲粮中的磷主要来源于酪蛋白和豆粕，选择三氧化二铬作为外源指示剂，通过添加石粉调整饲粮钙磷比，具体饲粮组成及营养水平见表1。本试验选用576只15日龄的雄性罗氏肉鸡，根据初始体重随机分为9个处理，每个处理8个重复，每个重复8只鸡。试验期间所有动物饲养于代谢笼内，室内温度控制在24～27 ℃，自然光照，自由采食和饮水，试验期为7 d。试验结束时(22日龄)对每只鸡进行称重，以笼为单位计算采食量，并据此计算饲料转化效率。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of diets (air-dry basis) % 项目 Items 饲粮钙磷比 Dietary Ca∶P ratio 1.0 1.5 2.0 饲粮1 Diet 1 饲粮2 Diet 2 饲粮3 Diet 3 饲粮4 Diet 4 饲粮5 Diet 5 饲粮6 Diet 6 饲粮7 Diet 7 饲粮8 Diet 8 饲粮9 Diet 9 原料 Ingredients 豆粕 Soybean meal 30.00 43.00 56.00 30.00 43.00 56.00 30.00 43.00 56.00 玉米淀粉 Cornstarch 36.56 23.45 10.33 36.26 23.04 9.81 35.96 22.63 9.30 豆油 Soybean oil 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 酪蛋白 Casein 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 蔗糖 Sucrose 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 25.00 食盐 NaCl 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 石粉 Limestone 0.29 0.40 0.52 0.59 0.81 1.04 0.89 1.22 1.55 三氧化二铬 Cr2O3 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 预混料 Premix1) 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels2) 总能 GE/(MJ/kg) 16.87 16.99 17.11 16.92 17.10 17.17 16.80 16.95 17.11 粗蛋白质 CP 18.43 25.79 30.76 18.22 25.36 31.78 18.76 25.11 30.32 钙 Ca 0.22 0.30 0.40 0.36 0.45 0.61 0.47 0.62 0.81 总磷 TP 0.23 0.30 0.38 0.22 0.31 0.39 0.23 0.31 0.38 1)预混料为每千克饲粮提供Premix provided the following per kilogram of diets: Cu (as CuSO4·5H2O)8 mg，Fe (as FeSO4·7H2O)80 mg，Mn (as MnSO4·H2O)20 mg，Zn (as ZnSO4·H2O)80 mg，Se (as Na2SeO3)0.3 mg，I (as KI)0.4 mg，VA 12 000 IU，VD3 6 000 IU，VE 60 IU，VK3 3.6 mg，VB1 2 mg，VB2 6 mg，VB6 4 mg，VB12 0.02 mg，生物素 biotin 0.2 mg，泛酸 pantothenic acid 10 mg，烟酸 niacin 80 mg，叶酸 folic acid 1 mg。 2)实测值Measured value。

表1 饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of diets (air-dry basis)

试验结束时(22日龄)，使用二氧化碳麻醉屠宰所有试验动物，收集每笼鸡所有的回肠食糜，混合均匀后在60 ℃烘箱中烘干至恒重，粉碎待测。

饲料样本和食糜干物质含量在105 ℃条件下干燥24 h后测定得出。使用比色法测定饲粮和食糜中铬和磷的含量^[12]。

饲粮磷的表观消化率按照公式(1)计算：

食糜中磷的排泄量和可消化磷分别按照公式(2)和(3)计算：

使用线性回归法测定豆粕中磷的真消化率按照公式(4)计算：

如公式(4)线性方程所描述，用可消化磷与饲粮总磷摄入量做回归，得出的回归方程斜率即为豆粕中磷的真消化率。

使用差量法测定豆粕中磷的真消化率按照公式(5)计算：

如公式(5)所描述，磷的真消化率由豆粕含量56.00%组和豆粕含量30.00%组的可消化磷之差除以2组之间总磷摄入量之差得出。

使用SAS 9.3统计分析软件中的一般线性模型(GLM)程序按照3×3因子完全随机区组设计分析试验数据，所有试验数据均以笼为单位进行统计分析，统计模型为y_ijk=μ+αi+βj+γk+(αβ)_ij+ε_ijk，其中μ为总体平均效应，αi为豆粕水平效应，βj为饲粮钙磷比效应，γk为区组效应，(αβ)_ij为豆粕水平和钙磷比的互作效应，ε_ijk为试验误差效应。试验数据以平均值±平均标准误表示，P<0.05为差异显著。

由表2可见，饲粮钙磷比对肉鸡体增重、采食量、饲粮转化效率和干物质摄入量无显著影响(P>0.05)，而干物质消化率和胫骨灰分含量受饲粮钙磷比的影响(P<0.01)。肉鸡体增重(P<0.01)、采食量(P<0.1)、饲料转化效率(P<0.01)、干物质消化率(P<0.01)和胫骨灰分含量(P<0.05)受饲粮豆粕添加水平的影响。随着饲粮豆粕添加水平的提高，肉鸡体增重和饲料转化效率呈线性增加(P<0.01)，而干物质消化率呈线性降低(P<0.01)。此外，干物质消化率受饲粮钙磷比和豆粕水平互作效应的影响(P<0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 饲粮钙磷比对肉鸡生长性能和干物质消化率的影响 Table 2 Effects of dietary Ca ∶ P ratio on growth performance and dry matter digestibility of broilers 项目 Items 饲粮钙磷比 Dietary Ca∶P ratio SEM 1.0 1.5 2.0 饲粮1 Diet 1 饲粮2 Diet 2 饲粮3 Diet 3 饲粮4 Diet 4 饲粮5 Diet 5 饲粮6 Diet 6 饲粮7 Diet 7 饲粮8 Diet 8 饲粮9 Diet 9 体增重 BW gain/g 310 367 387 319 382 390 305 388 384 11 采食量 Feed intake/g 518 539 558 544 563 556 529 537 541 12 饲料转化效率 Gain:feed/(g/kg) 599 682 690 588 680 702 575 725 711 13 干物质摄入量 DM intake/g 477 492 508 500 516 508 480 492 499 11 干物质消化率 DM digestibility/% 82.43 76.89 72.68 81.22 75.32 72.35 82.65 78.66 72.82 0.42 胫骨灰分 Tibia ash/% 47.26 47.67 48.04 46.22 46.78 46.68 47.12 47.11 48.51 0.39 P值 P-value 钙磷比 Ca∶P ratio 豆粕水平 SBM level 互作 Interaction 1.0 1.5 2.0 线性 Linear 二次 Quadratic 线性 Linear 二次 Quadratic 线性 Linear 二次 Quadratic 体增重 BW gain/g 0.599 <0.01 0.765 <0.01 0.180 <0.01 0.054 <0.01 <0.01 采食量 Feed intake/g 0.137 0.089 0.705 0.053 0.948 0.871 0.374 0.575 0.910 饲料转化效率 Gain:feed/(g/kg) 0.345 <0.01 0.103 <0.01 <0.05 <0.01 <0.05 <0.01 <0.01 干物质摄入量 DM intake/g 0.153 0.172 0.796 0.107 0.966 0.997 0.394 0.484 0.961 干物质消化率 DM digestibility/% <0.01 <0.01 <0.05 <0.01 0.205 <0.01 <0.01 <0.01 0.078 胫骨灰分 Tibia ash/% <0.01 <0.05 0.426 0.233 0.970 0.712 0.503 <0.01 0.148

表2 饲粮钙磷比对肉鸡生长性能和干物质消化率的影响 Table 2 Effects of dietary Ca ∶ P ratio on growth performance and dry matter digestibility of broilers

由表3可见，提高饲粮钙磷比导致肉鸡回肠食糜磷排泄量显著增加(P<0.01)，而可消化磷和磷的表观消化率显著降低(P<0.01)。随着饲粮豆 粕水平的提高，肉鸡回肠食糜磷排泄量和可消化磷呈线性增加(P<0.01)，而磷的表观消化率呈线性降低(P<0.01)。可消化磷受饲粮钙磷比和豆粕水平互作效应的影响(P<0.01)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 饲粮钙磷比对肉鸡总磷摄入量和回肠食糜磷的表观消化率的影响 Table 3 Effects of dietary Ca ∶ P ratio on total P intake and apparent P digestibility in ileal digesta of broilers 项目 Items 饲粮钙磷比 Dietary Ca∶P ratio SEM 1.0 1.5 2.0 饲粮1 Diet 1 饲粮2 Diet 2 饲粮3 Diet 3 饲粮4 Diet 4 饲粮5 Diet 5 饲粮6 Diet 6 饲粮7 Diet 7 饲粮8 Diet 8 饲粮9 Diet 9 总磷摄入量 Total P intake/(mg/kg) 2 116 2 745 3 458 2 024 2 837 3 549 2 116 2 837 3 458 磷排泄量 P output/(mg/kg) 329 493 950 468 676 1134 611 786 1 419 48 可消化磷 Digestible P/(mg/kg) 1 787 2 252 2 508 1 556 2 160 2 415 1 504 2 050 2 039 48 磷的表观消化率 Apparent P digestibility/% 84.44 82.05 72.53 76.85 76.15 68.06 71.08 72.28 58.96 1.85 P值 P-value 钙磷比 Ca∶P ratio 豆粕水平 SBM level 互作 Interaction 1.0 1.5 2.0 线性 Linear 二次 Quadratic 线性 Linear 二次 Quadratic 线性 Linear 二次 Quadratic 磷排泄量 P output/(mg/kg) <0.01 <0.01 0.225 <0.01 <0.05 <0.01 <0.05 <0.01 <0.01 可消化磷 Digestible P/(mg/kg) <0.01 <0.01 <0.01 <0.01 <0.05 <0.01 <0.05 <0.01 <0.01 磷的表观消化率 Apparent P digestibility/% <0.01 <0.01 0.610 <0.01 0.122 <0.01 <0.01 <0.01 <0.01

表3 饲粮钙磷比对肉鸡总磷摄入量和回肠食糜磷的表观消化率的影响 Table 3 Effects of dietary Ca ∶ P ratio on total P intake and apparent P digestibility in ileal digesta of broilers

可消化磷与总磷摄入量之间显著线相关是使用线性回归法测定磷真消化率的前提条件，本试验结果满足上述条件，由此得出的线性回归方程见表4。由表4和表5的数据可知，饲粮钙磷比在1.0、1.5和2.0时，由线性回归法测得豆粕中磷的真消化率分别为53.36%、56.81%和40.79%，而差量法测得豆粕中磷的真消化率分别为55.59%、56.36%和39.84%。饲粮钙磷比在2.0时测得磷的 真消化率显著低于饲粮钙磷比在1.0和1.5时测 得磷的真消化率(P<0.05)。在本试验条件下，由线性回归法测得磷的真消化率和差量法测得磷的真消化率之间无显著差异(P>0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 线性回归法测得回归方程 Table 4 The regression equation determined by the regression method 项目 Items 饲粮钙磷比 Dietary Ca∶P ratio 1.0 1.5 2.0 回归方程 Regression equation Y=0.533 6X+602.687 5 Y=0.568 1X+451. 2775 Y=0.407 9X+720.886 5 斜率的标准误 SE of the slope 0.034 6 0.058 7 0.038 8 截距的标准误 SE of the intercept 97.952 8 168.705 0 225.166 4 决定系数 R2 0.90 0.81 0.84 Y表示可消化磷，X表示总磷摄入量。 Y means digestible P,X means total P intake.

表4 线性回归法测得回归方程 Table 4 The regression equation determined by the regression method

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 线性回归法和差量法测得豆粕中磷的真消化率 Table 5 The determined true digestibility of P in soybean meal by the regression method and the difference method 项目 Items 饲粮钙磷比 Dietary Ca∶P ratio SEM 1.0 1.5 2.0 线性回归法测得磷的真消化率 Estimates of true P digestibility by the regression method/% 53.36a 56.81a 40.79b 4.40 差量法测得磷的真消化率 Estimates of true P digestibility by the difference method/% 55.59a 56.36a 39.84b 3.79 同行肩标不同字母者表示差异显著(P<0.05)。 In the same row,values with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05).

表5 线性回归法和差量法测得豆粕中磷的真消化率 Table 5 The determined true digestibility of P in soybean meal by the regression method and the difference method

线性回归法和差量法是测定待测饲料原料中磷真消化率的主要方法，但前期关于饲粮因素影响线性回归法和差量法测得磷真消化率的研究报道较少。因此，本试验通过在肉鸡饲粮中添加3个水平的豆粕(30.00%、43.00%和56.00%)，研究了饲粮钙磷比(1.0、1.5和2.0)对线性回归法和差量法测得豆粕中磷真消化率的影响。在使用线性回归法和差量法测定豆粕中磷真消化率的过程中会通过增加饲粮豆粕添加量的方式调整饲粮磷水平，从而必然导致不同饲粮的粗蛋白质水平有所差异，最终影响肉鸡的生长性能。在本试验条件下，肉鸡体增重和饲料转化效率均随饲粮豆粕水平的提高而线性增加，这与Dilger等^[13]和刘静波等^[14]的研究结果一致。不同处理饲粮的能量水平无显著差异，因此肉鸡采食量和干物质摄入量不受饲粮豆粕水平和钙磷比的影响。钙和磷均为影响肉鸡骨骼生长发育的重要矿物质元素，因此，通过增加饲粮豆粕添加量的方式提高磷水平以及提高钙磷比可显著提高肉鸡胫骨灰分含量，这与Iyayi等^[15]的研究结果一致。豆粕粗纤维含量显著高于玉米淀粉，通过添加玉米淀粉替代豆粕导致饲粮干物质消化率线性降低，这与前期研究结果一致^{[13, 14]}。

饲粮钙磷水平低于动物需要量是使用线性回归法和差量法测定磷真消化率的必要条件^[2]。在本试验中，饲粮钙和总磷的最高水平分别为0.81%和0.39%，低于NRC(1994)^[16]推荐的钙(1.00%)和非植酸磷(0.45%)需要量，满足线性回归法和差量法测定磷真消化率的条件。为缓解以玉米淀粉为主的半纯合饲粮影响肉鸡生长性能，本试验在基础饲粮中添加了5.00%的酪蛋白用于改善饲粮氨基酸模式。添加酪蛋白使得豆粕中的磷并非饲粮磷的唯一来源，但饲粮总磷水平的提高源于豆粕水平的增加，因此对豆粕中磷真消化率的测定无显著影响。提高饲粮豆粕水平导致肉鸡总磷摄入量以及回肠食糜中磷的排泄量显著增加，这与Dilger等^[13]和刘静波等^[14]的研究结果一致。提高饲粮钙磷比显著增加磷的排泄量，从而降低了可消化磷。本试验结果表明，肉鸡回肠食糜磷的表观消化率随饲粮豆粕水平和钙磷比的提高显著降低。肉鸡饲粮钙磷比为1.0(接近饲料原料所含钙磷比)、1.5(商品饲粮钙磷比)和2.0(可消化磷含量较高饲粮钙磷比)时测得磷的表观消化率分别在84.44%～72.53%、76.85%～68.06%以及72.28%～58.96%之间。由于基础饲粮添加了酪蛋白，因此测得磷的表观消化率并非豆粕中磷的表观消化率，而是饲粮总磷(来源于酪蛋白和豆粕)的表观消化率。酪蛋白中磷的消化率显著高于豆粕，提高饲粮豆粕水平降低了酪蛋白与豆粕的比例，从而降低了可消化磷与总磷的比例，最终导致磷的表观消化率随豆粕水平提高呈线性降低。

线性回归法和差量法能否用于准确评定待测饲料原料中磷真消化率的关键在于其理论假设是否成立。使用线性回归法测定磷真消化率的理论假设为：动物总磷摄入量与食糜或粪中磷的排泄量呈线性相关，且饲料原料中磷的消化率和动物内源磷排泄量在一定范围内不受饲粮磷水平的影响。将动物可消化磷与总磷摄入量做回归分析后得出的斜率即为磷的真消化率，当外推动物总磷摄入量为零时测得磷的排泄量(回归方程的截距)即为动物内源磷损失。使用差量法测定磷真消化率时首先需要给动物饲喂含有不同磷水平的饲粮，而真消化率由采食不同磷水平饲粮的动物所测得可消化磷之差除以总磷摄入量之差得出。使用差量法测定磷真消化率的理论假设与线性回归法基本一致，因此通过上述2种方法测得磷真消化率的结果在理论上可以相互印证。本试验通过添加30.00%、43.00%和56.00%的豆粕增加了肉鸡的总磷摄入量，一方面满足了肉鸡的氨基酸需要量，另一方面保证了不同处理之间总磷摄入量的差异满足线性回归法和差量法测定磷真消化率的需要。使用线性回归法和差量法测定磷真消化率时，虽然通过梯度增加待测饲料原料水平提高饲粮磷水平时会导致饲粮粗蛋白质和氨基酸水平发现显著改变，但Varley等^[17]研究指出，饲粮粗蛋白质水平对磷消化率测定无显著影响。本试验中，通过线性回归法和差量法测得豆粕中磷的真消化率在饲粮钙磷比1.0时为53.36%和55.59%、在饲粮钙磷比1.5时为56.81%和56.36%、在饲粮钙磷比2.0时为40.79%和39.84%。由此可见，当钙磷比一致时，由线性回归法和差量法测得磷的真消化率之间无显著差异，这与前期研究结果一致^[10]。此外，将肉鸡饲粮钙磷比由1.0和1.5提高到2.0时，所测得豆粕中磷的真消化率由53.36%～56.81%显著降低到39.84%。Liu等^[9]研究表明，肉鸡饲粮钙磷比为0.8时测得回肠末端豆粕中磷的真消化率为70.8%，显著高于钙磷比在1.2、1.6和2.0时测得磷的真消化率55.3%、45.8%和50.6%。本试验测得豆粕中磷的真消化率普遍低于Liu等^[9]和刘静波等^[14]的研究结果，导致上述差异的主要原因可能在于本试验选用豆粕的植酸磷含量显著高于Liu等^[9]和刘静波等^[14]研究中所选用豆粕的植酸磷含量，从而降低了豆粕中磷的真消化率。对比前期研究和本研究结果可以看出，肉鸡饲粮钙磷比显著影响待测饲料原料中磷真消化率的评定。因此，为合理使用消化代谢试验测得磷真消化率的结果用于商品饲料的配制，动物消化代谢试验使用的试验饲粮应保持与商品饲料具有相同的饲粮钙磷比。

① 提高肉鸡饲粮钙磷比导致豆粕中磷真消化率的测定值偏低。

② 豆粕中磷真消化率的测定值不受真消化率计算方法(线性回归法和差量法)的影响。