豆粕作为优质的植物性蛋白质饲料，具有粗蛋白质含量高、氨基酸组成合理的特点，被广泛应用于畜禽饲料中，但由于豆粕中含有多种抗营养因子，不同程度地影响了饲料的适口性和动物对其营养成分的消化吸收^[1]。经过酶解或发酵等技术处理的豆粕，能有效去除豆粕中的抗营养因子^[2]，提高动物对饲料中营养物质的利用率^[3]，其在畜禽饲粮中的添加利用逐渐成为人们关注的焦点。研究表明，豆粕经发酵后不仅可以去除其中的大部分抗营养因子，产生大量乳酸、益生菌等物质，而且使豆粕中的大分子蛋白降解为多肽、小肽和游离氨基酸等小分子营养物质^[4]。发酵豆粕中的大豆蛋白较传统大豆蛋白具有更易于吸收、低抗原等优点^[5]。Xu等^[6]研究发现，饲喂发酵豆粕可显著提高蛋鸡生产性能，改善料蛋比，增强机体免疫力。发酵豆粕中的益生菌能明显改善肠道菌群平衡，有利于畜禽的健康^[7]。但是，发酵豆粕经过烘干处理后，部分营养物质遭到破坏，益生菌的数量显著降低，且会增加生产的成本。菌肽蛋白(bacterial peptide protein,BPP)是由浙江诚元生物技术有限公司通过高生物活性发酵豆粕的制备方法^[8]和菌酶协同发酵豆粕制备活性饲用肽的方法^[9]，采用凝结芽孢杆菌BC101、耐高温酵母菌Y301发酵豆粕而得。菌肽蛋白能有效保护益生菌的活性，并拥有更高含量的小分子营养物质。钊守梅等^[10]研究发现，饲粮中添加菌肽蛋白能显著提高断奶仔猪的生长性能和对饲料的利用率。本试验以菌肽蛋白为试验材料，通过其对蛋鸡生产性能、蛋品质、肠道菌群数量和血清生化指标的影响，确定其在蛋鸡饲粮中的最佳添加水平，为其在养殖业中的应用提供理论依据。

试验用菌肽蛋白是由凝结芽孢杆菌BC101与耐高温酵母菌Y301联合深层固体发酵工艺生产的一种液态型高生物活性发酵豆粕，含水量(GB/T 6435—2006)为37.75%，粗蛋白质(GB/T 6432—1994)在湿样中含量为35%，酸溶蛋白(GB/T 22492—2008)在湿样中含量为9.26%，脲酶活性(GB/T 8622—2006)为0.02 U/g，水苏糖含量(GB/T 22491—2008)为0.28%，棉籽糖含量(GB/T 22491—2008)为0.11%，益生菌数量(GB/T 4789.35—2010)为9.45×10⁸ CFU/g。本试验菌肽蛋白由浙江诚元生物有限公司提供。试验地点为浙江省建德市三益有限公司养殖基地，饲养时间为2014年8月1日至2014年10月15日。

选取900只体质健康的74周龄京红1号商品蛋鸡，随机分成5组，每组5个重复，每个重复36只。预试期1周，正试期9周，试验预试期按各重复小组统计产蛋率，并根据统计结果进行适当调整，以使各小组在正试验开始时的产蛋率差异不显著(P>0.05)。对照组饲喂不含有菌肽蛋白的基础饲粮，试验组分别饲喂添加2%、4%、6%和8%菌肽蛋白的饲粮。试验饲粮参考NRC(1994)蛋鸡营养需要标准配制。试验饲粮组成及营养水平见表1。

表 1 (Table 1)

表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) 项目 Items 菌肽蛋白水平 Bacterial peptide protein level/% 0 2 4 6 8 原料 Ingredients 玉米 Corn 60.42 60.41 60.41 60.20 60.20 豆粕 Soybean meal 24.00 22.50 21.00 19.50 18.00 麸皮 Wheat bran 3.00 2.50 2.00 1.50 1.00 贝壳粉 Shell powder 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 石粉 Limestone 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 菌肽蛋白 BPP 2.00 4.00 6.00 8.00 蛋氨酸 Met 0.08 0.09 0.09 0.10 0.10 豆油 Soybean oil 0.50 0.50 0.50 0.70 0.70 预混料 Premix1) 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 营养水平 Nutrient levels2) 代谢能 ME/(MJ/kg) 10.88 10.88 10.88 10.88 10.88 粗蛋白质 CP 15.26 15.33 15.25 15.30 15.19 赖氨酸盐酸盐 Lys·HCl 0.77 0.74 0.77 0.78 0.73 蛋氨酸 Met 0.29 0.31 0.30 0.32 0.30 色氨酸 Trp 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18 苏氨酸 Thr 0.60 0.60 0.60 0.60 0.59 钙 Ca 3.42 3.51 3.40 3.42 3.55 总磷 TP 0.48 0.48 0.48 0.47 0.47  1)每千克预混料为饲粮提供A kg of premix provided the following for diets:VA 200 000 IU，VD3 50 000 IU，VE 285 IU,VK3 30 mg，VB1 39 mg,VB2 132 mg，VB6 52.5 mg，VB12 0.4 mg，生物素 biotin 4.5 mg，叶酸 folic acid 1.0 mg，D-泛酸 D-pantothenic acid 207 mg，烟酸 nicotinic acid 600 mg，Cu (as copper sulfate) 0.1 g，Fe (as ferrous sulfate) 1.6 g，Mn (as manganese sulfate) 1.6 g，Zn (as zinc sulfate) 1.0 g，I (as potassium iodide) 5.0 mg，Se (as sodium selenite) 4.0 mg。  2)除代谢能、色氨酸和苏氨酸为计算值外，其余为实测值。ME,Trp and Thr were calculated values,while the others were measured values.

表 1 试验饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis)

试验采用3层阶梯式笼养，半机械通风，人工照明，每天07:00和14:00各喂料1次，根据剩料情况酌情增减给料量使鸡处于自由采食状态，以刺激食欲，避免浪费，试验鸡自由饮水。

每天记录各重复采食量、产蛋数和蛋重，计算平均日采食量(g/d)、产蛋率(%)、平均蛋重(g)和料蛋比。

每5周收集1次鸡蛋，共收集2次。以重复为单位，每个重复随机选取6枚鸡蛋，每组30枚，进行蛋品质指标测定。

蛋品质测定采用日产DET 6000蛋品质测定仪检测，主要指标有：蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位、蛋壳厚度和蛋壳强度。

用经消毒的绳子于盲肠与回肠接连处打结，剪下盲肠，得到整段盲肠及内容物，切口处消毒。在超净台下采集盲肠内容物约2 g用于肠道菌群数量检测。大肠杆菌采用麦康凯培养基37 ℃培养24 h；乳酸菌采用MRS培养基37 ℃厌氧培养48 h；细菌数量采用平板菌落计数法进行统计，最后用每克肠道内容物鲜样中细菌个数的对数[lg(CFU/g)]表示。

饲养试验结束后，每个重复随机选取2只鸡，每组10只，供水禁食24 h后称重，翅下静脉采血，3 500 r/min离心15 min以制备血清用于血清生化指标的测定，制备好的血清立即分装并置于冰盒临时保存，于-80 ℃冰箱长期保存。血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)含量，谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性均采用试剂盒测定，试剂盒购于南京建成生物工程研究所。

试验数据均以“平均值±标准误”表示，采用SPSS 20.0单因素方差分析处理(one-way ANOVA)处理数据，采用Duncan氏法进行多重比较。以P<0.05作为差异显著的标准。使用SPSS 20.0中的回归曲线模型，以产蛋率、蛋白高度和盲肠内容物中益生菌数量作为评价指标，根据一次线性和二次曲线的P值，选择合适的方程，计算菌肽蛋白最佳添加水平。

预试验结束后，对照组、2%、4%、6%和8%菌肽蛋白组产蛋率分别为75.63%、75.00%、74.43%、75.89%和75.00%，其中各组之间差异不显著(P<0.05)。由表2可知，与对照组相比，饲粮中添加不同水平菌肽蛋白显著提高了蛋鸡的产蛋率(P<0.05)，其中，4%、6%和8%菌肽蛋白组产蛋率分别提高了6.17%、4.95%和5.28%。饲粮中添加菌肽蛋白对平均日采食量、料蛋比和平均蛋重无显著影响(P>0.05)，其中，8%菌肽蛋白组的平均蛋重最大，4%菌肽蛋白组的平均日采食量最高。随菌肽蛋白添加水平增加，产蛋率呈二次曲线变化(P=0.016)，回归方程为：Y=-0.634 3X²+4.455 7X+66.99(R²=0.955 7，X=菌肽蛋白添加水平，Y=产蛋率)。

表 2 (Table 2)

表 2 饲粮菌肽蛋白对京红1号蛋鸡生产性能的影响 Table 2 Effects of dietary BPP on performance of Jinghong No. 1 laying hens 项目 Items 菌肽蛋白水平 Bacterial peptide protein level/% P值 P-value 0 2 4 6 8 线性 Linear 二次 Quadratic 产蛋率 Laying rate/% 70.94±0.83b 72.95±0.81ab 75.32±1.05a 74.45±0.99a 75.13±0.33a 0.071 0.016 平均日采食量 ADFI/(g/d) 117.46±1.86 118.37±2.25 121.12±4.31 120.56±0.62 120.71±1.11 0.099 0.192 料蛋比 Feed to egg ratio 2.56±0.05 2.49±0.05 2.49±0.08 2.50±0.04 2.51±0.03 0.554 0.398 平均蛋重 AEW/g 64.63±0.29 65.15±0.42 64.75±0.38 64.71±0.39 65.21±0.23 0.515 0.787  同行数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同字母表示差异显著(P<0.05)。下表同。  In the same row,values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05),while with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

表 2 饲粮菌肽蛋白对京红1号蛋鸡生产性能的影响 Table 2 Effects of dietary BPP on performance of Jinghong No. 1 laying hens

由表3可知，饲粮中添加不同水平的菌肽蛋白对蛋品质有一定影响。与对照组相比，饲粮中添加2%~8%的菌肽蛋白显著提高了鸡蛋哈氏单位(P<0.05)。其中，4%和8%菌肽蛋白组鸡蛋蛋白高度显著高于对照组(P<0.05)。较之对照组，饲粮中添加2%~8%的菌肽蛋白显著提高了鸡蛋 蛋壳厚度(P<0.05)。蛋黄颜色和蛋壳强度随饲粮中菌肽蛋白添加水平的升高而呈现出增加的趋势，但差异不显著(P>0.05)。以蛋白高度为评价指标，随菌肽蛋白添加水平增加，蛋白高度呈二次曲线变化(P=0.042)，回归方程为：Y=-0.061 4X²+0.472 6X+5.204(R²=0.625 1，X=菌肽蛋白添加水平，Y=蛋白高度)。

表 3 (Table 3)

表 3 菌肽蛋白对京红1号蛋鸡蛋品质的影响 Table 3 Effects of dietary BPP on egg quality of Jinghong No. 1 laying hens 项目 Items 菌肽蛋白水平 Bacterial peptide protein level/% P值 P-value 0 2 4 6 8 线性 Linear 二次 Quadratic 蛋白高度 Albumen height/mm 5.64±0.09c 5.78±0.05bc 6.29±0.17a 5.94±0.22abc 6.08±0.10ab 0.241 0.042 哈氏单位 Haugh unit 69.12±1.37b 74.79±1.37a 75.68±1.17a 74.26±0.48a 74.80±0.61a 0.014 <0.01 蛋黄颜色 Yolk color 5.91±0.14 5.96±0.07 6.27±0.15 6.17±0.26 6.19±0.07 0.042 0.075 蛋壳强度 Eggshell strength/ (kgf/cm2) 3.49±0.50 3.54±0.90 3.58±0.11 3.29±0.46 3.58±0.15 0.855 0.941 蛋壳厚度 Eggshell thickness/mm 0.36±0.09b 0.39±0.09a 0.39±0.06a 0.38±0.07a 0.39±0.09a 0.118 0.066

表 3 菌肽蛋白对京红1号蛋鸡蛋品质的影响 Table 3 Effects of dietary BPP on egg quality of Jinghong No. 1 laying hens

由表4可知，饲粮中添加菌肽蛋白能显著提高京红1号蛋鸡盲肠内容物有益菌的数量，同时显著降低有害菌的数量(P<0.05)。与对照组相比，4%和8%菌肽蛋白组盲肠内容物中乳酸菌数量分别提高了18.74%和20.45%(P<0.05)；2%、4%、6%和8%菌肽蛋白组枯草芽孢杆菌数量分别提高了24.95%、37.42%、33.26%和46.60%(P<0.05)；2%、4%、6%和8%菌肽蛋白组大肠杆菌数量分别降低了16.18%、28.90%、19.22%和20.98%(P<0.05)。以盲肠内容物乳酸菌数量为评价指标，随菌肽蛋白添加水平的增加，乳酸菌数量呈二次曲线变化(P=0.041)，回归方程为：Y=-0.088 6X²+0.829 4X+7.014(R²=0.631 1，X=菌肽蛋白添加水平，Y=乳酸菌数量)。

表 4 (Table 4)

表 4 菌肽蛋白对京红1号蛋鸡盲肠内容物菌群数量的影响 Table 4 Effects of dietary BPP on the number of caecum content bacteria flora in Jinghong No. 1 laying hens lg(CFU/g) 项目 Items 菌肽蛋白水平 Bacterial peptide protein level/% P值 P-value 0 2 4 6 8 线性 Linear 二次 Quadratic 乳酸菌 Lactobacillus 7.63±0.95b 8.45±0.50ab 9.06±0.26a 8.31±0.42ab 9.19±0.23a 0.146 0.041 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 4.57±0.20c 5.71±0.31b 6.28±0.38ab 6.09±0.67ab 6.70±0.16a 0.134 0.037 大肠杆菌 Escherichia coli 6.92±0.44a 5.80±0.41b 4.90±0.20b 5.59±0.43b 5.72±0.27b 0.054 0.138

表 4 菌肽蛋白对京红1号蛋鸡盲肠内容物菌群数量的影响 Table 4 Effects of dietary BPP on the number of caecum content bacteria flora in Jinghong No. 1 laying hens

由表5可知，饲粮中添加菌肽蛋白对血清总蛋白、白蛋白含量及谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性无显著影响(P>0.05)。2%~8%菌肽蛋白组尿素氮含量显著低于对照组(P<0.05)。

表 5 (Table 5)

表 5 菌肽蛋白对京红1号蛋血清代谢生化指标的影响 Table 5 Effects of dietary BPP on the serum biochemical parameters of Jinghong No. 1 laying hens 项目 Items 菌肽蛋白水平 Bacterial peptide protein level/% 0 2 4 6 8 总蛋白 TP/(g/L) 61.11±4.29 61.88±1.98 67.18±3.62 62.50±4.14 62.66±3.92 白蛋白 ALB/(g/L) 41.66±0.91 40.77±0.97 43.71±1.43 42.80±1.35 42.05±1.28 尿素氮 UN/(mmol/L) 3.96±0.33a 2.86±0.08b 3.00±0.26b 2.85±0.29b 2.81±0.11b 谷草转氨酶 GOT/(IU/L) 113.07±11.91 102.28±10.24 108.27±4.95 142.20±23.80 108.89±18.31 谷丙转氨酶 GPT/(IU/L) 68.47±5.68 71.88±4.41 73.61±5.21 69.64±5.06 70.30±4.68

表 5 菌肽蛋白对京红1号蛋血清代谢生化指标的影响 Table 5 Effects of dietary BPP on the serum biochemical parameters of Jinghong No. 1 laying hens

豆粕经发酵处理后，大分子的大豆蛋白质被分解为小肽、氨基酸等多种小分子营养物质^[11]。小肽可直接或间接的参与机体代谢调节，并且能够促进钙、铁、铜和锌的被动转运过程及其在体内的储存^[12]。施用晖等^[13]报道，在蛋鸡基础饲粮中添加3%的肽制品能显著提高蛋鸡的产蛋率和饲料转化效率。同时，发酵后的豆粕，有效去除了胰蛋白酶抑制因子、植酸和大豆球蛋白等抗营养因子^[14]，提高了饲料中营养物质的利用率。蛋鸡饲粮中添加枯草芽孢杆菌及其发酵的豆粕可以显著提高生产性能^[15]。孙亚楠等^[12]研究发现，添加2％发酵豆粕可显著提高试验后期蛋鸡的产蛋率。本试验结果表明，饲粮中添加菌肽蛋白能显著提高蛋鸡的产蛋率。以产蛋率为评价指标，根据菌肽蛋白添加水平变化做二次曲线拟合分析，高峰后期京红1号蛋鸡菌肽蛋白最佳添加水平为4%。Chiang等^[16]报道，发酵豆粕可以显著提高肉鸡的日增重与饲料转化率。仔猪上的研究表明，利用Rhizopus subtilis发酵豆粕可显著提高仔猪的日增重和采食量^[17]。本试验中发现，随着菌肽蛋白添加水平的增加平均日采食量和平均蛋重略有升高，料蛋比稍有改善，但均未达到显著水平，这可能与试验所用蛋鸡的日龄(74周龄)有关，高峰后期产蛋鸡的经济性状变化受饲粮因素影响的敏感性较产蛋高峰期有明显的下降，其代偿性较强^[18]。

哈氏单位是评价鸡蛋蛋白品质的重要指标，哈氏单位越大说明蛋白越黏稠，蛋品质越好^[19]。Leeson等^[20]报道，小肽与蛋白的沉积有关，可使鸡蛋内卵黏蛋白增多，而卵黏蛋白与哈氏单位呈正相关关系。本试验中，添加菌肽蛋白能显著提高鸡蛋哈氏单位和蛋白高度，并且随着菌肽蛋白添加水平的增加蛋白高度逐渐升高。原因可能是菌肽蛋白与豆粕相比，经过生物化学反应后，大豆蛋白分解为小分子的蛋白质、小肽和游离氨基酸^[1]，使豆粕的可溶性及体外消化率得到明显提高^[17]，有利于蛋鸡对其蛋白质的消化吸收。同时，菌肽蛋白中的小肽、氨基酸等小分子物质可为机体提供更多的氮源，有利于蛋白质的沉积^[21]。本试验中以蛋白高度为评价指标，根据菌肽蛋白添加水平变化做二次曲线拟合分析，高峰后期京红1号蛋鸡菌肽蛋白最佳添加水平为4%。蛋壳厚度是反映蛋壳质量的重要指标，影响蛋鸡的产蛋率和破蛋率。饲粮中的营养水平如钙、磷、镁、锌、锰等矿物质和维生素D可显著影响蛋壳的厚度^[22]。Ilyas等^[23]报道，Aspergillus usamii发酵处理豆粕后，能将不可消化吸收的肌醇六磷酸转化成无机磷，显著改善磷的生物学利用率。通过X射线能谱研究，单位蛋壳钙绝对含量与蛋壳厚度之间存在必然联系^[24]。本试验中菌肽蛋白组蛋壳厚度均显著高于对照组。这还可能与菌肽蛋白富含小肽有关，小肽可作为配体，与多种矿物元素形成螯合物，促进矿物元素的吸收和利用^[25]，从而有利于蛋壳钙的沉积。

微生物发酵饲料能增加畜禽粪便中乳酸菌等有益菌数量，减少大肠杆菌和沙门氏菌等有害菌数量^[26]。枯草芽孢杆菌不仅能以芽孢形式耐受胃酸、胆盐而进入肠道，并在其中定植生长，而且能选择性增加鸡盲肠中的乳酸菌等有益菌群的数量^[27]。大肠杆菌是动物肠道中的一种条件性致病菌，对维持肠道微生物区系平衡及动物体的健康起到不可或缺的作用，只有当肠道微生物区系失去平衡时才会引发疾病。许丽惠等^[28]报道，在饲粮中用9%的发酵豆粕替代部分普通豆粕，能显著改善肉鸡盲肠微生物区系，减少盲肠大肠杆菌数量，并促进了乳酸菌的定植，与本试验结果一致。Mogilner等^[29]指出微生态制剂中的活菌进入动物胃肠道后可迅速定植并逐步成为优势菌群，同时其分泌的代谢物如有机酸、各种酶类和胆汁酸等降低了肠道内环境的pH，可抑制大肠杆菌的生长。本试验结果表明，添加一定水平的菌肽蛋白后，京红蛋鸡盲肠内容物大肠杆菌的数量较对照组呈显著下降趋势，乳酸菌和枯草芽孢杆菌数量显著增加，原因可能是菌肽蛋白含有的活菌数量较高，在一定层度上起到类似微生态制剂的功效。以盲肠内容物乳酸菌数量为评价指标，根据菌肽蛋白添加水平变化做二次曲线拟合分析，高峰后期京红1号蛋鸡菌肽蛋白最佳添加水平为4%。

机体蛋白质的沉积取决于蛋白质的合成、分解代谢速度。血清总蛋白和白蛋白的含量是反映机体蛋白质合成能力的重要指标^[30]。高含量的血清总蛋白和白蛋白，是蛋白质代谢旺盛的表现，有利于蛋白质的沉积。许丽惠等^[28]研究表明，饲粮中添加发酵豆粕能使黄羽肉鸡血清白蛋白和总蛋白含量升高。饲喂发酵豆粕的黑鲷鱼血清总蛋白的含量显著升高^[31]。在本试验中，京红1号蛋鸡饲粮中添加不同水平菌肽蛋白，其血清总蛋白和白蛋白含量均高于对照组。这一定程度上说明，菌肽蛋白能促进蛋鸡机体高峰后期蛋白质的合成。尿素氮是体内蛋白质降解的产物，当动物体内蛋白质的代谢状态发生变化时，尿素氮的含量也随之变化。一般情况下，蛋白质利用率越高，尿素氮含量越低^[32]。Feng等^[33]报道，肉鸡对发酵豆粕中氮的利用率显著高于普通豆粕。饲喂发酵豆粕的肉鸡血清尿素氮的含量显著降低^[11]，这与本试验结果一致。这可能与菌肽蛋白中胰蛋白酶抑制因子含量及其抗营养作用降低，蛋鸡体内内源蛋白质分解减弱，饲粮中蛋白质的利用率提高有关。这表明菌肽蛋白能够有效的促进蛋鸡对蛋白质的利用。

① 饲粮中添加一定水平的菌肽蛋白可显著改善蛋鸡肠道菌群的平衡，并且显著提高京红1号蛋鸡产蛋高峰后期的产蛋率、蛋壳厚度、蛋白高度、哈氏单位，降低尿素氮含量。

② 在本试验条件下，京红1号蛋鸡产蛋高峰后期(74～85周龄)玉米－豆粕型饲粮菌肽蛋白的最佳添加水平为4%。