2. 湖南农业大学动物科学技术学院, 长沙 410128;
3. 湖南省畜牧兽医研究所, 长沙 410131
2. College of Animal Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China;
3. Department of Animal Nutrition and Feeding Technology, Hunan Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Changsha 410131, China
豆粕和棉籽粕等饼粕类是目前畜禽饲料的主要蛋白质原料,但这些饲料原料中含有以水苏糖和棉籽糖为主的α-半乳糖苷类抗营养因子,由于单胃动物缺乏内源性的α-半乳糖苷酶,无法消化吸收这一类糖,而此类低聚糖在消化道聚积,使食糜黏度增加,胃肠道蠕动排空加快,影响养分的释放、吸收、利用及沉积,最终影响畜禽的生长性能,而α-半乳糖苷酶有望改善这一状况[1, 2]。Zhang等[3]研究在低代谢能饲粮中添加α-半乳糖苷酶对爱拔益加(AA)肉鸡生长性能和养分代谢率的影响,结果表明随着α-半乳糖苷酶的添加,试鸡42日龄体重及1~42日龄平均日增重均有显著提高,极显著改善饲料报酬,显著提高了试鸡表观代谢能、粗蛋白质、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维利用率;Bun等[4]研究了豆粕饲粮和含5%~8%棉籽粕的饲粮中添加α-半乳糖苷酶对肉仔鸡生长性能的影响,结果显示在棉籽粕和豆粕饲粮中添加α-半乳糖苷酶对42日龄肉仔鸡体增重分别提高了4.35%和3.49%,同时代谢试验结果显示在豆粕中添加α-半乳糖苷酶试鸡真代谢能比不添加酶的提高了4.69%。不过亦有报道认为在饲粮中添加α-半乳糖苷酶并不能改善肉鸡生长性能[5, 6],其作用效果还存在一定争议。故本研究针对α-半乳糖苷酶在研究应用过程中存在的上述问题,以快长型AA肉鸡作为试验动物,以饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶作为试验因子,探索其对试鸡生长性能、肠道黏膜形态结构和血清生化、激素指标的影响,以期深入验证α-半乳糖苷酶添加于饲粮中对肉鸡的作用效果,为α-半乳糖苷酶在生产养殖中的实际应用提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验材料试验动物:AA肉鸡360羽,购自湖南顺成实业有限公司。
试验用酶制剂:α-半乳糖苷酶制剂,酶活为400 U/g,由湖南尤特尔生化有限公司提供。
1.2 试验动物与分组选择遗传背景相同、同批次、发育正常的1日龄健康AA肉鸡360羽,随机分为A、B、C、D、E、F 6个处理,每处理5个重复,每个重复12羽,各处理鸡初始体重无显著差异(P>0.05),试验期为21 d。
试验采用单因素随机试验设计,处理A饲喂基础饲粮作为正对照,处理B饲喂降低基础饲粮代谢能0.21 MJ/kg的饲粮作为负对照,处理C、D、E、F分别饲喂在负对照处理饲粮中添加75、150、300、600 g/t的α-半乳糖苷酶制剂的饲粮。试鸡采用粉料饲喂。
1.3 试验饲粮与营养水平试验基础饲粮参考NRC(1994)[7]和《NY/T 33—2004 鸡饲养标准》[8]中的肉鸡营养需要,选用玉米、豆粕、次粉等原料配制而成,由湖南光大牧业科技有限公司饲料厂加工生产,其组成及营养水平见表1。
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表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) |
试鸡采用网上平养,人工持续光照制度,保持正常温度,育雏时采用红外灯供暖,1~7日龄33~34 ℃、8~14日龄27~31 ℃,鸡舍自然通风,定期打扫鸡舍卫生,相对湿度保持在55%~65%,自由饮水和采食(计量不限量),按常规免疫。
1.5 测试指标与方法 1.5.1 生长性能试验期内观察试鸡生长和健康状况,每天记录鸡只死亡情况,按重复记录饲料消耗量,并于试鸡21日龄时空腹8 h后称重,计算各处理试鸡的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)、料重比(F/G)和各处理试鸡存活率。
1.5.2 肠道黏膜形态结构于试鸡饲养试验21日龄时分别从各处理每重复中选择1只接近该处理平均体重的试鸡,屠宰剔出肠道后,立即分离十二指肠、空肠、回肠,剪取肉鸡十二指肠、空肠和回肠中段各2 cm左右,并用生理盐水轻轻涮洗干净,再用滤纸吸干残余水分后,置于10%甲醛磷酸缓冲液中固定。接着将固定的标本经脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→展片→常规苏木精 — 伊红(HE)染色等处理后,制成石蜡切片[9]。之后用显微镜在40倍、100倍下随机选择多个非连续性视野观察切片,并挑选典型视野拍摄成图片,用图象分析系统进行观察测量,测定平均肠绒毛高度、隐窝深度、肠壁厚度指标,并计算绒毛高度/隐窝深度(V/C)。
1.5.3 血清生化、激素指标于饲养试验的21日龄晨(试鸡先空腹8 h),从A、B、C、D、E、F每处理随机选取5只接近该处 理平均体重的AA肉鸡(每重复1只),翼静脉采 血8 mL,注入10 mL离心管倾斜放置,让血液自然凝固。在血凝0.5 h后以3 000 r/min离心15 min分离血清,收集离心管上层血清分装,于-20 ℃下保存,以测定相关生化、激素指标。
血清中葡萄糖(GLU)含量采用葡萄糖氧化酶法测定,甘油三酯(TG)含量采用甘油氧化酶法测定,总胆固醇(CHO)含量采用胆固醇氧化酶法测定,尿酸(UA)含量采用酶联比色法测定,尿素氮(UN)含量采用尿素酶法测定,肌酐(Cr)含量采用苦味酸法测定,总蛋白(TP)含量采用双缩脲法测定,白蛋白(ALB)含量采用溴甲酚绿法测定,尿酸测定试剂盒由浙江东欧医疗诊断产品公司生产,其余指标都使用由桂林优利特医疗电子有限公司产的相应试剂盒测定,所有检测均在URIT-8000全自动生化分析仪(桂林优利特医疗电子有限公司生产)上进行;而血清球蛋白(GLO)含量通过计算获得,即GLO=TP-ALB[10],并计算白蛋白/球蛋白。
而血清中生长激素(GH)、胰岛素(Ins)、胰高血糖素(GIU)、三碘甲腺原氨酸(T3)和甲状腺素(T4)含量则采用放射性同位素免疫法(RIα),使用由北京北方生物技术研究所生产的相应试剂盒在GC-300型γ-放免仪(安徽中科中佳科学仪器有限公司生产)上测定,之后计算T3/T4。
1.6 数据处理与统计分析试验数据用Excel 2003软件进行初步处理后,采用SPSS 13.0统计软件进行单因素方差分析(ANOVA),若组间差异显著,则采用Duncan氏法进行多重比较,显著水平为P<0.05。试验结果以“平均值±标准差”表示。
2 结果与分析 2.1 饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶对1~21日龄AA肉鸡生长性能的影响由表2可知,饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶对1~21日龄各处理AA肉鸡平均日增重、平均日采食量和存活率均无显著影响(P>0.05),但饲粮添加75 g/t的α-半乳糖苷酶处理(处理C)1~21日龄试鸡的平均日增重最佳。同时α-半乳糖苷酶制剂的添加对1~21日龄AA肉鸡料重比有改善作用的趋势(0.10>P>0.05),加酶各处理试鸡料重比均显著低于处理B(P<0.05),数值上也低于处理A(P>0.05),同时试鸡1~21日龄料重比以添加150 g/t酶制剂的处理D最低,但加酶处理间料重比无显著差异(P>0.05),而处理A料重比显著低于处理B(P<0.05)。
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表2 饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶对1~21日龄AA肉鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of different α-galactosidase levels on the growth performance of AA broilers aged from 1 to 21 days |
由表3可知,饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶对21日龄AA肉鸡十二指肠绒毛高度影响显著(P<0.05),十二指肠绒毛高度以处理D最高,为1 815.91 μm,分别比试验处理A、B和C高了16.93%(P<0.05)、22.36%(P<0.01)和14.62%(P<0.05),十二指肠肠壁厚度以试验处理D最高,为169.39 μm,分别比试验处理A和E高了35.88%(P<0.05)和37.72%(P<0.05),十二指肠隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度分别以试验处理E和D最高,为355.56 μm和6.19。回肠肠壁厚度以处理A最高,为188.43 μm,比处理F高了39.98%(P<0.05);回肠绒毛高度、隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度各处理间差异不显著(P>0.05),分别以试验处理C、B和C最高,为1 485.01 μm、329.47 μm和4.85。空肠肠壁厚度、绒毛高度、隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度各处理间差异亦不显著(P>0.05),同时分别以处理D、F、D和F最高,分别为157.80 μm、1 477.46 μm、381.36 μm和4.62。
2.3 饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶对1~21日龄AA肉鸡血清生化、激素指标的影响由表4可知,饲粮中添加不同水平α-半乳糖苷酶对各处理21日龄AA肉鸡血清葡萄糖、甘油三酯、尿酸、尿素氮、白蛋白含量均无显著影响(P>0.05);血清总胆固醇含量以处理E最低,为3.83 mmol/L,显著低于血清总胆固醇含量最高的处理D(P<0.05);血清中肌酐含量以处理A最高,为29.60 μmol/L,比处理D高了52.58%(P<0.01);血清中总蛋白、球蛋白含量均以处理A最高,分别为28.60和14.00 g/L,总蛋白含量分别比处理C和D高了20.17%(P<0.05)和21.19%(P<0.05),而球蛋白含量分别比处理C和D高了59.09%(P<0.01)和47.68%(P<0.05);血清中白蛋白/球蛋白以处理C最高,为1.83,分别比处理A、B、E和F高了73.06%(P<0.01)、38.02%(P<0.05)、68.92%(P<0.01)和67.30%(P<0.01)。
同时饲粮中添加不同水平α-半乳糖苷酶对21日龄AA肉鸡血清中生长激素、T3含量和T3/T4均无显著影响(P>0.05);血清中胰岛素含量以处理E最高,为11.63 μIU/mL,比处理B和D分别高了38.29%(P<0.01)和21.96%(P<0.05);血清中胰高血糖素含量亦以处理E的最高,为216.91 pg/mL,分别比处理A和B高了32.15%(P<0.01)和29.46%(P<0.01);血清中T4含量以处理A的最高,为9.17 ng/mL,比处理D高了27.04%(P<0.05)。
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表3 不同水平α-半乳糖苷酶对21日龄AA肉鸡肠道黏膜形态结构的影响 Table 3 Effects of different α-galactosidase levels on the intestinal mucosa structure of 21-days-old AA broilers |
α-半乳糖苷是由1个蔗糖分子与1个或多个半乳糖分子通过α-1,6-糖苷键连接而成的一种低聚寡糖类物质,在豆粕及其他豆类饼粕原料中大量存在,如在豆粕中含量达5%~7%,且在大豆加工后仍然存在,其抗营养作用主要表现在:1)未被消化而进入后肠发酵产气,引起消化道胀气、恶心、下痢等,进而影响畜禽采食及生长、健康;2)增加食糜黏度、加快胃肠道蠕动排空,影响养分吸收利用,降低畜禽生长性能[11, 12, 13, 14, 15]。一般认为外源性α-半乳糖苷酶的添加能够补充禽类相应内源酶的缺乏,可以有效控制肠道微生物发酵,控制因饲料消化不良而引起的腹泻、胀气现象,同时可以降低食糜黏度,提高内源酶相对活性,提高蛋白质、能量等养分吸收利用效率,增加动物采食量,改善饲料报酬,提高畜禽生长性能[16]。如戴求仲等[17]研究玉米-豆粕-杂粕型饲粮中添加α-半乳糖苷酶对黄羽肉鸡生长性能影响,结果显示虽然α-半乳糖苷酶的添加对试鸡平均日增重、平均日采食量和料重比均无显著影响,但却有降低试鸡料重比的趋势;又如马慧慧等[18]研究α-半乳糖苷酶对饲喂玉米-豆粕型饲粮AA肉鸡生长性能的影响结果显示添加0.10、0.15、0.20 g/kg α-半乳糖苷酶处理显著提高了21、42日龄试鸡平均日增重2.56%~4.54%,降低了42日龄料重比1.91%~4.59%。不过有关α-半乳糖苷酶对肉鸡生长性能的作用效果还存在一定争议,有学者认为在饲粮中添加α-半乳糖苷酶并不能改善肉鸡生长性能[6]。本试验研究发现,饲粮正常能量水平处理(正对照处理)较降能处理的饲粮(负对照处理)能显著降低1~21日龄试鸡的料重比,这与Zhang等[3]研究结果类似,说明低代谢能水平饲粮无法满足试鸡的生长需要,影响了试鸡的生长性能。同时本研究结果显示尽管在负对照处理饲粮基础上添加不同水平α-半乳糖苷酶对1~21日龄AA肉鸡平均日增重、平均日采食量及全期存活率无显著影响,不过饲粮添加75 g/t的α-半乳糖苷酶处理1~21日龄试鸡的平均日增重最佳。同时α-半乳糖苷酶的添加对AA肉鸡的饲料报酬有所改善,加酶各处理试鸡料重比均显著低于降能处理的负对照处理,也低于采食正常代谢能水平饲粮的正对照处理,而4个添加酶制剂的试验处理间料重比无显著差异,表明α-半乳糖苷酶的添加提升了低代谢能水平饲粮的能量水平,弥补了较低能量水平饲粮不能满足试鸡生长需要的缺陷,进而提高AA肉鸡生长性能,并且在饲粮代谢能降低0.21 MJ/kg后添加合适水平的α-半乳糖苷酶可获得与正常代谢能水平饲粮相当甚至更优的饲喂效果。
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表4 不同水平α-半乳糖苷酶对21日龄AA肉鸡血清生化、激素指标的影响 Table 4 Effects of different α-galactosidase levels on the serum biochemical and hormonal indices of 21-days-old AA broilers |
肠道黏膜绒毛高度、隐窝深度、绒毛高度/隐窝深度、肠壁厚度是衡量肠道消化吸收功能的重要指标,肠绒毛是吸收养分的主要组织,绒毛高度与肠上皮细胞数量显著相关,绒毛高时,表明成熟的上皮细胞也增多,上皮细胞与食糜接触的表面积增大,增强机体吸收养分的能力;隐窝深度反映肠上皮细胞更新速度,不断有细胞从隐窝基部向绒毛端部迁移、分化,形成具有吸收能力的绒毛细胞,以补充绒毛上皮的正常脱落,隐窝变浅表明肠上皮细胞生成率降低,更新过程减慢而成熟率上升,分泌及吸收功能增强;绒毛高度/隐窝深度则综合反映肠黏膜功能状态,比值增大,说明肠内膜面积较大,肠黏膜结构改善,单位面积绒毛细胞数上升,消化吸收功能强;而对于肠壁厚度,其增大会影响营养物质的吸收和转运效率,降低饲料养分利用率,影响动物生长,此外,若肠壁适当变薄还能够减少机体内脏器官的维持需要,利于生长[19, 20, 21, 22, 23, 24]。本试验中,酶制剂的添加对21日龄十二指肠、回肠肠壁厚度,十二指肠绒毛高度有显著改善作用,这与张继东[25]报道结果较一致,其余各肠段肠壁厚度、绒毛高度、隐窝深度和绒毛高度/隐窝深度各处理间则无显著差异,但酶制剂的添加亦对这些产生了一定的改善作用,说明α-半乳糖苷酶在本试验条件下有改善试鸡肠黏膜形态结构发育的潜力,进而增强试鸡对养分的吸收能力,从而促进试鸡生长性能的提高。
3.3 饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶对21日龄AA肉鸡血清生化指标的影响张继东[25]研究在不同类型饲粮中添加主要含α-半乳糖苷酶的复合酶对艾维茵肉鸡血清生化指标的影响时发现酶制剂的添加无论是在玉米-豆粕型或玉米-豆粕-杂粕型饲粮中,都能够提高试鸡血糖含量,降低血清总胆固醇和甘油三酯含量,增加总蛋白、白蛋白、球蛋白和免疫球蛋白G(IgG)含量。而血清中葡萄糖主要是饲粮中的糖类被消化进入血液,以保障机体对能量的需要;而血清总胆固醇、甘油三酯含量能反映机体脂类代谢水平,其过高对机体健康不利;尿素氮、尿酸、肌酐都是禽类蛋白质代谢的终产物,其含量能反映机体蛋白质代谢情况、饲粮中氨基酸的平衡情况及动物体肾脏功能正常与否;血清总蛋白和白蛋白含量反映机体蛋白质代谢状况,若两者含量升高表明氨基酸、蛋白质的吸收利用率提高,机体肝脏蛋白质合成代谢及组织蛋白质的沉积作用增强;球蛋白占血清总蛋白比例较大,其含量高低可一定程度反映机体免疫水平;白蛋白/球蛋白反映机体脾脏功能,亦用来衡量机体免疫水平,白蛋白/球蛋白下降说明机体特异性免疫应答水平在升高[22, 26, 27, 28, 29]。本试验中,不同水平α-半乳糖苷酶的添加有提高21日龄肉鸡血糖、总蛋白含量,降低血清胆固醇、甘油三酯含量的趋势,同时对血清尿酸、尿素氮、肌酐含量和白蛋白/球蛋白有降低作用,这与张继东[25]、戴求仲等[17]、马慧慧等[18]研究结果较接近,说明本试验中α-半乳糖苷酶的添加一定程度消除了饲粮中α-半乳糖苷等的抗营养作用,提高了饲粮中养分被机体吸收、利用及沉积的效率,最终改善饲料报酬,提高动物生长性能。
3.4 饲粮添加不同水平α-半乳糖苷酶对21日龄AA肉鸡血清激素指标的影响甲状腺激素主要分为T3和T4 2种,是机体正常生理代谢所不可或缺的激素,主要作用是促进机体物质、能量代谢,促进组织生长、分化和发育成熟。血清甲状腺激素水平与禽类生长呈正相关,一般认为T3是发挥生理功能的主要激素,其生理效价是T4的数倍。T3一部分由甲状腺直接分泌,另一部分则来源于T4在5’-脱单碘酶的作用下转变为T3。T3/T4的大小则反映出T4向T3的转化能力,同时一定程度上反映动物机体的蛋白质合成代谢水平和胴体增重情况[22, 28, 30, 31, 32, 33];生长激素的功能主要是刺激骨骼生长,影响蛋白质、糖类、脂类的代谢,有报道禽类的促甲状腺激素释放激素(TRH)-T4、T3轴就通过影响生长激素对动物生长产生影响[4, 34];而胰岛素与胰高血糖素在机体中作用相互拮抗,胰岛素可促进葡萄糖转运入细胞,加强糖元合成,亦可促进脂肪沉积和蛋白质、核酸的合成,有利于肌肉发育,增加机体的合成代谢,从而起到改善畜禽胴体性状,促进生长的效应,胰高血糖素则与胰岛素相反,是一类促使分解代谢的激素[22, 31, 35]。
本试验中,各处理21日龄试鸡血清生长激素浓度无显著差异,不过酶制剂的添加对21日龄试鸡血清胰岛素和胰高血糖素含量有极显著的提高效应,说明试鸡前期机体的合成与分解代谢旺盛,结合生长性能结果分析,认为α-半乳糖苷酶的添加能够通过影响试鸡的内分泌来调控机体的合成与分解代谢,促进养分沉积,从而改善试鸡的生长性能。另外,不同水平α-半乳糖苷酶的添加对21日龄试鸡血清T3含量和T3/T4均无显著影响,但试鸡血清T3和T3/T4分别以处理E和处理C最高,分别为4.12 ng/mL和0.58,这说明酶制剂添加处理的试鸡生长代谢更旺盛,本试验结果也与穆永胜[36]、戴求仲等[17]在黄羽肉鸡中进行的研究报道相接近。
4 结 论综合分析生长性能、肠道黏膜形态结构和血清生化、激素指标结果,在本试验条件下,降低基础饲粮代谢能0.21 MJ/kg的基础上,添加75 g/t的α-半乳糖苷酶制剂即可使1~21日龄AA肉鸡生长性能达到与饲喂基础饲粮相当的水平。
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