锰是动物不可缺少的必需元素之一，是机体内多种酶的组成成分^[1]和激活剂^[2]，同时参与造血^[3]、免疫^[4]、生殖^[5]及氨基酸、脂肪、蛋白质和碳水化合物代谢^[6]等重要生命活动。目前关于水貂饲粮中锰添加的试验报道较少，Wood^[7]建议对繁殖期和生长期水貂锰添加量分别为44和40 mg/kg，此推荐量为水貂维持生命的最低需要量，同时该值被NRC(1982)参考。Erway等^[8]研究显示饲粮补充锰可以使水貂产仔数有所 增加。叶芪迁等^[9]报道母貂可发生锰中毒，但其 中毒量阈值没有确定。王夕国^[10]研究得出繁殖期母貂饲粮中锰的添加范围为50~100 mg/kg，饲粮中总锰水平为75~125 mg/kg时水貂能达到最佳繁殖性能。在鸡^[11]、猪^[12]、獭兔^[13]、鸭^[14]等动物上的大量研究表明适宜的饲粮锰水平能够提高动物的生长性能，对于育成期水貂饲粮锰水平对生长性能的影响目前未见报道，本试验拟通过研究饲粮锰水平对育成期水貂生长性能及血清生化指标的影响，为筛选育成期水貂饲粮锰的最适宜添加量提供科学依据，同时为水貂生产实践提供参考。

选取75只60日龄、体重相近的健康雄性水貂，随机分为5组，每组15个重复，每个重复1只水貂，单笼饲养，参考NRC(1982)水貂的相关饲养标准设计基础饲粮，其组成及营养水平见表1。选用硫酸锰作为锰源，在基础饲粮中分别添加0(Ⅰ组，作为对照组)、50(Ⅱ组)、100(Ⅲ组)、300(Ⅳ组)、600 mg/kg(Ⅴ组)锰，配制5种试验饲粮，基础饲粮中锰水平为43.69 mg/kg。预试期7 d，正试期60 d，试验开始时测定每只水貂的初始体重，每15 d称重1次，并记录数据。水貂每日08:00和15:00各饲喂1次，自由采食，自由饮水。

基础饲粮中干物质含量采用105 ℃烘干法测定，参照GB/T 6435—2006；粗蛋白质含量采用凯氏定氮法测定，参照GB/T 6432—1994；粗脂肪含量采用索氏抽提法测定，参照GB/T 6433—1994；粗灰分含量采用550 ℃灼烧法测定，参照GB/T 6438—1992；钙含量采用乙二胺四乙酸(EDTA)络合滴定法测定，参照GB/T 6436—1992；磷含量采用钒钼酸铵比色法测定，参照GB/T 6437—1992。

饲养试验结束后，每组分别选取8只水貂指尖消毒并采血5 mL，置于促凝固管中，静置待血清析出后3 500 r/min、4 ℃离心10 min，将分离出的血清分装在1.5 mL的Eppendor管中，置于-80 ℃中保存，备用。分别测定其中总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)含量及天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳糖脱氢酶(LDH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性。测定所用试剂盒全部购自中生北控有限公司，按照试剂盒说明书操作使用VITALIB-E全自动生化分析仪测定，GLOB含量为TP和ALB含量的差值。

使用SAS 9.0进行数据统计分析，采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行差异显著性检验。分析结果以“平均值±标准差”形式表示，其中P<0.05为差异显著，P>0.05为差异不显著。

表 1(Table 1)

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % % 项目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 海杂鱼 Sea fish 28.00 鸡肉 Chicken 14.00 腺胃 Proventriculus 12.00 猪肝 Pig liver 8.00 碎猪肉 Pork 3.00 膨化玉米 Extrusion corn 34.00 预混料 Premix1) 1.00 合计 Total 100.00 营养水平 Nutrient levels2) 粗灰分 Ash 10.99 粗蛋白质 CP 37.43 粗脂肪 EE 21.08 碳水化合物 Carbohydrate 26.70 锰 Mn/(mg/kg) 43.69 锌 Zn/(mg/kg) 14.43 铜 Cu/(mg/kg) 17.24 钙 Ca/(g/kg) 2.68 磷 P/(g/kg) 1.61 代谢能 ME/(MJ/kg) 18.41  1)预混料为每千克饲粮提供The premix provided the following per kg of the diet：VA 940 IU，VD3 250 IU，VB1 0.2 mg，VB2 0.5 mg，VB6 0.3 mg，叶酸 folic acid 0.8 mg，D-泛酸 D-pantothenic acid 1.0 mg，生物素 biotin 1 600 mg，Fe (as ferrous sulfate) 82.0 mg，Cu (as copper sulfate) 6.4 mg，I (as potassium iodide) 0.5 mg，Zn (as zinc sulfate) 100.0 mg，Se (as sodium selenite) 0.20 mg。  2)代谢能为计算值，其余为实测值。ME was a calculated value,while others were measured values.

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

由表2可知，饲粮锰水平对水貂的平均日采食量无显著影响(P>0.05)。60、75、90和105日龄时，各组水貂平均体重差异不显著(P>0.05)，120日龄时Ⅳ组水貂的平均体重显著高于未添加锰的对照组(P<0.05)，其他组间差异不显著(P>0.05)；60~75日龄平均日增重以Ⅳ组水貂最高，显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ组(P<0.05)，与Ⅲ组差异不显著(P>0.05)，同时Ⅲ组显著高于Ⅱ组(P<0.05)；76~90日龄平均日增重各组间差异不显著(P>0.05)；91~105日龄、106~120日龄平均日增重均 表现为Ⅳ组显著高于其他组(P<0.05)，其他各组 间差异不显著(P>0.05)。

表 2(Table 2)

表2 饲粮锰水平对育成期水貂生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary Mn level on growth performance of growing mink 项目 Items 日龄 Day of age 组别 Groups P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 平均日采食量 ADFI/g 60~120 80.44±1.98 81.84±4.83 81.89±6.69 80.06±3.62 80.83±4.73 0.261 4 平均体重 ABW/kg 60 0.83±0.04 0.84±0.05 0.83±0.03 0.84±0.05 0.84±0.04 0.873 8 75 1.16±0.11 1.16±0.07 1.17±0.16 1.20±0.21 1.18±0.12 0.463 1 90 1.37±0.08 1.38±0.13 1.38±0.12 1.40±0.15 1.38±0.17 0.295 7 105 1.46±0.17 1.47±0.21 1.48±0.16 1.52±0.19 1.48±0.17 0.196 3 120 1.58±0.10b 1.59±0.12ab 1.60±0.09ab 1.66±0.11a 1.60±0.14ab 0.046 4 平均日增重 ADG/g 60~75 22.02±1.98bc 21.41±2.01c 22.62±1.75ab 24.04±2.12a 22.56±1.08b 0.039 7 76~90 14.31±1.11 14.62±0.96 14.11±1.21 13.41±1.13 13.39±1.07 0.451 9 91~105 6.03±0.64b 6.14±0.33b 6.61±0.57b 8.02±0.42a 6.67±0.59b 0.030 1 106~120 8.11±0.51b 8.24±0.63b 8.29±0.46b 9.33±0.57a 8.14±0.59b 0.032 4  同行数据肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)，相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)。下表同。  In the same row,values with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05),while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表2 饲粮锰水平对育成期水貂生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary Mn level on growth performance of growing mink

由表3可知，血清中TP含量以Ⅳ组最高，显著高于其他组(P<0.05)，Ⅰ组最低，显著低于其他组(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ组间差异不显著(P>0.05)；Ⅳ组血清中ALB含量显著高于Ⅰ和Ⅱ组(P<0.05)，与其他2组差异不显著(P>0.05)；血清中UN含量以Ⅳ组最低，显著低于其他组(P<0.05)，其他各组间差异不显著(P>0.05)；Ⅳ组血清中ALT和AST活性显著高于其他组(P<0.05)，Ⅰ组显著低于其他组(P<0.05)，Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ组间差异不显著(P>0.05)。

表 3(Table 3)

表3 饲粮锰水平对育成期水貂血清中蛋白质代谢相关指标的影响 Table 3 Effects of dietary Mn level on serum protein metabolism related indices of growing mink 项目 Items 组别 Groups P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 总蛋白 TP/(g/L) 88.64±14.25c 93.32±9.17bc 106.01±10.54b 125.36±11.62a 99.68±9.58b 0.005 2 白蛋白 ALB/(g/L) 38.46±3.52b 41.52±4.12b 52.25±2.98ab 60.62±3.64a 51.24±4.22ab 0.041 7 尿素氮 UN/(mmol/L) 195.31±12.52a 193.26±13.81a 175.47±14.20ab 158.39±9.63b 179.62±10.35ab 0.023 1 丙氨酸氨基转移酶 ALT/(U/L) 182.69±22.68c 193.52±23.51b 224.21±21.85ab 248.56±19.52a 202.47±13.21b 0.008 9 天门冬氨酸氨基转移酶 AST/(U/L) 142.68±23.74c 159.37±19.48bc 181.58±15.68ab 225.86±17.24a 167.21±12.52b 0.014 2

表3 饲粮锰水平对育成期水貂血清中蛋白质代谢相关指标的影响 Table 3 Effects of dietary Mn level on serum protein metabolism related indices of growing mink

由表4可知，饲粮锰水平对水貂血清中ALP活性有显著影响(P<0.05)，随着饲粮锰水平的提高，血清ALP活性呈上升趋势，其中Ⅳ和Ⅴ组显著高于Ⅰ和Ⅱ组(P<0.05)。水貂血清中LDH、T-SOD和Mn-SOD活性各组间差异不显著(P>0.05)，但随着饲粮锰水平的提高均有上升趋势。

表 4(Table 4)

表4 饲粮锰水平对水貂血清中锰相关酶活性的影响 Table 4 Effects of dietary Mn level on serum Mn related enzyme activities of growing mink 项目 Items 组别 Groups P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 碱性磷酸酶 ALP/(U/L) 148.27±10.95c 162.64±21.14bc 194.28±13.56ab 234.69±17.17a 242.07±14.85a 0.006 2 乳酸脱氢酶 LDH/(U/L) 1 238.36±123.52 1 489.45±212.34 1 651.37±185.62 1 725.68±197.25 1 826.59±136.87 0.782 5 总超氧化物歧化酶 T-SOD/(U/mL) 85.46±6.85 87.21±5.23 86.54±7.84 87.89±7.29 89.22±4.71 0.623 1 锰超氧化物歧化酶 Mn-SOD/(U/mL) 21.68±6.98 22.04±7.29 22.15±5.87 23.17±6.23 23.85±7.12 0.069 2

表4 饲粮锰水平对水貂血清中锰相关酶活性的影响 Table 4 Effects of dietary Mn level on serum Mn related enzyme activities of growing mink

由表5可知，Ⅳ组血清中GLOB含量显著高于其他组(P<0.05)，其他各组间差异不显著(P>0.05)；血清中IgG含量各组间差异不显著(P>0.05)；血清中IgA和IgM含量均以Ⅳ组最高，显著高于Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组(P<0.05)，与Ⅴ组差异不显著(P>0.05)。

表 5(Table 5)

表5 饲粮锰水平对育成期水貂血清中免疫指标的影响 Table 5 Effects of dietary Mn level on serum immune indices of growing mink g/L 项目 Items 组别 Groups P值 P-value Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 球蛋白GLOB 50.42±8.97b 51.78±6.84b 53.88±5.12b 64.75±6.37a 48.52±4.81b 0.029 6 免疫球蛋白G IgG 2.61±0.02 2.62±0.01 2.62±0.03 2.63±0.04 2.62±0.01 0.537 6 免疫球蛋白A IgA 0.16±0.01b 0.15±0.02b 0.17±0.01b 0.23±0.03a 0.21±0.05ab 0.044 1 免疫球蛋白M IgM 2.56±0.06b 2.58±0.12b 2.58±0.07b 2.69±0.11a 2.61±0.09ab 0.038 2

表5 饲粮锰水平对育成期水貂血清中免疫指标的影响 Table 5 Effects of dietary Mn level on serum immune indices of growing mink

研究表明饲粮中的锰能够提高啮齿动物的生长率^{[15, 16]}，本试验结果得出饲粮锰水平可影响育成期水貂的平均体重和平均日增重。育成期是水貂生长发育最旺盛的时期，饲粮锰可能通过参与水貂骨骼生长^[17]、采食量^[18]及营养物质代谢^[19]发挥其营养作用来影响水貂生长发育。本试验中水貂各阶段的平均体重和平均日增重随着饲粮锰水平的升高有先升高后降低的趋势，其中饲粮中添加300 mg/kg锰时水貂试验末平均体重和平均日增重均最高。在其他动物上，罗绪刚等^[11]研究表明饲粮锰水平在90~96 mg/kg时肉仔鸡增重最快，孟轲音^[20]研究得出獭兔基础饲粮中添加35 mg/kg锰时生长性能最佳，王宝维等^[21]研究得出1~4周龄五龙鹅饲粮中添加105.71~117.74 mg/kg锰时生长性能最佳，王淑梅^[22]研究得出饲粮中添加90 mg/kg锰时育成期蛋鸭日增重最高。水貂饲粮锰最适宜添加量较其他动物高，可能是由动物品种差异导致，水貂锰中毒的阈值目前未见报道，本试验条件下饲粮中添加600 mg/kg锰时水貂未出现中毒现象，此外，本试验中水貂在育成初期增重较育成后期快，锰是骨骼生长的重要营养元素，育成期需要量也较其他生物学时期高，这与前人在水貂上得出的规律^[23]相同。

血清TP含量高低反映了机体蛋白质的吸收和代谢状况，血液中含量高，可促进机体蛋白质合成。动物生长发育阶段或者消化道功能增强时，血液中需相对较多的ALB来运输合成机体组织所需的原料和代谢废物。本试验中，当饲粮中添加300 mg/kg锰时，血清中TP和ALB含量最高。张丽娜^[24]对小鼠的试验结果表明，补锰160 mg/kg时血清TP含量达到最高值。UN是蛋白质和氨基酸代谢的终产物，受饲粮中氨基酸量与质的影响，其含量与体内氮沉积率、蛋白质或氨基酸利用率有显著负相关^[25]。本试验中，当饲粮中添加300 mg/kg锰时血清中UN含量最低，说明饲粮锰通过影响饲粮中蛋白质代谢发挥营养作用。ALT和AST这2种酶活性的高低是反映蛋白质合成和分解代谢的重要指标，本试验中，这2种酶在血清中的活性随饲粮锰水平的升高均呈现先升高后降低的趋势，当饲粮锰添加量为300 mg/kg时活性均达到最高。这与王夕国^[10]对繁殖期水貂的研究结果相一致，但与孟轲音等^[13]报道的锰对生长獭兔血清ALT、AST活性有不同程度的抑制作用的结果不一致，出现这种现象的原因可能与物种不同有关，也可能与动物的不同生长发育时期有关，有待于深入的研究。

罗绪刚等^[26]研究表明，锰可作为ALP的激活剂，添加锰可提高ALP活性。本试验结果显示，随着饲粮锰水平的升高血清ALP活性呈上升趋势，这与王夕国^[10]在繁殖期水貂上的报道相一致。才秀莲等^[27]研究表明，随着锰染毒剂量的升高和染毒时间的延长，大鼠睾丸组织中LDH活性呈下降趋势，表明过量锰可抑制LDH的活性。曹盛丰等^[28]报道，饲粮中锰缺乏或过量引起公鸡血清、肝脏和睾丸LDH活性同步下降，LDH活性的下降同锰在这些组织大量积聚有关。本试验中，随着饲粮中锰水平的升高，血清中LDH活性呈先升高后降低的趋势，以Ⅳ组最高，表明饲粮适宜锰水平可以提高血清中LDH的活性。超氧化物歧化酶(SOD)是能够有效清除超氧化物阴离子自由基的一类极重要的抗氧化酶，在机体的氧化与抗氧化平衡中发挥着极其重要的作用，能够保护机体免受损伤。本试验结果显示，饲粮锰水平对血清T-SOD、Mn-SOD活性均无显著影响，可能是由于基础饲粮中作为Mn-SOD必需的金属辅基的锰已经基本达到饱和状态，因此在此基础饲粮中添加锰作用不明显，王夕国^[10]在繁殖期水貂上、孟轲音等^[13]在獭兔上及陈寒清等^[29]在产蛋母鸡上均得到了相同的结果。虽然本试验中饲粮锰水平对血清中Mn-SOD活性的影响不显著，但随着饲粮中锰水平的提高，水貂血清中Mn-SOD活性也呈现了升高趋势。庄怀飞等^[30]研究表明在饲粮中添加锰能够显著提高荷斯坦公牛血清中Mn-SOD活性，田立蓉^[31]在小鼠上也得到了同样的结果。

免疫球蛋白是血清TP的组成部分，能够直接反映水貂机体的免疫力。目前的初步研究认为，充足的锰氧结构是正常抗体产生的先决条件，且钙与锰激活淋巴细胞的协同作用可增强机体免疫力^{[32, 33]}。缪其宏^[34]结合动物试验发现，锰盐进入体内可提高免疫球蛋白的含量。本试验中，当育成期水貂饲粮中添加300 mg/kg锰时，水貂血清中GLOB、IgG、IgA和IgM含量均高于其他组，这与王艳立等^[35]对肉仔鸡、曹阳等^[36]对绒山羊和陈小敏等^[37]对触锰工人的研究结果相似。锰能够显著提高血清中GLOB含量，但饲粮中锰水平过高或过低均不利于蛋白质的合成。锰能提高动物免疫系统功能，可能是由于其参与了核酸和蛋白质的代谢，同时，GLOB是体液免疫的重要指标^[38]，而适宜锰水平可提高血清中GLOB含量。

本试验条件下，当饲粮中添加300 mg/kg的锰，饲粮中锰水平为343.69 mg/kg时，可提高育成期水貂的生长性能，同时可提高血清蛋白质代谢相关指标含量和锰相关酶活性及机体免疫力。