投喂频率是影响鱼类摄食和饲料转化率的重要因子之一^[1]，适宜的投喂频率可以提高水产动物的生长速度和存活率，减少饲料浪费污染环境，提高饲料转化率，减少个体生长差异，从而提高养殖经济效益与生态效益^[2,3]；而不合理的投喂频率往往会降低鱼类的生长速度，使个体间规格分化差异较大^[4,5,6]。因此，适宜的投喂频率在水产养殖中具有重要意义。

团头鲂(Megalobrama amblycephala)，隶属于硬骨鱼纲，鲤形目，鲤科，鳊亚科，鳊属，其肉质嫩滑、味道鲜美、营养价值高，是我国主要的淡水养殖鱼类之一。近20年来，江苏、浙江、上海、安徽、山东、河南、河北、湖南、江西等20余个省、市、自治区引进养殖了团头鲂。目前，团头鲂在南方地区产量占总产量的10%以上，成为我国池塘、网箱养殖的主要品种，经济效益显著^[7]。目前有关投喂频率对鱼类生长^[8,9,10,11]、消化和代谢^[12,13]、肌肉成分^[14]和血液生化指标^[15]影响的研究已见报道，Li等^[16]和Tian等^[17]在室外网箱养殖的试验条件下对团头鲂幼鱼适宜投喂频率进行了研究，但是所得结论并不一致，因此团头鲂适宜投喂频率仍需进一步研究。本文主要探讨了循环流水控温养殖系统下不同投喂频率对团头鲂幼鱼生长性能、肌肉品质和血浆生化指标的影响，为团头鲂幼鱼阶段的合理投喂、能量物质转化利用、品质调控等提供科学依据。

试验用团头鲂幼鱼选自中国水产科学院淡水渔业研究中心南泉养殖基地。团头鲂幼鱼养殖于循环流水控温养殖系统，用团头鲂浮性膨化饲料[无锡通威饲料公司提供，实测粗蛋白质含量为31.13%(风干基础)，实测粗脂肪含量为5.05%(风干基础)，粒径1.0 mm]驯化15 d后，选取体质健康、规格整齐的幼鱼540尾[初均重(1.007±0.004) g]，随机分成6组，每组3个重复，每个重复30尾鱼，以重复为单位饲养于18个圆形蓄养槽 (规格为直径820 mm×高700 mm)，进行正式试验。

设定6种不同的投喂频率，各组团头鲂幼鱼的投喂频率及投喂时间见表1。每天以鱼重的2%～5%投喂膨化浮性饲料，每次投喂时观察摄食情况，使其饱食而无饲料剩余，试验周期为70 d。试验期间，每天吸污1次，并且每天冲洗滤布，日夜连续充气增氧。整个试验期间水质如下：平均水温(27.5±1.0) ℃，溶氧浓度≥5 mg/L，氨氮浓度≤0.2 mg/L，亚硝酸盐浓度≤0.2 mg/L，pH为7.2~7.8。光照周期为自然光周期。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 各组团头鲂幼鱼的投喂时间和投喂频率 Table 1 Feeding frequency and feeding time for Megalobrama amblycephala juvenile in each group 组别 Groups 投喂频率 Feeding frequency/(次/d) 投喂时间 Feeding time F1 1 10:00 F2 2 08:00、16:00 F3 3 08:00、12:00、16:00 F4 4 08:00、11:00、14:00、17:00 F5 5 08:00、10:00、12:00、16:00、18:00 F6 6 08:00、10:00、12:00、14:00、16:00、18:00

表1 各组团头鲂幼鱼的投喂时间和投喂频率 Table 1 Feeding frequency and feeding time for Megalobrama amblycephala juvenile in each group

饲养试验结束后，禁食24 h，将各缸鱼称重计数。然后每桶随机选取3尾团头鲂幼鱼用MS-222麻醉后尾部静脉采血，并迅速在4 ℃、2 000 r/min离心10 min分离血浆，-70 ℃冷冻保存，用于血液生化指标的测定。随后采集鱼体背部去鳞肌肉，将每桶3尾鱼体的背肌混合后-70 ℃冷冻保存，用于鱼体肌肉常规营养成分的测定。

血浆总蛋白(TP)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒购买自上海骏实生物科技有限公司，用美国贝克曼Cx-4型自动生化分析仪测定。

肌肉水分含量采用105 ℃恒重法(GB/T 6435—2006)测定，粗蛋白质含量采用凯氏定氮法(GB/T 6432—1994)测定，粗脂肪含量采用索氏抽提法(GB/T 6433—1994)测定，粗灰分含量采用550 ℃灼烧法(GB/T 6438—1992)测定。

增重率(%)=100×(终末总重-初始总重)/初总重；
特定生长率(%/d)=100×(ln终末体重-ln初始体重)/试验天数；
饲料系数(%)=饲料摄入量/增重量；
蛋白质效率(%)=100×湿增重/粗蛋白质摄入量；
蛋白质生产值(%)=100×蛋白质获得量/蛋白质摄入量。

试验所得数据用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析(one-way ANOVA)和LSD多重比较，P＜0.05表示差异显著。试验结果以平均值±标准误(mean±SE)表示。

如表2所示，随着投喂频率的增加，各组团头鲂幼鱼均未出现死亡，增重率和特定生长率呈现先升后降的趋势，F5组增重率和特定生长率为最高，显著高于F1、F2和F6组(P＜0.05)。F1和F5组摄食量分别为最低和最高，与其他组差异显著(P＜0.05)，摄食量在F2、F3和F6组间差异不显著(P＞0.05)。F1和F5组的饲料系数较低，显著低于F2和F6组(P＜0.05)，而与其他各组差异不显著(P＞0.05)。F1和F5组蛋白质效率显著高于 F2组(P＜0.05)，而与其他各组差异不显著(P＞0.05)。各组鱼体蛋白质生产值没有显著差异(P＞0.05)。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 投喂频率对团头鲂幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of feeding frequency on growth performance of Megalobrama amblycephala juvenile (n=3) 组别 Groups 初始均重 Initial average weight/g 终末均重 Final average weight/g 增重率 WGR/% 特定 生长率 SGR/(%/d) 摄食量 Feed intake/g 饲料系数 FCR 蛋白质 效率 PER/% 蛋白质 生产值 PPV/% F1 1.007±0.002 6.64±0.07a 559.57±5.67a 2.10±0.01a 281.83±18.16a 1.95±0.01a 1.65±0.15b 27.14±3.97 F2 1.008±0.004 7.92±0.56a 685.45±55.76a 2.28±0.08a 460.90±33.04bc 2.65±0.23b 1.21±0.16a 21.18±3.03 F3 1.004±0.001 9.10±0.43a 806.88±43.07ab 2.45±0.05ab 504.09±27.59c 2.46±0.01ab 1.31±0.12ab 21.82±2.13 F4 1.006±0.001 8.78±1.81a 772.96±179.50a 2.36±0.22a 399.28±26.07b 2.27±0.93ab 1.42±0.21ab 25.02±4.16 F5 1.007±0.002 12.67±1.63b 1 157.70±162.17b 2.80±0.14b 640.83±38.66d 2.08±0.19a 1.54±0.19b 28.27±3.67 F6 1.008±0.003 8.88±1.22a 781.80±124.14a 2.40±0.15a 428.17±32.40b 2.65±0.53b 1.21±0.20a 21.74±2.81 同列数据肩标不同字母表示差异显著(P＜0.05)。下表同。 Values in the same column with different letter superscripts mean significant difference (P＜0.05). The same as below.

表2 投喂频率对团头鲂幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of feeding frequency on growth performance of Megalobrama amblycephala juvenile (n=3)

如表3所示，F4组鱼体肌肉中水分含量较F1和F3组显著减少(P＜0.05)，其他各组之间差异不 显著(P＞0.05)。鱼体肌肉中粗脂肪含量则是F5 组较F1、F2和F3组显著提高(P＜0.05)，与F4和F6组无显著差异(P＞0.05)。各组鱼体肌肉中粗蛋白质和粗灰分含量差异不显著(P＞0.05)。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 投喂频率对团头鲂幼鱼肌肉品质的影响(湿重基础) Table 3 Effects of feeding frequency on muscle quality of Megalobrama amblycephala juvenile (wet weight basis,n=3) % 组别 Groups 水分 Moisture 粗蛋白质 Crude protein 粗脂肪 Crude lipid 粗灰分 Ash F1 71.44±1.02b 16.47±1.32 7.07±0.45a 1.38±0.04 F2 68.49±1.98ab 17.47±1.62 7.20±1.24a 1.48±0.10 F3 71.46±0.75b 16.71±0.56 7.00±0.66a 1.42±0.11 F4 65.40±2.96a 17.68±0.23 8.85±0.02ab 1.60±0.10 F5 67.45±1.28ab 18.30±1.48 9.42±0.28b 1.62±0.17 F6 66.89±1.70ab 17.95±0.16 8.53±0.06ab 1.57±0.19

表3 投喂频率对团头鲂幼鱼肌肉品质的影响(湿重基础) Table 3 Effects of feeding frequency on muscle quality of Megalobrama amblycephala juvenile (wet weight basis,n=3)

如表4所示，随着投喂频率的增加，血浆总蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白含量均呈现先上升后下降的趋势，且均以F5组最高。F5组血浆总蛋白含量显著高于F1和F2组(P＜0.05)。F3和F5组血浆碱性磷酸酶活性最高，较F1、F2和F4组显著提高(P＜0.05)，而与F6组差异不显著(P＞0.05)。F5组血浆葡萄糖含量较F1和F3组显著降低(P＜0.05)，其余各组之间无显著差异(P＞0.05)。F5和F6组血浆总胆固醇含量显著高于F1组(P＜0.05)，而与其他各组差异不显著(P＞0.05)。投喂频率对团头鲂血浆甘油三酯含量没有显著影响(P＞0.05)。F5组血浆低密度脂蛋白含量显著高于F1组(P＜0.05)。各组血浆高密度脂蛋白含量相比较，F1组最低，F5组最高，且显著高于F1和F2组(P＜0.05)；此外，F3、F4和F6组均显著高于F1组(P＜0.05)。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 投喂频率对团头鲂幼鱼血浆生化指标的影响 Table 4 Effects of feeding frequency on plasma biochemical indices of Megalobrama amblycephala juvenile 组别 Groups 总蛋白 TP/ (g/L) 碱性磷酸酶 ALP/ (U/L) 葡萄糖 GLU/ (mmol/L) 总胆固醇 TC/ (mmol/L) 甘油三酯 TG/ (mmol/L) 低密度脂蛋白 LDL/ (mmol/L) 高密度脂蛋白 HDL/ (mmol/L) F1 17.15±1.71a 66.23±6.21a 32.54±3.97b 3.87±0.21a 1.14±0.03 1.07±0.16a 2.32±0.08a F2 20.45±1.00a 78.87±4.18a 24.36±3.51ab 4.68±0.17ab 1.20±0.09 1.49±0.07ab 2.72±0.08ab F3 21.88±1.12ab 111.96±11.85b 27.46±3.31b 4.84±0.36ab 1.10±0.10 1.54±0.19ab 2.86±0.17b F4 22.28±3.28ab 76.24±5.14a 24.41±5.50ab 4.89±0.55ab 1.10±0.07 1.55±0.26ab 2.87±0.26b F5 25.97±1.23b 111.91±11.90b 18.16±2.12a 5.66±0.13b 1.20±0.03 1.87±0.10b 3.27±0.05bc F6 22.76±2.45ab 91.42±9.71ab 25.37±1.33ab 5.09±0.63b 1.22±0.20 1.61±0.35ab 2.94±0.27b

表4 投喂频率对团头鲂幼鱼血浆生化指标的影响 Table 4 Effects of feeding frequency on plasma biochemical indices of Megalobrama amblycephala juvenile

虽然有学者认为投喂频率对鱼体生长和饲料系数并无显著影响，如Biswas等^[12]对麦鲮(Cirrhinus mrigala)和南亚野鲮(Labeo rohita)的研究显示，投喂频率对鱼体生长和饲料系数并无显著影响。但是大量的研究显示，较高的投喂频率可以改善鱼体的生长性能。杨帆等^[18]对黄鳝(Monopterus albus)幼鱼的研究发现，每天投喂4次黄鳝幼鱼特定生长率显著高于每天投喂2和3次。王武等^[3]对瓦氏黄颡鱼的研究也显示，21～60 d瓦氏黄颡鱼幼鱼的特定生长率随投喂频率的增加而显著升高。Webster等^[19]认为每天投喂2次时杂交鲈鱼(Morone chrysops×M. saxatilis)的生长性能显著高于每天投喂1次时。虹鳟(Oncorhynchus mykiss)每天投喂频率为3次时，其生长性能高于每天投喂1和2次时^[20]。本试验同样发现，每天投喂5次时团头鲂幼鱼的增重率和特定生长率显著高于每天投喂1和2次时。这可能是因为在较高的投喂频率下可以使团头鲂幼鱼每天接近或达到饱食更多次，获得更多的能量和营养用于体重增加^[21]，这也可能与鱼体胃排空的时间有关，研究发现对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)每隔4 h进行投喂可以获得最佳的生长，与其肠胃排空的时间是一致的^[22]。Cho等^[23]以3%和6%的投喂量饲养香鱼(Plecoglossus altivelis)时，与每天4次的投喂频率相比，每天投喂6次时特定生长率呈现下降趋势，这与本试验结论相似，说明饱食投喂时，适当增加投喂频率对鱼类的生长有促进作用，但当投喂次数过多时，鱼类摄食活动等行为频繁，使得鱼体能量消耗过多，导致用于生长的能量贮存减少，从而影响生长，且会增加饲料成本^[24]。此外，本试验中每天投喂5次时，蛋白质效率和蛋白质生产值最大，且投喂频率由每天2次增加到6次均呈先升高后降低的趋势。姜建湖等^[10]对青鱼(Mylopharyngodon piceus)的研究结果也显示，随着投喂频率的增加蛋白质效率及蛋白质生产值均先升高后逐渐趋于同一水平或稍有降低。这可能是由于投喂频率增加使食物在动物消化道移动反射性加快，未被完全消化吸收的营养物质随粪便排掉，因而会造成蛋白质消化吸收率下降和饲料的浪费^[25]。虽然本试验设计和Li等^[16]和Tian等^[17]结果相似，但他们采用的是室外网箱养殖，可能由于天然饵料比较充足，所以即使投喂次数减少，仍然能满足团头鲂幼鱼的正常生长。

本试验中测定了团头鲂鱼体肌肉水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量，其中粗蛋白质和粗脂肪的含量是衡量鱼体肌肉品质的重要指标。结果显示投喂频率对鱼体肌肉水分和粗脂肪含量具有显著影响，其中每天投喂1次组和每天投喂3次组的鱼体肌肉水分含量较高，每天投喂5次组的鱼体肌肉粗脂肪含量较高，而投喂频率对肌肉粗蛋白质和粗灰分含量无显著影响。与本试验结果类似，Lee等^[26]以不同投喂频率饲养许氏平鲉(Sebastes schlegeli)后发现，投喂频率对肌肉粗蛋白质含量没有影响，但是高投喂频率可以显著提高肌肉粗脂肪含量。Oh等^[27]研究发现,条石鲷(Oplegnathus fasciatus)鱼体粗脂肪含量随着投喂频率的增加而显著升高。罗波^[28]对吉富罗非鱼(GIFT strain of Nile tilapia,Oreochromis niloticus)幼鱼的研究也显示，随着投喂频率的增加鱼体粗脂肪含量呈现上升趋势，水分含量呈现下降趋势。在对草鱼(Ctenopharynodon idellus)^[29]、大黄鱼(Pseudosciaena crocea)^[13]、牙鲆(Paralichthys olivaceus)^[30]、虹鳟^[31]、香鱼^[32]等的研究中都有类似发现。但是，纪秀文等^[33]对点带石斑鱼(Epinephelus coioides)的研究却发现，投喂频率对点带石斑鱼全鱼水分和粗脂肪含量无显著影响;覃志彪等^[34]对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)的研究则显示，随着投喂频率的增加，瓦氏黄颡鱼幼鱼鱼体水分含量逐步升高，粗脂肪含量逐步降低，这与本试验的研究结果正好相反。这可能是由于团头鲂幼鱼摄食活动频率增加，饲料在水中浸泡时间少，营养成分流失少，但是随着投喂频率的增加，鱼类摄食活跃性降低^[35]，并且摄食次数越多，耗费能量越多，所以全鱼粗蛋白质和粗灰分含量随投喂频率的增加而升高但并不显著，也可能是吸收的过多营养成分以体脂的形式存在于鱼体中。

鱼类血液与机体代谢、营养状况以及疾病等密切相关，血液成分被广泛地用来评价鱼类的健康状况、营养状况以及对环境的适应状况，是重要的生理、病理和毒理学指标^[36]。碱性磷酸酶是动物代谢过程中重要的代谢酶，可通过水解作用将表面带有磷酸酯的异物破坏掉，并可修饰或改变外来异物的表面分子组成，加快吞噬细胞的吞噬作用和对异物的降解速度，从而阻止病菌在机体的生长和繁殖，是机体解毒体系中的重要成员^[37]，并且碱性磷酸酶在鱼体对营养物质的吸收、利用和非特异性免疫反应中发挥着重要的作用，其活性的高低可反映动物的生长速度和生长性能^[38]；另外，碱性磷酸酶活性通常还会受到饥饿^[39]或者不良的摄食活动^[40]的影响而变化，在对舌齿鲈(Dicentrarchus labrax)摄食行为的研究中发现碱性磷酸酶活性与其摄食物体、摄食节律等相关^[40]。血浆总蛋白、甘油三酯和总胆固醇含量代表了机体生理和肝脏脂肪代谢功能^[41]。水产动物脂类的转运需要经过血液运输到其他组织，血液中胆固醇等脂类物质的含量能够反映水产动物脂类的代谢状态^[42]。低密度脂蛋白由极低密度脂蛋白胆固醇转变而来，主要作用是向组织转运肝脏合成的内源胆固醇；高密度脂蛋白主要将肝外组织中的胆固醇运回肝脏，在肝脏中转化为胆汁酸或直接排出体外，故血浆低密度脂蛋白和高密度脂蛋白含量反映机体的胆固醇代谢情况^[43]。葡萄糖是许多组织的必需燃料，恒定的血糖含量对维持鱼类正常生命活动有重要作用。正常情况下，鱼类血糖含量可以作为机体营养状况的指标，因为在神经系统和内分泌系统的调节下，鱼类血糖总量处于动态平衡之中，但由于鱼类的摄食状态、活动性、健康状态、栖息环境等众多因素均可影响鱼类血糖含量^[44]。周明等^[45]、崔素丽等^[46]、何敏等^[47]在团头鲂免疫机能相关研究中发现血浆中碱性磷酸酶活性及总胆固醇、甘油三酯、总蛋白含量等指标可以反映鱼体的免疫状态。关于投喂频率对鱼体血浆生化指标影响的研究不多见，本试验发现不同的投喂频率也会影响鱼体的免疫功能，同时对团头鲂幼鱼血脂和血糖代谢也有一定影响。随着投喂频率的增加，血浆总蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白含量均呈现先上升后下降的趋势，且均在每天投喂5次时最高，且每天投喂5次时血浆葡萄糖含量最低。这可能是由于随着投喂频率的增加，鱼类达到饱食的次数增多，增加了营养成分及能量物质摄入，改善了团头鲂的血脂代谢功能，形成的少食多餐的摄食规律刺激了胰岛素的持续分泌，改善了糖代谢水平，从而增强了机体免疫力。

在循环流水控温养殖方式下，投喂频率为每天5次时团头鲂幼鱼可获得快速、健康的生长，且依然可保持鱼体肌肉品质，因此建议团头鲂幼鱼养殖的投喂频率为每天5次。