军曹鱼(Rachycentron canadum)隶属鲈形目(Perciformes)，鲈亚目(Percoidei)，军曹鱼科(Rachycentridae)，军曹鱼属(Rachycentron)，俗称海鲡、海龙鱼，具有个体大、生长快、营养丰富、肉质细腻、味道鲜美等特点，是当前我国南方海水网箱养殖的优良品种之一^{[1, 2]}。近年来，随着高密度集约化养殖模式的推广，养殖密度过大及养殖水体恶化等问题导致军曹鱼病害频发，为控制病害而大量使用的抗生素不仅破坏了养殖水体生态系统，而且因水产品中的药物残留带来食品安全问题。为了更好地解决养殖病害和食品安全等问题，确保水产养殖业的可持续健康发展，寻找绿色环保、安全高效的抗生素替代品成为目前的研究热点。由于在生产上通过在饲料中添加免疫增强剂来防止鱼类疾病的方法简单易行，且具有良好效果，因此越来越受到人们的关注。而免疫增强剂中的益生菌由于具有提高养殖动物生长性能、免疫力、抗病力作用且无残留、无毒副、对环境无不良影响，成为最有潜力的抗生素替代品。

益生菌是指在一定浓度范围内可以促进动物健康的活体微生物^[3]，主要有芽孢杆菌类、乳酸菌类、酵母菌和光合细菌等，我国已批准部分品种在养殖业和饲料业中应用。益生菌的作用机理主要为：自身富含蛋白质、维生素等营养物质；其在增殖的过程中分泌的酶类可促进宿主对营养物质的消化吸收；生长过程中通过竞争空间和营养物质而抑制致病菌的生长；自身的结构成分如肽聚糖等能刺激宿主免疫系统，进而提高免疫力^{[4, 5]}。研究发现，饲料中添加不同水平的益生菌可提高凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)^{[6, 7]}、牙鲆(Paralichthys olivaceus)^[8]、罗非鱼(Oreochromis spp.)^[9]、金头鲷(Sparus auratus)^{[10, 11]}等的生长性能、相关酶活性和抗病力。饲料中添加益生菌对军曹鱼生长、免疫等指标影响的研究仅见于本实验室报道，而益生菌不同投喂方式对军曹鱼生长等指标影响的研究未见报道。因此，本试验旨在探讨持续与非持续投喂添加单一或复合益生菌的饲料对军曹鱼幼鱼生长性能、消化酶和免疫酶活性的影响，从而为益生菌在军曹鱼养殖中高效、合理地应用提供科学依据。

以鱼粉、去皮豆粕为蛋白质源，鱼油、玉米油和大豆磷脂油为脂肪源，制成粗蛋白质含量46%、粗脂肪含量8%的基础饲料(表1)，在基础饲料中分别添加枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌及二者的混合物(枯草芽孢杆菌 ∶ 嗜酸乳杆菌=1 ∶ 1，质量比)，配制成有效活菌数分别为1.0×10⁷、1.0×10⁷、2.0×10⁷ CFU/g的3种试验饲料，上述菌种均购自广东省微生物菌种保藏中心(GIMCC)。饲料原料经粉碎后过60目筛，按照配方比例准确称重后混匀，微量组分以逐级扩大法添加混合，之后加入预先混匀的鱼油、大豆磷脂油和玉米油，搓散油脂颗粒后搅拌混合15 min，分别加入氯化胆碱溶液、一水合磷酸二氢钙溶液，继续搅拌5 min，然后按处理将不同的菌液添加水分稀释后加入到正在搅拌的饲料中，继续搅拌10 min，用F-26型双螺杆挤条机将搅拌均匀的饲料压制成粒径为3.0 mm的颗粒饲料，风干后用封口袋编号分装，于-20 ℃冰箱保存备用，并检测饲料样品中有效活菌数。

养殖试验在广东省湛江市南三岛海域广东粤海饲料有限公司深水网箱系统中进行。试验用鱼购于海南省琼海市博鳌镇某鱼苗场。试验开始前，军曹鱼幼鱼先在网箱(3.0 m×3.0 m×4.5 m)中暂养2周，期间投喂商品饲料(广东粤海饲料有限公司产品，粗蛋白质含量44%)，使其适应养殖环境和饲料。暂养期结束后，饥饿24 h后，挑选健壮无伤、规格一致[平均体重(22.00±0.15) g]的军曹鱼幼鱼随机分配到21个网箱(1.5 m×2.0 m×2.5 m)中，每个网箱放养40尾鱼。根据试验设计，将试验鱼分为7个组，每组3个重复(网箱)。对照组(T0组)投喂基础饲料；T1、T2和T3组在前30天分别投喂含枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌+嗜酸乳杆菌饲料，后20天投喂基础饲料；T4、T5和T6组分别持续投喂含枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌+嗜酸乳杆菌饲料50 d。每天投喂2次(07:00、17:00)，日投喂量为体重的5%~10%，水温29.5~34.0 ℃，盐度16‰~20‰，溶解氧浓度≥6 mg/L，试验期50 d。

养殖试验结束饥饿24 h后，将每个网箱中的军曹鱼全部捞出，用丁香酚(1 ∶ 10 000)麻醉后称重、计数。每个网箱随机选取6尾鱼心脏采血，采集的血样放入不含抗凝剂的1.5 mL的离心管中，在冰上静置4 h，然后4 ℃条件下4 000 r/min离心10 min，收集血清，分装后于-80 ℃冰箱保存待测。每个网箱再随机取5尾鱼解剖取肝脏、肠道(前、后肠)，于-80 ℃超低温冰箱保存待测。

表 1 (Table 1)

表 1 基础饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis) % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 鱼粉 Fish meal 41.00 去皮豆粕 Peeled soybean meal 19.00 面粉 Wheat flour 32.82 玉米油 Corn oil 1.00 大豆磷脂油 Soybean lecithin 1.00 鱼油 Fish oil 2.00 维生素C Vitamin C (35%) 0.05 氯化胆碱 Choline chloride 0.50 维生素预混料 Vitamin premix1) 0.20 矿物质预混料 Mineral premix2) 0.20 纤维素 Cellulose 0.50 诱食剂 Attractant 0.10 乙氧基喹啉 Ethoxy quinoline 0.03 一水合磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2·H2O 1.60 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels3) 水分 Moisture 12.19 粗蛋白质 Crude protein 46.64 粗脂肪 Crude lipid 8.02 粗灰分 Ash 10.20  1)维生素预混料为每千克饲料提供The vitamin premix provided the following per kg of the diet:VA 12 000 IU，VD 4 000 IU，VE 400 mg，VK3 40 mg，VB1 60 mg，VB2 200 mg，VB6 40 mg，VB12 0.4 mg，泛酸钙 calcium pantothenate 280 mg，烟酸nicotinic acid 800 mg，生物素 biotin 6 mg，叶酸 folic acid 15 mg，肌醇 inositol 400 mg，对氨基苯甲酸 PABA 400 mg，β-胡萝卜素 β-carotene 12 mg。  2)矿物质预混料为每千克饲料提供The mineral premix provided the following per kg of the diet:KCl 953.47 mg，MgSO4·7H2O 1 024.44 mg，柠檬酸铁 ferric citrate 850.25 mg，ZnSO4·7H2O 353.57 mg，CuSO4·5H2O 59.84 mg，MnSO4·H2O 96.26 mg，CoCl2·6H2O 8.16 mg，Na2SeO3 4.47 mg。  3)测定值 Measured values。

表 1 基础饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (DM basis)

饲料常规成分测定：采用AOAC(2005)^[12]中方法进行。其中，水分含量测定采用105 ℃烘干恒重法；粗蛋白质含量测定采用凯氏定氮法;粗脂肪含量测定采用索氏抽提法；粗灰分含量测定采用箱式电阻炉550 ℃灼烧法。

血清免疫酶活性测定：碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、溶菌酶(LZM)活性均采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒测定，样品前处理、试剂配制和测定步骤严格按照操作说明书执行。

肝脏及肠道淀粉酶(AMS)、蛋白酶(PRS)活性测定：称取适量组织，并记下其准确重量，按照组织样品与生理盐水1 ∶ 9的比例加入生理盐水，并在冰水浴条件下匀浆，制成10%组织匀浆液，4 ℃条件下2 500 r/min离心15 min，小心吸取上清液分装，进行测定。AMS活性测定严格按照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒说明书执行，PRS活性测定采用福林酚试剂法^[13]，以每毫克组织蛋白质在37 ℃下每分钟水解酪蛋白生成1 μg酪氨酸作为1个酶活性单位。

试验结果以平均值±标准差(mean±SD)表示。用SPSS 19.0软件对所有数据进行单因素方差分析(one-way ANOVA)，当组间差异显著(P<0.05)时，进行Duncan氏法多重比较。

由表2可知，饲料中添加益生菌对军曹鱼幼鱼有促进生长的作用，其中持续投喂组(T4、T5、T6组)的WGR和SGR均显著高于对照组(P<0.05)，同时T4和T5组间无显著差异(P>0.05)，但均显著低于T6组(P<0.05)。非持续投喂组(T1、T2和T3组)间WGR和SGR无显著差异(P>0.05)。T1和T2组的WGR与对照组无显著差异(P>0.05)，但T3组的WGR则显著高于对照组(P<0.05)；T1组的SGR与对照组无显著差异(P>0.05)，T2、T3组的SGR则显著高于对照组(P<0.05)。此外，与对照组相比，各益生菌添加组军曹鱼幼鱼的FCR均显著降低(P<0.05)，连续投喂组的FCR均优于非连续投喂组，其中T4和T6组的FCR显著低于其他益生菌添加组(P<0.05)。 各组的成活率无显著差异(P>0.05)。

表 2 (Table 2)

表 2 益生菌对军曹鱼幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of probiotics on growth performance of juvenile cobia 项目 Items 组别 Groups T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 初均重IBW/g 21.92 ±0.31 22.04 ±0.08 21.92 ±0.14 22.00 ±0.00 21.96 ±0.14 22.04 ±0.14 22.13 ±0.13 末均重FBW/g 102.12 ±3.20d 104.82 ±1.40cd 107.74 ±2.60c 109.54 ±2.20bc 113.70 ±4.60b 114.72 ±4.00b 126.15 ±1.50a 增重率 WGR/% 365.92 ±13.20e 375.57 ±7.10de 391.57 ±9.28cde 397.90 ±10.21bcd 417.89 ±24.08bc 420.55 ±20.44b 470.18 ±6.42a 特定生长率 SGR/(%/d) 3.08 ±0.06e 3.12 ±0.03de 3.18 ±0.04cd 3.21 ±0.04bcd 3.29 ±0.09bc 3.30 ±0.08b 3.48 ±0.02a 饲料系数 FCR 1.48 ±0.06c 1.40 ±0.02b 1.40 ±0.04b 1.34 ±0.03b 1.20 ±0.06a 1.33 ±0.06b 1.17 ±0.02a 成活率 SR/% 92.50 ±12.99 90.00 ±4.33 94.17 ±8.04 86.67 ±3.82 92.50 ±12.99 99.17 ±1.44 99.17 ±1.44  同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。  In the same row,values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05),while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表 2 益生菌对军曹鱼幼鱼生长性能的影响 Table 2 Effects of probiotics on growth performance of juvenile cobia

由表3可知，与对照组相比，饲料中添加益生菌显著提高军曹鱼幼鱼肝脏AMS活性(P<0.05)，其中T6组的肝脏AMS活性显著高于其他益生菌添加组(P<0.05)，而其他益生菌添加组间无显著差异(P>0.05)。T5和T6组的前肠AMS活性显著高于对照组(P<0.05)，而T1和T2组则显著低于对照组(P<0.05)，T3、T4组则与对照组无显著差异(P>0.05)。T4组的后肠AMS活性显著高于 对照组(P<0.05)，且显著高于T1、T2、T5组(P<0.05)，但与T3、T6组无显著差异(P>0.05)。此外，与对照组相比，各益生菌添加组的肝脏、前肠和后肠PRS活性显著提高(P<0.05)，同时持续投喂组均显著高于非持续投喂组(P<0.05)。T6组的肝脏和前肠PRS活性与T5组无显著差异(P>0.05)，但显著高于T4组(P<0.05)；T6组的后肠PRS活性显著高于其他益生菌添加组(P<0.05)，T4与T5组之间无显著差异(P>0.05)。

表 3 (Table 3)

表 3 益生菌对军曹鱼幼鱼肝脏及肠道消化酶活性的影响 Table 3 Effects of probiotics on digestive enzyme activities in liver and intestine of juvenile cobia U/mg prot 项目 Items 组别 Groups T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 淀粉酶 AMS 肝脏 liver 0.273 ±0.011c 0.307 ±0.018b 0.318 ±0.014b 0.306 ±0.018b 0.319 ±0.008b 0.315 ±0.013b 0.344 ±0.012a 前肠 foregut 0.234 ±0.015b 0.194 ±0.014cd 0.170 ±0.014d 0.219 ±0.022bc 0.235 ±0.005b 0.321 ±0.012a 0.316 ±0.020a 后肠 hindgut 0.085 ±0.004bc 0.076 ±0.004d 0.074 ±0.001d 0.090 ±0.008ab 0.097 ±0.005a 0.080 ±0.002cd 0.093 ±0.008ab 蛋白酶 PRS 肝脏 liver 1.026 ±0.023e 1.405 ±0.034c 1.232 ±0.061d 1.443 ±0.031c 1.635 ±0.088b 1.758 ±0.031a 1.768 ±0.045a 前肠 foregut 1.705 ±0.047d 1.759 ±0.040c 1.727 ±0.031d 1.780 ±0.030bc 1.792 ±0.021b 1.799 ±0.026ab 1.826 ±0.030a 后肠 hindgut 2.235 ±0.075e 2.665 ±0.124d 2.724 ±0.039c 2.758 ±0.020c 2.820 ±0.115b 2.832 ±0.100b 2.885 ±0.097a

表 3 益生菌对军曹鱼幼鱼肝脏及肠道消化酶活性的影响 Table 3 Effects of probiotics on digestive enzyme activities in liver and intestine of juvenile cobia

由表4可知，与对照组相比，各益生菌添加组军曹鱼幼鱼血清LZM活性均显著提高(P<0.05)，血清LZM活性在各组之间均具有显著差异(P<0.05)，以T6组最高。与对照组相比，持续投喂组能显著提高血清T-SOD活性(P<0.05)，且持续投喂复合益生菌组(T6组)显著高于持续投喂单一益生菌组(T4、T5组)；血清T-SOD活性在非持续 投喂益生菌组中，T1组与对照组无显著差异(P>0.05)，T2和T3组显著低于对照组(P<0.05)。与对照组相比，饲料中添加益生菌能显著降低血清AKP活性(P<0.05)。T3、T4和T5组血清ACP活性显著低于对照组(P<0.05)，T1和T2组则显著高于对照组(P<0.05)，T6组与对照组无显著差异(P>0.05)。

表 4 (Table 4)

表 4 益生菌对军曹鱼幼鱼血清免疫酶活性的影响 Table 4 Effects of probiotics on immune enzyme activities in serum of juvenile cobia 项目 Items 组别 Groups T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 溶菌酶 LZM/(μg/mL) 7.35±0.06g 7.64±0.03f 7.53±0.05e 8.14±0.04d 9.04±0.02c 9.81±0.04b 10.07±0.01a 总超氧化物歧化酶 T-SOD/(U/mL) 37.00±0.19c 36.49±0.29c 32.88±0.57e 34.57±0.50d 38.81±0.55b 38.62±0.30b 42.16±0.62a 碱性磷酸酶 AKP/(金氏单位/dL) 1.473±0.033a 1.262±0.014b 0.949±0.015c 0.527±0.011f 0.649±0.027e 0.728±0.034d 0.750±0.042d 酸性磷酸酶 ACP/(金氏单位/dL) 0.954±0.035b 1.215±0.042a 1.264±0.023a 0.681±0.050d 0.848±0.029c 0.595±0.049e 0.964±0.020b

表 4 益生菌对军曹鱼幼鱼血清免疫酶活性的影响 Table 4 Effects of probiotics on immune enzyme activities in serum of juvenile cobia

目前益生菌已经以不同的方式(如拌料投喂、投入到水中、强化活饵等)运用到水产养殖业当中，Wang等^[9]每隔4 d用1×10⁷ CFU/mL的粪肠球菌(Enteroccus faecium)ZJ4处理罗非鱼(Oreochromis niloticus)养殖水体，结果表明，经益生菌处理的养殖水体中的罗非鱼体增重和日增重显著高于未处理的对照组。华雪铭等^[14]发现，在饲料中添加芽孢杆菌(Bacillus sp.)和硒酵母可显著促进异育银鲫(Carassius auratus gibelio)的生长。在大菱鲆(Scophthalmus maximus)^[15]、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)^[16]、牙鲆^{[8, 17]}、青鱼(Mylopharyngodon piceus)^[18]、吉富罗非鱼(GIFT)^[19]、斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)^[20]等养殖对象饲料中添加不同益生菌的研究结果均表明益生菌能在一定程度上促进动物的生长，提高动物的WGR。本试验中，各益生菌添加组的WGR和SGR均优于对照组，从试验结果可以看出，持续投喂益生菌的效果优于非持续投喂，复合益生菌效果优于单一益生菌。连续投喂复合益生菌的T6组的WGR比对照组提高了28.49%，与上述研究结果相似。据报道，复合益生菌比单一益生菌更能提高大菱鲆的存活率及其生长性能^[15]。Zokaeifar等^[6]报道，2株枯草芽孢杆菌对凡纳滨对虾的WGR、SGR有显著提高，但不影响FCR。另有研究认为饲料中不同浓度的枯草芽孢杆菌对青鱼的体增重和FCR无显著影响^[18]，不同浓度的嗜酸乳酸菌不影响吉富罗非鱼的增重和FCR^[19]。上述试验结果的不同可能源于益生菌的种类和添加量、试验动物种类和规格的不同，且益生菌的活性及其对水生动物作用还受到养殖环境如盐度、温度等因素的影响^[21]。目前研究认为益生菌促进鱼体生长主要在于进入鱼体消化道的益生菌富含蛋白质，易被机体吸收，其次进入消化道的益生菌能够定植下来，抑制和排除有害菌，达到维持或恢复肠内菌群的平衡，使机体处于良好的状态，利于对饲料营养物质的消化吸收^{[22, 23]}。此外，肠道内的益生菌在增殖过程中会分泌代谢酶类，补充内源性酶或将鱼体不能消化的大分子物质分解成易被肠道细胞吸收的小分子物质，进而更利于鱼类的生长。

研究表明饲料中添加益生菌能够提高鱼类的消化酶活性。对大菱鲆的研究结果表明，饲料中添加益生菌能使大菱鲆消化道中PRS、脂肪酶和AMS活性升高，其中添加复合益生菌(枯草芽孢杆菌+地衣芽孢杆菌+嗜酸乳杆菌+双歧杆菌)的试验组消化道中各消化酶活性显著高于对照组^[15]。据报道，摄食含枯草芽孢杆菌饲料的青鱼肠道PRS活性显著高于对照组，且随着饲料中枯草芽孢杆菌添加量的增加而上升，但枯草芽孢杆菌添加量达到2×10⁷ CFU/g及以后则肠道PRS活性不再有显著变化；同时，肠道AMS活性也表现出与PRS类似的趋势^[18]。江永明等^[24]在奥尼罗非鱼(Oreochromis niloticus♀×Oreochromis aureus )饲料中添加了活菌数为3.0×10¹¹ CFU/kg的枯草芽孢杆菌，投喂56 d后发现奥尼罗非鱼肠道和肝胰脏的胃蛋白酶活性显著高于对照组，但是对AMS、脂肪酶活性没有显著影响。在草鱼^[25]、异育银鲫^[26]、鲤鱼(Cyprinus carpio)^[27]上的研究也表明益生菌能够提高鱼类消化酶的活性。本试验中，各益生菌添加组军曹鱼幼鱼肝脏中AMS和PRS活性均显著高于对照组；前肠AMS活性仅T5和T6组显著高于对照组，其他益生菌添加组与对照组相比无显著差异或显著降低；后肠AMS活性仅T3、T4和T6组显著高于对照组，其他各益生菌添加组与对照组相比无显著差异或显著低于对照组。而前、后肠PRS活性除了T2组与对照组无显著差异外，其他各益生菌添加组均显著高于对照组，且采用持续投喂复合益生菌的T6组的前、后肠PRS活性要高于其他各益生菌添加组。这与前人的研究结果基本一致。但Sun等^[28]发现，在斜带石斑鱼饲料中添加嗜冷杆菌(Psychrobacter sp.)能轻微提高其肝胰脏PRS、脂肪酶活性以及肠道AMS活性，但在统计学上无显著差异。这可能跟益生菌添加种类和水平有关。从前人报道及本试验结果不难发现，饲料中添加益生菌能够在一定程度上提高动物肝脏和肠道消化酶活性，多数研究者认为饲料中添加的益生菌在自身的代谢过程中能产生消化酶类，如芽孢杆菌类能产生具有AMS、PRS、脂肪酶活性及氨基酸、维生素类的代谢物^{[29, 30]}，或在长期饲喂过程中对动物肠道刺激形成适应性分泌消化酶类^[25]；此外，枯草芽孢杆菌属好氧菌，在进入动物肠道后会大量消耗氧气，有利于厌氧性的嗜酸乳杆菌在肠道中生长繁殖，二者在增殖过程中可形成协同作用，维持了肠道微生物的动态平衡，确保了肠道上皮细胞等对营养物质的吸收，从而达到提高动物生长性能的作用。本试验所得消化酶活性的结果和军曹鱼的生长性能相辅相成，进一步证实了这一点。

血清LZM、超氧化物歧化酶(SOD)、AKP和ACP活性是反映动物非特异性免疫力的重要指标。LZM是鱼类血清、黏液和吞噬细胞中能杀死病原微生物的一种重要的杀菌溶菌物质，可以破坏细菌细胞壁并对真菌细胞壁和昆虫的外骨骼进行有限的水解，消除侵入机体内的异物，从而实现机体防御的功能。SOD是生物体内重要的抗氧化酶，能够抑制氧自由基的形成，一定程度上反映了动物体生长发育、体内氧自由基的代谢、抗氧化状况及外界环境胁迫的变化^{[19, 31]}。AKP和ACP在动物体内广泛分布且在不同组织呈现的生理和催化作用也不尽相同，血清中的AKP和ACP是高等动物巨噬细胞溶酶体的标志酶，两者活性变化反映了动物的生长状况、肝功能的好坏和外界环境的变化。在本试验中，各益生菌添加组军曹鱼幼鱼血清LZM活性均显著高于对照组，这与在斜带石斑鱼^{[32, 33]}、牙鲆^{[17, 34]}、南亚野鲮(Labeo rohita)^[35]上的研究结果相似。同时，复合益生菌组的血清LZM活性显著高于单一益生菌组，这与李桂英等^[36]在凡纳滨对虾、Salinas等^[37]在金头鲷上的研究结果类似。此外，本试验中只有持续投喂益生菌组的军曹鱼幼鱼血清T-SOD活性显著高于对照组，而非持续投喂组中T1组与对照组无显著差异，而T2和T3组则显著低于对照组，其原因可能是改投基础饲料后，消化道中的益生菌数量减少了，肠道菌群结构发生了变化，鱼类肠道黏膜免疫适应性刺激在前期的负反馈调节下减弱或降低，进而引起动物体抗氧化能力下降。刘晓勇等^[38]在饲料中添加枯草芽孢杆菌，研究其对杂交鲟(Acipenser baeri ×Acipenser schrenkii ♀)幼鱼的影响，结果发现饲料中添加0.25%枯草芽孢杆菌且持续投喂15 d时显著提高了血清LZM和SOD活性。研究发现，复合益生菌(含光合细菌、短小乳杆菌、嗜酸乳杆菌)提高了斜带石斑鱼血清SOD活性^[39]。Sun等^[40]研究发现饲料中添加乳酸乳球菌MM1能够提高斜带石斑鱼幼鱼血清LZM活性，而粪肠球菌MM4则降低其血清LZM活性，两者对血清SOD活性无显著影响。可见，不同的益生菌种类对不同鱼种或不同的免疫酶所起的调节作用存在差异。本试验中，各益生菌添加组的军曹鱼幼鱼血清AKP活性均显著低于对照组，而血清ACP活性除了非持续投喂益生菌中2个单一益生菌组(T1和T2组)高于对照组外，其他各组也显著低于对照组，这与刘晓勇等^[38]在杂交鲟幼鱼、刘小玲等^[19]在吉富罗非鱼、Sun等^[41]在斜带石斑鱼、沈文英等^[16]在草鱼上的研究结果有所不同，以上研究结果均认为饲料中或活饵中添加益生菌能够提高血清AKP活性。此外，也有研究认为在饲料中添加益生菌对血清AKP活性无显著影响^{[42, 43]}。而本试验在饲料中添加益生菌降低了军曹鱼幼鱼血清AKP和ACP的活性，从医学生理角度上讲AKP和ACP活性的升高意味着机体肝脏或骨骼生长可能出现病变，说明各益生菌添加组军曹鱼幼鱼机体的健康状况要优于对照组，而从生化角度看，AKP和ACP是磷酸基团转移和代谢的重要酶类，能够水解外来异物表面上的磷酸酯，提高吞噬细胞的吞噬效率及降解异物的速度，也说明AKP和ACP活性的升高有着一定的正面作用。遗传规律表明，生长速度快的动物，往往其免疫力不高，而免疫功能强时，其生长速度不快，据此，本试验的结果是否可以解释为饲料添加益生菌后促进了军曹鱼的生长，因而用于免疫方面的营养物质减少，导致某些相关酶活性的降低，有待进一步研究。在水产动物营养学研究中，生长性能和免疫酶活性间是呈正相关还是负相关，目前尚无定论。

在本试验条件下，饲料中添加枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌或二者(质量比1 ∶ 1)的混合物均可提高军曹鱼幼鱼的生长性能、免疫力及消化酶活性，且持续投喂复合益生菌效果优于非持续或单一投喂益生菌，说明本试验选择的2种益生菌在消化道中具有协同作用。