拉氏鱥(Phoxinus lagowskii)，属鲤形目，鲤科，雅罗鱼亚科， 鱥属，为小型鱼类，俗名柳根鱼，分布于我国的黑龙江干支流以及热河、辽河至长江流域等地，主要在山区溪流等水质清澈度高的水体中生活^{[1, 2]}。拉氏鱥 肉嫩味美、营养丰富，且抗病力强、生长速度快，具有广阔发展前景。国内的学者已经对拉氏鱥 人工繁殖、池塘驯化、养殖技术、适宜栖息地、营养成分分析与营养价值评价等方面进行了初步研究^{[3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10]}。拉氏鱥 为杂食性鱼类，也可以投喂人工配合饲料，目前已有专家学者对同一亚科的丁鱥 (Tinca tinca)进行了营养需要等方面的研究^{[11, 12]}，而关于拉氏鱥 适宜蛋白质和脂肪需求量研究在国内和国外还未见报道。本试验采用双因素方差分析，研究不同蛋白质、脂肪水平饲料对拉氏鱥 幼鱼生长、体成分和免疫力的影响，以寻找出符合该鱼最佳生长且最科学的蛋白质和脂肪需求量，为拉氏鱥 饲料的配制提供理论依据和参考。

试验在辽宁省铁岭市铁岭县青年水库叉尾 良种场进行，试验池塘为土池塘，面积约6亩(1亩≈667 m²)，水深1.6 m。用木板在水面搭建架子，将36个30目的聚乙烯网箱(370 cm×170 cm×140 cm)固定在架子上，以高密度聚乙烯泡沫做浮子，网箱四角用坠石做沉子。

选取健康、无伤病、体长与体重基本一致[平均体重(27.60±0.13) g，平均体长(11.60±0.09) cm]的拉氏鱥 幼鱼1 080尾，随机放入36个网箱内，每个网箱放养30尾。将36个网箱随机分为12个组，每组3个重复(网箱)。试验鱼在网箱中驯化1周，每天06:30、10:30、14:30和18:30各投喂饲料1次。

试验设4个蛋白质水平，分别为23%、28%、33%、38%，每个蛋白质水平下设3个脂肪水平，分别为5%、8%、11%。以鱼粉和豆粕为蛋白质源，豆油为脂肪源，糊精为糖源，共配制12种试验饲料。试验饲料的总糖含量在25%左右，蛋能比在18.71~31.30 mg/kJ范围内(以微晶纤维素作为调节物质，不计算在内)，用小型环模饲料机制粒，粒径为2.0 cm。

表 1(Table 1)

表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis) % 项目 Items 组别 Groups 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 原料 Ingredients 鱼粉 Fish meal 29.0 29.0 29.0 35.5 35.5 35.5 41.5 41.5 41.5 47.5 47.5 47.5 豆粕 Soybean meal 8.0 8.0 8.0 10.0 10.0 10.0 12.0 12.0 12.0 14.0 14.0 14.0 糊精 Dextrin 20.0 20.0 20.0 18.0 18.0 18.0 16.0 16.0 16.0 14.0 14.0 14.0 豆油 Soybean oil 2.1 5.0 8.1 1.5 4.5 7.5 0.9 3.9 6.9 0.3 3.3 6.3 维生素矿物盐预混料 Vitamin and mineral premix 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 7.0 氯化胆碱 Choline chloride 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 纤维素 Cellulose 31.7 28.8 25.7 25.8 22.8 19.8 20.4 17.4 14.4 15.0 12.0 9.0 磷酸二氢钙 Ca(H2PO4)2 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 合计 Total 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 营养水平 Nutrient levels 干物质 DM 90.37 89.72 90.66 89.56 90.57 88.59 90.37 90.16 89.46 90.43 88.68 90.22 粗脂肪 EE 5.13 8.10 11.24 5.10 8.16 11.08 5.16 8.28 11.29 5.07 8.24 11.32 粗蛋白质 CP 22.98 23.24 23.07 27.90 28.26 28.02 33.09 33.28 33.12 37.93 37.98 38.11 粗灰分 Ash 5.47 5.63 5.73 5.39 5.66 5.93 5.28 5.58 5.62 5.83 5.74 5.93 总糖 Total carbohydrate 25.51 25.23 25.47 24.79 24.88 24.58 24.01 24.25 24.17 23.21 23.35 23.16 总能 Gross energy/(kJ/g) 10.03 11.14 12.33 10.72 11.94 12.95 11.48 12.72 13.81 12.12 13.34 14.49 蛋能比 P/E/(mg/kJ) 22.91 20.86 18.71 26.03 23.67 21.64 28.82 26.16 23.98 31.30 28.47 26.30  维生素矿物盐预混料为每千克饲料提供Vitamin and mineral premix provided the following per kg of diets:VA 60 000 IU,VD3 20 000 IU,VE 500 mg,VK3 50 mg,VB6 100 mg,VB1 120 mg,VB12 0.5 mg,VB2 200 mg,VC 4 000 mg,泛酸钙 calcium pantothenate 400 mg,叶酸 folic acid 32 mg,烟酸 nicotinic acid 500 mg,生物素 biotin 4 mg,食盐 NaCl 60 000 mg,肉毒碱carnitine 2 000 mg,总磷 total phosphorus 32 000 mg,胆碱 choline 15 000 mg,FeSO4 2 000 mg,CuSO4·5H2O 150 mg,ZnSO4·7H2O 500 mg,MgSO4·H2O 2 500 mg,MnSO4·H2O 250 mg,KI 20 mg,CoCl2·6H2O 25 mg,Na2SeO3 5 mg。

表1 试验饲料组成及营养水平(干物质基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (DM basis)

试验水源来自铁岭县青年水库，试验期间水温(23±4) ℃，pH在7.6左右。每个网箱放1个气石，24 h充氧。养殖水体透明度在20~30 cm，氨氮(NH₃-N)浓度＜0.4 mg/L，每天投喂4次，分别在06:30、10:30、14:30和18:30，根据剩余残饵量及体重变化来调整投喂量，每隔15 d测定1次体重，投喂量为平均体重的5%，饲养时间为60 d。

在试验结束后，每组挑选25尾鱼进行攻毒试验。病原菌采用的是嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)，由辽宁省水生动物病害防治重点实验室提供，将2次活化后的嗜水气单胞菌用无菌生理盐水稀释，通过预试验确定选用的浓度约为1×10⁷ CFU/mL。试验鱼按每100 g体重腹腔注射菌液1.0 mL进行攻毒，注射后将试验鱼放入塑料水槽中，水体24 h连续充氧，观察鱼体死亡情况并统计。

式中：W_t为终末体重(g)；W₀为初始体重(g)；d为饲养天数(d)；N_t为终末尾数；N₀为初始尾数；F为投饲量(g)；CP为饲料中粗蛋白质含量(%)。

样品中水分、粗灰分、粗蛋白质、粗脂肪含量分别采用恒温干燥法、马福炉(550 ℃)灼烧法、凯氏定氮法和索氏抽提法测定；总糖含量的测定采用3,5-二硝基水杨酸法；微机量热仪测定总能^{[13, 14]}。

试验数据用平均值±标准误(mean±SE)表示。4个蛋白质水平和3个脂肪水平数据采用SPSS 17.0软件进行双因素方差分析，4个蛋白质水平之间的数据和3个脂肪水平之间的数据采用SPSS 17.0软件进行单因素方差分析，SNK检验和Duncan氏法多重比较组间差异，P＜0.05表示差异显著^[15]。

表2列出了饲养60 d后各组拉氏鱥 幼鱼的增重率、特定生长率、饲料系数、蛋白质效率和存活率。从中可以看出，饲料蛋白质水平对拉氏鱥 幼鱼的增重率、特定生长率、蛋白质效率和饲料系数有显著或极显著影响(P＜0.05或P＜0.01)，饲料脂肪水平对拉氏鱥 幼鱼的蛋白质效率和饲料系数有显著影响(P＜0.05)，但饲料中蛋白质和脂肪水平对各生长性能指标均无显著交互作用(P＞0.05)。28%蛋白质组的增重率、蛋白质效率显著高于其他3组(P＜0.05)，而饲料系数则显著低于其他3组(P＜0.05)，同时该组的特定生长率显著高于32%和36%蛋白质组(P＜0.05)。8%脂肪组的蛋白质效率显著高于其他2组(P＜0.05)，其饲料系数仅显著低于11%脂肪组(P＜0.05)，与5%脂肪组差异不显著(P＞0.05)。

综合生长、蛋白质利用率和饲料利用情况，拉氏鱥 适宜的蛋能比水平为23.67~26.03 mg/kJ，饲料蛋白质水平为23%~28%，脂肪水平为5%~8%。

经过了60 d的饲养，各组拉氏鱥 幼鱼全鱼粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分和水分含量见表3。从表中可知，饲料蛋白质水平对全鱼粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量有显著影响(P＜0.05)，饲料脂肪水平对全鱼粗脂肪和粗灰分含量有显著影响(P＜0.05)，但饲料中蛋白质和脂肪水平对各体成分指标均无显著交互作用(P＞0.05)。随着饲料中蛋白质水平的升高，全鱼粗蛋白质、粗脂肪和粗灰分含量均呈现出先升高后降低的趋势，最高值出现在28%蛋白质组。随着饲料中脂肪水平的升高，全鱼粗脂肪含量呈现升高的趋势，但8%和11%脂肪组差异不显著(P＞0.05)。

表 2(Table 2)

表2 摄食不同蛋白质和脂肪水平饲料的拉氏鱥 幼鱼的生长性能 Table 2 Growth performance of juvenile Phoxinus lagowskii fed the diets containing various protein and lipid levels (n=3) 组别 Groups 增重率 WGR/% 特定生长率SGR/(%/d) 蛋白质效率 PER/% 饲料系数FCR 存活率SR/% 1 142.97±4.65cde 1.53±0.05bcde 1.41±0.16d 1.39±0.02bc 86.67±6.94 2 150.61±8.03cd 1.57±0.01bcd 1.76±0.22c 1.54±0.04c 88.89±2.22 3 161.90±12.79bc 1.60±0.08bc 2.30±0.11b 1.58±0.14c 83.33±5.09 4 179.51±7.13ab 1.62±0.03b 2.13±0.09b 1.52±0.03c 86.67±6.94 5 182.96±5.13a 1.74±0.02a 2.63±0.06a 0.86±0.05a 90.00±5.09 6 141.79±7.68cde 1.50±0.03d 1.75±0.14c 1.54±0.06c 80.00±1.92 7 138.25±2.72de 1.45±0.02de 1.51±0.18d 1.63±0.10c 86.00±0.44 8 143.97±5.18cde 1.49±0.04cde 1.77±0.21c 1.21±0.08b 85.56±5.29 9 138.57±4.09de 1.47±0.11cde 1.52±0.07d 1.50±0.12c 93.33±0.14 10 126.11±7.78e 1.42±0.05e 1.43±0.13d 1.25±0.10b 84.40±5.88 11 144.97±5.00cde 1.49±0.03cde 1.11±0.08e 1.86±0.06d 94.40±5.56 12 135.52±4.02de 1.43±0.03e 1.07±0.24e 1.97±0.09d 88.89±1.11 蛋白质水平 Protein level/% 23 151.83±3.72b 1.57±0.02a 1.83±0.03b 1.51±0.04b 86.30±2.77 28 168.09±3.72a 1.58±0.02a 2.17±0.03a 1.31±0.04a 85.56±2.77 33 140.26±3.72c 1.48±0.02b 1.77±0.03b 1.47±0.04b 88.52±2.77 38 135.53±3.72c 1.45±0.02b 1.23±0.03c 1.70±0.04c 89.26±2.77 脂肪水平 Lipid level/% 5 146.71±3.22 1.51±0.02 1.62±0.03b 1.45±0.04ab 86.11±2.40 8 155.63±3.22 1.52±0.02 1.82±0.03a 1.37±0.04a 89.72±2.40 11 144.45±3.22 1.50±0.02 1.66±0.03b 1.65±0.04b 86.39±2.40 双因素方差分析 Two-way ANOVA 蛋白质水平 Protein level * * * * * * ns 脂肪水平 Lipid level ns ns * * ns 互作 Interaction ns ns ns ns ns  同列数据肩标不同字母表示差异显著(P＜0.05)；*表示差异显著(P＜0.05)，* *表示差异极显著(P＜0.01)，ns表示无显著差异(P>0.05)。下表同。  Values in the same column with different letter superscripts were significantly different (P＜0.05)；* represented significant difference (P＜0.05),* * represented extremely significant difference (P＜0.01),and ns represented no significant difference (P>0.05). The same as below.

表2 摄食不同蛋白质和脂肪水平饲料的拉氏鱥 幼鱼的生长性能 Table 2 Growth performance of juvenile Phoxinus lagowskii fed the diets containing various protein and lipid levels (n=3)

表 3(Table 3)

表3 摄食不同蛋白质和脂肪水平饲料的拉氏鱥 幼鱼的体成分(湿重基础) Table 3 Body composition of juvenile Phoxinus lagowskii fed the diets containing various protein and lipid levels (wet weight basis,n=3) % 组别 Groups 粗蛋白质 Crude protein 粗脂肪 Crude lipid 粗灰分 Ash 水分 Moisture 1 14.75±0.10cd 7.01±0.12d 3.46±0.07d 74.14±1.22bc 2 15.49±0.17b 7.27±0.05cd 3.00±0.12g 74.08±2.17c 3 15.44±0.18b 8.77±0.23a 3.70±0.07b 71.21±1.16e 4 16.13±0.20a 7.62±0.07bc 3.86±0.14a 71.60±2.25e 5 16.59±0.06a 8.14±0.04b 3.51±0.08cd 70.54±2.27f 6 16.19±0.13a 8.57±0.13a 3.28±0.06e 71.42±1.31e 7 16.27±0.17a 8.81±0.09a 3.59±0.12bc 70.39±1.11f 8 14.91±0.09c 8.01±0.11b 3.22±0.23ef 71.94±2.34e 9 14.88±0.05c 7.49±0.15bc 3.22±0.10ef 74.63±3.09b 10 14.85±0.14c 7.54±0.22bc 3.07±0.08g 73.26±2.10d 11 14.90±0.04c 8.61±0.12a 3.21±0.06fg 71.78±2.18e 12 14.35±0.11d 7.03±0.09d 2.99±0.11g 75.47±0.22a 蛋白质水平 Protein level/% 23 15.22±0.09b 7.68±0.08b 3.39±0.11b 73.14±1.14 28 16.31±0.09a 8.11±0.08a 3.55±0.11a 71.19±1.14 33 15.36±0.09b 8.11±0.08a 3.35±0.11b 72.32±1.14 38 14.70±0.09c 7.73±0.08b 3.06±0.11c 73.50±1.14 脂肪水平 Lipid level/% 5 15.50±0.08 7.75±0.07b 3.51±0.11a 72.35±1.00 8 15.47±0.08 8.01±0.07a 3.21±0.11c 72.09±1.00 11 15.22±0.08 7.96±0.07a 3.30±0.11b 73.18±1.00 双因子方差分析 Two-way ANOVA 蛋白质水平 Protein level * * * * ns 脂肪水平 Lipid level ns * * ns 互作 Interaction ns ns ns ns

表3 摄食不同蛋白质和脂肪水平饲料的拉氏鱥 幼鱼的体成分(湿重基础) Table 3 Body composition of juvenile Phoxinus lagowskii fed the diets containing various protein and lipid levels (wet weight basis,n=3)

在嗜水气单胞菌攻毒12 h后，拉氏鱥 幼鱼就不同程度表现出由嗜水气单胞菌引起的典型的出血性败血症，如肛门红肿、鳍条基部和体表充血等症状。攻毒48 h后，1~12组的存活率依次为76%、64%、60%、84%、60%、52%、48%、36%、40%、44%、36%、32%。通过数据统计分析，摄食蛋白质水平在23%~28%、脂肪水平在5%~8%的试验饲料的试验鱼的存活率较高，说明其抗病能力强，免疫力好。

蛋白质和脂肪是鱼类饲料组成定量的最重要的基础参数，饲料中的蛋白质能给动物机体提供必需的氨基酸，饲料中的脂肪能给动物生长提供必需的脂肪酸，使体内的脂溶性维生素更好地被吸收利用^[16]，合适的蛋白质和脂肪水平对于鱼类的生长起到至关重要的作用^[17]。拉氏鱥 属于杂食性鲤科鱼类，有关该鱼人工配合饲料的营养水平还没有学者专门进行研究。如果在实际生产中蛋白质水平过高，会导致部分蛋白质源被浪费，从而污染水质和提高饲料成本；如果蛋白质水平过低，容易造成拉氏鱥 在养殖过程中营养素摄入不均衡。同样，饲料中脂肪水平过高或者过低也会影响拉氏鱥 的生长。因此，研究拉氏鱥 的适宜蛋白质和脂肪需求量具有重要意义。

目前，鱼类饲料中适宜蛋能比差异较大，主要是由鱼的种类、年龄、天气、水温环境、食性、饲料蛋白质源的质量、非蛋白质能源质量以及计算总能时所采用生理数值的不同而导致的^{[18, 19, 20]}。

在本试验中，随着饲料中蛋白质水平的升高，试验鱼的特定生长率和蛋白质效率出现先升高后降低的趋势，鱼类的最大生长并未发生在最高蛋白质水平组，而是在较低的蛋白质水平组，这与Samantaray等^[21]的研究结果相一致，这说明此时饲料中的蛋白质和能量达到了平衡状态。另外，通过试验数据发现，在适宜蛋白质水平(28%)下，适当增加饲料中脂肪水平可以提高拉氏鱥 幼鱼的特定生长率与饲料的蛋白质效率，说明饲料中的脂肪起到了节约蛋白质的作用，这与Ai等^[22]的研究结果相似。在本试验中，当蛋能比为23.67~26.03 mg/kJ，蛋白质水平为23%~28%，脂肪水平为5%~8%时，拉氏鱥 幼鱼的特定生长率和蛋白质效率达到最大值，且饲料系数达到了最小值，这一研究结果与张萍等^[23]在鲫鱼上所得结论相似，说明食性相同的同科鱼类对营养需求相近。有学者研究发现，饲料中蛋白质和脂肪水平对鱼类的存活率没有显著影响^{[24, 25]}，这与本试验结果一致。

鱼体蛋白质含量的增加可作为鱼类生长的一个最重要的标志。本试验结果表明，全鱼粗蛋白质含量从低蛋白质组(23%蛋白质组)出现稳步上升，在中蛋白质组(28%蛋白质组)达到了最大值，之后在高蛋白质组(33%、38%)开始降低，初步分析可能是拉氏鱥 幼鱼只有在合适的蛋能比范围内才能获得最大的生长，饲料中过高水平的蛋白质没有被机体利用合成鱼体蛋白质，反而会被当做能量消耗掉，这和Samantaray等^[21]在鳢鱼(Channa striata)上以及温小波等^[26]在中华鲟(Acipenser sinensis)上的研究结果相似。本试验所得数据还显示，在中低蛋白质水平(23%~28%)下，随着饲料中脂肪水平的升高，全鱼粗脂肪含量有升高的趋势；但是在高蛋白质水平(33%~38%)下，随着饲料脂肪水平的升高，全鱼粗脂肪含量则无升高的趋势。分析原因，作者认为当拉氏鱥 幼鱼对蛋白质需求得不到满足或超出其生长需求量的时候，非蛋白质能源(脂肪、糖类等)不能代替蛋白质来提高生长，这与Peres等^[27]、Company等^[28]在欧洲鲈(Dicentrarchus labrax)上以及刘永坚等^[29]在红姑鱼(Sciaenops ovellatus)上所得结果一致。

嗜水气单胞菌广泛分布于自然界的各种水体中，是多种水生动物的原发性致病菌，为条件致病菌，是典型的人、兽、鱼共患病原菌。嗜水气单胞菌在水温14.0～40.5 ℃范围内都可繁殖，且毒性很强，通常作为致病菌进行攻毒试验^{[30, 31]}，试验动物的存活率可以综合反映该动物的免疫力^[32]。本试验发现，在拉氏鱥 幼鱼注射嗜水气单胞菌后12 h，不同程度出现了典型的出血症状，在24 h后达到死亡的高峰，这与徐磊等^[33]的研究结果相一致。攻毒48 h后，低、中蛋白质组(23%和28%蛋白质组)的存活率高于高蛋白质组(33%和38%蛋白质组)，低脂肪组(5%脂肪组)的存活率高于其他2个脂肪组(8%和11%组)。蔡春芳等^[34]研究发现，体脂含量的增加与免疫力下降有一定的相关性，这与本试验结果相一致。

综合生长、体成分和免疫力得出，拉氏鱥 幼鱼饲料适宜的蛋能比为23.67~26.03 mg/kJ，蛋白质水平为23%~28%，脂肪水平为5%~8%。