大豆油是水产商品饲料,是淡水鱼饲料中常用的优质脂肪源。随着水产养殖业和饲料工业的快速发展,大豆油消耗量日益剧增,价格大幅升高,其在水产饲料中的使用量逐渐受到了限制[1]。如何用更加廉价、优质的油脂替代大豆油已成为了水产饲料工业研究的热点之一。棕榈油(palm oil)是世界油脂市场重要的组成部分,占世界油脂总产量的比例超过30%,20世纪70年代以来棕榈油产量是各植物油脂中增长最快的,2012年世界棕榈油产量已超过6 200万t[2]。棕榈油主要含棕榈酸、油酸和亚油酸,饱和脂肪酸含量约为50%、单不饱和脂肪酸含量约为40%、多不饱和脂肪酸含量约为10%,其中单不饱和脂肪酸主要为油酸,多不饱和脂肪酸主要为亚油酸,并富含维生素E、γ-生育三烯、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、叶黄素等,是鱼油、大豆油的适宜替代源之一[3]。研究发现,棕榈油替代一定比例鱼油对花鲈(Lateolabrax maculatus)[4]、非洲鲶鱼(Clarias gariepinus)[5]、大西洋鲑(Salmo salar L.)[6]、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)[7]、欧洲鲈(Dicentrarhus labrax L.)[8]的生长性能和饲料利用率无显著影响。程民杰[9]报道,半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)饲料油脂含量为10%时,棕榈油替代饲料中32%~60%的鱼油有利于半滑舌鳎的生长和机体健康,可降低饲料系数和提高肌肉营养组成。
罗非鱼(Oreochromis niloticus)属亚热带鱼类,吉富罗非鱼(genetically improved farmed tilapia,GIFT)是近年经过遗传育种选育后的优良品系,其生长速度快,肉质丰满、细嫩,出肉率高,是华南地区主要的养殖品种之一,也是我国出口创汇重要水产养殖品种之一,具有重要的市场经济价值。近年来,众学者研究了罗非鱼营养需求量、健康免疫等,但罗非鱼饲料中大豆油替代源的研究尚未见报道。因此,本文研究了不同比例棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、肌肉营养组成和血清生化指标的影响,以期为棕榈油在罗非鱼饲料中的应用提供理论依据。
1 材料与方法 1.1 棕榈油试验用棕榈油购于益海(广州)粮油工业有限公司,为印度尼西亚棕榈油,熔点为24 ℃。使用气质联用仪(美国Agilent 6890N-5975)进行脂肪 酸组成分析[分析柱:Agilent DB-23(30 mm× 0.25 mm×0.25 μm),色谱和质谱条件参照刘穗华等[10]的方法],试验用棕榈油的C14 ∶ 0、C16 ∶ 0、C18 ∶ 0、C18 ∶ 1、C18 ∶ 2、C18 ∶ 3、C20 ∶ 0、C20 ∶ 1含量分别为0.94%、38.45%、3.78%、44.34%、11.22%、0.22%、0.35%、0.19%,以上测定结果为占总脂肪酸的百分比。
1.2 试验饲料以豆粕、菜籽粕、玉米蛋白粉为主要蛋白质源,大豆油为主要脂肪源,高筋面粉为主要碳水化合物源配制基础饲料(G0,作为对照),用棕榈油等量替代基础饲料中25%(G25)、50%(G50)、75%(G75)、100%(G100)的大豆油,配制4种替代饲料。5种试验饲料等氮(31.60%)等脂(9.30%),其组成及营养水平见表1,脂肪酸组成见表2。试验饲料各原料混合均匀后,经立式超微粉碎机(利达华 LDSWFL-130)粉碎,再用BUHLER-125双螺杆挤压膨化制粒机制成直径为1.50 mm的膨化饲料,室温保存备用。
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表 1 试验饲料组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) |
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表 2 试验饲料脂肪酸组成(风干基础,占总脂肪酸的百分比) Table 2Fatty acid composition of experimental diets (air-dry basis,percentage of total fatty acids) |
试验在广东省农业科学院广州国家农业科技园区的室内循环水养殖系统中进行。试验鱼购于佛山市南海通威水产科技有限公司,购回后暂养于广州国家农业科技园区的室外网箱(3.0 m×3.0 m×3.0 m)中,每天用广东通威151高档鱼种膨化配合饲料饱食投喂2次(08:30、17:00),驯养2周。试验用养殖系统为室内循环水养殖系统,由24个直径80 cm、高70 cm的圆柱形玻璃纤维桶组成,容水量约为300 L。试验开始时,挑选大小均匀、体质健壮、体表无外伤、平均体重为8.80 g吉富罗非鱼幼鱼600尾,分配于15个养殖桶中,每桶放养40尾。将15个养殖桶随机分为5个组,每组3个重复,分别投喂对照组饲料和4种替代饲料,并按照对应饲料编号记为G0、G25、G50、G75、G100组。每日于08:30、17:00投饲,投饲量为体重的2%~3%,并根据摄食和生长情况调节。每天记录投饲量、水温和死亡情况。试验期间,24 h不间断曝气,溶氧浓度>8.0 mg/L,自然光源,平均水温28.8 ℃,氨氮浓度<0.06 mg/L,亚硝酸盐浓度<0.05 mg/L,pH 7.6~8.0。试验期为56 d。
1.4 样品采集与指标分析试验开始时,选取体重与试验鱼初始体重相近的鱼20尾,-20 ℃冰箱中保存备用。养殖试验结束时,停食24 h,每桶幼鱼分别称重和统计数目。每桶随机取5尾鱼,尾静脉取血混合后于4 ℃ 4 000 r/min离心10 min制备血清样品,-80 ℃冰箱保存备用,用于血清生化指标测定。每桶随机取5尾鱼,用于形体指标测定。每桶随机取5尾鱼,取同侧背肌混合后,-20 ℃冰箱保存备用,用于肌肉营养组成测定。
饲料、肌肉样品中水分含量采用105 ℃常压干燥法(GB/T 6435—1986)测定,粗蛋白质含量采用凯氏定氮法(GB/T 6432—1994)测定,粗脂肪含量采用乙醚抽提法(GB/T 6432—1994)测定,粗灰分含量采用550 ℃灼烧法(GB/T 6438—1992)测定。饲料中钙含量采用乙二胺四乙酸(EDTA)滴定法(GB/T 6436—2002)测定,总磷含量采用钼黄比色法(GB/T 6437—2002)测定,粗纤维含量采用酸碱消煮过滤法(GB/T 5009.10—2002)测定。
血清胆固醇(cholesterol,CHOL)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和总蛋白(total protein,TP)含量及谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(glutamic-oxalacetic transaminase,AST)活性采用罗氏全自动生化分析仪(MODULAR P800,瑞士)测定。
1.5 指标计算


试验数据用平均值±标准差表示,采用SPSS 19.0软件进行统计分析。先对试验数据开展方差齐性检验,如果满足方差齐性条件则进行单因素方差分析(one-way ANOVA),差异显著再用Tukey’s检验方法进行多重比较;如果方差齐性条件不满足,则用Dunnett’s T3检验法进行多重比较。P<0.05表示差异显著。
2 结果与分析 2.1 棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼生长性能的影响由表3可知,棕榈油替代不同比例的大豆油对吉富罗非鱼幼鱼的终末体重、WGR、SGR、FI、FCR、SR均无显著影响(P>0.05)。各组罗非鱼幼鱼SR均在96.60%以上,其中G0、G75组罗非鱼幼鱼的终末体重、WGR、SGR最高,G25组罗非鱼幼鱼的FCR最低。
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表 3 棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼生长性能的影响 Table 3 Effects of soybean oil replacement by palm oil on growth performance of juvenile GIFT |
由表4可知,棕榈油替代不同比例的大豆油对罗非鱼幼鱼CF、VSI和HSI的影响均不显著(P>0.05)。
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表 4 棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼形体指标的影响 Table 4 Effects of soybean oil replacement by palm oil on physique indexes of juvenile GIFT |
由表5可知,各组罗非鱼幼鱼肌肉水分、粗蛋白质、粗灰分含量无显著差异(P>0.05)。各替代组罗非鱼幼鱼肌肉粗脂肪含量与G0组相比无显著变化(P>0.05),但G50组罗非鱼幼鱼肌肉粗脂肪含量显著高于G100组(P<0.05)。
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表 5棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼肌肉营养组成的影响(干物质基础) Table 5Effects of soybean oil replacement by palm oil on muscle nutritional composition of juvenile GIFT (DM basis) |
由表6可知,棕榈油替代不同比例的大豆油对罗非鱼幼鱼血清CHOL、TG、LDL-C、TP含量的影响不显著(P>0.05)。与G0组相比,G50、G100组血清HDL-C含量显著降低(P<0.05);此外,G75组血清HDL-C含量显著高于G50、G100组(P<0.05)。与G0组相比,G25、G50组血清ALT活性以及G50、G75组血清AST活性显著降低(P<0.05),其他替代组无显著变化(P>0.05)。
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表 6 棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼血清生化指标的影响 Table 6 Effects of soybean oil replacement by palm oil on serum biochemical indexes of juvenile GIFT |
本试验结果表明,棕榈油替代不同比例的大豆油对吉富罗非鱼幼鱼的WGR、FCR和SR的影响不显著,其中G0、G75组的WGR、SGR最高,G25组的FCR最低。这与棕榈油替代不同比例的鱼油在鲶鱼[5]、大西洋鲑[6]、虹鳟[7]上的研究结果类似。此外,宋益贞等[11]报道,在基础饲料中分别添加4.00%的鸡油、鱼油、棕榈油、花生油、磷脂油,饲喂初始体重为11.19 g的吉富罗非鱼60 d,结果显示,棕榈油组罗非鱼的SGR显著低于鸡油、花生油和磷脂油组,与鱼油组无显著差异。程民杰[9]研究指出,当半滑舌鳎饲料油脂含量为10.00%时,棕榈油替代饲料中60%鱼油时半滑舌鳎的WGR显著高于全鱼油组。Bahurmiz等[12]用毛棕榈油、棕榈油酸、精炼棕榈油分别完全替代饲料中8.00%的鱼油,养殖初始体重为31.24 g的红罗非鱼(Oreochromis sp.)20周后发现,毛棕榈油、棕榈油酸、精炼棕榈油完全替代鱼油对红罗非鱼的终末体重、SGR、饲料效率、SR、形体指标、血细胞容积等的影响均不显著。Lim等[13]研究指出,非洲鲶鱼饲料中粗炼或精炼棕榈油为8.00%时,可显著提高鲶鱼的生长性能、蛋白质沉积率和肌肉中维生素E含量。棕榈油富含维生素E等天然抗氧化剂[3],随棕榈油添加比例的增加,饲料中维生素E含量逐渐升高。本试验中各替代组罗非鱼幼鱼的WGR、FCR和SR与对照组(G0组)相比无显著差异,G75组罗非鱼终末体重、WGR、SGR高于其他替代组,这可能与饲料中维生素E含量随替代比例增加而增加有关。李志华等[14]在饲料中添加0、25、250、2 500 mg/g维生素E饲喂初始体重为3.25 g的罗非鱼56 d,研究发现添加250 mg/kg组罗非鱼的WGR、SGR显著高于其他组;并指出饲料中适量维生素E可提高罗非鱼生长性能、增强机体抗氧化能力,但过量的维生素E则会抑制罗非鱼生长。Gao等[15]报道,随花鲈饲料中棕榈油替代鱼油比例的增加,饲料中维生素E含量逐渐增加,棕榈油替代饲料中60%的鱼油对花鲈的终末体重、WGR、SGR、FCR等无显著影响。Ng等[16]报道,在粗脂肪含量为10%的非洲鲶鱼饲料中,用棕榈油酸分别替代0、25%、50%、75%、100%的鱼油,随替代比例的增加,饲料中维生素E含量由78.68 μg/g增加至304.81 μg/g;棕榈油酸替代饲料中25%鱼油时,非洲鲶鱼的终末体重、WGR显著高于全鱼油组。研究发现,水产动物生长性能主要受油脂脂肪酸组成的影响,不同鱼类对同一油脂的消化利用率也不同。雍文岳[17]报道,罗非鱼对亚油酸需求量高于其他脂肪酸,添加植物油更有利于罗非鱼生长。本试验中大豆油和棕榈油均为植物油,随棕榈油替代大豆油比例的增加,饲料中C18 ∶ 3、C18 ∶ 2含量逐渐降低(C18 ∶ 3由4.44%降至2.31%,C18 ∶ 2由45.96%降至35.46%);生长结果显示各替代组罗非鱼幼鱼生长性能与对照组相比无显著差异。这说明棕榈油完全替代饲料中大豆油后,饲料中C18 ∶ 2和C18 ∶ 3含量仍能满足罗非鱼的生长需要。
3.2 棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼形体指标和肌肉营养组成的影响本试验结果显示,棕榈油替代不同比例的大豆油对吉富罗非鱼幼鱼CF、VSI、HSI的影响均不显著,这说明棕榈油替代大豆油在形态学上不会对吉富罗非鱼幼鱼产生显著影响。各替代组罗非鱼肌肉水分、粗蛋白质、粗灰分含量与对照组相比差异不显著,这说明棕榈油替代大豆油不影响吉富罗非鱼幼鱼肌肉中蛋白质的沉积。本试验结果显示,G100组罗非鱼肌肉粗脂肪含量显著低于G50组。这可能是随着棕榈油替代大豆油比例的增加,饲料中C18 ∶ 2和C18 ∶ 3含量逐渐降低,导致C18 ∶ 2和C18 ∶ 3比例失衡(G50组C18 ∶ 2 ∶ C18 ∶ 3=11.19 ∶ 1.00,G100组C18 ∶ 2 ∶ C18 ∶ 3=15.35 ∶ 1.00),进而影响了脂肪在罗非鱼肌肉中的沉积。曹俊明等[18]报道,随着饲料中家蝇蛆粉替代鱼粉比例的增加,饲料中多不饱和脂肪酸缺乏导致了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肌肉中粗脂肪含量下降。张立坚等[19]报道,罗非鱼肌肉脂肪酸主要为C16 ∶ 0、C18 ∶ 1、C18 ∶ 2、C22 ∶ 6。本试验中,G50组饲料中C16 ∶ 0含量(12.02%)高于对照组和其他替代组,这可能导致了G50组吉富罗非鱼幼鱼肌肉粗脂肪含量高于其他替代组。
3.3 棕榈油替代大豆油对吉富罗非鱼幼鱼血清生化指标的影响HDL-C是一种血脂蛋白,可将肝脏外的CHOL、TG等物质运输到肝脏分解,防止CHOL在血管壁的沉积。本试验结果显示,G50、G100组吉富罗非鱼幼鱼血清HDL-C含量显著低于对照组。这与程民杰[9]的研究结果不同,其研究指出棕榈油替代饲料中80%鱼油时可显著提高半滑舌鳎血清HDL-C含量,在一定程度上有利于机体脂肪代谢。出现这种差异,可能与试验鱼、棕榈油替代脂肪源不同有关。Torstesen等[20]研究发现,棕榈油全部替代饲料中鱼油时,对大西洋鲑鱼血浆中CHOL、TG、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、LDL-C和HDL-C含量的影响不显著。ALT、AST主要存在于肝脏细胞中,其活性高低是肝脏功能正常与否的标志,正常情况下鱼类血液中活性较低且相对稳定,当肝脏受损时,会使血液中这2种酶活性显著升高。本试验结果显示,随着棕榈油替代大豆油比例的增加,吉富罗非鱼幼鱼血清ALT、AST活性呈现先降低后升高趋势,其中G25、G50组ALT活性以及G50、G75组AST活性显著降低,这表明在此替代比例下,棕榈油在一定程度上可改善吉富罗非鱼幼鱼肝脏的健康状况。这可能与随饲料中棕榈油替代大豆油比例的增加,饲料中维生素E、β-胡萝卜素等天然抗氧化剂含量逐渐升高,饲料抗氧化能力逐渐增强有关。研究发现,棕榈油[13]、棕榈油酸[16]替代非洲鲶鱼饲料中鱼油,可提高饲料中维生素E含量,显著提高非洲鲶鱼肝脏和肌肉的抗氧能力,保护肝脏健康。Gao等[15]用棕榈油分别替代饲料中0、40%、60%、100%的氧化鱼油,饲料中维生素E含量由0 mg/kg增加至246 mg/kg;饲喂花鲈50 d后发现,棕榈油替代氧化鱼油可降低花鲈机体脂质过氧化反应,提高机体抗氧化能力。韩雨哲等[4]指出,花鲈饲料中添加一定比例的棕榈油可缓解氧化鱼油对花鲈肝脏的损伤作用。
4 结 论① 棕榈油等比例替代25%~100%的大豆油对吉富罗非鱼幼鱼的生长性能、形体指标、肌肉常规成分(粗脂肪除外)含量无显著影响。
② 棕榈油等比例替代50%大豆油显著影响吉富罗非鱼幼鱼血清HDL-C含量和ALT、AST活性。
③ 以吉富罗非鱼幼鱼生长性能为评价指标,在粗蛋白质、粗脂肪含量分别为31.60%、9.30%的饲料中,当大豆油含量为4.00%时,棕榈油可全部替代饲料中的大豆油。
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