红藻糖苷为半乳糖甘油，是大部分红藻中的主要光合可溶性物质，是一种典型的低分子质量红藻碳水化合物。它在红藻中的含量丰富，依据藻的种类的不同，含量变化在1.5%～8.0%干重^[1]。红藻糖苷在藻体中的作用类似于高等植物的海藻糖^[2]，是渗透压调节物质和抗氧化物质，在红藻受到环境胁迫时大量产生^{[3, 4]}。近年研究发现，红藻糖苷具有很多生物活性，如保水、调节免疫系统、抗氧化等^{[5, 6]}，在医药、食品和饲料领域都有很大的开发价值。

黄颡鱼(Pelteoobagrus fulvidraco)是一种优质名贵的经济鱼类^[7]，有关其生物学和养殖技术的研究很多，而对黄颡鱼的营养研究较少，已有的研究主要集中在对其主要营养素的营养需求方面。研究发现，饲料中添加0.05%～0.10%的褐藻糖胶能促进黄颡鱼的生长，提高消化酶活性^[8]，改善抗氧化和非特异性免疫方面的状态^[9]；于艳梅等^[10]研究发现，魔芋甘露寡糖可以有效提高黄颡鱼的非特异性免疫能力和生长；张振龙等^[11]研究发现，木聚糖可以显著影响黄颡鱼的生长和饲料利用率。但关于红藻糖苷对黄颡鱼生长性能、饲料利用以及血液生化指标的影响尚未见报道，因此，本试验拟研究红藻糖苷对黄颡鱼生长性能和血液生化指标的影响，探讨红藻糖苷作为鱼类营养调节剂的功能，为红藻糖苷作为水产饲料营养剂的开发提供理论依据。

红藻糖苷以紫菜为原料制备。紫菜样品购于浙江省宁波市鄞州锦锋水产食品有限公司。紫菜经粉碎后，用70%的乙醇进行提取，提取物中含有蛋白质、脂肪、色素等，用乙酸乙酯萃取进行初步纯化，经过大孔树脂进一步纯化，喷干等工艺制得，经高效液相色谱质谱联用技术检测，其纯度≥95%。

设定饲料中红藻糖苷的有效含量分别为0、0.1%、0.2%、0.4%，饲料原料粉碎后过60目筛，按 照配方要求准确称量，混匀，微量成分采取逐级扩大法预混合，再与大宗原料混合均匀，加入30%的水，再次混匀后用双螺杆制粒机挤压成粒径分别为2.5和4.0 mm的2种颗粒饲料，制粒后于90 ℃烘箱中熟化0.5 h，风干干燥后于-20 ℃保存备用。饲料成分分析参照AOAC(1995)^[12]的方法，即水分含量采用105 ℃常压干燥法测定，粗蛋白质含量采用凯氏定氮法测定，粗脂肪含量采用索氏抽提法测定。试验饲料组成及营养水平见表1，其中，以不添加红藻糖苷的饲料作为对照饲料，其他3组饲料分别为添加0.1%、0.2%、0.4%红藻糖苷的饲料。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) % 项目Items 饲料中红藻糖苷含量 Dietary floridoside content/% 0 0.1 0.2 0.4 原料 Ingredients 鱼粉 Fish meal 18.00 18.00 18.00 18.00 菜籽粕 Rapeseed meal 12.00 12.00 12.00 12.00 豆粕 Soybean meal 26.00 26.00 26.00 26.00 面粉 Wheat flour 27.30 27.30 27.30 27.30 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 7.50 7.50 7.50 7.50 豆油 Soybean oil 2.10 2.10 2.10 2.10 鱼油 Fish oil 2.10 2.10 2.10 2.10 大豆卵磷脂 Lecithin 0.50 0.50 0.50 0.50 矿物质预混料 Mineral premix1) 1.50 1.50 1.50 1.50 维生素预混料 Vitamin premix2) 0.20 0.20 0.20 0.20 氯化胆碱 Choline chloride 0.30 0.30 0.30 0.30 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 2.00 2.00 2.00 2.00 纤维素 Cellulose 0.50 0.40 0.30 0.10 红藻糖苷 Floridoside 0.10 0.20 0.40 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels 粗蛋白质 CP 39.82 40.28 39.96 40.47 粗脂肪 EE 7.73 7.53 7.31 7.60 水分 Moisture 10.57 10.44 10.57 10.23   1)矿物质预混料为每千克饲粮提供The mineral premix provided the following per kg of diets：Fe (as ferric citrate) 12 mg，Zn (as zinc sulfate) 32 mg，Mn (as manganese sulfate) 20 mg，Cu (as copper sulfate) 25 mg，I (as potassium iodide) 0.10 mg，Mg (as magnesium sulphate) 350 mg，K (as monopotassium phosphate) 1 000 mg，Na (as monosodium phosphate) 300 mg，Ca (as calcium lactate) 65 mg，Co (as cobalt dichloride) 5 mg，Se (as sodium selenite) 0.3 mg。   2)维生素预混料为每千克饲粮提供The vitamin premix provided the following per kg of diets：VA 2 mg，VB1 100 mg，VB2 60 mg，VB6 120 mg，VB12 0.2 mg，VC 105 mg，VD3 0.15 mg，VE 100 mg，VK3 40 mg，生物素 biotin 2.5 mg，叶酸 folic acid 4.0 mg，泛酸钙calcium pantothenic 150 mg，烟酸 nicotinic acid 400 mg，肌醇 inositol 2 000 mg。

表1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

试验用黄颡鱼幼鱼购自浙江湖州渔场，在试验条件下暂养2周后开始试验。试验前，禁食24 h后，取平均体重为(2.49±0.04) g的健康黄颡鱼幼鱼240尾，随机分为4组，每组3个重复，每个重复20尾，饲养于300 L玻璃钢桶中，分别投喂对照、0.1%、0.2%和0.4%饲料。每天07:00和17:00各投喂1次，日投喂量为鱼体重的6%～8%，投喂后1 h观察其摄食情况，记录死亡数和投饵量，根据鱼的进食情况调整投喂量。试验期为10周。试验用水为经过曝气处理的自来水，整个养殖过程中连续充气，溶氧浓度保持或接近饱和，每2周测量1次鱼体重，每天除污1次，前2周隔天换水1次，之后视水质情况每天换水40%～60%。试验期间水温为19～29 ℃。

饲养10周结束后，禁食24 h，擦干鱼体表水分和黏液，称重，统计存活率。每桶随机取3尾鱼测定其体重、体长、内脏团重及肝脏重。按下列公式计算生长性能指标：

式中：W_t为终末体重(g)；W₀为初始体重(g)；t为试验天数(d)；F为摄食量(g)；P为蛋白质摄入量(g)；W为体重(g)；L为体长(cm)；W_h为肝脏重(g)；W_v为内脏团重(g)。

饲养结束时，禁食24 h，每桶随机挑选3尾鱼，用涂有肝素(100 IU/mL)的一次性注射器尾静脉取血，用于血常规指标测定。每桶随机再挑选3尾鱼，用未浸润过肝素的一次性注射器尾静脉取血，所取血样于-4 ℃静置过夜后5 000 r/min离心，取血清用于血清生化指标测定。全血及血清样品均送至宁波大学附属医院检测。

试验数据用平均值±标准误(mean±SE)表示，采用SPSS 17.0统计软件中的ANOVA过程进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法多重比较，以P＜0.05为差异显著。

由表2可知，饲料中添加不同水平的红藻糖苷对黄颡鱼幼鱼的存活率、肥满度、肝体指数、脏体指数均无显著性影响(P＞0.05)。尽管饲料效率以0.1%组最高，0.4%组最低，但各组间差异不显著(P＞0.05)。0.1%组的终末体重、增重率和蛋白质效率均显著高于其他各组(P＜0.05)，且其特定生长率显著高于除0.2%组外的其他各组(P＜0.05)。0.4%组的终末体重、增重率显著低于其他各组(P＜0.05)。

由表3可知，饲料中添加红藻糖苷对黄颡鱼血清总蛋白、白蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白、葡萄糖含量及谷丙转氨酶、谷草转氨酶和碱性磷酸酶活性均无显著影响(P＞0.05)。0.1%组的血清球蛋白含量比对照组高2.27 g/L，差异显著(P＜0.05)，0.2%和0.4%组与对照组差异不显著(P＞0.05)；0.1%、0.2%和0.4%组的血清高密度脂蛋白含量分别较对照组高0.10、0.06和0.04 mmol/L，0.1%组与对照组差异达显著水平(P＜0.05)；0.4%组的血清甘油三酯含量显著高于对照组(P＜0.05)，对照组及0.1%、0.2%组间差异不显著(P＞0.05)。

由表4可知，摄食添加红藻糖苷饲料的黄颡鱼全血中血红蛋白含量、红细胞数量与对照组相比均有所上升，但各组之间差异不显著(P＞0.05)。摄食添加红藻糖苷饲料的黄颡鱼全血中白细胞数量有所下降，但各组之间差异也不显著(P＞0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 红藻糖苷对黄颡鱼幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of floridoside on growth performance of juvenile yellow catfish (n=3) 项目Items 饲料中红藻糖苷含量 Dietary floridoside content/% 0 0.1 0.2 0.4 终末体重 FBW/g 18.70±0.72b 22.22±2.03c 18.03±2.11b 15.83±2.00a 增重率 WGR/% 645.77±35.69b 785.47±68.66c 626.49±88.48b 535.23±81.18a 特定生长率 SGR/(%/d) 2.59±0.36a 3.11±0.11b 2.67±0.14ab 2.48±0.24a 饲料效率 FE 0.42±0.14 0.50±0.03 0.40±0.02 0.39±0.06 蛋白质效率 PER 1.12±0.13a 1.38±0.08b 1.11±0.07a 1.08±0.16a 存活率 SR/% 83.33±17.56 100.00±0.00 90.00±8.66 90.00±10.00 肥满度 CF/(g/cm3) 1.60±0.07 1.56±0.02 1.51±0.02 1.60±0.08 肝体指数 HSI/% 1.40±0.18 1.39±0.10 1.30±0.02 1.31±0.09 脏体指数 VSI/% 8.98±1.25 8.10±0.06 8.05±0.86 8.58±1.21   同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P＞0.05)，不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。下表同。   In the same row,values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P＞0.05),while with different letter superscripts mean significant difference (P＜0.05). The same as below.

表2 红藻糖苷对黄颡鱼幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of floridoside on growth performance of juvenile yellow catfish (n=3)

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 红藻糖苷对黄颡鱼血清生化指标的影响 Table 3 Effects of floridoside on serum biochemical indexes of juvenile yellow catfish (n=3) 项目Items 饲料中红藻糖苷含量 Dietary floridoside content/% 0 0.1 0.2 0.4 总蛋白 TP/(g/L) 33.33±2.08 35.67±0.60 32.73±1.06 33.97±1.70 白蛋白 ALB/(g/L) 9.80±1.30 9.87±0.32 9.37±0.16 9.77±0.21 球蛋白 GLOB/(g/L) 23.53±0.81a 25.80±0.44b 23.37±0.95a 24.20±1.57ab 谷丙转氨酶ALT/(U/L) 9.67±3.51 9.00±4.00 17.00±9.54 14.67±9.81 谷草转氨酶AST/(U/L) 188.33±20.74 180.67±47.59 202.50±2.50 198.50±10.50 碱性磷酸酶ALP/(U/L) 24.67±8.08 27.33±3.79 25.50±3.50 25.33±5.51 胆固醇CHOL/(mmol/L) 3.52±0.39 3.90±0.48 4.20±0.08 4.04±0.56 甘油三酯 TG/(mmol/L) 3.79±0.85ab 3.73±0.19a 3.71±0.08a 4.62±0.16b 高密度脂蛋白HDL/(mmol/L) 0.37±0.05a 0.47±0.02b 0.43±0.02ab 0.41±0.09ab 低密度脂蛋白LDL/(mmol/L) 0.93±0.08 1.12±0.14 1.07±0.03 1.00±0.21 葡萄糖GLU/(mmol/L) 5.24±1.72 6.31±1.16 6.24±0.85 5.91±2.37

表3 红藻糖苷对黄颡鱼血清生化指标的影响 Table 3 Effects of floridoside on serum biochemical indexes of juvenile yellow catfish (n=3)

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 红藻糖苷对黄颡鱼血液常规指标的影响 Table 4 Effects of floridoside on blood routine indexes of juvenile yellow catfish (n=3) 项目Items 饲料中红藻糖苷含量 Dietary floridoside content/% 0 0.1 0.2 0.4 白细胞 WBC/(×109 个/L) 133.60±13.85 119.33±22.84 121.67±6.57 118.70±21.44 红细胞 RBC/(×1012 个/L) 2.16±0.07 2.20±0.03 2.23±0.04 2.17±0.10 血红蛋白 HGB/(g/L) 54.67±4.04 57.33±3.79 51.00±5.29 59.33±5.86

表4 红藻糖苷对黄颡鱼血液常规指标的影响 Table 4 Effects of floridoside on blood routine indexes of juvenile yellow catfish (n=3)

本试验结果显示，饲料中添加0.1%的红藻糖苷可显著提高黄颡鱼幼鱼的终末体重、增重率和特定生长率。目前尚无关于红藻糖苷在动物饲料中应用的报道，但是与其结构相近、功能相似的海藻糖在动物饲料中的应用效果与本试验结果基本一致。丁宏标等^[13]和黄俊^[14]研究发现：添加0.5%海藻糖组的1日龄公仔鸡在生长前期(1～21日龄)生长较快，在整个生长期则以0.1%组的促长效果最优。Sivagnanavelmurugan等^[15]研究也表明，以添加1 000、2 000及3 000 mg/kg褐藻多糖的饲料投喂中国对虾，其增重率都显著高于未添加褐藻多糖的对照组。杨晴等^[8]研究发现，褐藻糖胶在0.05%～0.10%添加范围内能促进黄颡鱼的增长。而李素莹^[16]以初始体重0.35 g的南美白对虾为研究对象，发现添加海藻多糖对凡纳滨对虾的生长没有促进作用，个别还出现生长效果降低的现象，这可能与试验对象有关。

雷爱莹等^[17]研究结果表明复合海藻多糖对凡纳滨对虾的生长和抗病力有很好的促进作用。于会民等^[18]以海藻多糖作为饲料添加剂进行应用试验，研究表明，海藻多糖有利于改善机体能量代谢和养分利用，改善肉仔鸡的生长性能，促进增重和改善饲料转化效率。红藻糖苷之所以能够促进黄颡鱼幼鱼的生长可能与其特有的生物学功能有关。红藻糖苷可以通过清除自由基而调节机体的免疫功能，通过抑制细胞中的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达等起到抗氧化作用^[5]；法国及美国专利中表明，红藻糖苷具有加强表皮层细胞的保水、保湿、抗氧化、美白抗皱、生物抗冻等多种作用^{[19, 20]}。一般认为，红藻糖苷的这些作用主要在于它能够保持蛋白质和细胞膜的稳定性，防止蛋白质和类脂膜的降解，因此，在饲料中添加红藻糖苷可望保持饲料的稳定性，保持饲料干燥，防止饲料腐败变质，防止饲料中不饱和脂肪酸的氧化和氨基酸变性，有效保护饲料中营养成分和品质。作者认为，红藻糖苷的这些特性不但能够保证饲料品质，同时能在动物体内更有效地发挥其生物学功效，维持动物机体内环境的稳定，最终提高生长速率。在饲养过程中，诸如温度、盐度等环境因素以及免疫、操作等人为因素不可避免地给黄颡鱼带来应激，给黄颡鱼带来生长抑制、疾病等不利影响，而红藻糖苷可以缓解应激造成的不利影响，提高存活率。另外，红藻糖苷基本不能被动物自身消化吸收，直接进入肠道被消化道微生物选择性地作为营养物，能被消化道有益微生物利用而不能被有害微生物利用，从而调节微生态平衡，达到促进生长的效果；但是本试验未对这些猜想做验证，所以具体原因尚无试验证据。

一般认为肝脏是黄颡鱼重要的代谢器官，已有研究表明红藻糖苷具有免疫活性，而本试验中，红藻糖苷对黄颡鱼幼鱼的蛋白质效率影响显著，而对饲料效率、肥满度、肝体指数和脏体指数没有显著影响，此结果同杨晴等^[8]的研究结果一致。

动物血液学指标被广泛地用来评价其健康状况、营养状况及对环境的适应状况，是重要的生理、病理和毒理学指标^[21]。血清总蛋白含量反映鱼体的营养与代谢状况，也间接反映了机体的免疫水平的高低。不同程度的脂肪肝与肝内甘油三酯积聚的量有关。徐文^[22]研究显示，高甘油三酯含量增加脂肪肝的患病率，而单纯的高胆固醇含量对脂肪肝的产生没有多大影响，脂肪肝与甘油三酯、胆固醇等含量之间的关系还有待进一步的研究。本试验的结果表明，饲料中添加0.1%红藻糖苷可以显著提高黄颡鱼幼鱼血清中球蛋白和高密度脂蛋白含量，降低甘油三酯含量。此与杨晴等^[8]研究结果一致。

谷草转氨酶和谷丙转氨酶在糖、蛋白质和脂肪三大物质代谢过程中起着十分重要的作用，是生命体正常生命活动不可缺少的酶类之一。当肝脏受到损伤或坏死时，会引起血液中谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性升高，因此血清中谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性的高低在一定程度上可以反映肝细胞损伤的程度^{[23, 24]}。碱性磷酸酶是高等动物体内巨噬细胞溶酶体的标志酶，在体内直接参与磷酸基团的转移和代谢，是机体生长代谢，维持内环境稳定，维持机体健康所必需的酶，其活性受营养状况、环境变化、疾病及生长状况的影响^[25]。本试验结果表明，饲料中添加红藻糖苷对黄颡鱼幼鱼血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶和碱性磷酸酶活性均未产生显著影响。

饲料中添加0.1%的红藻糖苷可以显著促进黄颡鱼幼鱼的生长，并对黄颡鱼幼鱼的血清生化指标具有一定的调节作用。