近年来，随着生活水平的日益提高，人们对畜禽产品质量的要求也越来越高，由于饲料中添加抗生素和化学药物对畜禽产品品质的负面影响，寻找抗生素替代品，生产安全可靠的畜禽产品成为关注的焦点。杜仲是我国传统中药材，其皮、叶、果、枝条等部位均含有丰富的天然活性物质，是一种多功能的植物^[1]。但中医仅以杜仲树皮入药，据中医药典记载，杜仲树皮具有补肝肾、强筋骨、安胎的功效；并能抗高血压，具有调脂与保护心血管的功能^[2]。现己发现杜仲叶含有与杜仲皮相似的医药活性成分与营养物质，主要包括绿原酸、黄酮类、鞣质、多糖、氨基酸等。其中，杜仲叶中单体绿原酸的含量丰富，甚至高于杜仲皮^[3]。

杜仲叶提取物是从杜仲叶中提取而得的一种天然植物性饲料添加剂。与抗生素等化学合成药物添加剂相比，杜仲叶提取物无耐药性、毒副作用小，且资源丰富，功能多样。研究表明，杜仲叶中绿原酸具有抗菌、抗病毒、增高白血球等作用，可提高机体免疫功能^[4]。杜仲作为饲料添加剂可增强动物免疫力，提高畜禽生长性能，改善肉、蛋、奶品质等^[5]。但是，当前有关杜仲叶提取物的文献资料主要集中在其功能组成研究，而动物饲养试验研究报道不多。因此，本试验研究饲粮添加杜仲叶提取物对肉鸡生长性能以及免疫功能的影响，为杜仲叶提取物在肉鸡生产上的应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 试验动物与试验设计

试验所用的1日龄健康爱拔益加(AA)肉鸡275只鸡苗，购自南昌正大，初重45~50 g，随机分成5个组，每组5个重复，每个重复11只鸡。对照组饲喂基础饲粮，试验组分别在基础饲粮中添加0.05%、0.10%、0.15%、0.20%杜仲叶提取物。试验为期42 d。基础饲粮参考肉鸡饲养标准配比，其组成及营养水平见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) % 项目 Items 含量 Content 1~21 d 22~42 d 原料 Ingredients 玉米 Corn 57.00 60.50 豆粕 Soybean meal 32.00 30.00 鱼粉 Fish meal 5.00 1.80 豆油 Soybean oil 2.00 3.50 石粉 Limestone 1.10 1.60 磷酸氢钙 CaHPO 4 1.60 1.45 食盐 NaCl 0.36 0.36 蛋氨酸 Methionine 0.19 0.06 赖氨酸 Lysine 0.05 0.03 微量元素预混剂 Microelement premix 0.50 0.50 维生素预混剂 Vitamin premix 0.20 0.20 合计 Total 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels 代谢能 ME/(MJ/kg) 12.71 12.78 粗蛋白质 CP 21.37 19.99 蛋氨酸 Methionine 0.54 0.39 赖氨酸 Lysine 1.25 1.10 钙 Ca 1.08 1.03 总磷 TP 0.62 0.55 微量元素预混剂和维生素预混剂为千克饲粮提供 Microelement premix and vitamin premix provided the following per kilogram of diets: Fe 80 mg，Zn 80 mg，Cu 8 mg，Mn 80 mg，I 0.35 mg，Se 0.15 mg，VD 1 250 IU，VK 2.2 mg，VB1 1.5 mg，VB2 8.0 mg，VB6 2.5 mg，VB12 0.011 mg，烟酸 nicotinic acid 44 mg，胆碱 choline 3.5 mg，泛酸 pantothenic acid 11 mg，叶酸 folic acid 0.9 mg，生物素 biotin 0.11 mg。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)

杜仲叶提取物购自西安某公司，从杜仲叶中提取而得。提取方法为水溶液提取法。 1.1.2.1 高效液相色谱(HPLC)检测谱的条件

梯度洗脱，10 μL进样，流速1.0 mL/min，检测波长250 nm，色谱柱为Waters C18 (4.6 mm×250 mm,5 μL)，流动相为0.2%醋酸(A)和甲醇(B)，流速：1 mL/min，检测波长327 nm，柱温40 ℃。 1.1.2.2 标准溶液制备

精确称取一定量的绿原酸标准品，用甲醇超声溶解，制得绿原酸标准溶液，吸取一定量标准溶液，在9.25~292.50 μg/L内配成8个浓度的标准品溶液。所得标准曲线计算公式为：y=28.052x-121.54，R²=0.999[y为峰面积，x为绿原酸含量(μg/mL)]。 1.1.2.3 样品测定结果

测得杜仲叶提取物中绿原酸的含量为28.51%，液相色谱图见图1。

图 1(Figure 1)

Fig. 1

图1 杜仲叶提取物的高效液相色谱图 Fig. 1 High performance liquid chromatography (HPLC) figure of Eucommia leaves extract

试验于2013年10—11月在江西农业大学动物科技学院动物养殖实践基地进行。各个组的饲养环境完全相同，试验前对鸡舍及周边的环境和试验用具进行彻底消毒处理。试验鸡采用立体笼养，自由饮水和采食。试验期内控制温度、湿度、光照和自然通风，按正常免疫程序进行免疫。 1.3 样品采集及测定方法 1.3.1 生长性能的测定

通过饲养试验，每天以重复为单位记录试验肉鸡的采食量，并在7、14、21、28、35、42 d清晨对全部试验鸡空腹称重，计算试验肉鸡平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。 1.3.2 血清免疫指标的测定

在21和42 d，每个重复随机选取2只体重相近的健康鸡，空腹翅静脉采血。血液样品在室温下静置1~2 h后3000 r/min离心，分离血清，采用酶联免疫技术测定血清中的免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)的含量。 1.3.3 免疫器官指数的测定

在21和42 d，每个重复随机选取2只体重相近的健康鸡，翅静脉采血后，放血屠宰。仔细分离宰杀后试验鸡的法氏囊、脾脏、胸腺，用滤纸吸干血液后称重，计算其免疫器官指数。 免疫器官指数(g/kg)=器官重量/体重。 1.4 统计分析

基本数据处理采用Excel 2003，试验结果分析采用SPSS 17.0中的单因素方差分析(one-way ANOVA)程序进行方差、线性和二次型分析，多重比较用Duncan氏法，结果以平均值表示。 2 结 果 2.1 杜仲叶提取物对肉鸡生长性能的影响

由表2可见，在肉鸡的各个生长阶段，与对照组比较，饲粮中添加不同水平的杜仲叶提取物对肉鸡平均日采食量影响均不显著(P>0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 杜仲叶提取物对肉鸡平均日采食量的影响Table 2 Effects of Eucommia leaves extract on average daily feed intake of broilers g/d 平均日采食量 ADFI 添加水平 Supplemental levels/% SEM P值P-value 0 0.05 0.10 0.15 0.20 线性 Linear 二次 Quadratic 1~7 d 20.43 20.05 20.06 20.19 19.75 0.193 0.414 0.994 8~14 d 47.48 49.92 49.40 49.30 48.70 0.541 0.654 0.243 15~21 d 67.41 66.94 68.20 69.46 69.05 0.417 0.056 0.972 22~28 d 103.42 102.89 105.16 104.81 105.73 1.129 0.455 0.977 29~35 d 123.32 122.46 125.24 124.87 127.53 1.194 0.234 0.714 36~42 d 171.51 162.45 171.98 175.00 171.12 1.960 0.399 0.814 1~42 d 86.35 85.15 87.49 87.97 87.80 0.700 0.280 0.975 同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same row,values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05),while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表2 杜仲叶提取物对肉鸡平均日采食量的影响Table 2 Effects of Eucommia leaves extract on average daily feed intake of broilers

由表3可见，与对照组比较，添加各水平杜仲叶提取物后，肉鸡平均日增重呈现先提高后下降的二次变化趋势。其中，在1~7 d、15~21 d和36~42 d，各组肉鸡的平均日增重与对照组之间均无显著差异(P>0.05)；在8~14 d，0.15%添加组比对照组提高了7.42%(P<0.05)，其他添加组与对照组差异不显著(P>0.05)；在22~28 d，0.05%与0.10%添加组分别比对照组降低了14.65%、14.63%(P<0.05)；在29~35 d，0.05%、0.10%和0.15%添加组分别比对照组提高了26.13%、25.05%和24.94%(P<0.05)，0.20%添加组与对照组之间无显著差异(P>0.05)。从试验全期看，0.05%添加组肉鸡的平均日增重比对照组提高了7.41%(P<0.05)，其他各组与对照组无显著差异(P>0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 杜仲叶提取物对肉鸡平均日增重的影响Table 3 Effects of Eucommia leaves extract on average daily gain of broilers g/d 平均日增重 ADG 添加水平 Supplemental levels/% SEM P值P-value 0 0.05 0.10 0.15 0.20 线性 Linear 二次 Quadratic 1~7 d 18.71 18.31 18.47 18.54 19.00 0.170 0.528 0.295 8~14 d 33.32a 33.55ab 34.48ab 35.79b 34.53ab 0.340 0.049 0.335 15~21 d 36.77 39.58 37.62 40.33 40.28 0.550 0.043 0.809 22~28 d 73.44b 62.68a 62.70a 67.95ab 68.95ab 1.300 0.640 0.005 29~35 d 63.71a 80.36b 79.67b 79.60b 71.97ab 2.700 0.398 0.038 36~42 d 71.13 73.78 71.90 73.77 74.45 1.420 0.546 0.990 1~42 d 49.10a 52.74b 49.21a 51.24ab 49.92a 0.427 0.009 0.006

表3 杜仲叶提取物对肉鸡平均日增重的影响Table 3 Effects of Eucommia leaves extract on average daily gain of broilers

由表4可见，在肉鸡的各个阶段，各组之间料重比的差异主要表现29~35 d时，添加杜仲叶提取物后，肉鸡料重比在29~35 d呈现二次显著下降(P<0.05)，其余阶段差异不显著(P>0.05)。其中，在29~35 d，0.05%、0.10%、0.15%和0.20%添加组料重比与对照组相比分别降低了21.15%(P<0.05)、17.53%(P>0.05)、19.34%(P<0.05)和7.73%(P>0.05)。从试验全期看，0.05%添加组料重比比对照组显著降低(P<0.05)，其他各组与对照组均无显著差异(P>0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 杜仲叶提取物对肉鸡料重比的影响Table 4 Effects of Eucommia leaves extract on feed to gain of broilers 料重比 F/G 添加水平 Supplemental levels/% SEM P值 P-value 0 0.05 0.10 0.15 0.20 线性 Linear 二次 Quadratic 1~7 d 1.09 1.10 1.09 1.09 1.04 0.011 0.217 0.367 8~14 d 1.42 1.49 1.43 1.38 1.41 0.015 0.217 0.629 15~21 d 1.84 1.71 1.82 1.73 1.72 0.023 0.164 0.841 22~28 d 1.41 1.57 1.51 1.55 1.54 0.028 0.218 0.308 29~35 d 1.94b 1.53a 1.60ab 1.56a 1.79ab 0.056 0.457 0.014 36~42 d 2.43 2.22 2.41 2.39 2.15 0.048 0.252 0.533 1~42 d 1.76b 1.62a 1.78b 1.72b 1.76b 0.018 0.351 0.272

表4 杜仲叶提取物对肉鸡料重比的影响Table 4 Effects of Eucommia leaves extract on feed to gain of broilers

由表5可见，与对照组比较，添加不同水平杜仲叶提取物后各组血清IgA含量均没有显著差异(P>0.05)。血清IgG含量在21 d时以0.15%添加组最高，比对照组提高了23.06%(P<0.05)，其他添加组与对照组无显著差异(P>0.05)；在42 d时，0.05%添加组比对照组提高了4.61%(P>0.05)，但0.20%添加组血清IgG含量下降了13.52%(P<0.05)，其余添加组与对照组无显著差异(P>0.05)。各添加组21 d的血清IgM含量与对照组相比均有提高趋势，但差异不显著(P>0.05)，在42 d时，0.05%、0.15%和0.20%添加组血清IgM含量分别比对照组提高了118.89%、73.33%和71.11%(P<0.05)。

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 杜仲叶提取物对肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响Table 5 Effects of Eucommia leaves extract on serum immune globulin content of broilers mg/mL 项目 Items 添加水平 Supplemental levels/% SEM P值 P-value 0 0.05 0.10 0.15 0.20 线性 Linear 二次 Quadratic 免疫球蛋白A 21 d 1.15 1.35 1.42 1.49 1.40 0.068 0.212 0.347 IgA 42 d 1.52 1.19 1.44 1.76 1.02 0.075 0.328 0.129 免疫球蛋白G 21 d 4.90a 5.28a 5.40a 6.03b 5.41a 0.099 0.002 0.022 IgG 42 d 6.51b 6.81b 6.65b 6.66b 5.63a 0.132 0.024 0.014 免疫球蛋白M 21 d 0.57 0.63 0.69 0.66 0.69 0.022 0.108 0.393 IgM 42 d 0.90a 1.97c 1.08a 1.56b 1.54b 0.089 0.016 0.054

表5 杜仲叶提取物对肉鸡血清免疫球蛋白含量的影响Table 5 Effects of Eucommia leaves extract on serum immune globulin content of broilers

由表6可见，在21和42 d，随着杜仲叶提取物的添加水平的提高，肉鸡胸腺指数和法氏囊指数呈现先增加后下降的变化趋势，但与对照组均无显著差异(P>0.05)。其中，在21 d时，0.05%和0.10%添加组法氏囊指数比对照组分别提高了15.42%和14.98%(P>0.05)，在42 d时，0.10%和0.20%添加组法氏囊指数分别比对照组提高了12.21%和16.03%(P>0.05)。各个杜仲叶提取物添加组的脾脏指数与对照组相比有下降趋势，但是均没有显著差异(P>0.05)。

表6

Table 6

表6(Table 6)

表6 杜仲叶提取物对肉鸡免疫器官指数的影响Table 6 Effects of Eucommia leaves extract on immune organs index of broilers g/kg 项目 Items 添加水平 Supplemental levels/% SEM P值P-value 0 0.05 0.10 0.15 0.20 线性 Linear 二次 Quadratic 胸腺指数 21 d 4.84 5.01 4.02 4.30 5.01 0.165 0.751 0.089 Thymus index 42 d 3.36 4.04 3.52 3.62 3.61 0.204 0.968 0.687 法氏囊指数 21 d 2.27 2.62 2.61 2.43 2.23 0.094 0.685 0.115 Bursal index 42 d 1.31 1.13 1.47 1.28 1.52 0.113 0.514 0.758 脾脏指数 21 d 0.90 0.80 0.91 0.84 1.18 0.058 0.146 0.141 Spleen index 42 d 1.08 1.05 1.06 0.80 0.95 0.080 0.407 0.918

表6 杜仲叶提取物对肉鸡免疫器官指数的影响Table 6 Effects of Eucommia leaves extract on immune organs index of broilers

本试验结果表明，添加杜仲叶提取物对AA肉鸡平均日采食量影响不显著，但提高了肉鸡在29~35 d的平均日增重，降低了其料重比。有研究表明，杜仲作为饲料添加剂可增强动物免疫力，提高畜禽生长性能，改善畜产品质量^{[6, 7]}。王华朗等^[8]报道，在肉鸡饲粮中添加0.30%的杜仲粉可显著提高肉鸡平均日增重，改善其生长性能，分析可能是杜仲叶粉中绿原酸成分对机体免疫功能改善有关。但是，本试验结果发现，在22~28 d，添加0.05%与0.10%的杜仲叶提取物降低了肉鸡的平均日增重，料重比与对照组无差异。这提示杜仲叶提取物添加后可改善肉鸡生长性能，但其作用与添加剂量和使用阶段有关。欧爱明等^[9]在基础饲粮中添加杜仲叶粉饲喂雪峰乌骨鸡的试验中发现，随杜仲添加量的增加，鸡的平均日增重、平均日采食量均下降。 3.2 杜仲叶提取物提取物对肉鸡免疫功能的影响

血清免疫球蛋白主要存在于动物血清中，其含量的高低是反映机体免疫系统状况的重要指标。IgG是哺乳动物血清中含量最高的免疫球蛋白，约占总量的80%，是介导体液免疫的主要抗体，该抗体能够抵抗外来抗原，有效地保护机体不受感染。IgM是机体初次接触抗原物质时最早出现的免疫球蛋白，在抗感染中起着关键作用。在机体受到病原菌和病毒感染时，IgM能与体内补体结合，清除病原体^[10]。本试验结果表明，添加杜仲叶提取物可显著提高血清中IgG和IgM的含量，这说明在饲粮中添加一定水平的杜仲叶提取物可改善肉鸡的体液免疫。

胸腺是免疫系统的重要器官，参与机体的非特异性免疫功能，对细胞免疫及体液免疫具有重要调节作用。法氏囊是禽类特有的中枢免疫器官，可促进B细胞的诱导分化和成熟，促进机体的体液免疫。脾脏是体内产生抗体的重要器官，对机体细胞免疫过程中致敏T细胞的产生和抗体的形成有促进作用。一般认为，免疫器官重量降低为免疫抑制所致，而免疫器官重量增加则为免疫增强的表现^[11]。本研究中，添加杜仲叶提取物在一定程度上提高了肉鸡的法氏囊指数，这可能与绿原酸促进机体免疫器官的发育有关。前期报道显示，杜仲能促进免疫器官的发育，增强机体的免疫应答能力，从而提高了机体的抵抗力^[12]。吕锦芳等^[13]研究也显示，在肉鸡饲粮中添加复方杜仲口服液可提高肉鸡的法氏囊指数及脾脏指数。 4 结 论

在肉鸡饲粮中添加一定水平的杜仲叶提取物可提高AA肉鸡平均日增重，降低料重比，并可提高肉鸡的免疫功能，其中以0.15%的添加水平效果较好。