种狐的体况与繁殖有着极密切的关系，过肥、过瘦都会降低繁殖力。配种前期的主要任务是平衡营养，调整狐的体况，并使其控制在中等或中上等水平。此期间种狐的营养需求高，要求饲料营养全面。含硫氨基酸为蓝狐的第一限制性氨基酸^[1]，在饲粮中添加适宜水平含硫氨基酸可改善氨基酸平衡状况，满足机体需要。而蛋氨酸为含硫氨基酸之一，在动物体内不仅能合成机体蛋白质，而且能转化为半胱氨酸和胱氨酸，满足动物营养需要^[2]。崔虎^[3]研究表明，在蛋白质水平为30%饲粮中，蛋氨酸水平为1.14%时，育成期蓝狐的生长性能、营养物质消化率和氮代谢比较理想。郭俊刚等^[4]研究表明，蛋白质水平为26%的饲粮中添加0.6%蛋氨酸，即饲粮中蛋氨酸水平为0.99%时，冬毛期蓝狐的生长性能、营养物质消化率和氮沉积较为理想，可在生产中推广应用。然而，关于蛋氨酸在蓝狐繁殖期上的应用研究尚存在诸多空白，因此，为进一步完善研究蓝狐饲粮中适宜蛋氨酸水平，在前期试验^[5]得出配种前期雌性蓝狐适宜蛋白质水平基础上，研究饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐营养物质消化率、氮代谢及血清生化指标的影响，筛选出配种前期雌性蓝狐饲粮中适宜蛋氨酸水平，以期达到蛋白质资源的高效利用，节约养殖户成本，提高养殖户经济效益。

选择健康初产雌性北极狐(8~9月龄)150只，随机分为5组，每组30个重复，每个重复1只蓝狐，均为单笼饲养。Ⅰ~Ⅴ组分别饲喂在基础饲粮中添加0、0.26%、0.52%、0.78%和1.04%蛋氨酸的试验饲粮。预试期7 d，正试期60 d。试验开始前，对蓝狐进行常规免疫接种，试验期间注射1次加德纳氏菌疫苗。每天09:00饲喂1次，自由饮水。试验从2013年12月1日至2014年1月30日在农业部长白山野生生物资源重点野外科学观测试验站进行。

以膨化玉米、鱼粉、豆粕等为主要原料，参照国内文献^{[5, 6]}报道，配制基础饲粮，其组成及营养水平见表1。

表 1

Table 1

表 1(Table 1)

表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 膨化玉米 Extruded corn 47.90 豆粕 Soybean meal 14.00 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 2.00 鱼粉 Fish meal 14.00 肉骨粉 Meat and bone meal 15.00 乳酪粉 Cheese meal 1.00 豆油 Soybean oil 4.50 赖氨酸 Lys 0.40 食盐 NaCl 0.20 预混料 Premix1) 1.00 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels2) 代谢能 ME/(MJ/kg) 16.31 粗蛋白质 CP 29.31 粗脂肪 EE 7.98 赖氨酸 Lys 2.09 蛋氨酸 Met 0.51 半胱氨酸 Cys 0.45 钙 Ca 2.01 总磷 TP 1.32     1)每千克预混料含有Contained the following per kg of premix: VA 1 000 000 IU，VD3 200 000 IU，VE 18 000 IU，VB1 600 mg，VB2 1 000 mg，VB6 1 000 mg，VB12 10 mg，VK3 200 mg，VC 50 000 mg，烟酸 nicotinic acid 4 000 mg，泛酸 pantothenic acid 4 000 mg，生物素 biotin 30 mg，叶酸 folic acid 300 mg，胆碱 choline 60 000 mg，Fe 10 000 mg，Cu 800 mg，Mn 2 000 mg，Zn 8 000 mg，I 50 mg，Se 20 mg，Co 50 mg。     2)粗蛋白质、粗脂肪、氨基酸、钙和总磷为测定值，其他为计算值。CP,EE,AA,Ca and TP were measured values,while the others were calculated values.

表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

在正试期开始30 d后，每组挑选8只体重相近的健康雌性蓝狐进行4 d消化代谢试验。采用全收粪法，消化代谢试验期间饲养管理与日常饲养管理相同。每天收集的粪便称重后按鲜重的5%加入10%硫酸溶液，并加少量甲苯防腐，保存于-20℃备用。每天收集的尿液中每100 mL加入10 mL的10%硫酸溶液，加4滴甲苯用于防腐，保存于-20℃备用。

在正试期开始40 d后，每组挑选10只健康雌性蓝狐进行腿部静脉采血5 mL，采血时间08:30至09:30，装于促凝管中，静置析出血清后3 500 r/min、4～8℃离心5 min，血清分装于1.5 mL的Eppendorf管中，于-80℃保存备用。

样品分析：105℃烘干法测定干物质含量；索氏浸提法测定粗脂肪含量，采用索氏脂肪提取器，主要试剂为无水乙醚；凯氏定氮法测定粗蛋白质含量，采用Kjeltec8400全自动凯氏定氮仪。利用Hitachi日立L-8900全自动专用氨基酸分析仪分析氨基酸含量。待血清样品室温解冻后，采用威图-E全自动生化分析仪测定血清生化指标。尿素氮(UN)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)测定所用试剂全部购自中生北控有限公司，球蛋白(GLOB)由总蛋白和白蛋白差值计算获得。

干物质消化率(%)＝[(干物质食入量-
干物质排泄量)/干物质食入量]×100；

粗蛋白质消化率(%)＝[(粗蛋白质食入量-
粗蛋白质排泄量)/粗蛋白质食入量]×100；

粗脂肪消化率(%)＝[(粗脂肪食入量-
粗脂肪排泄量)/粗脂肪食入量]×100；

氨基酸表观消化率(%)＝[(氨基酸食入量-
氨基酸排泄量)/氨基酸食入量]×100；

氮沉积(g/d)＝食入氮-粪氮-尿氮。

用统计软件SAS 9.1对数据进行分析，表中结果以平均值±标准差表示，采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行差异显著性检验，并对差异显著者进行Duncan氏法多重比较，检验差异显著性，其中P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著，P>0.05为差异不显著。

由表2可以看出，干物质采食量和干物质排出量各组间差异不显著(P>0.05)，但随着饲粮蛋氨酸水平的提高，干物质排出量有相对降低的趋势。干物质消化率和粗脂肪消化率随着饲粮蛋氨酸水平的提高，有相对提高的趋势(P>0.05)。Ⅲ组粗蛋白质消化率显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。

表 2

Table 2

表 2(Table 2)

表 2 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐营养物质消化率的影响 Table 2 Effects of dietary Met levels on nutrient digestibility of female blue foxes in prepare breeding period 项目 Items 组别 Groups Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 干物质采食量 DM intake/(g/d) 156.56±1.13 155.71±0.94 155.89±0.48 158.08±1.09 155.05±1.06 干物质排出量 DM output/(g/d) 57.20±3.04 56.22±1.60 52.18±6.64 52.05±4.82 52.75±4.29 干物质消化率 DM digestibility/% 63.58±1.75 63.89±1.01 66.98±4.30 65.68±3.12 65.99±2.70 粗蛋白质消化率 CP digestibility/% 62.88±2.03b 62.65±3.01b 65.11±4.98a 64.16±3.95ab 64.68±2.52ab 粗脂肪消化率 EE digestibility/% 90.43±2.38 91.46±1.19 91.97±2.58 91.56±2.92 91.67±2.68     同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。     In the same row,values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05),and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01),while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表 2 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐营养物质消化率的影响 Table 2 Effects of dietary Met levels on nutrient digestibility of female blue foxes in prepare breeding period

由表3可以看出，各组雌性蓝狐食入氮含量差异不显著(P>0.05)，Ⅴ组粪氮含量显著低于Ⅱ组(P<0.05)。Ⅲ组和Ⅳ组尿氮含量显著低于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。Ⅳ组氮沉积量极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.01)，Ⅲ组和Ⅴ组氮沉积含量显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。

表 3

Table 3

表 3(Table 3)

表 3 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐氮代谢的影响 Table 3 Effects of dietary Met levels on nitrogen metabolism of female blue foxes in prepare breeding period g/d 项目 Items 组别 Groups Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 食入氮 Nitrogen intake 7.47±0.25 7.53±0.74 7.44±0.52 7.55±0.45 7.40±0.85 粪氮 Fecal nitrogen 2.72±0.15ab 2.82±0.23a 2.67±0.29ab 2.64±0.37ab 2.48±0.18b 尿氮 Urine nitrogen 4.53±0.20a 4.40±0.51a 4.08±0.31b 4.07±0.33b 4.28±0.52ab 氮沉积 Nitrogen deposition 0.22±0.22Bc 0.31±0.61Bc 0.69±0.39ABab 0.84±0.44Aa 0.64±0.52ABab

表 3 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐氮代谢的影响 Table 3 Effects of dietary Met levels on nitrogen metabolism of female blue foxes in prepare breeding period

由表4可以看出，Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组蛋氨酸表观消化率显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)，Ⅳ组和Ⅴ组苏氨酸表观消化率显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P< 0.05)，Ⅰ组苏氨酸、甘氨酸、亮氨酸、缬氨酸表观 消化率显著低于Ⅳ组和Ⅴ组(P<0.05)，Ⅰ组和Ⅱ组半胱氨酸表观消化率极显著低于Ⅳ组和Ⅴ组(P<0.01)，Ⅴ组精氨酸表观消化率显著高于Ⅰ组(P<0.05)，Ⅰ组谷氨酸表观消化率极显著低于Ⅳ组和Ⅴ组(P<0.01)。

表 4

Table 4

表 4(Table 4)

表 4 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐氨基酸表观消化率的影响 Table 4 Effects of dietary Met levels on amino acid apparent digestibility of female blue foxes in prepare breeding period % 项目 Items 组别 Groups Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 补充的氨基酸 Supplement AA 蛋氨酸 Met 66.25±1.47a 71.83±3.28a 78.85±1.57b 84.60±2.30bc 89.16±1.11c 与Met代谢有关的氨基酸 AA associated with Met metabolism 苏氨酸 Thr 71.25±3.14b 71.82±2.68b 73.32±3.12ab 76.90±3.82a 75.84±3.24a 甘氨酸 Gly 64.83±3.17Bc 66.99±5.34ABbc 68.77±4.23ABabc 71.07±4.45ABab 73.17±2.73ABa 丝氨酸 Ser 68.11±2.63 68.87±3.92 68.03±4.28 70.84±5.01 70.39±3.57 半胱氨酸 Cys 62.27±6.70Bb 63.95±3.41Bb 64.82±5.71ABb 71.74±4.67Aa 72.06±3.43Aa 参与尿循环的氨基酸 Urea cycle AA 精氨酸 Arg 80.47±2.31b 82.21±2.79ab 82.01±2.71ab 82.89±2.72ab 83.71±2.13a 支链氨基酸 Branched-chain AA 异亮氨酸 Ile 62.76±2.08 62.52±4.34 66.47±2.86 70.46±4.74 70.97±3.03 亮氨酸 Leu 72.35±1.87b 75.36±3.28a 75.59±2.65a 77.69±3.85a 78.49±2.40a 缬氨酸 Val 63.38±2.15b 63.35±4.29b 66.40±3.29b 70.69±4.80a 71.48±2.89a 其他的必需氨基酸 Remaining EAA 赖氨酸 Lys 76.06±0.77 76.47±3.81 77.47±2.28 77.86±2.82 77.11±2.15 苯丙氨酸 Phe 69.36±2.14 73.63±3.77 72.04±2.72 74.85±4.05 75.73±2.65 组氨酸 His 81.25±1.86 80.43±1.89 81.54±1.79 82.87±2.87 83.03±2.17 酪氨酸 Tyr 77.12±2.50 75.68±2.54 77.51±2.51 79.09±3.20 78.25±2.60 其他的非必需氨基酸 Remaining NEAA 谷氨酸 Glu 71.61±2.20Bb 75.63±3.35ABa 75.33±2.72ABa 76.68±3.74Aa 78.18±2.28Aa

表 4 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐氨基酸表观消化率的影响 Table 4 Effects of dietary Met levels on amino acid apparent digestibility of female blue foxes in prepare breeding period

由表5可以看出，Ⅲ组和Ⅳ组丙氨酸氨基转移酶活性显著高于Ⅰ组(P<0.05)，而天门冬酸氨基转移酶活性各组间差异不显著(P>0.05)。白蛋白和球蛋白含量随饲粮蛋氨酸水平的提高，有先升高后降低的趋势(P>0.05)。Ⅲ组总蛋白含量显著高于Ⅰ组(P<0.05)，尿素氮含量各组间差异不显著(P>0.05)。

表 5

Table 5

表 5(Table 5)

表 5 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐血清生化指标的影响 Table 5 Effects of dietary Met levels on serum biochemical parameters of female blue foxes n prepare breeding period 项目 Items 组别 Groups Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 丙氨酸氨基转移酶 ALT/(U/L) 111.17±6.99b 118.75±10.87ab 140.96±7.79a 134.57±27.05a 120.57±12.55ab 天门冬酸氨基转移酶 AST/(U/L) 122.83±3.69 132.69±34.70 134.34±11.77 133.88±9.39 128.40±8.35 白蛋白 ALB/(g/L) 41.95±1.95 42.09±3.07 43.12±1.96 43.99±3.72 41.89±3.85 球蛋白 GLOB/(g/L) 24.97±4.73 26.56±2.09 27.52±3.46 26.14±4.06 28.20±3.71 总蛋白 TP/(g/L) 66.93±4.71b 68.65±3.56ab 74.13±2.80a 70.64±5.41ab 70.08±5.78ab 尿素氮 UN/(mmol/L) 93.56±2.92 91.46±1.19 90.43±2.38 91.57±2.58 92.67±2.68

表 5 饲粮蛋氨酸水平对配种前期雌性蓝狐血清生化指标的影响 Table 5 Effects of dietary Met levels on serum biochemical parameters of female blue foxes n prepare breeding period

配种前期的主要任务是平衡营养，调整雌性蓝狐的体况，并使其控制在中等或中上等水平。在整个配种前期限制饲喂，因此雌性蓝狐各组干物质采食量差异不显著，随着试验组雌性蓝狐饲粮中蛋氨酸添加水平的提高，营养物质消化率呈现先增高后降低的趋势，干物质排出量呈现降低的趋势，在雌性蓝狐饲粮中添加0.52%的蛋氨酸干物质消化率、粗蛋白质消化率和粗脂肪消化率在各组中最高。蛋氨酸为蓝狐的第一限制性氨基酸^[7]，如果蛋氨酸缺乏就会导致体内蛋白质合成受阻，造成机体损害，添加适宜水平蛋氨酸可改善氨基酸平衡状况，满足其对含硫氨基酸的需要。Dahlman^[8]研究表明，饲粮中添加蛋氨酸可以提高粗脂肪的消化率，促进蓝狐生长，提高饲料转化 率。本试验结果表明，饲粮中添加蛋氨酸可以提 高粗脂肪消化率，但效果并不是十分明显，可能是配种前期为控制雌性蓝狐体况限饲的原因，当饲粮采食水平较低时，食糜的排空速度也较慢，有利于营养物质被充分消化吸收，因此消化率会相应升高。

本试验结果可知，各组蓝狐的干物质采食量和蛋白质水平之间差异不显著，蓝狐的食入氮含量与干物质采食量和蛋白质水平之间存在很大的相关性，因而各组蓝狐的食入氮含量不存在显著差异。杨春花等^[9]研究表明，饲粮氨基酸平衡可减少尿氮排出，提高氮的利用率。董志岩等^[10]研究表明，饲粮蛋白质水平一定的情况下，提高限制性氨基酸水平，尿氮和粪氮排出量均显著降低。本试验研究结果表明，随着饲粮蛋氨酸水平的提高，粪氮和尿氮排出量分别具有降低的趋势，而氮沉积具有相对增加的趋势。蛋氨酸是蓝狐的限制性氨基酸，提高饲粮中蛋氨酸水平，有利于提高蓝狐的营养物质消化率，尤其是蛋白质消化率，这由本试验结果可得到证实。饲粮中添加蛋氨酸可以提高氮沉积，提高蓝狐对饲粮中氮的利用率，这与张铁涛等^[11]的研究结果基本一致。

在动物营养中，决定饲料氨基酸利用率的首要指标是消化率，它决定于饲料中氨基酸在消化道内的消化、吸收状况。本试验结果表明，随着蛋氨酸水平的提高，氨基酸表观消化率相应提高。蛋氨酸作为蛋白质的结构组成部分和弥补氨基酸平衡的营养性添加剂，提供氨基酸转换过程中所需的活性甲基，饲粮中添加适宜水平蛋氨酸能提高蛋白质和其他氨基酸消化利用率。Dilger等^[12]研究表明，某一氨基酸添加量的差别会影响其他氨基酸的消化率，所以氨基酸表观消化率随饲粮氨基酸摄入量的增加而增加^[13]。Dahlman等^[14]研究表明，饲粮中添加DL-蛋氨酸或L-蛋氨酸能够提高蓝狐的氨基酸表观消化率，补充外源性的氨基酸比调节饲粮中氨基酸比例效果更加明显。蛋氨酸是毛皮动物第一限制性氨基酸，含硫氨基酸需要量远远大于其他家畜。张铁涛等^[11]研究在育成期蓝狐饲粮中添加蛋氨酸，可以提高饲粮中含硫氨基酸的表观消化率，本试验结果与其结果基本一致。在动物饲粮生产中添加限制性合成氨基酸，能够促进饲粮中氨基酸平衡，更符合理想蛋白质模型，因此，提高了饲粮中蛋白质和氨基酸利用率。粗蛋白质和各种氨基酸消化率是根据饲料和粪便中粗蛋白质含量和干物质消化率计算的，由于受各种氨基酸之间的协同和拮抗关系的影响，还受到胃肠道微生物及其代谢产物，消化道分泌物和经消化道排泄的代谢产物，消化道黏膜脱落物的影响。因此，本试验中各种氨基酸表观消化率与粗蛋白质消化率变化规律也不完全一致。

Gugolek等^[15]研究表明，饲粮中添加蛋氨酸可提高蓝狐血红蛋白水平，可能对造血具有积极影响，有利于改善蓝狐健康状况，并且指出蓝狐对蛋氨酸需要量近年来呈现增加的趋势。天门冬酸氨基转移酶和丙氨酸氨基转移酶是蛋白质代谢过程中2种重要的酶，在蛋白质合成和分解中发挥作用，其活性能够直接反映机体蛋白质合成代谢的状况。Ⅲ组丙氨酸氨基转移酶活性最高，说明饲粮中添加适宜水平蛋氨酸有利于体内蛋白质和氨基酸相互转化。血清总蛋白是机体蛋白质的一个来源，用于修补组织和提供能量，在一定程度上也代表了饲粮蛋白质水平以及动物对蛋白质的消化吸收程度。本试验研究结果表明，饲粮中添加蛋氨酸可以显著提高血清中总蛋白含量，可以提高白蛋白和球蛋白含量。周勤飞等^[16]研究表明，母兔饲喂不同水平蛋氨酸饲粮，球蛋白含量呈上升趋势，白蛋白含量先上升后下降，说明饲粮中适宜的蛋氨酸水平能促进体内蛋白质营养利用，本试验结果与其基本一致。血清尿素含量氮是衡量动物体内蛋白质代谢和氨基酸平衡的一个重要指标^[11]。血清尿素氮含量过高会导致尿氮的增加，从而降低了机体对氮的利用率。通常较低的血清尿素氮含量表明氨基酸平衡较好，机体蛋白质合成率较高。本试验结果血清尿素氮含量各组间虽差异不显著，但随着饲粮蛋氨酸水平的提高，有相对降低的趋势。

在蛋白质水平为29.31%饲粮中添加0.52%蛋氨酸，即饲粮中蛋氨酸总水平为1.03%时，配种前期雌性蓝狐的营养物质消化率和血清生化指标较为理想，并且满足配种前期雌性蓝狐的蛋氨酸需要量。