碳水化合物是鱼类饲料中重要的廉价能源物质，适宜的饲料碳水化合物水平能够减少蛋白质供能、减轻氮排泄对养殖水体的污染^[1]，在斑点叉尾 (Ictalurus punctatus)、露斯塔野鲮(Labeo rohita)、麦瑞加拉鲮(Cirrhinus mrigala)、欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)、罗非鱼(Oreochromis niloticus×O. aureus)等的研究中均表明饲料碳水化合物对蛋白质有一定的节约作用^{[2, 3, 4, 5, 6]}，但与哺乳动物相比，鱼类不能有效利用碳水化合物，海水鱼饵料中适宜的碳水化合物水平不宜超过20%，淡水鱼饵料中适宜的碳水化合物水平不宜超过40%^[7]，过高的碳水化合物水平会引起持续的高血糖、肝糖原积累、免疫功能降低、抑制鱼体生长^{[8, 9, 10]}，但鱼类对碳水化合物利用能力低下的机制仍不清楚。在鱼类糖代谢中，主要涉及糖酵解、糖异生、三羧酸循环、戊糖磷酸途径、糖原合成与降解过程，其中主要是糖酵解和糖异生过程，由激素和营养状况维持的血糖含量的平衡主要依赖于糖酵解和糖异生关键酶活性高低和表达量多少^[11]，而血糖含量的持续升高可能抑制摄食，从而抑制鱼体生长^[12]。研究表明饲料中碳水化合物水平能够调节糖酵解和糖异生关键酶的活性及表达量^{[13, 14]}，目前在大菱鲆(Scophthalmus maximus L.)、欧洲鲈鱼(Dicentrarchus labrax)、金头鲷(Sparus aurata)、鲈鱼(Lateolabrax japonicus)、欧洲鳗鲡、瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)、 鱼(Elopichthys bambusa)等鱼类中均有研究^{[15, 16, 17, 18, 19, 20, 21]}，研究这些酶活性及表达量的变化有助于了解鱼类碳水化合物代谢机制，从而解释鱼类对碳水化合物利用能力差的原因。

大黄鱼(Pseudosciaena crocea Richardson)隶属鲈形目(Perciformes)石首鱼科(Sciaenidae)黄鱼属(Pseudosciaena)，为暖温性近海中下层集群洄游性鱼类，主要分布在我国黄海南部、东海、台湾海峡以及南海北部^[22]，因其肉质鲜美而深受人们喜爱，是我国传统“海洋四大经济鱼类”之一^[23]，目前对大黄鱼的蛋白质、脂肪及部分氨基酸需求量、部分饲料原料消化率、蛋白质替代、大黄鱼风味及其营养成分均有研究^{[22, 23, 24, 25, 26, 27, 28]}，但缺乏大黄鱼糖代谢相关研究。研究表明(12.8±0.08) g的大黄鱼的蛋白质需要量为48.3%^[24]，本试验设计2个蛋白质水平(42%、48%)，并在不同蛋白质水平饲料中分别设3个葡萄糖添加水平(10%、20%、30%)，研究在蛋白质水平较低的情况下，饲料中葡萄糖添加水平对大黄鱼生长性能、糖酵解和糖异生关键酶活性的影响，从而为大黄鱼资源节约型配合饲料的研制提供基础数据。

本试验采用2×3双因素试验设计，以饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平为影响因素，其中饲料蛋白质水平分别为42%、48%，葡萄糖添加水平分别为10%、20%、30%，共配制6种试验饲料，即42/10、42/20、42/30、48/10、48/20、48/30。以鱼粉、豆粕、小麦蛋白粉为蛋白质源，葡萄糖为糖源，鱼油、豆油、卵磷脂为脂肪源，按照试验设计，配制6种等脂饲料，试验饲料组成及营养水平见表1，按照表1配方将各种固态原料混合后过80目筛，维生素和矿物质预混料等微量组成采用逐级扩大法混合，再加入鱼油、豆油和卵磷脂以及水混合均匀，用双螺杆挤条机制成粒径为2和4 mm的硬颗粒饲料，在烘箱中90 ℃熟化30 min，自然风干，饲料密封后保存在-20 ℃冰箱中。

养殖试验于浙江省象山县西沪港港湾鱼排上进行，试验鱼苗由象山港湾水产苗种有限公司提供，正式试验前先将所有鱼苗于鱼排上暂养2周，暂养结束后，挑选体质健壮、规格一致、初重为(14.89±0.11) g的大黄鱼900尾，随机分为6组(每组3个重复，每个重复50尾鱼)，随机分配于18个小规格网箱(1.5 m×1.5 m×2.0 m)，试验期为8周。试验期间每天于05:00、17:00进行饱食投喂，试验期间海水温度为26.5~31.5 ℃，盐度为32~36 g/L，溶解氧浓度不低于7.0 mg/L。

养殖试验结束后饥饿24 h，将鱼捞出，并用丁香酚(1 ∶ 10 000)麻醉，然后称重并记录每个网箱的大黄鱼尾数及总重，用于计算增重率(WGR)、特定生长率(SGR)，每个网箱随机取3尾称重、量体长，取其肝脏并称重，用于计算肥满度(CF)、肝体比(HSI)；另取8尾鱼，从尾部静脉抽取血样(血样不混合)，注入1.5 mL离心管中，4 ℃冰箱静置过夜，3 000 r/min离心5 min，取上清液置于-80 ℃冰箱备用；将部分取过血的大黄鱼肝脏、胃、前肠剥离，放置于2 mL离心管中(取完立即放入液氮中)，用于检测肝脏葡萄糖激酶(GK)、6-磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、果糖-1,6-二磷酸酶(FBPase)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)，胃蛋白酶，肠道淀粉酶和脂肪酶活性以及肝糖原含量；取背鳍肌肉，装于密封袋中，用于检测肌糖原含量。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) % 项目 Items 饲料 Diets 42/10 42/20 42/30 48/10 48/20 48/30 原料 Ingredients 鱼粉 Fish meal 40.00 40.00 40.00 40.00 40.00 40.00 豆粕 Soybean meal 11.00 11.00 11.00 5.00 5.00 0.20 小麦蛋白粉 Wheat protein powder 5.26 5.26 5.26 15.45 15.45 18.61 葡萄糖 Glucose 10.00 20.00 30.00 10.00 20.00 30.00 鱼油 Fish oil 1.40 1.40 1.40 1.41 1.41 1.45 豆油 Soybean oil 1.40 1.40 1.40 1.41 1.41 1.45 大豆卵磷脂 Soybean lecithin 1.49 1.49 1.49 1.49 1.49 1.49 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 氯化胆碱 Choline chloride 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 矿物质预混料Mineral premix1) 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 维生素预混料 Vitamin premix1) 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 3.00 纤维素 Cellulose 22.65 12.65 2.65 18.44 8.44 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平Nutrient levels2) 干物质 Dry matter 88.07 84.78 83.01 87.39 85.27 84.15 粗蛋白质 Crude protein 42.03 42.64 42.87 47.75 48.06 48.16 粗脂肪 Crude lipid 9.07 9.47 9.06 9.31 9.35 9.21 粗灰分 Ash 11.17 11.27 11.60 10.62 10.89 10.99 可消化碳水化合物 Digestible carbohydrate 13.89 23.28 33.03 12.68 22.58 31.34  1)矿物质预混料和维生素预混料参照Mai等[29]配制。 Mineral premix and vitamin premix were prepared according to Mai,et al[24].  2)营养水平为实测值。Nutrient levels were measured values.

表1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

饲料水分含量采用105 ℃常压干燥法测定，粗蛋白质含量采用微量凯氏定氮法测定，粗脂肪含量采用索氏抽提法测定，粗灰分含量采用550 ℃马弗炉灼烧法测定，可消化碳水化合物含量采用3，5-二硝基水杨酸法测定。

血清生化指标及酶活活性使用日立7600-110型全自动生化分析仪进行检测，肝脏酶及肠道脂肪酶活性均采用上海源叶生物科技有限公司生产的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒进行检测，胃蛋白酶、肠道淀粉酶活性及肝糖原和肌糖原含量采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行检测。其中，肝脏、胃和肠道中酶活性的测定均是指单位组织中的酶活性。

试验数据采用SPSS 17.0统计软件进行分析，先以饲料蛋白质和葡萄糖添加水平为影响因素进行双因素方差分析(two-way ANOVA)，然后对相同蛋白质水平的试验组采用Duncan氏法进行多重比较，最后对相同葡萄糖添加水平的试验组采用t检验(independent-samples t test)进行检测，以P＜0.05表示处理间差异显著。试验数据采用平均值±标准差(mean±SD)表示。

由表2可知，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对大黄鱼的WGR、SGR、CF有显著影响(P＜0.05)，但对HSI无显著影响(P＞0.05)。在饲料蛋白质水平相同时，饲料葡萄糖添加水平对大黄鱼WGR、SGR、HSI、CF无显著影响(P＞0.05)。在饲料葡萄糖添加水平为20%时，饲料蛋白质水平为48%组WGR、SGR显著高于饲料蛋白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对大黄鱼CF、HSI无显著影响(P＞0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为10%或30%时，饲料蛋白质水平对WGR、SGR、HSI、CF无显著影响(P＞0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼的生长性能和形态学指标的影响 Table 2 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on growth performance and morphological indices of large yellow croaker 项目 Items 蛋白质水平 Protein level/% 葡萄糖添加水平 Glucose supplemental level/% 合并标准误 Pooled SEM 交互作用(P值) Interaction (P-value) 10 20 30 增重率 WGR/% 42 151.63±14.51 152.88±3.28A 170.76±8.08 4.19 0.03 48 162.15±9.60 168.37±2.06B 153.09±9.10 3.62 特定生长率 SGR/(%/d) 42 1.64±0.10 1.65±0.03A 1.78±0.06 0.03 0.03 48 1.72±0.09 1.76±0.02B 1.66±0.08 0.03 肝体比 HSI/% 42 1.83±0.43 2.06±0.25 2.20±0.79 0.17 0.41 48 1.97±0.06 2.09±0.61 1.64±0.31 0.13 肥满度 CF/(g/cm3) 42 1.45±0.04 1.43±0.06 1.56±0.06 0.02 0.01 48 1.50±0.05 1.52±0.06 1.42±0.08 0.02  同行数据肩标不同小写字母表示同一蛋白质水平下不同葡萄糖添加水平组间差异显著(P＜0.05)；同列数据肩标不同大写字母表示同一葡萄糖添加水平下不同蛋白质水平组间差异显著(P＜0.05)。下表同。  Values in the same row with different small letter superscripts indicated significant difference among different glucose supplemental level groups following the same protein level (P＜0.05); values in the same column with different capital letter superscripts indicated significant difference among different protein level groups following the same glucose level (P＜0.05). The same as below.

表2 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼的生长性能和形态学指标的影响 Table 2 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on growth performance and morphological indices of large yellow croaker

由表3可知，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对大黄鱼血清总蛋白(TP)、葡萄糖含量有显著影响(P＜0.05)，但对大黄鱼血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)含量无显著影响(P＞0.05)。在饲料蛋白质水平为42%时，血清TG含量随饲料葡萄糖添加水平的升高而呈显著上升(P＜0.05)，血清HDL含量随饲料葡萄糖添加水平的升高呈下降的趋势且饲料葡萄糖添加水平为10%时显著高于饲料葡萄糖添加水平为30%时(P＜0.05)，但饲料葡萄糖添加水平对大黄鱼血清TP、TC、葡萄糖、LDL含量无显著影响(P＞0.05)；在饲料蛋白质水平为48%时，血清TP、HDL含量均随饲料葡萄糖添加水平的升高呈降低的趋势且饲料葡萄糖添加水平为10%时显著高于饲料葡萄糖添加水平为30%时(P＜0.05)，血清葡萄糖含量随饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升的趋势且饲料葡萄糖添加水平为10%、20%时显著低于饲料葡萄糖添加水平为30%时(P＜0.05)，但饲料葡萄糖添加水平对大黄鱼血清TG、TC、LDL含量无显著影响(P＞0.05)。在饲料葡萄糖添加水平为10%时，饲料蛋白质水平为48%组大黄鱼血清TP含量显著高于饲料蛋白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对血清TG、TC、LDL、HDL、葡萄糖含量无显著影响(P＞0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为20%时，饲料蛋白质水平对大黄鱼血清TP、TG、TC、LDL、HDL、葡萄糖含量无显著影响(P＞0.05)；当饲料葡萄糖添加水平为30%时，饲料蛋白质水平为48%组大黄鱼血清葡萄糖 含量显著高于且血清HDL含量显著低于饲料蛋 白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对血清TP、TG、TC、LDL含量无显著影响(P＞0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼血清生化指标的影响 Table 3 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on serum biochemical indices of large yellow croaker 项目 Items 蛋白质水平 Protein level/% 葡萄糖添加水平 Glucose supplemental level/% 合并标准误 Pooled SEM 交互作用(P值) Interaction (P-value) 10 20 30 总蛋白 TP/(g/L) 42 22.90±2.34A 25.30±1.18 23.03±0.95 0.61 0.02 48 28.17±2.12bB 25.00±1.31a 23.80±1.00a 0.79 总胆固醇 TC/(mmol/L) 42 2.49±0.20 2.69±0.29 2.99±0.04 0.09 0.78 48 2.96±0.73 3.08±0.16 3.17±0.30 0.14 甘油三酯 TG/(mmol/L) 42 2.50±0.35a 3.13±0.16b 4.54±0.18c 0.31 0.78 48 3.10±1.24 4.04±1.75 4.69±0.70 0.44 葡萄糖 Glucose/(mmol/L) 42 3.59±0.06 3.54±0.10 4.11±0.17A 0.12 ＜0.01 48 3.17±0.36a 4.71±0.91a 5.40±0.20bB 0.37 低密度脂蛋白 LDL/(mmol/L) 42 0.66±0.07 0.77±0.15 0.76±0.01 0.03 0.12 48 0.90±0.24 0.75±0.04 0.70±0.11 0.05 高密度脂蛋白 HDL/(mmol/L) 42 0.37±0.02b 0.32±0.02ab 0.29±0.04aB 0.01 0.27 48 0.36±0.07b 0.28±0.03ab 0.21±0.02aA 0.02

表3 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼血清生化指标的影响 Table 3 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on serum biochemical indices of large yellow croaker

由表4可知，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对大黄鱼血清ALT、AST活性有显著影响(P＜0.05)，但对大黄鱼血清AKP活性无显著影响(P＞0.05)。在饲料蛋白质水平为42%时，血清ALT活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升的趋势且饲料葡萄糖添加水平为10%时显著低于饲料葡萄糖添加水平为30%时(P＜0.05)，血清AST活性随饲料葡萄糖添加水平的升高显著上升(P＜0.05)，但饲料葡萄糖添加水平对血清AKP活性无显著影响(P＞0.05)；在饲料蛋白质水平为48%时，血清AST活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈下降的趋势且饲料葡萄糖添加水平为30%时显著低于饲料葡萄糖添加水平为10%和20%时(P＜0.05)，但饲料葡萄糖添加水平对血清ALT和AKP活性无显著影响(P＞0.05)。在饲料葡萄糖添加水平为10%时，饲料蛋白质水平为48%组大黄鱼血清AST活性显著高于饲料蛋白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对血清ALT和AKP活性无显著影响(P＞0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为20%时，饲料蛋白质水平对血清AST、ALT和AKP活性均无显著影响(P＞0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为30%时(P＜0.05)，饲料蛋白质水平为42%组大黄鱼血清AST和ALT活性显著高于饲料蛋白质水平为48%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对血清AKP活性无显著影响(P＞0.05)。

由表5可知，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对大黄鱼肝脏GK、PFK及PK活性有显著影响(P＜0.05)。在饲料蛋白质水平为42%时，肝脏GK活性随饲料葡萄糖添加水平的升高显著上升(P＜0.05)，肝脏PFK和PK活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈先降低后上升的趋势；在饲料蛋白质水平为48%时，肝脏GK活性随着饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升的趋势且饲料葡萄糖添加水平为10%时显著低于饲料葡萄糖添加水平为30%时，但饲料葡萄糖添加水平对肝脏PFK、PK活性无显著影响(P＞0.05)。在饲料葡萄糖添加水平为10%时，饲料蛋白质水平为48%组大黄鱼肝脏GK活性显著高于饲料蛋白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对肝脏PFK和PK活性无显著影响(P＞0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为20%或30%时，饲料蛋白质水平对肝脏GK、PFK及PK活性均无显著影响(P＞0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼血清酶活性的影响 Table 4 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on serum enzyme activities of large yellow croaker U/L 项目 Items 蛋白质水平 Protein level/% 葡萄糖添加水平 Glucose supplemental level/% 合并标准误 Pooled SEM 交互作用(P值) Interaction (P-value) 10 20 30 丙氨酸转氨酶 ALT 42 17.50±2.50a 21.67±3.21a 29.67±3.06bB 1.98 0.02 48 16.33±4.73 22.00±1.00 19.00±3.00A 1.25 天冬氨酸转氨酶 AST 42 85.50±1.50aA 125.00±10.00b 184.50±19.50cB 14.84 ＜0.01 48 146.50±6.50bB 143.67±17.56b 98.50±15.50aA 8.77 碱性磷酸酶 AKP 42 14.67±2.89 20.67±3.79 17.67±1.53 1.20 0.13 48 16.00±1.00 17.00±2.65 16.00±1.00 1.39

表4 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼血清酶活性的影响 Table 4 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on serum enzyme activities of large yellow croaker

表5

Table 5

表5(Table 5)

表5 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼肝脏糖酵解关键酶活性的影响 Table 5 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on hepatic glycolysis key enzyme activities of large yellow croaker U/g 项目 Items 蛋白质水平 Protein level/% 葡萄糖添加水平 Glucose supplemental level/% 合并标准误 Pooled SEM 交互作用(P值) Interaction (P-value) 10 20 30 葡萄糖激酶 GK 42 3.82±0.09aA 4.52±0.23b 5.60±0.27c 0.27 0.02 48 4.28±0.05aB 4.33±0.14ab 5.74±0.04b 0.24 6-磷酸果糖激酶 PFK 42 4.97±0.06c 2.37±0.05a 4.09±0.17b 0.38 ＜0.01 48 3.50±0.62 4.54±1.36 3.81±0.37 0.30 丙酮酸激酶 PK 42 3.61±0.34b 2.71±0.08a 3.24±0.48ab 0.16 0.04 48 3.14±0.17 3.30±0.42 3.16±0.13 0.08

表5 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼肝脏糖酵解关键酶活性的影响 Table 5 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on hepatic glycolysis key enzyme activities of large yellow croaker

由表6可知，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对肝脏G6Pase、FBPase及PEPCK活性有显著影响(P＜0.05)。在饲料蛋白质水平为42%时，饲料葡萄糖添加水平对G6Pase、FBPase及PEPCK活性有显著影响(P＜0.05)，且肝脏G6Pase和FBPase活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈先降低后上升的趋势，肝脏PEPCK活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈降低的趋势；在饲料蛋白质水平为48%时，饲料葡萄糖添加水平对肝脏G6Pase和FBPase活性有显著影响(P＜0.05)，且其活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈先升高后降低的趋势，但饲料葡萄糖添加水平对PEPCK活性无显著影响(P＞0.05)。在饲料葡萄糖添加水平为10%时，饲料蛋白质水平为42%组肝脏G6Pase、FBPase及PEPCK活性均显著高于饲料蛋白质水平为48%组(P＜0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为20%时，饲料蛋白质水平为48%组肝脏G6Pase和FBPase活性均显著高于饲料蛋白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对肝脏PEPCK活性无显著影响(P＞0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为30%时，饲料蛋白质水平对肝脏G6Pase、FBPase及PEPCK活性均无显著影响(P＞0.05)。

表6

Table 6

表6(Table 6)

表6 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼肝脏糖异生关键酶活性的影响 Table 6 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on hepatic gluconeogenic key enzyme activities of large yellow croaker U/g 项目 Items 蛋白质水平 Protein level/% 葡萄糖添加水平 Glucose supplemental level/% 合并标准误 Pooled SEM 交互作用(P值) Interaction (P-value) 10 20 30 葡萄糖-6-磷酸酶 G6Pase 42 3.89±0.08cB 2.85±0.08aA 3.30±0.14b 0.15 ＜0.01 48 2.46±0.10aA 4.54±0.15cB 3.50±0.05b 0.30 果糖-1,6-二磷酸酶 FBPase 42 4.12±0.47bB 2.79±0.25aA 3.37±0.37ab 0.22 ＜0.01 48 2.63±0.29aA 4.76±0.05bB 2.85±0.11a 0.34 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 PEPCK 42 4.77±0.02bB 3.92±0.07a 3.84±0.33a 0.16 0.01 48 3.60±0.35A 4.64±0.78 3.95±0.39 0.22

表6 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼肝脏糖异生关键酶活性的影响 Table 6 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on hepatic gluconeogenic key enzyme activities of large yellow croaker

由表7可知，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对肝糖原含量有显著影响(P＜0.05)，对肌糖原含量无显著影响(P＞0.05)。在饲料蛋白质水平为42%或48%时，饲料葡萄糖添加水平对肝糖原含量有显著影响(P＜0.05)，且肝糖原含量随饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升的趋势，但饲料葡萄糖添加水平对肌糖原含量无显著影响(P＞0.05)。在饲料葡萄糖添加水平为10%或20%时，饲料蛋白质水平对肝糖原和肌糖原含量均无显著影响(P＞0.05)；在饲料葡萄糖添加水平为30%时，饲料蛋白质水平为48%组肝糖原含量显著高于饲料蛋白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对肌糖原含量无显著影响(P＞0.05)。

表7

Table 7

表7(Table 7)

表7 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼肝糖原和肌糖原含量的影响 Table 7 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on hepatic and muscle glycogen contents of large yellow croaker mg/g 项目 Items 蛋白质水平 Protein level/% 葡萄糖添加水平 Glucose supplemental level/% 合并标准误 Pooled SEM 交互作用(P值) Interaction (P-value) 10 20 30 肝糖原 Hepatic glycogen 42 24.61±1.09a 30.01±3.60a 38.60±2.87bA 2.18 0.01 48 24.91±2.21a 29.03±0.87a 54.37±8.59bB 2.84 肌糖原 Muscle glycogen 42 0.37±0.02 0.36±0.02 0.35±0.02 0.01 0.83 48 0.34±0.05 0.32±0.03 0.34±0.12 0.03

表7 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼肝糖原和肌糖原含量的影响 Table 7 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on hepatic and muscle glycogen contents of large yellow croaker

由表8可知，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对大黄鱼胃蛋白酶及肠道脂肪酶和淀粉酶活性均无显著影响(P＞0.05)。在饲料蛋白质水平为42%或48%时，饲料葡萄糖添加水平对大黄鱼胃蛋白酶及肠道脂肪酶和淀粉酶活性均无显著影响(P＞0.05)。在饲料葡萄糖添加水平相同时，饲料蛋白质水平为48%组胃蛋白酶活性均显著高于饲料蛋白质水平为42%组(P＜0.05)，但饲料蛋白质水平对肠道淀粉酶和脂肪酶活性均无显著影响(P＞0.05)。

蛋白质和碳水化合物是鱼类重要的营养物质来源，饲料中蛋白质为鱼类提供氨基酸和氮源，用于合成机体蛋白质，对鱼类的生长发育具有重要作用，蛋白质占鱼体干物质质量的65%～75%^[30]。碳水化合物对于鱼类的存活和生长并非必需的^[31]，但适宜的碳水化合物水平对鱼类的生长仍有促进作用^{[32, 33]}。本研究发现，饲料蛋白质水平和葡萄糖添加水平的交互作用对大黄鱼WGR和SGR有显著影响，在金头鲷的研究中也发现饲料蛋白质和碳水化合物水平对WGR和SGR有显著影响^[34]。在本试验中，当饲料蛋白质水平为42%时，血清TG含量及AST、ALT活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升的趋势，其中当肝脏受到损伤或坏死时，会引起血液中AST和ALT活性升高^{[35, 36]}，表明饲料葡萄糖添加水平的升高对肝功能有一定的负面影响，血清TC含量虽然没有显著差异，但也随着饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升趋势，这可能是由于过多的碳水化合物转化为脂肪，进而引起血脂含量的升高，这与厚唇弱棘 (Hephaestus fuliginosus)^[37]、翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis Bleeke)^[38]的研究结果相似，并且高葡萄糖添加水平显著增加了肝糖原含量，这 与在欧洲舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)^[39]、虹鳟 (Salmo gairdneri)^[40]上的研究结果相似；但饲料葡萄糖添加水平的升高并未引起大黄鱼HSI和血清葡萄糖含量的变化，表明过高葡萄糖添加水平虽然引起大黄鱼肝糖原及血清部分物质含量的上升，但并未对大黄鱼的生长造成不利影响，并且改善了大黄鱼的WGR和SGR，这与在麦瑞加拉鲮^[3]、露斯塔野鲮^[4]上的研究结果相似。在饲料蛋白质水平为48%时，血清TP、HDL含量随饲料葡萄糖添加水平的升高呈下降趋势，其中肝功能障碍、营养不良或消耗增加等易造成血清TP含量降低，并且引起血清HDL含量的变化^[41]，表明添加30%的葡萄糖对大黄鱼肝功能有一定的负面影响，并且添加30%的葡萄糖显著增加了大黄鱼的血清葡萄糖含量和肝糖原含量；此外，虽然添加30%的葡萄糖并未显著增加大黄鱼HSI，但却对大黄鱼的生长造成了不利的影响。

表8

Table 8

表8(Table 8)

表8 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼消化酶活性的影响 Table 8 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on digestive enzyme activities of large yellow croaker 项目 Items 蛋白质水平 Protein level/% 葡萄糖添加水平 Glucose supplemental level/% 合并标准误 Pooled SEM 交互作用(P值) Interaction (P-value) 10 20 30 胃蛋白酶 Pepsin/(U/mg) 42 4.01±0.18A 4.37±0.05A 4.41±0.27A 0.08 0.06 48 6.28±0.80B 5.22±0.33B 6.00±0.62B 0.24 淀粉酶 Amylase/(U/mg) 42 0.37±0.02 0.36±0.02 0.35±0.02 0.01 0.82 48 0.34±0.05 0.32±0.03 0.34±0.12 0.02 脂肪酶 Lipase/(U/g) 42 2.40±0.48 2.42±0.31 2.22±0.21 0.11 0.70 48 2.08±0.43 1.94±0.33 2.09±0.30 0.11

表8 不同蛋白质水平下葡萄糖添加水平对大黄鱼消化酶活性的影响 Table 8 Effects of glucose supplemental level at different protein levels on digestive enzyme activities of large yellow croaker

糖酵解和糖异生在生理功能上分别是糖的分解与合成，其中糖酵解是所有生物体内葡萄糖代谢的唯一途径^[42]，糖异生是指将非糖物质转化成葡萄糖，主要在肝脏中进行^[43]，其中涉及的酶在鱼体内均存在^{[42, 44]}，其关键酶有己糖激酶、GK、PFK、PK、G6Pase、FBPase、PEPCK。在本试验中，在饲料蛋白质水平为42%时，大黄鱼肝脏GK活性随着饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升趋势，这与前人的研究结果^{[15, 39, 45, 46, 47, 48]}相似；肝脏PFK和PK活性随饲料葡萄糖添加水平的升高呈先降低后升高的趋势，表明当饲料葡萄糖添加水平过高时，大黄鱼糖酵解能力随之出现了适应性的增强；肝脏G6Pase和FBPase活性均随饲料葡萄糖添加水平的升高先下降后上升，在葡萄糖添加水平为20%和30%时的肝脏FBPase活性无显著差异，说明饲料葡萄糖添加水平对FBPase活性有一定抑制作用，这与在金头鲷^[49]上的研究结果相似；肝脏PEPCK活性随饲料葡萄糖添加水平的升高而降低，在葡萄糖添加水平为20%与30%时无显著差异，表明饲料葡萄糖添加水平对大黄鱼肝脏PEPCK活性抑制作用很强，这与在翘嘴红鲌^[38，50]、大菱鲆^[15]上的研究结果相似，表明大黄鱼在高葡萄糖添加水平下能够通过调节糖酵解和糖异生关键酶活性有效调节血糖含量，并且高葡萄糖添加水平还改善了大黄鱼的WGR和SGR。在饲料蛋白质水平为48%时，大黄鱼肝脏GK活性随着饲料葡萄糖添加水平的升高呈上升趋势，但饲料葡萄糖添加水平对肝脏PFK和PK活性均无显著影响，这与在南方鲇(Silurus meridionalis Chen)^[51]、金头鲷^[17]、塞内加尔鳎(Solea senegalensis,Kaup)^[52]、虹鳟^[19]上的研究结果相似，说明饲料葡萄糖添加水平的升高对肝脏PFK和PK活性无调节作用；肝脏G6Pase和FBPase活性均随饲料葡萄糖添加水平的升高先上升后下降，但高葡萄糖添加水平时的肝脏G6Pase活性显著高于低葡萄糖添加水平时，高葡萄糖添加水平时的FBPase活性与低葡萄糖添加水平时的无显著差异，表明高葡萄糖添加水平对大黄鱼肝脏G6Pase和FBPase活性无抑制作用；饲料葡萄糖添加水平对肝脏PEPCK活性无显著影响，表明大黄鱼在高葡萄糖水平不能有效调节糖酵解和糖异生关键酶活性，且高葡萄糖添加水平显著提高了血糖含量，进而降低了大黄鱼WGR和SGR。

与饲料蛋白质水平为48%时相比，在饲料蛋白质水平为42%时，大黄鱼能够通过调节肝脏糖酵解和糖异生关键酶活性及肝糖原含量来维持其血糖含量的平衡，从而使饲料中的葡萄糖得到有效利用。