维生素A是蛋鸡生产需要的重要脂溶性维生素之一，在体外试验中被证实是一种有效的抗氧化剂^{[1, 2]}，体内试验中也被证实为一种有效的抗氧化和清除自由基物质^[3]。肝脏和血清中维生素A水平是评定饲粮维生素A水平是否满足需要的敏感指标^[4]，而鸡蛋中维生素A含量分析是一项估测产蛋鸡维生素A营养状况的诊断技术，通过对鸡蛋中维生素A含量的分析测定可以估测饲粮最适维生素A水平，还可以直接用于测定维生素A的生物学效价^[5]。目前关于适宜条件以及热应激下蛋鸡维生素A的适宜添加水平的研究较多^[6]，但冬季条件下维生素A适宜添加水平却鲜有报道，北方冬季温度较低(一般在4℃以下)，而当外界温度降到或低于4℃时，即可引起家禽发生冷应激^[7]，但对于冬季条件下维生素A水平对海兰褐产蛋鸡血清抗氧化以及血清、肝脏和蛋中维生素A沉积量的研究国内未见报道。因此，本试验从以上4个方面探讨冬季条件下蛋鸡饲粮适宜维生素A水平。

维生素A由潍坊亨懋动物保健品有限公司提供。

选525只43周龄健康海蓝兰蛋鸡，随机分成5个组，每组5个重复，每个重复21只。对照组饲喂基础饲粮，按我国《鸡饲养标准》维生素A推荐量(8 000 IU/kg)供给；试验组饲粮在基础饲粮中依次增加2 500 IU/kg，即维生素A水平分别为10 500、13 000、15 500和18 000 IU/kg，其他维生素水平与对照组饲粮相同。基础饲粮参照NRC(1994)蛋鸡标准配制，其组成及营养水见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 玉米 Corn 62.00 豆粕 Soybean meal 25.00 豆油 Soybean oil 1.50 石粉 Limestone 8.50 磷酸氢钙 CaHPO4 0.90 鱼粉 Fish meal 0.88 食盐 NaCl 0.22 预混料 Premix1) 1.00 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels2) 代谢能 ME/(MJ/kg) 11.20 粗蛋白质 CP 16.80 钙 Ca 3.40 总磷 TP 0.55 食盐 NaCl 0.25 赖氨酸 Lys 0.76 蛋氨酸 Met 0.24 色氨酸 Try 0.17 1)预混料为每千克饲粮提供The premix provided the following per kg of the diet：VA 8 000 IU，VD3 4 200 IU，VE 30 IU，VK3 4.5 mg，VB1 2.3 mg，VB2 8.8 mg，VB5 7.0 mg，VB6 4.0 mg，VB12 0.016 mg，烟酰胺 niacin 30 mg，氯化胆碱 choline chloride 500 mg，生物素 biotin 0.2 mg，叶酸 folic acid 0.25 mg，Mn 80 mg，Fe 58 mg，Zn 80 mg，Cu 8 mg，I 0.6 mg，Se 0.3 mg。 2)代谢能为计算值，其余为实测值。ME was a calculated value,and the others were measured values.

表1 基础饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)

试验前，饲喂鸡场饲粮，收集2周的基础数据，然后换试验饲粮。试验期42 d，冬季(外界气温变动范围为-15～2℃，鸡舍内温度变动范围为5～12℃)进行试验。试验鸡采用2层阶梯式笼养，自由采食与饮水，自然光和人工光照相结合，光照时间为16 h。按蛋鸡饲养管理要求进行免疫和消毒。

于试验的第1、21、42天，每个重复取2枚鸡蛋，每个组共10枚鸡蛋用于测定鸡蛋维生素A的含量。

试验结束时每个重复选2只鸡，每个组共10只，翅静脉采血10 mL，以3 000 r/min离心10 min，分离血清，放入-20℃保存待测抗氧化及维生素A含量。采血后屠宰，取肝脏并迅速液氮冻存，待测肝脏维生素A含量。

采用试剂盒测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

测定方法采用GB/T 5009.82—2003《食品中维生素A和维生素E的测定》^[8]的方法。

血清维生素A含量，采用反相高效液相色谱法测定，波长为325 nm。

肝脏维生素A含量同鸡蛋维生素A含量的测定方法相同。

数据采用SAS 9.2统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和LSD，差异显著性采用Duncan氏法进行多重比较，并对维生素A水平的处理效应进行线性和二次回归分析。P<0.05为差异显著。

由表2可知，饲粮维生素A水平显著影响蛋鸡血清抗氧化能力(P<0.05)。随维生素A水平的增加，T-AOC呈线性(P<0.05)或二次曲线升高(P<0.05)，SOD活性呈二次曲线升高(P<0.05)，MDA含量呈线性(P<0.05)或二次曲线降低(P<0.05)。维生素A水平为10 500和13 000 IU/kg时，T-AOC和SOD活性显著高于8 000 IU/kg时(P<0.05)，而MDA含量显著低于8 000 IU/kg时(P<0.05)；与8 000 IU/kg组相比，15 500 IU/kg组MDA含量显著降低(P<0.05)，T-AOC和SOD 活性差异不显著(P>0.05)。维生素A添加水平 达到18 000 IU/kg时，虽然MDA含量显著低于其他水平(P<0.05)，但T-AOC的活性显著低于8 000 IU/kg时(P<0.05)，而SOD活性与其他水平差异不显著(P>0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 维生素A水平对蛋鸡血清抗氧化能力的影响 Table 2 Effects of vitamin A level on the serum antioxidant capacity of laying hens 项目 Items 维生素A水平 Vitamin A level/(IU/kg) SEM P值 P-value 8 000 10 500 13 000 15 500 18 000 维生素A水平 Vitamin A level 线性 Linear 二次 Quadratic 总抗氧化能力 T-AOC/(U/mL) 10.49b 12.19a 12.64a 10.07bc 9.54c 0.30 <0.01 0.04 <0.01 超氧化物歧化酶 SOD/(U/mL) 141.74b 152.99a 152.69a 149.82ab 144.6ab 2.74 0.03 0.81 <0.01 丙二醛 MDA/(nmol/mL) 9.13a 8.19b 7.12c 6.936.53d 0.08 <0.01 <0.01 <0.01 同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。 In the same row,values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05),while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表2 维生素A水平对蛋鸡血清抗氧化能力的影响 Table 2 Effects of vitamin A level on the serum antioxidant capacity of laying hens

由表3可知，饲粮维生素A水平显著影响蛋鸡血清和肝脏维生素A含量(P<0.05)。随维生素A水平的增加，血清中维生素A的含量呈二次曲线变化(P<0.05)，肝脏中维生素A含量呈线性(P<0.05)或二次曲线升高(P<0.05)。与18 000 IU/kg组相比，15 500 IU/kg组血清维生素A含量差异不显著(P>0.05)，但其余组间差异显著(P<0.05)。10 500 IU/kg组肝脏中维生素A含量与13 000 IU/kg组差异不显著(P>0.05)，但与其他组间差异显著(P<0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 维生素A水平对血清和肝脏维生素A含量的影响 Table 3 Effects of vitamin A level on the content of vitamin A in serum and liver of laying hens 项目 Items 维生素A水平 Vitamin A level/(IU/kg) SEM P值 P-value 8 000 10 500 13 000 15 500 18 000 维生素A水平 Vitamin A level 线性 Linear 二次 Quadratic 血清 Serum/(IU/mL) 5.38a 4.81c 4.18d 5.15b 5.20b 0.05 <0.01 0.98 <0.01 肝脏 Liver/(IU/g) 1 307.04d 1 416.68c 1 406.09c 1 448.55b 1 485.95a 7.01 <0.01 <0.01 <0.01

表3 维生素A水平对血清和肝脏维生素A含量的影响 Table 3 Effects of vitamin A level on the content of vitamin A in serum and liver of laying hens

由表4可知，第21和42天时，饲粮维生素A水平显著影响鸡蛋维生素A含量(P<0.05)。试验第21天时，随维生素A水平从8 000 IU/kg增加到18 000 IU/kg，鸡蛋中维生素A含量显著升高(P<0.05)，且呈线性(P<0.05)或二次曲线升高(P<0.05)。试验第42天时，随维生素A水平的增加，鸡蛋中维生素A含量显著增加(P<0.05)，且呈现线性(P<0.05)或二次曲线升高(P<0.05)。当维生素A水平为18 000 IU/kg时，第21、42天鸡蛋中维生素A含量较15 500 IU/kg时显著降低(P<0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 维生素A水平对鸡蛋维生素A含量的影响 Table 4 Effects of vitamin A level on the content of vitamin A in eggs 项目 Items 维生素A水平 Vitamin A level/(IU/kg) SEM P值 P-value 8 000 10 500 13 000 15 500 18 000 维生素A水平 Vitamin A level 线性 Linear 二次 Quadratic 第1天 Day 1 7.68 7.75 7.75 7.79 7.72 0.036 0.32 0.32 0.14 第21天 Day 21 7.55e 8.20d 9.24c 14.12a 11.83b 0.052 <0.01 <0.01 <0.01 第42天 Day 42 10.49e 11.26d 13.99c 15.88a 15.46b 0.084 <0.01 <0.01 <0.01

表4 维生素A水平对鸡蛋维生素A含量的影响 Table 4 Effects of vitamin A level on the content of vitamin A in eggs

本试验中的饲粮维生素A水平是在NY/T 33—2004推荐量8 000 IU/kg的基础上继续添加，试验结果表明维生素A添加水平的增加提高了血清T-AOC和SOD活性，且具有先升后降的趋势。饲粮维生素A水平为10 500和13 000 IU/kg时，血清T-AOC和SOD活性达到最高，但当维生素A水平为15 500和18 000 IU/kg时，T-AOC和SOD活性却呈现下降的趋势，这与张养东^[9]，任国峰等^[10]的研究结果一致，原因可能是维生素A水平不同可不同程度的影响机体的抗氧化能力，适宜水平能有效的降低脂质过氧化反应，增强T-AOC和SOD的活性，而水平过高产生反抑制效果，不利于机体的抗氧化能力，导致机体平衡状态破坏，降低血清T-AOC和SOD的活性。本试验还发现，维生素A添加水平从8 000 IU/kg增加到18 000 IU/kg，血清MDA含量显著降低，这与谢登玉等^[11]的研究结果一致，其原因可能是在冷应激作用下，打破了机体自由基产生与清除的平衡的状态，自由基的大量积累出现脂质过氧化，这就使得动物的饲粮中维生素A及其他抗氧化营养物质除了能满足基本的营养需要外，还要求能维持自由基稳衡状态^[12]，即机体对维生素A的需要量发生改变。

一般认为维生素A在血清和肝脏中的含量是评定饲粮维生素A水平是否满足需要的敏感指标^[4]。本试验结果表明，维生素A水平为8 000～13 000 IU/kg时，血清维生素A含量随饲粮维生素A水平的升高而显著降低；维生素A水平为15 500～18 000 IU/kg时，血清维生素A含量保持相对稳定，这说明，维生素A水平低于15 500 IU/kg，尚不能满足冬季蛋鸡维持血清维生素A正常含量的需要，而添加15 500～18 000 IU/kg维生素A时血清维生素A含量能够维持相对稳定。该结果可以解释为当饲粮维生素A水平低于某一范围时，血清维生素A含量下降；而高于某一范围时，血清维生素A含量则增加；当超过一定范围时，增加幅度变小，并保持稳定^[13]。

本研究发现，肝脏维生素A的含量与饲粮维生素A水平存在显著的线性相关，这与张丽萍等^[14]、张春善等^[15]研究结果一致，同时Surai等^[16]的试验表明，给鸡强制灌入维生素A，能够增加肝脏维生素A的沉积量，这说明肝脏是维生素A的存储器官，其维生素A含量的变化直接反映机体维生素A的摄入情况，同时肝脏具有调节外周维生素A含量的能力，摄入大量维生素A时，肝脏可将其储存，避免血液中维生素A含量过高，而维生素A缺乏时，动员肝脏释放满足组织需要^[17]。

鸡蛋中正常维生素A含量的分析测定可以估测饲粮最适的维生素A水平，还可直接用于测定维生素A的生物学利用率。Hill等^[18]在研究蛋鸡维生素A需要量时发现，饲粮维生素A的水平从1 980 IU/kg增加到22 000 IU/kg时，鸡蛋中维生素A含量提高了23倍。Surai等^[16]在蛋鸡饲粮中添加10 000、20 000、100 000和400 000 IU/kg的维生素A，结果发现在每个添加水平均能使鸡蛋中维生素A的含量增加，在最高水平组中，每克蛋黄中维生素A含量达到85.1 mg。以上研究与本试验得出的结论相似，另外本试验还发现，当维生素A水平从15 500 IU/kg升高至18 000 IU/kg时，鸡蛋中维生素A的含量却显著降低，这可能是因为过高水平的维生素A对机体的正常代谢造成了损害，导致维生素A在鸡蛋中的沉积量减少。

综合考虑国家相关规定和成本因素，冬季条件下海兰褐产蛋鸡维生素A水平为10 500～13 000 IU/kg时可以获得较强的血清抗氧化能力；维生素A水平为15 500 IU/kg时，血清、肝脏和鸡蛋维生素A沉积量较高。