2. 水产高效健康生产湖南省协同创新中心, 常德 415000;
3. 盐城工学院海洋与生物工程学院, 盐城 224051;
4. 淮安新希望饲料有限公司, 淮安 223005;
5. 农业部淡水渔业和种质资源利用重点实验室, 中国水产科学研究院淡水 渔业研究中心, 无锡 214081
2. Collaborative Innovation Center for Efficient and Health Production of Fisheries in Hunan Province, Changde 415000, China;
3. Marine and Biological Engineering College, Yancheng Institute of Technology, Yancheng 224051, China;
4. Huaian New Hope Feed Co., Ltd., Huaian 223005, China;
5. Key Laboratory of Freshwater Fisheries and Germplasm Resources Utilization, Ministry of Agriculture, Freshwater Fisheries Research Center, Chinese Academy of Fishery Sciences, Wuxi 214081, China
目前，鱼粉价格昂贵，已成为限制水产养殖业持续发展的关键因素[1, 2]。由于豆粕中抗营养因子的存在以及蛋氨酸的缺乏，饲料过量添加豆粕会影响水产动物的生长，降低饲料利用率[3]，破坏肠道形态[4]，降低消化酶活力及机体免疫力[5]。与豆粕相比，膨化豆粕经过了膨化工艺，其内部的抗营养因子部分被破坏，对水产动物的负面影响降低[6]。
黄鳝属亚热带鱼类，主要分布于亚洲东部及 南部，尤其在我国分布较广，主要栖息于湖泊、水 库、池塘、沟渠、稻田等淡水水域中，具有较高的营养和药用价值，在国内外市场供不应求，是重要的出口创汇产品，也是我国目前大力推广养殖的重要名特优水产品之一。然而，有关黄鳝营养学研究较少，目前国内外研究报道主要见于蛋能比[7]、胆碱[8]、维生素E[9]、肉骨粉替代鱼粉[10]等方面的研究，本试验通过研究饲料中不同比例膨化豆粕替代鱼粉对黄鳝生长性能、体成分、肠道消化酶活力及血清生化指标的影响，探索膨化豆粕的最佳替代比例，为降低黄鳝饲料成本提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 试验饲料参照黄鳝商品饲料配方，配制一种以鱼粉为蛋白质源，鱼油为脂肪源的基础饲料，用膨化豆粕(益海嘉里集团产品)分别替代基础饲料中0、12%、24%、36%和48%的鱼粉，配制成膨化豆粕含量分别为0(对照)、9.3%、18.6%、28.0%、37.2%的5种等氮等脂的试验饲料，试验饲料组成及营养水平见表1，试验饲料氨基酸组成见表2。饲料原料粉碎过80目筛，准确称取各原料后混合均匀，在室温条件下风干至水分含量低于10%，置于-20 ℃冰柜中保存备用，投喂前加20%水调成面团状使用。
 | 表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) |
| 表2 试验饲料氨基酸组成 Table 2 Amino acid composition of experimental diets |
试验用黄鳝为规格整齐的野生黄鳝，在湖南省常德市某黄鳝养殖场进行池塘网箱养殖，黄鳝入箱后2 d内不投饵料，驯化时首先少量投喂比例为1 ∶ 1的蚯蚓和鲜鱼浆，依照摄食情况逐渐地增加投喂量和鲜鱼浆的投喂比例，直到黄鳝能完全摄食鲜鱼浆后，开始添加粉状试验基础饲料(鲜鱼浆 ∶ 试验饲料=4 ∶ 1)，依照摄食情况逐渐增加试验饲料的投喂比例，直到黄鳝能完全摄食粉状试验饲料，整个驯化过程持续20 d，饥饿24 h后挑选规格均匀、健康的黄鳝进行分组，共5个组，每个组设3个重复，共15个网箱(1.5 m×2.0 m×1.0 m)，每个网箱放养100尾黄鳝，以黄鳝初始体重的3%～5%投喂，日投喂1次(17:00—18:00)，根据摄食情况，投喂量每周调整1次，记录每个网箱黄鳝的采食量，养殖试验持续90 d。试验期间，水温保持在(28.0±3.5) ℃，溶氧浓度(6.0±0.5) mg/L，氨氮浓度低于0.5 mg/L。
1.3 样品收集与指标测定 1.3.1 生长性能测定养殖试验结束后，黄鳝禁食24 h后进行称重和采样。试验起始和结束时分别对各网箱中黄鳝进行计数和称重，计算成活率(SR)、增重率(WGR)和饲料系数(FCR)。
WGR=100×(Wt-W0)/W0；
FCR=F/(Wt-W0)。
式中：N0为初始尾数；Nt为终末尾数；W0为终末体重(g)；Wt为初始体重(g)；F为饲料投喂总量(g)。
养殖试验结束后，每网箱随机取5尾黄鳝记录体长和体重，然后解剖，分离内脏和肝脏，计算肝体比(HSI、脏体比(VSI)和肥满度(CF)。
VSI=100×Wv/Wt；
CF=100×Wt/L3t。
式中：Wh为肝脏重(g)；Wt为体重(g)；Wv为内脏重(g)；Lt为体长(cm)。
1.3.2 饲料及全鱼营养成分分析每个网箱随机取3尾黄鳝，置于-20 ℃保存，用于全鱼水分、粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量的测定。饲料及全鱼常规营养成分测定参照AOAC(1995)[11]的方法，其中水分含量测定采用105 ℃烘箱干燥恒重法，粗蛋白质含量的测定采用凯氏定氮法，粗脂肪含量的测定采用索氏抽提法，粗灰分含量的测定采用550 ℃灼烧法。
1.3.3 饲料及肌肉中氨基酸组成分析氨基酸组成的测定参照GB/T 5009.124—2003《食品中氨基酸的测定》中方法并在此基础上作适当的修改，具体如下：将待测样品干燥粉碎后，称取粉碎样品100 mg放入水解管，加入6 mol/L盐酸5 mL，封住水解管管口，在110 ℃恒温下干燥水解22 h，取出冷却，打开水解管，将水溶液过滤，定容至100 mL，取1 mL稀释至10 mL，取样上机分析(氨基酸自动分析仪A300，德国)。由饲料氨基酸分析结果可计算出饲料中鲜味氨基酸(delicious amino acid,DAA)、必需氨基酸(EAA)、总氨基酸(TAA)含量及EAA/TAA和必需氨基酸指数(essential amino acid index,EAAI)。
式中：aa为饲料中某必需氨基酸占必需氨基酸总量的百分数；AA为黄鳝肌肉[12]中该必需氨基酸占必需氨基酸总量的百分数；n为比较的必需氨基酸个数。
1.3.4 肠道消化酶活性测定养殖试验结束后，每个网箱随机取5尾黄鳝，解剖取其整个肠道，去除肠道粪便及附着物，用冰双蒸水清洗肠道，滤纸吸干，称重，捣碎后移入匀浆器内冰水浴匀浆，在4 ℃下3 000 r/min离心15 min，取上清液备用，于24 h内分析完毕。肠道胰蛋白酶(trypsase)、淀粉酶(amylase)和脂肪酶(lipase)活力均采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。
1.3.5 血清生化指标测定养殖试验结束后黄鳝禁食1 d，每个网箱随机取8尾黄鳝，用1 mL注射器于尾静脉处取血，将血液混合并置于无菌离心管中，4 ℃静置过夜，3 500 r/min离心15 min，取上层血清置于-80 ℃冰箱保存备用。血清总胆固醇(TC)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(UN)、总蛋白(TP)含量及谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活力均采用南京建成生物工程研究所试剂盒测定。
1.4 数据处理数据用“平均值±标准差”表示，采用SPSS 12.0版统计软件进行单因素方差分析，若组间差异显著(P＜0.05)，则作Duncan氏多重比较分析。
2 结果与分析 2.1 生长性能由表3可知，膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝的SR无显著影响(P>0.05)。与对照组相比，当饲料中膨化豆粕含量大于18.6%时，黄鳝的WGR显著下降(P＜0.05)，FCR显著升高(P＜0.05)。各组间黄鳝的HSI和VSI无显著差异(P>0.05)，但当饲料中膨化豆粕含量达到37.2%时，CF较其他组显著下降(P＜0.05)。
| 表3 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝生长性能的影响 Table 3 Effects of fish meal replacement by different proportions of extruded soybean meal on growth performance of rice field eel (Monopterus albus) |
由表4可知，膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝机体水分、粗灰分和粗蛋白质含量没有显著影响(P>0.05)。与对照组相比，当饲料中膨化豆粕含量大于18.6%时，黄鳝机体粗脂肪含量显著下降(P＜0.05)。由表5可知，与对照组相比，当膨化豆粕含量大于18.6%时，黄鳝肌肉中EAA含量和EAA/TAA显著降低(P＜0.05)，而肌肉中DEE及大部分氨基酸含量在各组间无显著差异(P>0.05)。
| 表4 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝体成分的影响 Table 4 Effects of fish meal replacement by different proportions of extruded soybean meal on body composition of rice field eel (Monopterus albus) |
| 表5 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝肌肉氨基酸组成的影响(鲜重基础) Table 5 Effects of fish meal replacement by different proportions of extruded soybean meal on amino acid composition in muscle of rice filed eel (Monopterus albus) (fresh weight basis) |
由表6可知，随着饲料中膨化豆粕含量的升高，肠道胰蛋白酶活力呈先上升后下降的趋势，当 饲料中膨化豆粕含量为18.6%时肠道胰蛋白酶活 力显著高于对照组(P＜0.05)；与对照组相比，当饲料中膨化豆粕含量大于18.6%时肠道脂肪酶和淀粉酶活力均显著降低(P＜0.05)。
| 表6 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝肠道消化酶活力的影响 Table 6 Effects of fish meal replacement by different proportions of extruded soybean meal on digestive enzyme activities in intestine of rice field eel (Monopterus albus) |
由表7可知，随着饲料中膨化豆粕含量的升高，血清TC含量呈下降的趋势，但各组差异不显著(P>0.05)。当饲料中膨化豆粕含量大于18.6%时，血清GLU含量显著低于对照组(P＜0.05)。当饲料中膨化豆粕含量达到37.2%时，血清UN含量 显著高于对照组(P＜0.05)。膨化豆粕替代不同比例鱼粉后血清GOT活力均显著下降(P＜0.05)，而GPT活力呈不同程度的上升，且饲料中膨化豆粕含量为9.3%和18.6%时与对照组差异显著(P＜0.05)。
| 表7 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝血清生化指标的影响 Table 7 Effects of fish meal replacement by different proportions of extruded soybean meal on serum biochemical indexes of rice field eel (Monopterus albus) |
本试验结果表明，以膨化豆粕替代不同比例的鱼粉，当饲料中膨化豆粕含量超过18.6%时会降低黄鳝的生长和饲料利用率，其替代比例小于齐口裂腹鱼(Schizothorax prenati)[13]、金头鲷(Sparus aurata L.)[14]，与虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[15]、篮子鱼(Siganus guttatus)[16]、大黄鱼(Pseudosciaena crocea R.)[17]相似，大于金枪鱼(Thunnus orientalis)[18]。饲料中高含量的膨化豆粕影响黄鳝生长可能与以下几方面有关：1)黄鳝主要通过嗅觉来觅食，对饲料中带特定气味的诱食剂较敏感。杨代勤等[19]报道，由甘氨酸+丙氨酸组成的复合氨基酸对黄鳝有明显的促摄食效果。本试验中，对试验饲料的氨基酸组成分析表明，随着膨化豆粕含量的升高，饲料中甘氨酸和丙氨酸含量下降，且豆粕中的豆腥味会影响饲料风味。养殖试验期间观察到黄鳝摄食高膨化豆粕饲料时摄食时间延长。2)膨化豆粕虽经过高温膨化后消除了一些热敏性抗营养因子，如胰蛋白酶抑制因子和大豆抗原物质，但仍存在非热敏性抗营养因子，如非淀粉多糖、植酸等，非淀粉多糖影响饲料中营养物质消化吸收[20]，植酸能与Zn2+、Ca2+、Cu2+及Fe2+等金属离子螯合形成稳定的不溶性络合物，降低鱼类对这些矿物质元素的利用，并且植酸对淀粉酶和脂肪酶的活力有抑制作用[21]，本试验结果证实饲料中高含量膨化豆粕会降低黄鳝肠道淀粉酶和脂肪酶活力。3)EAAI可用来评价配合饲料的营养价值[12]。本试验结果表明，EAAI随饲料中膨化豆粕含量的升高而下降，说明膨化豆粕替代鱼粉后降低了黄鳝配合饲料的营养价值，可能与膨化豆粕中EAA比例不平衡有关，尤其是蛋氨酸的缺乏，在本试验中，28.0%和37.2%膨化豆粕饲料组的蛋氨酸含量比对照组分别降低了44.48%和57.37%。有研究发现，在高植物蛋白质饲料中添加外源晶体氨基酸可提高鱼类生长[22, 23]，而本实验室前期在黄鳝的研究中并未发现此现象[24]。
本研究发现，膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝HSI和VSI无显著影响，与在大埃及胡子鲶(Clarias fuscus)[25]和翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)[26]上的研究结果相似，但饲料中高含量膨化豆粕使黄鳝CF降低，在大菱鲆(Scophthalmus maximus)的研究中也得到相同的结果[27]，可能与高含量膨化豆粕会影响黄鳝的生理状态和营养状况有关。
3.2 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝体成分及肌肉氨基酸组成的影响本试验结果表明，膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝机体水分、粗灰分和粗蛋白质含量无显著影响，与在虹鳟[28]和大西洋鲑(Salmo salar)[29]上的研究结果一致，但高含量的膨化豆粕降低了鱼体粗脂肪含量，与在中华鳖(Trionyx Sinensis)[30]及金箔鱼(Barbodes altus)[31]上的结果一致，可能与膨化豆粕中非淀粉多糖降低试验鱼对脂肪的消化，进而降低脂肪在鱼体内沉积有关[32]，本试验结果也表明饲料中高含量膨化豆粕降低了黄鳝肠道脂肪酶活力。EAA/TAA可以评价蛋白质质量的好坏[33]，本研究结果表明，当饲料中膨化豆粕含量高于18.6%时，黄鳝肌肉中EAA/TAA显著下降，表明饲料中添加高含量膨化豆粕会影响肌肉营养价值。而各组黄鳝肌肉DAA含量基本一致，表明饲料中高含量膨化豆粕不会影响黄鳝肌肉的鲜味。
3.3 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝肠道消化酶活力的影响肠道消化酶是一类由消化腺分泌的水解酶，能将大分子的蛋白质、脂肪和淀粉分别水解为小分子的氨基酸、甘油三酯和葡萄糖，其活力在一定程度上可反映鱼类对饲料营养物质的消化和吸收能力。本试验结果表明，当饲料中膨化豆粕含量低于18.6%时，对黄鳝生长没有不良影响，而肠道胰蛋白酶活力逐渐升高，可能原因是水产动物对植物蛋白质的消化利用率低于鱼粉，机体则通过增强胰蛋白酶的合成与分泌来提高饲料的利用率。当饲料中膨化豆粕含量大于18.6%时，黄鳝的增重率及胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力均下降，与罗非鱼(Tilapia)[34]、鲈鱼(Lateolabrax japonicus)[35]及胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)[36]的研究结果相似，这可能与豆粕中非热敏性抗营养因子如植酸、皂苷及异黄酮的存在降低消化酶活力有关[37]。
3.4 膨化豆粕替代不同比例鱼粉对黄鳝血清生化指标的影响鱼类血液生理生化指标能够反映动物机体的健康状况和生理状况。胆固醇是皮质类激素和性激素的前体，对机体糖、蛋白质和脂肪代谢有着重要的作用[38]，由于植物蛋白质中类雌激素异黄酮的存在，使得植物蛋白质替代鱼粉可降低血液中胆固醇的含量[39, 40]，本试验中也观察到血清TC含量随饲料中膨化豆粕含量的升高而下降的趋势，而各组间差异不显著，可能与养殖周期短有关。血糖是体内细胞代谢活动所需能量的直接来源，本试验中，当饲料中膨化豆粕含量大于18.6%时，血清GLU含量显著降低，与在牙鲆[41]上的研究结果相似，说明饲料中过量添加膨化豆粕会影响黄鳝的能量代谢。血清GOT和GPT活力与肝功能相关，血清GPT活力上升可能是与膨化豆粕含量升高引起肝脏受到一定的损伤有关[42]，也可能与生长有关，在一定范围内，快速生长也可能使转氨酶活力升高；血清GOT活力下降可能是因为饲料中膨化豆粕含量升高使蛋白质合成下降，造成生长速度下降所致。
4 结 论在本试验条件下，以膨化豆粕替代鱼粉，当饲料中膨化豆粕含量低于18.6%时，黄鳝生长、饲料效率、体成分、肠道消化酶活力及肌肉营养价值不会受到影响，因此，黄鳝饲料中可添加18.6%的膨化豆粕，从而降低黄鳝养殖成本，提高经济效益。
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