近几年来，随着生物科学技术的不断提高，酶制剂的产品也越来越多，许多饲料加工企业已经将酶制剂运用到了畜牧生产中，如植酸酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶等。然而在肉鸡饲粮中添加外源酶制剂的想法源于刚孵化出来的小鸡缺乏关键的消化酶^[1]。有报道表明，饲料中添加酶制剂具有补充动物机体内源酶的不足、消除抗营养因子、提高饲料利用率、促进畜禽的生长、减少环境污染等作用，具有一定的经济效益和生态效益^[2]。蛋白酶作为催化蛋白质水解的一类酶，与动物机体生命活动有很大的联系。胡学智等^[3]指出，蛋白酶与生物体的生理活动和疾病的发生，如食物的消化吸收、炎症、生理活性肽的活化等都息息相关。汪银锋等^[4]指出，在家禽饲粮和幼龄家畜饲粮中添加蛋白酶能够弥补体内蛋白酶的分泌不足，加速动物对蛋白质的分解消化吸收，提高蛋白质饲粮利用率，降低粪便中含氮物质的排出，减少对环境的污染，提高畜禽生产性能。然而由于蛋白酶的产品种类繁多，性质差异较大，因此在动物中的研究结果不尽相同。本试验通过在饲粮不同粗蛋白质(CP)水平条件下添加不同水平的外源蛋白酶，观察其对肉鸡生产性能、血清生化指标及抗氧化功能的影响，旨在寻求适宜的蛋白酶添加水平和添加方式，为其在白羽肉鸡配合饲料中的应用提供试验依据。

试验采用3×3因子设计(表1)，分别为正对照(PC，CP水平1~21 d为21%，22~42 d为19%)、负对照1(NC1，CP水平在PC基础上降1%)和负对照2(NC2，CP水平在PC基础上降2%)；3种蛋白酶添加水平(0、150和300 mg/kg)。试验共选用1 080只1日龄爱拔益加(AA)肉鸡，随机分配到9个处理，每个处理6个重复，每个重复20只鸡，公母各占1/2。

表 1

Table 1

表 1(Table 1)

表 1 试验设计 Table 1 Experimental design 处理 Treatments 粗蛋白质水平 CP level/% 蛋白酶 Protease/(mg/kg) 1~21 d 22~42 d 正对照 PC T1 21 19 0 T2 21 19 150 T3 21 19 300 负对照1 NC1 T4 20 18 0 T5 20 18 150 T6 20 18 300 负对照2 NC2 T7 19 17 0 T8 19 17 150 T9 19 17 300

表 1 试验设计 Table 1 Experimental design

本试验酶制剂是由绵阳禾本生物工程有限公司生产提供的蛋白酶(1×10⁵ U/g)，酶活性定义：在温度37 ℃、pH为8.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1 μg酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为1个蛋白酶活性单位，以U表示。

试验饲粮采用玉米-豆粕型，参照中国鸡饲养标准(2004)肉用仔鸡营养需要结合生产中实际饲粮营养水平配制。PC、NC1、NC2处理饲粮为不同CP水平和不同赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸水平，在1~21 d，NC1处理CP、赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸相对于PC处理分别降低了4.085%、4.515%、6.276%、4.772%。NC2处理CP、赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸相对于PC分别降低了9.517%、10.206%、10.502%、9.393%；在22~42 d，NC1处理CP、赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸相对于PC分别降低了5.297%、5.881%、5.354%、6.608%；NC2处理CP、赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸相对于PC分别降低了10.649%、11.161%、10.798%、11.995%。各处理间的其他营养水平保持一致。饲粮为颗粒料。试验饲粮组成及营养水平见表2。

表 2

Table 2

表 2(Table 2)

表 2 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) % 项目 Items 含量 Content 1~21 d 22~42 d 正对照 PC 负对照1 NC1 负对照2 NC2 正对照 PC 负对照1 NC1 负对照2 NC2 原料 Ingredients 玉米 Corn 57.93 61.13 64.28 62.39 65.63 68.93 豆粕 Soybean meal 35.16 32.36 29.64 30.20 27.42 24.57 豆油 Soybean oil 2.77 2.34 1.91 3.72 3.27 2.81 石粉 Limestone 1.16 1.19 1.20 1.13 1.13 1.13 磷酸氢钙 CaHPO4 1.84 1.84 1.84 1.60 1.60 1.60 DL-蛋氨酸 DL-Met 0.21 0.19 0.18 0.13 0.12 0.11 L-赖氨酸盐酸盐 L-Lys·HCl 0.10 0.12 0.12 0.07 0.08 0.10 苏氨酸 Thr 0.04 0.04 0.04 0.03 0.02 0.02 食盐 NaCl 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 多维 Compound vitamin1) 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 氯化胆碱 Choline chloride 0.16 0.16 0.16 0.10 0.10 0.10 预混料 Premix2) 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels3) 代谢能 ME/(MJ/kg) 12.34 12.34 12.34 12.76 12.76 12.76 粗蛋白质 CP 21.00 20.00 19.00 19.00 18.00 17.00 钙 Ca 1.00 1.00 1.00 0.90 0.90 0.90 有效磷 AP 0.45 0.45 0.45 0.40 0.40 0.40 赖氨酸 Lys 1.15 1.10 1.04 1.01 0.95 0.90 蛋氨酸 Met 0.50 0.47 0.45 0.40 0.38 0.36 苏氨酸 Thr 0.81 0.77 0.73 0.73 0.68 0.64 1)多维为每千克饲粮提供 Compound vitamin provided the following per kilogram of diets：VA 12 000 IU，VD3 3 000 IU，VE 7.5 IU，VK2 1.5 mg，VB1 0.6 mg，VB2 4.8 mg，VB6 1.8 mg，VB12 0.009 mg，烟酸 niacin acid 10.5 mg，D-泛酸钙 D-calcium pantothenate 7.5 mg，叶酸 folic acid 0.15 mg。 2)预混料为每千克试验饲粮提供Premix provided the following per kilogram of diets：Fe (FeSO4·H2O) 100 mg，Cu (CuSO4·5H2O) 8 mg，Mn (MnSO4·H2O) 120 mg，Zn (ZnSO4·H2O) 100 mg，I (KI) 0.7 mg，Se (Na2SeO3) 0.35 mg。 3)营养水平为计算值。Nutrient levels were calculated values.

表 2 试验饲粮组成及营养水平(干物质基础) Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

试验在四川农业大学动物营养研究所试验场进行，试验期42 d。试验肉鸡均采用网上平养(高0.5 m×宽1 m×长2 m)。试验前清洗鸡舍、笼具、料盘、料桶和饮水设备，然后用福尔马林和高锰酸钾(每立方米加30 mL福尔马林，15 g高锰酸钾)对其熏蒸48 h，开窗敞5 d后正式试验。入雏前24 h将鸡舍升温至32~35 ℃，此后温度每周降低2~3 ℃，直至保持在22~24 ℃为止。采用连续光照、自然通风、自由采食和自由饮水的管理方式。定期打扫圈舍卫生。常规免疫。

试验第21、42天，分别以重复为单位对试验鸡进行空腹称重，统计饲粮消耗量，计算21、42 d的肉鸡平均体重(ABW)和1~21 d、22~42 d、1~42 d的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和料重比(F/G)。

试验第21、42天，各重复随机抽取体重中等的健康肉鸡1羽，颈静脉采血10 mL，于4 000 r/min离心10 min，分离血清于0.5 mL离心管中，置-20 ℃冷冻保存，待测。采用全自动生化分析仪测定外周血血清中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、尿酸(UA)、肌酐(Crea)的含量及谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性。

采用试剂盒测定外周血血清中丙二醛(MDA)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

生产性能数据采用SPSS 17.0软件中的一般线性模型进行多变量检验和单因素方差分析(one-way ANOVA)，对血清生化指标和抗氧化功能的数据只采用SPSS 17.0软件中的一般线性模型进行多变量检验，并均以Duncan氏法多项检验进行显著性比较，P≤0.05表示差异显著，P>0.05表示差异不显著，0.05<P<0.10表示有趋势。试验结果采用平均值±标准差表示。

由表3可见，从单因素分析看，各处理21 d的ABW和1~21 d的ADG、F/G有显著差异(P<0.05)。在不加蛋白酶情况下，PC处理21 d的ABW和1~21 d的ADG显著高于NC1和NC2处理(P<0.05)，1~21 d的F/G显著低于NC1和NC2处理(P<0.05)；与PC+0 mg/kg蛋白酶处理对比，NC1处理添加150和300 mg/kg的蛋白酶后，21 d的ABW和1~21 d的ADG、F/G无显著差异(P>0.05)；与PC+0 mg/kg蛋白酶处理对比，NC2处理添加150和300 mg/kg的蛋白酶后，21 d的ABW和1~21 d的ADG显著降低(P<0.05)，1~21 d的F/G显著升高(P<0.05)。此外，在各处理中，以PC+300 mg/kg蛋白酶处理肉鸡ABW和ADG为最高，F/G为最低。

表 3

Table 3

表 3(Table 3)

表 3 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对肉鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on performance of broilers 处理Treatments 平均体重 ABW/g 平均日增重 ADG/(g/d) 平均日采食量 ADFI/(g/d) 料重比 F/G 1 d 21 d 42 d 1~21 d 22~42 d 1~42 d 1~21 d 22~42 d 1~42 d 1~21 d 22~42 d 1~42 d 正对照 PC T1 37.7±0.2 904.4±10.5de 2 458.2±58.2ab 41.3±0.5de 74.0±2.7 57.6±1.4abc 58.1±1.4 154.8±5.3 105.6±3.5 1.41±0.04ab 2.09±0.03 1.83±0.02 T2 37.7±0.1 919.4±28.9e 2 452.6±111.8ab 42.0±1.4e 75.2±5.3 58.6±2.2bc 58.6±1.3 161.2±11.3 109.0±4.4 1.40±0.02a 2.15±0.15 1.86±0.08 T3 37.7±0.1 915.5±23.5e 2 544.9±98.5b 41.8±1.1e 77.6±3.9 59.7±2.3c 58.3±1.3 157.7±6.7 107.1±4.0 1.39±0.01a 2.03±0.08 1.8±0.05 负对照1 NC1 T4 37.7±0.2 867.1±23.7bc 2 499.4±92.8b 39.5±1.1bc 74.3±6.9 56.9±3.4abc 57.2±1.6 154.8±7.6 105.0±3.9 1.45±0.01cd 2.09±0.14 1.85±0.06 T5 37.7±0.1 884.0±16.1cd 2 448.3±81.2ab 40.3±0.8cd 74.5±3.8 57.4±1.9abc 57.5±1.3 159.1±7.8 107.4±3.5 1.43±0.02bc 2.14±0.14 1.87±0.08 T6 37.7±0.1 886.6±18.3cd 2 446.4±72.0ab 40.4±0.9cd 74.3±2.8 57.4±1.7abc 57.7±1.3 156.3±7.2 106.0±3.9 1.43±0.01bc 2.10±0.04 1.85±0.03 负对照2 NC2 T7 37.7±0.1 856.0±14.5ab 2 377.0±105.6a 39.0±0.7ab 72.4±4.6 55.7±2.5a 57.9±1.1 157.8±8.1 106.9±4.0 1.49±0.03e 2.18±0.10 1.92±0.06 T8 37.6±0.2 852.3±29.1ab 2 371.1±82.8a 38.8±1.4ab 72.3±3.3 55.6±2.0a 57.5±2.5 154.4±8.6 105.2±5.5 1.48±0.02e 2.14±0.08 1.89±0.05 T9 37.7±0.1 838.0±29.0a 2 381.5±54.7a 38.1±1.4a 73.5±3.2 55.8±1.3ab 55.7±1.9 151.5±6.5 102.6±3.9 1.46±0.03de 2.07±0.13 1.84±0.08 P值P-value 主效应 Main effect 0.937 <0.001 0.015 <0.001 0.587 0.026 0.125 0.589 0.344 <0.001 0.374 0.058 粗蛋白质水平 CP level PC 37.7 913.1c 2 485.2b 41.7c 75.6 58.7b 58.3b 157.9 107.3 1.40a 2.10 1.83a NC1 37.7 879.3b 2 464.7b 40.1b 74.4 57.2b 57.5ab 156.7 106.1 1.43b 2.11 1.86ab NC2 37.7 848.8a 2 376.5a 38.7a 72.8 55.7a 57.0a 154.6 104.9 1.48c 2.13 1.88b 蛋白酶水平 Protease level/(mg/kg) 0 37.7 875.9 2 444.9 39.9 73.6 56.8 57.7 155.8 105.9 1.45b 2.14 1.87 150 37.6 885.2 2 424.0 40.4 74.0 57.2 57.9 158.2 107.2 1.44ab 2.12 1.87 300 37.7 880.1 2 457.6 40.1 75.1 57.6 57.2 155.2 105.3 1.43a 2.07 1.83 P值 P-value 粗蛋白质水平 CP level 0.949 <0.001 0.001 <0.001 0.142 0.001 0.050 0.449 0.238 <0.001 0.586 0.035 蛋白酶水平 Protease level 0.505 0.463 0.503 0.461 0.538 0.488 0.434 0.464 0.371 0.043 0.109 0.057 粗蛋白质水平×蛋白酶水平CP level×protease level 0.846 0.342 0.365 0.344 0.869 0.828 0.260 0.505 0.380 0.712 0.538 0.511 同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。 In the same column,values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05),while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表 3 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对肉鸡生产性能的影响 Table 3 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on performance of broilers

从双因素分析看，与PC处理相比，NC1和NC2处理21 d的ABW和1~21 d的ADG显著下降(P<0.05)，1~21 d的F/G显著升高(P<0.05)。PC处理21 d的ABW显著高于NC1和NC2处理(P<0.05)，NC1处理21 d的ABW显著高于NC2处理(P<0.05)；PC和NC1处理42 d的ABW显著高于NC2处理(P<0.05)；PC处理1~21 d的ADG显著高于NC1和NC2处理(P<0.05)，NC1处理1~21 d的ADG显著高于NC2处理(P<0.05)；NC2处理1~42 d的ADG显著低于PC和NC1处理(P<0.05)；PC处理1~21 d的ADFI显著高于NC2处理(P<0.05)，PC处理22~42 d和1~42 d的ADFI与NC1和NC2处理无显著差异(P>0.05)；PC处理1~21 d的F/G显著低于NC1和NC2处理(P<0.05)，NC1处理1~21 d的F/G显著低于NC2处理(P<0.05)；PC处理1~42 d的F/G显著低于NC2处理(P<0.05)。在添加蛋白酶后，1~21 d的F/G显著下降(P<0.05)，1~42 d的F/G有降低的趋势(P=0.057)，添加300 mg/kg的蛋白酶处理1~21 d的F/G显著低于不加酶处理(P<0.05)，蛋白酶水平对ABW、ADG和ADFI无显著影响(P>0.05)。

由表4和表5可见，当饲粮CP水平降低时，对21 d血清TP、ALB、GLB、Crea、UA含量及ALT、AST活性均无显著影响(P>0.05)；42 d时血清ALB含量显著降低(P<0.05)，NC1和NC2处理间差异不显著(P>0.05)；NC1处理42 d血清GLB含量显著低于PC处理(P<0.05)，NC2处理与PC和NC1处理间差异不显著(P>0.05)；NC1和NC2处理42 d血清中TP含量相对于PC处理有降低的趋势(P=0.052)。添加蛋白酶后，对21 d血清中Crea含量有显著影响(P<0.05)，300 mg/kg蛋白酶处理血清中Crea含量显著低于0和150 mg/kg蛋白酶处理(P<0.05)，蛋白酶对血清TP、ALB、GLB、UA含量及ALT、AST活性均无显著影响(P>0.05)；蛋白酶水平和CP水平的互作对21 d血清TP和GLB含量有显著影响(P<0.05)。

表 4

Table 4

表 4(Table 4)

表 4 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对21 d肉鸡血清生化指标的影响 Table 4 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on serum biochemical indices of broilers at 21 days 处理Treatments 总蛋白 TP/(g/L) 白蛋白 ALB/(g/L) 球蛋白 GLB/(g/L) 谷丙转氨酶 ALT/(U/L) 谷草转氨酶 AST/(U/L) 肌酐 Crea/(mol/L) 尿酸 UA/(mol/L) 正对照 PC T1 30.1±0.8 11.8±1.1 18.3±1.3 4.6±0.7 229.4±17.0 3.3±0.5 293.3±69.2 T2 28.5±3.3 11.1±1.4 17.3±2.1 5.2±1.2 267.4±49.5 3.8±1.5 320.2±100.1 T3 27.7±2.1 10.9±0.9 16.7±1.6 4.7±0.6 255.9±30.9 3.0±0.7 267.4±55.5 负对照1 NC1 T4 29.4±3.7 11.6±1.1 17.9±2.8 4.7±0.8 221.8±35.6 3.0±0.6 281.5±90.5 T5 29.5±3.9 11.2±1.7 18.3±2.3 4.6±0.2 228.2±19.1 3.2±0.4 229.0±70.1 T6 28.5±2.4 11.3±0.6 17.2±2.4 4.8±1.0 251.1±60.7 2.8±1.0 280.0±91.9 负对照2 NC2 T7 27.4±3.0 10.9±1.0 16.5±2.7 4.8±0.9 227.1±15.5 3.5±1.1 344.3±81.9 T8 28.8±3.1 11.6±2.0 17.2±1.8 4.6±0.9 239.7±52.9 3.7±0.8 351.5±68.2 T9 33.9±4.4 12.5±1.7 21.4±2.7 4.9±1.5 244.3±44.7 2.2±0.4 255.6±91.2 主效应 Main effect 粗蛋白质水平 CP level PC 28.8 11.2 17.5 4.8 250.6 3.4 295.2 NC1 29.0 11.4 17.7 4.7 234.0 3.0 265.5 NC2 29.5 11.6 18.0 4.7 237.9 3.1 317.6 蛋白酶水平 Protease level/(mg/kg) 0 28.9 11.4 17.4 4.7 226.0 3.3b 301.6 150 28.9 11.3 17.6 4.8 246.1 3.6b 304.4 300 30.0 11.4 18.2 4.8 251.0 2.7a 268.4 P值 P-value 粗蛋白质水平 CP level 0.453 0.624 0.505 0.884 0.442 0.448 0.193 蛋白酶水平 Protease level 0.496 0.897 0.354 0.895 0.225 0.020 0.366 粗蛋白质水平×蛋白酶水平CP level×protease level 0.020 0.227 0.017 0.765 0.849 0.540 0.297

表 4 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对21 d肉鸡血清生化指标的影响 Table 4 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on serum biochemical indices of broilers at 21 days

表 5

Table 5

表 5(Table 5)

表 5 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对42 d肉鸡血清生化指标的影响 Table 5 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on serum biochemical indices of broilers at 21 dayss 处理Treatments 总蛋白 TP/(g/L) 白蛋白 ALB/(g/L) 球蛋白 GLB/(g/L) 谷丙转氨酶 ALT/(U/L) 谷草转氨酶 AST/(U/L) 肌酐 Crea/(mol/L) 尿酸 UA/(mol/L) 正对照 PC T1 31.6±8.0 16.5±2.2 15.1±6.1 4.9±1.1 309.1±131.9 10.3±4.6 190.7±77.5 T2 24.8±0.7 15.8±0.8 9.0±0.4 4.9±1.9 244.4±36.7 8.7±5.8 255.0±52.5 T3 27.7±6.8 16.9±2.3 10.8±4.9 5.2±3.5 241.6±34.0 5.0±2.2 194.5±61.6 负对照1 NC1 T4 23.4±5.6 15.2±1.9 8.2±3.8 5.0±2.1 233.0±40.0 7.8±4.6 177.4±53.7 T5 22.4±3.9 14.3±1.1 8.0±3.3 4.5±1.3 268.1±77.9 8.0±3.7 187.8±47.5 T6 24.1±9.4 15.6±3.7 8.6±5.8 3.8±1.9 245.5±19.1 8.8±1.0 208.5±51.6 负对照2 NC2 T7 22.9±3.7 14.3±1.5 8.6±2.6 4.2±0.8 257.1±43.2 7.7±4.7 208.33±23.1 T8 28.6±2.5 14.7±1.3 13.9±2.8 5.0±1.8 216.7±55.7 11.2±4.3 200.8±38.7 T9 26.5±3.8 15.3±1.0 11.3±3.1 4.5±1.7 208.1±41.1 9.0±5.3 231.2±91.8 主效应 Main effect 粗蛋白质水平 CP level PC 28.1 16.4b 11.6b 5.0 267.9 8.4 215.8 NC1 23.2 14.9a 8.2a 4.5 250.4 8.1 189.9 NC2 25.6 14.7a 10.9ab 4.7 221.3 9.6 214.5 蛋白酶水平 Protease level/(mg/kg) 0 26.0 15.3 10.7 4.8 270.7 8.9 189.7 150 24.8 15.0 9.9 4.8 243.1 9.3 214.6 300 26.3 16.0 10.3 4.5 228.3 7.8 214.2 P值 P-value 粗蛋白质水平 CP level 0.052 0.027 0.042 0.701 0.322 0.711 0.541 蛋白酶水平 Protease level 0.898 0.352 0.943 0.880 0.401 0.570 0.586 粗蛋白质水平×蛋白酶水平CP level×protease level 0.147 0.950 0.035 0.861 0.463 0.429 0.454

表 5 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对42 d肉鸡血清生化指标的影响 Table 5 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on serum biochemical indices of broilers at 21 dayss

由表6可见，当饲粮CP水平降低，血清中T-SOD活性和MDA含量无显著差异(P>0.05)，但NC2处理42 d血清中GSH-Px活性与PC处理相比显著下降(P<0.05)；与PC处理相比，NC1和NC2处理21 d血清中GSH-Px活性有降低的趋势(P=0.092)。添加蛋白酶后对21 d血清中MDA含量和GSH-Px活性有显著影响(P<0.05)，300 mg/kg的蛋白酶处理21 d血清GSH-Px活性显著高于不添加蛋白酶的处理(P<0.05)，而MDA含量显著低于不添加蛋白酶处理(P<0.05)，蛋白酶水平对血清中T-SOD活性无显著影响(P>0.05)。

表 6

Table 6

表 6(Table 6)

表 6 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对肉鸡血清抗氧化功能的影响 Table 6 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on antioxidant function of broilers 处理Treatments 21 d 42 d 丙二醛 MDA/(nmol/mL) 总超氧化物歧化酶T-SOD/(U/mL) 谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px/(μmol/mL) 丙二醛 MDA (nmol/mL) 总超氧化物歧化酶T-SOD/(U/mL) 谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px/(μmol/mL) 正对照 PC T1 6.2±2.2 131.3±12.6 1 436.9±225.4 3.7±1.6 177.1±14.0 1 873.6±198.5 T2 4.8±0.6 1331.2±22.3 1 434.2±224.8 5.3±1.1 182.8±24.0 1 700.6±189.9 T3 3.4±0.5 136.1±6.5 1 516.6±185.9 4.5±1.1 191.8±14.2 1 984.7±464.8 负对照1 NC1 T4 4.9±1.7 135.6±16.2 1 177.8±123.8 4.0±1.1 156.7±34.9 1 664.3±303.8 T5 5.1±2.4 135.0±19.2 1 446.7±175.3 3.8±0.8 171.8±25.0 1 807.5±303.0 T6 3.9±1.2 136.3±17.9 1 435.7±44.4 4.5±1.3 179.1±24.8 1 758.3±363.7 负对照2 NC2 T7 4.1±0.8 124.9±34.0 1 269.8±98.8 4.2±1.7 158.0±34.8 1 470.8±283.6 T8 4.1±1.1 137.1±18.5 1 368.0±76.5 3.5±0.8 158.7±17.6 1 724.9±301.6 T9 3.9±0.9 139.4±27.0 1 409.7±108.4 4.3±1.0 173.0±14.2 1 418.2±159.4 主效应 Main effect 粗蛋白质水平 CP level PC 4.9 132.8 1 460.9 4.5 183.4 1 845.2b NC1 4.7 135.6 1 360.6 4.1 169.2 1 743.4ab NC2 4.0 133.4 1 346.0 3.9 161.0 1 553.0a 蛋白酶水平 Protease level/(mg/kg) 0 5.1b 130.0 1 309.4a 3.9 163.9 1 669.6 150 4.7ab 134.2 1 419.7ab 4.2 171.1 1 744.3 300 3.7a 137.5 1 452.3b 4.5 181.7 1 743.1 P值 P-value 粗蛋白质水平 CP level 0.282 0.943 0.092 0.491 0.056 0.016 蛋白酶水平 Protease level 0.047 0.695 0.023 0.503 0.142 0.748 粗蛋白质水平×蛋白酶水平CP level×protease level 0.283 0.937 0.452 0.189 0.965 0.229

表 6 不同粗蛋白质水平饲粮添加外源蛋白酶对肉鸡血清抗氧化功能的影响 Table 6 Effects of different crude protein levels diet supplemented with exogenous protease on antioxidant function of broilers

酶制剂已被广泛用于饲料加工行业和化工行业等。蛋白酶作为酶制剂的一种，其主要作用是提高饲粮CP的消化率并节约饲料成本。此外适宜的CP水平也能够节约生产成本，从而获得更好的生产效益。

Bregendahl等^[5]研究发现，饲喂高CP水平的饲粮能够显著提高肉鸡的体重和饲料转化效率，但CP水平的变化对采食量无显著影响。但刘少凯等^[6]研究发现，饲粮CP水平对13~18周龄略阳乌鸡公鸡和母鸡的体增重没有显著影响。Angel等^[7]发现，当饲粮CP水平由22.5%下降至20.5%时，肉鸡7~22日龄阶段的体增重和饲料转化率显著下降，但对采食量无显著影响。本试验研究发现，PC处理21 d的ABW和1~21 d的ADG显著高于NC1和NC2处理，NC1处理显著高于NC2处理，并且PC和NC1处理42 d的ABW和1~42 d的ADG显著高于NC2处理；此外PC处理1~21 d的F/G显著低于NC1和NC2处理，NC1处理显著低于NC2处理，PC处理1~42 d的F/G显著低于NC2处理。这与Bregendahl等^[5]和Angel等^[7]的结论一致，不同之处在于PC处理1~21 d的ADFI相对于NC2处理有显著提高，其原因可能是适当高的CP水平更有助于增加体内消化酶的分泌，并提高对饲料的消化利用，从而促进采食。

Angel等^[7]发现在20.5% CP饲粮中加入200、400和800 mg/kg的蛋白酶后体增重显著增加，F/G显著下降，而与饲粮CP水平为22.5%处理相比F/G无显著差异。Freitas等^[8]指出蛋白酶的补充对肉鸡体重没有影响，但是能够改善肉鸡的饲料转化率并与蛋白酶的补充量呈二次曲线关系。相反，游金明等^[9]指出饲粮中添加125 mg/kg的复合蛋白酶对肉鸡的采食量无显著影响，但可显著提高肉鸡后期及全期的日增重；肉鸡前期和后期的饲料转化效率未出现显著变化，但复合蛋白酶对肉鸡全期的饲料转化效率有改善的趋势。本试验发现，加入蛋白酶后，300 mg/kg处理1~21 d的F/G显著低于不加酶处理，1~42 d的F/G有降低的趋势，但加入蛋白酶后，对ADG、ABW和ADFI无显著影响，这与Freitas等^[8]的结论一致。这可能是由于肉鸡刚出生时体内蛋白酶的分泌不足，外源蛋白酶的加入有助于补充内源蛋白酶的不足或者刺激其分泌。

本试验结果表明，与PC+0 mg/kg处理对比，NC1+0 mg/kg处理肉鸡21 d的ABW和ADG显著降低，F/G显著增加，而NC1+150 mg/kg和NC1+300 mg/kg处理21 d的ABW和1~21 d的ADG、F/G与PC+0 mg/kg处理相比无显著差异。表明在PC处理饲粮CP水平降低1%后加入外源蛋白酶能够起到代偿作用。与PC+0 mg/kg处理对比，NC2+0 mg/kg、NC2+150 mg/kg和NC1+300 mg/kg处理21 d的ABW、ADG显著降低，F/G显著增加。表明在PC处理饲粮CP水平降低2%后加入外源蛋白酶的效果并不能达到PC+0 mg/kg处理水平。原因可能是在过低蛋白质饲粮中添加外源蛋白酶会降低体内蛋白酶等消化酶的分泌和活性，从而降低生产性能。

动物机体血清生化指标的变化是动物健康及代谢情况的直接反映。TP、ALB和GLB含量是机体蛋白质代谢和免疫功能的反映，Crea含量能够反映机体肾脏的健康情况，UA是机体氨基酸代谢的产物，ALT和AST则主要是参与机体的转氨基作用。刘少凯等^[6]发现高粗蛋白质水平的饲粮会使血清中的UA含量显著增加，但CP水平的变化对血清中TP、ALB、GLB含量以及AST和ALT活性无显著影响。袁超等^[10]研究表明，饲粮CP水平对育雏期绿壳蛋鸡血清UA、总胆固醇、甘油三酯、TP和ALB含量影响均不显著，但随着饲粮CP水平的升高，血清UA和ALB含量均有一定的上升趋势。史景松^[11]研究发现，饲粮CP水平对血清中ALB和UA含量的影响达到极显著水平，随饲粮CP水平的升高，ALB和UA的含量皆呈升高趋势。本试验研究发现，PC处理42 d肉鸡血清中ALB含量显著高于NC1和NC2处理；并且NC1处理GLB含量显著低于PC处理，NC1和NC2处理肉鸡42 d血清中TP含量相对于PC处理有降低的趋势。试验结果和刘少凯等^[6]、史景松^[11]的结论较为一致。原因可能是适当高蛋白质饲粮更有助于提高消化道内消化酶的分泌和活性，促进对蛋白质的消化，进而提高蛋白的代谢。

关于蛋白酶对肉鸡血清生化指标的影响方面的研究较少，本试验研究发现，蛋白酶水平和CP水平的互作对21 d血清TP和GLB含量有显著影响；并且添加300 mg/kg蛋白酶处理21 d肉鸡的血清中Crea含量显著低于添加150 mg/kg蛋白酶处理和不加酶处理，但其值均在正常范围内。其原因有待进一步研究。

在正常情况下，动物机体内会不断地产生自由基和内源性抗自由基的活性物质，并且两者处于动态平衡中。MDA是脂质过氧化物最重要的产物之一，在正常范围之内，其含量越低表明机体抗氧化功能越好。T-SOD和GSH-Px也是机体重要的抗氧化酶，能够清除机体内自由基或减少自由基的形成，在正常范围内其值越高表明机体的抗氧化功能越强。关于饲粮CP水平的变化对肉鸡血清抗氧化功能的报道比较少。本试验发现，PC处理42 d肉鸡血清中GSH-Px活性显著高于NC2处理。

王琤华等^[12]研究表明，在饲粮中添加蛋白酶能够显著降低血清中MDA的含量和增加血清中超氧化物歧化酶(SOD)和GSH-Px的活性。周梁^[13]研究表明，在肉鸡21日龄时，添加0.02%的外源蛋白酶后，肉鸡血清总抗氧化能力(T-AOC)及SOD活性均较高，而MDA含量最低，但未达到显著水平；在42日龄时，添加0.01%的外源蛋白酶处理的T-AOC较对照组有所提高。本试验研究发现，添加300 mg/kg蛋白酶处理中21 d肉鸡血清中MDA含量显著低于不加酶处理，而21 d肉鸡血清中GSH-Px活性显著高于不加酶处理，这与王琤华等^[12]的结论较为一致。可见，添加300 mg/kg蛋白酶更有利于增强肉鸡机体的抗氧化功能。

① 高CP水平的饲粮有助于提高肉鸡的抗氧化功能和生产性能，本试验以饲粮CP水平1~21 d为21%、22~42 d为19%时效果最好。

② 添加外源蛋白酶能够提高肉鸡的抗氧化功能，从而提高生产性能，在本试验中以300 mg/kg的添加水平效果更佳。

③ 饲粮CP水平降低1%后添加300 mg/kg蛋白酶对肉鸡生产性能、血清生化指标和抗氧化功能无影响，在基础饲粮中直接添加300 mg/kg蛋白酶其效果更佳。