蛋白质是鱼类维持生命和生长所必需的营养成分，不仅参与体内组织的构成，而且是某些代谢活性物质(激素、酶、免疫抗体)的主要成分，同时也是饲料成本中比例最大的部分。饲料中蛋白质水平过低则不能满足鱼类生长需要，过高则可能造成蛋白质浪费和饲料成本增加。目前，国内外已经开展了大黄鱼(Larimichthys crocea)^{[1, 2]}、牙鲆(Paralichthys olivaceus)^[3]和黑鲷(Sparus macrocephalus)^[4]等多种鱼类最适蛋白质需求量的研究。对于黄姑鱼的研究，当前主要集中在繁育^{[5, 6, 7]}、育种^{[8, 9]}和形态^[10]等方面，对营养需求的研究报道较少，关于黄姑鱼幼鱼最适蛋白质需求量的研究尚未见报道。本试验考察了饲料中不同蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼生长性能、饲料利用率、体组成、形体指标和消化酶活性的影响，以期为黄姑鱼幼鱼人工饲料的研发提供参考依据。

以鱼粉、豆粕和小麦蛋白粉为蛋白质源，鱼油和大豆卵磷脂为脂肪源，配制6种不同蛋白质水平(35%、40%、45%、50%、55%和60%)的等能等脂饲料，蛋白质水平实测值分别为37.52%、41.80%、46.52%、49.84%、56.80%和61.48%，分别记为P1、P2、P3、P4、P5和P6。试验饲料组成及营养水平见表1。所有原料粉碎后过60目筛，按配方比例称重后搅拌均匀，各组分采用逐级扩大法混合均匀后，放置于搅拌机中，边搅拌边加入适量的水分，搅拌均匀后用F-26型双螺杆挤条机挤压成2和4 mm 2种粒径的配合饲料，风干至水分含量10%左右，用封口袋分装后于-20 ℃冰箱保存备用。

表 1 (Table 1)

表 1 试验饲料组成及营养水平 Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets % 项目 Items 组别 Groups P1 P2 P3 P4 P5 P6 原料(风干基础) Ingredients (air-dry basis) 鱼粉 Fish meal 25.00 31.00 37.00 43.00 49.00 54.00 豆粕 Soybean meal 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 20.00 小麦蛋白粉 Wheat gluten meal 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 糊精 Dextrin 27.60 22.37 17.03 11.80 6.57 1.35 鱼油 Fish oil 6.80 6.10 5.50 4.80 4.10 3.50 大豆卵磷脂 Soybean lecithin 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 维生素预混料 Vitamin premix1) 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 矿物质预混料 Mineral premix2) 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 氯化胆碱 Choline chloride 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 0.30 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 乙氧基喹啉 Ethoxyquin 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05 纤维素 Cellulose 9.45 7.38 5.32 3.25 1.18 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平(干物质基础) Nutrient levels (DM basis) 粗蛋白质 Crude protein 37.52 41.80 46.52 49.84 56.80 61.48 粗脂肪 Crude lipid 9.80 10.27 10.70 10.59 10.80 11.46 粗灰分 Ash 8.11 8.19 8.11 8.15 8.16 8.16  1)每千克维生素预混料含有Contains the following per kg of vitamin premix：VA 32 mg，VD3 5 mg，VK 5.1 mg，VE 120 mg，VB1 25 mg，VB2 36.7 mg，VB6 20 mg，VB12 0.1 mg，VB5 60 mg，VB3 200 mg，VB9 20 mg，生物素 biotin 1.2 mg，肌醇 inositol 792 mg，VC 1 000 mg。  2)每千克矿物质预混料含有Contains the following per kg of mineral premix：MgSO4·7H2O 1 826 mg，FeSO4·7H2O 119 mg，ZnSO4·7H2O 76 mg，MnSO4·H2O 44 mg，CoCl2·6H2O 2 mg，KI 0.8 mg，CuSO4·5H2O 10 mg，NaCl 100 mg，KH2PO4 233.2 mg，NaH2PO4 137.03 mg。

表 1 试验饲料组成及营养水平 Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets

试验鱼为浙江省海洋水产研究所西闪岛试验场人工培育的苗种。初步选择600余尾幼鱼在室内50 m³水泥池中集中暂养2周。暂养结束后，选用大小均匀、健康活泼的初始体重为(17.84±0.34) g的幼鱼360尾，随机分为6组，每组3个重复，每个重复20尾鱼，分别饲养于500 L钢化玻璃桶中。养殖试验在位于西闪岛试验场的中挪海水鱼类营养与饲料联合实验室的流水系统中进行。每天分别在07：00和16：00各喂饲料1次，投喂量为鱼体重的3%~5%，每2周称重1次，以调整投喂量，试验期8周。养殖期间，水温为(27±2) ℃，水体pH为 7.8~8.0，盐度为28~29，溶解氧浓度>6 mg/L，氨氮浓度<0.05 mg/L。

饲养试验结束，停食24 h后，称量每个钢化玻璃桶中的黄姑鱼总重并记录尾数。从每个桶中随机取5尾鱼测量其体重、体长；在冰盘上分离肝脏和内脏团并称重。另取3尾鱼解剖，取肝脏和肠道分别放至2.0 mL离心管中，迅速放置于液氮罐中，备测消化酶活性。从每个桶中再取6尾鱼，用于全鱼常规营养成分分析。

试验饲料、全鱼的常规营养成分采用AOAC(1995)中方法检测。其中，水分含量采用105 ℃恒温烘干法测定；粗蛋白质含量采用凯氏定氮仪(BUCHI，KjeIFIex K-360，瑞士)测定，粗脂肪含量采用索氏抽提仪(FOSS Soxtec-2055，瑞典)测定，粗灰分含量采用马福炉550 ℃灼烧法测定。

肠道和肝脏样品检测前于4 ℃冰箱解冻，用预冷(0~4 ℃)的0.86%的生理盐水洗2次，再用滤纸吸干表面水分，称重，切碎后与预冷的0.86%的生理盐水按1 ∶ 9质量体积比稀释，于冰水浴中高速匀浆，匀浆液于高速冷冻离心机(0 ℃，4 000 r/min)离心20 min后，取上清液作为粗酶液，置于-80 ℃冰箱保存备用。

蛋白酶活性采用福林-酚试剂法测定，淀粉酶和脂肪酶活性采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒检测。

试验所得数据采用SPSS 19.0软件进行单因子方差分析(one-way ANOVA)，组间差异显著(P<0.05)时，进行Duncan氏法多重比较，试验结果以平均值±标准差(mean±SD)表示。

由表2可知，黄姑鱼幼鱼的增重率、特定生长率和饲料转化率的变化基本一致，均随饲料蛋白质水平的升高整体呈现先升高后维持稳定的趋势，且均在P5组达到最大值，分别为423.66%、3.12%/d和115.15%，略高于P6组(P>0.05)，显著高于其余各组(P<0.05)。随饲料蛋白质水平的升高，蛋白质效率先升高后持续小幅下降，以P2组最高，显著高于P6组(P<0.05)。存活率以P6组最低，显著低于P3组(P<0.05)，其他组间差异不显著(P>0.05)。

表 2 (Table 2)

表 2 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary protein level on growth performance of juvenile Nibea albiflora (n=3) 项目 Items 组别 Groups P1 P2 P3 P4 P5 P6 初始体重 IBW/g 17.75±0.10 17.88±0.57 17.67±0.31 17.78±0.22 17.76±0.35 18.38±0.88 终末体重 FBW/g 62.06±2.77a 70.72±2.13b 77.00±1.80bc 82.35±4.50c 93.03±1.30d 94.33±4.10d 增重率 WGR/% 249.60±15.79a 295.49±10.66b 335.69±10.62c 363.13±24.30c 423.66±6.30d 413.25±2.19d 特定生长率 SGR/(%/d) 2.36±0.08a 2.59±0.05b 2.78±0.05c 2.89±0.10c 3.12±0.02d 3.09±0.01d 存活率 SR/% 88.33±12.58ab 92.50±3.54ab 100.00±0.00b 91.67±7.64ab 97.50±3.54ab 80.00±14.14a 饲料转化率 FCR/% 76.73±6.67a 89.34±2.68b 99.14±1.49bc 104.14±5.91cd 115.15±5.14e 112.45±2.90de 蛋白质效率 PER 2.05±0.18ab 2.14±0.06b 2.13±0.03b 2.09±0.12b 2.03±0.09ab 1.83±0.05a  同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P＞0.05)，不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)。下表同。  In the same row,values with no or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05),while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表 2 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary protein level on growth performance of juvenile Nibea albiflora (n=3)

为研究饲料蛋白质水平与特定生长率的效应关系，以确定黄姑鱼幼鱼饲料中最适蛋白质水平，以饲料中蛋白质水平为横坐标(x)，以特定生长率为纵坐标(y)作图进行折线拟合(图1)。结果表明，在本试验条件下，黄姑鱼幼鱼获得最佳生长效果时饲料蛋白质水平为55.39%。

图1(Figure 1)

Fig. 1

图1 折线模型分析饲料蛋白质水平与 黄姑鱼幼鱼特定生长率之间的关系 Fig. 1 The broken-line model analysis of the relationship between dietary protein level and SGR of juvenile Nibea albiflora

由表3可知，P6组的全鱼水分、粗蛋白质和粗 灰分含量均最高，P1组的全鱼粗脂肪含量最高，但上述指标各组之间均没有显著差异(P>0.05)。

由表4可知，随饲料蛋白质水平的升高，黄姑鱼幼鱼的肝体比、脏体比和肥满度未产生显著变化(P>0.05)。

由表5可知，黄姑鱼幼鱼肝脏中蛋白酶的活性比肠道中小得多。当饲料蛋白质水平由37.52%升至56.80%时，肠道蛋白酶活性随饲料蛋白质水平的升高而增大，饲料蛋白质水平为56.80%时，肠道蛋白酶活性达到最大值，显著高于饲料蛋白质水平为37.52%时(P<0.05)。P6组肠道蛋白酶活性小于P5组，但两者之间无显著差异(P>0.05)。饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼肝脏蛋白酶活性的影响不显著(P>0.05)。

黄姑鱼幼鱼肝脏的淀粉酶活性比肠道淀粉酶活性稍高。当饲料蛋白质水平为61.48%时，肠道和肝脏淀粉酶活性均最低，但黄姑鱼幼鱼肠道和肝脏中淀粉酶活性并不受饲料蛋白质水平的显著影响(P>0.05)。

表 3 (Table 3)

表 3 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼体组成的影响(干物质基础) Table 3 Effects of dietary protein level on body composition of juvenile Nibea albiflora (DM basis, n=3) % 项目 Items 组别 Groups P1 P2 P3 P4 P5 P6 水分 Moisture 70.70±0.68 70.99±2.38 70.32±0.68 70.07±0.25 70.16±0.39 71.34±0.50 粗蛋白质 Crude protein 54.64±5.50 53.73±6.37 53.91±5.84 56.59±1.06 53.92±2.71 59.95±1.23 粗脂肪 Crude lipid 30.27±1.28 26.30±2.06 29.57±1.04 26.36±6.05 28.70±2.60 26.88±1.06 粗灰分 Ash 13.08±1.15 12.64±0.52 13.03±0.79 12.73±0.57 13.42±0.21 13.91±0.57

表 3 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼体组成的影响(干物质基础) Table 3 Effects of dietary protein level on body composition of juvenile Nibea albiflora (DM basis, n=3)

表 4 (Table 4)

表 4 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼形体指标的影响 Table 4 Effects of dietary protein level on body shape indexes of juvenile Nibea albiflora (n=5) % 项目 Items 组别 Groups P1 P2 P3 P4 P5 P6 肝体比 HSI 2.46±0.46 2.53±0.63 2.64±0.19 2.44±0.31 2.30±0.28 2.20±0.22 脏体比 VSI 5.90±0.84 6.42±0.40 6.11±0.73 5.89±0.75 5.81±0.35 5.61±0.50 肥满度 CF 2.04±0.24 1.92±0.07 1.96±0.10 2.11±0.19 2.00±0.18 2.01±0.22

表 4 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼形体指标的影响 Table 4 Effects of dietary protein level on body shape indexes of juvenile Nibea albiflora (n=5)

肠道和肝脏的脂肪酶活性接近，饲料蛋白质水平对肠道和肝脏脂肪酶活性均无显著影响(P>0.05)。

表 5 (Table 5)

表 5 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼肠道和肝脏消化酶酶活性的影响 Table 5 Effects of dietary protein level on digestive enzyme activities in intestine and liver of juvenile Nibea albiflora (n=3) 项目 Items 组别 Groups 肠道 Intestine 肝脏 Liver 蛋白酶 Protease/(U/mg) P1 402.08±50.20a 69.87±18.11 P2 428.49±67.62ab 79.12±14.69 P3 451.44±54.82ab 73.11±17.29 P4 469.26±50.59ab 80.34±14.78 P5 504.63±58.70b 81.43±17.07 P6 491.02±40.57b 77.32±15.78 淀粉酶 Amylase/(U/g) P1 278.74±36.81 366.21±64.08 P2 266.63±46.51 364.75±48.75 P3 244.41±33.32 348.19±84.37 P4 244.91±26.58 380.14±28.18 P5 234.80±38.69 352.16±33.38 P6 227.75±35.26 325.69±76.71 脂肪酶 Lipase/(U/g) P1 7.99±0.42 7.57±1.04 P2 8.91±1.56 8.24±1.35 P3 9.42±1.75 8.22±2.54 P4 9.79±1.20 9.44±1.19 P5 8.25±1.02 8.37±0.42 P6 8.90±0.95 7.55±1.37

表 5 饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼肠道和肝脏消化酶酶活性的影响 Table 5 Effects of dietary protein level on digestive enzyme activities in intestine and liver of juvenile Nibea albiflora (n=3)

在本试验中，随着饲料蛋白质水平的升高，黄姑鱼幼鱼的增重率和特定生长率逐渐上升，当饲料蛋白质水平达到56.80%后开始维持稳定，高蛋白质水平组(P5和P6组)之间并无显著差异。Yang等^[11]在研究澳洲银鲈(Bidyanus bidyanus)蛋白质需求时同样发现当饲料中蛋白质水平由13%升高到37%时，鱼体增重率持续上升，当饲料蛋白质水平在37%~55%时，增重率没有显著变化。Chen等^[12]、Salhi等^[13]和王胜^[14]的研究结果中都曾出现类似现象。Lee等^[3]研究发现，当饲料蛋白质水平过高时，牙鲆的增重率和特定生长率显著降低。这可能是因为过量的氨基酸发生脱氨基作用进入能量代谢，最终产生氨和尿素排出体外，而不能在体内沉积下来用于生长^{[15, 16]}，更为严重的还可能造成氨中毒^{[17, 18]}。

刘兴旺^[19]研究发现，大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼以鱼粉为蛋白质源时，其适宜蛋白质需求量为57%。Takeda等^[20]研究发现，日本黄条 (Seriola dumerilii)幼鱼以沙丁鱼肉和鱼粉为蛋白质源时，其最适蛋白质需求量为55%。本文以特定生长率为评价指标，通过折线模型分析得出在本试验条件下黄姑鱼幼鱼对饲料中蛋白质的适宜需求量为55.39%，与上述报道中的结果相近。大黄鱼^[1]、军曹鱼(Rachyceutrou cauadum)^[21]和红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)^[22]等鱼类幼鱼的最适蛋白质需求量分别为48.3%、44.5%、40.0%，均低于本试验研究结果。鱼类对蛋白质的适宜需求量差异较大，这可能与鱼的种类和初重、水环境因子、养殖密度、投喂水平以及饲料蛋白质源等不同有关^[23]。

饲料转化率是衡量动物所摄食饲料中用于机体生长增重的比例。林星^[24]研究发现，饲料蛋白质水平由34.76%升高到39.85%时，花鲈(Lateolabrax japonicas)的饲料转化率不断升高，当饲料蛋白质水平继续升至45.03%时，饲料转化率没有显著差异。本试验中也出现了相同的变化趋势，其中P5组饲料转化率最高，表明此时饲料中用于黄姑鱼幼鱼生长的营养物质比例较大。

研究表明，蛋白质效率随饲料蛋白质水平的升高显著降低^{[25, 26]}。本试验中，黄姑鱼幼鱼的蛋白质效率总体上随着饲料蛋白质水平的升高趋于降低，与上述结果类似。

本试验结果表明，黄姑鱼幼鱼摄食不同蛋白质水平的饲料时，全鱼粗蛋白质含量无显著差异，这一结果与翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)^[27]幼鱼和褐鳟(Salmo trutta)^[28]的结果一致。这说明饲料蛋白质水平在一定范围(37.52%~61.48%)内变化不影响黄姑鱼幼鱼的体蛋白质的沉积量。这可能是因为在较低的饲料蛋白质水平下，鱼体对低蛋白质饲料的蛋白质生物效价显著高于高蛋白质饲料^[29]，以弥补饲料蛋白质水平的不足，保证机体蛋白质的积累。

本试验中，随着饲料蛋白质水平的升高，全鱼粗脂肪含量的变化无显著差异，说明鱼体粗脂肪含量不受饲料蛋白质水平的显著影响，这与四须鲃(Barbodes altus)^[30]、鳙(Aristichthys nobilis)^[31]的结果相一致。但是，对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)^[32]、石斑鱼(Epinephelus malabaricus)^{[33, 34]}的研究发现，随着饲料粗蛋白质水平的升高，鱼体粗脂肪含量却不断下降。

饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼全鱼粗灰分和水分含量没有显著影响，这与四须鲃^[30]、罗非鱼(Sarotherodon mossambicus)^[16]幼鱼的研究结果一致。本试验结果表明，各组黄姑鱼幼鱼的肝体比、脏体比无显著差异，这与大黄鱼^[1]、金头鲷(Sparus aurata)^[35]等的研究结果相一致。试验结果显示，饲料蛋白质水平未影响黄姑鱼幼鱼的肥满度，类似结果在大黄鱼^[1]、宝石鲈(Scortum bacoo)^[36]等鱼类上都有发现。

饲料蛋白质水平影响鱼体的蛋白酶活性。对宝石鲈^[36]、翘嘴红鲌^[37]、牙鲆(Paralichthys olivaceus)^[38]以及刺鲃(Barbodes caldwell)^[39]等的研究均表明，在一定范围内，随饲料蛋白质水平的升高，鱼类肠道蛋白酶活性逐渐升高，当达到某一蛋白质水平后，蛋白酶活性不再增加，甚至还有所下降。本试验结果显示，当饲料蛋白质水平由37.52%升至56.80%时，黄姑鱼幼鱼肠道蛋白酶活性升高；当饲料蛋白质水平高于56.80%时，肠道蛋白酶活性略有下降，与上述报道基本一致。这可能是因为黄姑鱼为肉食性鱼类，对饲料蛋白质的需求量较高，肠道蛋白酶活性对饲料中蛋白质水平的变化比较敏感，饲料中的蛋白质可以刺激肠道蛋白酶的分泌^{[40, 41]}；然而，过高的饲料蛋白质水平则增加了肠道的消化负担，代谢产生了较多的有毒含氮物质，对肠道蛋白酶的分泌产生负反馈调节^[42]。本研究结果显示，黄姑鱼幼鱼肝脏蛋白酶活性不受饲料蛋白质水平的显著影响，这与刺鲃^[39]、大鳞鲃(Barbus capito)^[43]、芙蓉鲤鲫^[44]和瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)^[45]的研究结果一致。

本试验中，随着饲料蛋白质水平的升高，黄姑鱼幼鱼肠道和肝脏的淀粉酶活性均无显著变化。有关饲料蛋白质水平对鱼类消化腺淀粉酶活性的影响，在不同鱼类的研究中得到的结论并不一致，如肠道淀粉酶活性随饲料蛋白质水平的升高而升高^[46]、降低^{[39, 45]}、先升高后降低^{[4, 47]}或不受影响^[44]。刺鲃^[39]、黑鲷^[4]的肝胰脏淀粉酶活性随饲料蛋白质水平的升高先升高后降低；鳡(Elopichthys bambusa)^[48]、翘嘴红鲌^[37]、芙蓉鲤鲫^[44]和瓦氏黄颡鱼^[45]的肝胰脏淀粉酶活性随饲料蛋白质水平的升高没有显著变化。由此可见，饲料蛋白质水平对鱼类淀粉酶活性的影响因鱼而异。

一些研究表明，饲料蛋白质水平对鱼类的脂肪酶活性无显著影响，如宝石鲈^[36]、瓦氏黄颡鱼^[45]和翘嘴红鲌^[37]等。在本试验中，饲料蛋白质水平对黄姑鱼幼鱼肠道和肝脏的脂肪酶活性均无显著影响，与上述研究结果一致。脂肪酶的活性主要与其所摄食的饲料种类有关，特别是饲料中脂肪的水平有关^{[38, 49, 50]}，而在本试验中各组饲料的脂肪水平是相等的，这可能是各组试验结果之间没有显著差异的原因。

饲料蛋白质水平影响黄姑鱼幼鱼的生长性能、肠道蛋白酶活性，基于特定生长率的折线模型拟合后获得黄姑鱼幼鱼对饲料中蛋白质的适宜需求量为55.31%。