豪猪(Hystrix hodgsoni)，又称箭猪、刺猪，属于啮齿目动物，是一种经济价值很高的珍稀动物，具有食用价值、药用价值和观赏价值。随着人们生活水平的提高，具有“动物人参”之美誉的豪猪肉成为我国大城市高档酒店、宾馆的新宠，国内市场越来越大，刺激了豪猪养殖业的快速发展。蛋氨酸是动物生长所必需的一种含硫氨基酸，在玉米-豆粕型饲粮中作为家禽的第一限制性氨基酸^[1]、猪的第二限制性氨基酸^[2]发挥着重要作用。蛋氨酸除了参与合成机体蛋白质和其他氨基酸外，还可以促进动物生长^{[3, 4, 5, 6, 7]}，提高机体免疫力^{[8, 9, 10]}，并在机体分子氧化防御机制中起重要作用^{[11, 12, 13]}。蛋氨酸在畜禽生产方面的应用研究已经相当广泛，但对于豪猪来说，由于人工驯养的历史较短，其营养需要量研究起步也较晚，有关豪猪蛋氨酸需要量的研究鲜有文献报道。本试验以9月龄豪猪为研究对象，探讨饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪生长性能、血清免疫指标和抗氧化指标的影响，从而确定9～10月龄豪猪生长最佳时的饲粮蛋氨酸水平，旨在为豪猪生产实践提供理论依据。

采用单因子完全随机区组设计，选用9月龄健康无病、体重接近的豪猪96头，随机分为6组，每组设4个重复，每个重复4头，每个重复豪猪平均体重为(29.90±4.10) kg。

以玉米、豆粕、麦麸等为主要原料，参照文献[14, 15, 16]配制基础饲粮，蛋氨酸以DL-蛋氨酸形式添加，其余营养成分保持一致，预混料为豪猪场自配，基础饲粮组成及营养水平见表 1。6组豪猪分别饲喂蛋氨酸水平为0.25%、0.45%、0.65%、0.85%、1.05%和1.25%的试验饲粮。

表 1

Table 1

表 1(Table 1)

表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis) % 原料 Ingredients 含量 Content 营养水平 Nutrient levels2) 含量 Content 玉米 Corn 69.90 消化能 DE/(MJ/kg) 13.14 小麦麸 Wheat bran 7.25 粗蛋白质 CP 15.00 豆粕 Soybean meal 19.35 赖氨酸 Lys 0.66 磷酸氢钙 CaHPO4 0.70 蛋氨酸 Met 0.25 石粉 Limestone 0.50 钙 Ca 0.57 食盐 NaCl 0.30 有效磷 AP 0.28 预混料 Premix1) 2.00 合计 Total 100.00 1)预混料为每千克饲粮提供The premix provided the following per kg of the diet:VA 160 000 IU，VD3 5 000 IU，VE 1 500 IU，VK3 300 mg，VB1 500 mg，VB2 800 mg，VB6 300 mg，VB12 3.0 mg，叶酸 folic acid 100 mg，生物素 biotin 4.5 mg，烟酸 nicotinic acid 400 mg，泛酸钙 calcium pantothenate 150 mg，Fe 100 mg，Cu 10 mg，Zn 110 mg，Mn 20 mg，Se 0.30 mg，I 0.15 mg，Co 0.2 mg。 2)营养水平为计算值。The nutrient levels were calculated values.

表 1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet (air-dry basis)

饲养试验在桃源县堆金豪猪养殖场进行。预试期7 d，随后进入正式试验，正试期50 d，试验全期饲喂颗粒料，自由采食和饮水。豪猪舍为水泥地板，每个栏中有1个料槽和1个自动饮水器。按照豪猪场日常管理措施进行驱虫、消毒和防疫。每天定时打扫栏舍卫生，保证栏舍清洁干燥。

试验结束时，按重复称空腹体重，每个重复选择接近该重复平均体重的试验豪猪各1头，采用肌肉注射速眠新Ⅱ号对其进行麻醉，前腔静脉采血5 mL，再肌肉注射同剂量鹿醒宁Ⅱ号使其苏醒。所采血样静置30 min后，3 000 r/min离心10 min，吸取血清并分装于Eppendorf管中，置于-20 ℃低温冰箱中冷冻保存。

试验开始前和试验结束时，试验豪猪禁食(自由饮水)12 h后空腹称重，逐栏测定试验豪猪初始体重和终末体重，并以重复为单位统计耗料量，计算各组的平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量的测定均采用免疫比浊法，在湖南省兽药工程中心实验室完成测定，测定所用试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量测定所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，按照试剂盒说明书在湖南省兽药工程中心实验室完成测定。

试验数据采用SPSS 19.0统计软件进行单因素方差分析，Duncan氏法进行多重比较，结果用平均值和标准误表示。以P＜0.05作为差异显著性判断标准。通过回归分析中的曲线估计拟合二次曲线，建立二次回归模型：Y=aX²+bX+c，其中Y为依变量，X为饲粮蛋氨酸水平，当获得显著性二次效应时，再按Neter等^[17]推荐的方法求出获得最大二次效应时的蛋氨酸需要量(X_max=-b/2a)，该值再乘以95%即为适宜蛋氨酸需要量。

由表 2所示，饲粮蛋氨酸水平对豪猪ADG和ADFI的影响不显著(P＞0.05)，但对F/G的影响显著(P＜0.05)，随着饲粮蛋氨酸水平的升高，F/G呈现先降低再升高的二次曲线变化趋势，其中0.85%组显著低于0.25%、0.45%和1.25%组(P＜0.05)，与0.65%和1.05%组差异不显著(P＞0.05)。

表 2

Table 2

表 2(Table 2)

表 2 饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary Met level on growth performance of 9 to 10-month-old porcupine 项目Items 蛋氨酸水平 Met level/% SE P值 P-value 0.25 0.45 0.65 0.85 1.05 1.25 组间 Groups 线性 Linear 二次 Quadratic 初始体重 IBW/kg 29.64 30.62 30.04 29.73 28.78 30.61 0.84 0.993 平均日增重 ADG/g 50.29 47.52 49.98 56.84 50.60 47.06 1.26 0.271 0.998 0.171 平均日采食量 ADFI/g 218.13 196.35 200.00 205.11 198.96 201.15 2.98 0.349 0.244 0.234 料重比 F/G 4.39a 4.17a 4.01ab 3.63b 3.95ab 4.28a 0.08 0.041 0.253 0.005 同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，相同字母或无字母表示差异不显著(P＞0.05)。SE表示标准误。下表同。 In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). SE stand for standard error. The same as below.

表 2 饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪生长性能的影响 Table 2 Effects of dietary Met level on growth performance of 9 to 10-month-old porcupine

由表 3可知，饲粮蛋氨酸水平对豪猪血清 IgA、IgG和IgM含量均无显著影响(P＞0.05)。

表 3

Table 3

表 3(Table 3)

表 3 饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪血清免疫指标的影响 Table 3 Effects of dietary Met level on serum immune indices of 9 to 10-month-old porcupine g/L 项目Items 蛋氨酸水平 Met level/% SE P值 P-value 0.25 0.45 0.65 0.85 1.05 1.25 组间 Groups 线性 Linear 二次 Quadratic 免疫球蛋白A IgA 2.319 3.513 3.020 2.477 1.934 3.177 0.325 0.775 0.890 0.995 免疫球蛋白G IgG 11.639 15.439 10.602 11.763 13.991 16.796 0.843 0.222 0.183 0.209 免疫球蛋白M IgM 0.664 0.688 0.883 0.690 0.521 0.787 0.053 0.526 0.944 0.840

表 3 饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪血清免疫指标的影响 Table 3 Effects of dietary Met level on serum immune indices of 9 to 10-month-old porcupine

由表 4可知，饲粮蛋氨酸水平对豪猪血清SOD活性无显著影响(P＞0.05)；饲粮蛋氨酸水平显著影响豪猪血清GSH-Px活性(P＜0.05)，随着饲粮蛋氨酸水平的升高，豪猪血清GSH-Px活性呈现先增加再降低的二次曲线变化趋势，其中0.85%组活性最高，显著高于0.25%和0.45%组(P＜ 0.05)，与0.65%、1.05%和1.25%组差异不显著 (P＞0.05)，其他组间差异不显著(P＞0.05)；饲粮蛋氨酸水平对豪猪血清MDA含量影响极显著(P＜0.01)，血清MDA含量随饲粮蛋氨酸水平的升高呈现先降低再升高的二次曲线变化趋势，0.85%和1.05%组豪猪血清MDA含量极显著低于0.25%、0.45%和0.65%组(P＜0.01)，与1.25%组差异不显著(P＞0.05)，同时1.25%组血清MDA含量极显著低于0.25%和0.45%组(P＜0.01)。

表 4

Table 4

表 4(Table 4)

表 4 饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪血清抗氧化指标的影响 Table 4 Effects of dietary Met level on serum antioxidant indices of 9 to 10-month-old porcupine 项目Items 蛋氨酸水平 Met level/% SE P值 P-value 0.25 0.45 0.65 0.85 1.05 1.25 组间 Groups 线性 Linear 二次 Quadratic 超氧化物歧化酶 SOD/(U/mL) 277.45 328.11 284.62 263.32 259.41 234.35 10.35 0.161 0.036 0.317 谷胱甘肽过氧化物酶 GSH-Px/(U/mL) 302.38b 320.52b 370.56ab 407.78a 367.81ab 364.32ab 10.87 0.045 0.018 0.035 丙二醛 MDA/(nmol/mL) 13.61Aa 10.61ABab 8.47BCb 3.35Dc 4.08Dc 4.43CDc 0.87 <0.001 <0.001 0.008

表 4 饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪血清抗氧化指标的影响 Table 4 Effects of dietary Met level on serum antioxidant indices of 9 to 10-month-old porcupine

由表 5可知，9～10月龄豪猪获得最低F/G、最高血清GSH-Px活性和最低血清MDA含量95%处的饲粮蛋氨酸水平分别为0.76%、0.87%和0.96%。

表 5

Table 5

表 5(Table 5)

表 5 根据二次回归模型估测9～10月龄豪猪蛋氨酸需要量 Table 5 The Met requirements of 9 to 10-month-old porcupine estimated based on quadratic regression model 估测指标 Response parameters 二次回归方程 Quadratic regression equation R2 蛋氨酸需要量 Met requirements/% 料重比 F/G Y=2.08 X2-2.343 X+5.165 0.360 0.76 血清谷胱甘肽过氧化物酶活性 Serum GSH-Px activity Y=-209.277 X2+383.661 X+209.93 0.369 0.87 血清丙二醛含量 Serum MDA content Y=14.257 X2-28.948 X+20.596 0.765 0.96

表 5 根据二次回归模型估测9～10月龄豪猪蛋氨酸需要量 Table 5 The Met requirements of 9 to 10-month-old porcupine estimated based on quadratic regression model

目前，国内外关于豪猪蛋氨酸需要量的研究尚缺乏相关的报道，豪猪蛋氨酸的需要量多根据养殖经验或参考其他动物。根据二次回归模型估测，9～10月龄豪猪获得最低F/G、最高血清GSH-Px活性和最低血清MDA含量95%处的饲粮蛋氨酸水平分别为0.76%、0.87%和0.96%，要高于猪、禽的推荐量，如仔猪蛋氨酸推荐量为0.30%^[18]、42～62日龄康贝尔麻鸭饲粮蛋氨酸推荐量为0.38%^[19]、5～8周龄京红蛋鸡蛋氨酸需要推荐量为0.42%^[20]、开产蛋鸡蛋氨酸推荐量为0.48%^[21]等。而毛皮动物对蛋氨酸需要量则较高，如冬毛生长期银狐的蛋氨酸需要量为0.91%^[22]，冬毛期蓝狐、配种前雌性蓝狐和繁殖期蓝狐蛋氨酸需要量分别为0.99%^[23]、1.03%^[24]和0.98%^[25]等。豪猪全身上下长满硬刺，后背部及臀部的刺集中且特别粗长，可达20 cm以上，直径大约6 mm；四肢及体腹部刺短小、略软，全身硬刺下面被有稀疏的长毛，豪猪对蛋氨酸的需要有一部分是用于刺的生长。因此，参考毛皮动物对蛋氨酸的需要对豪猪养殖生产实际有一定的指导意义。

蛋氨酸是动物的必需氨基酸之一，满足机体对蛋氨酸的需求有助于发挥动物的生产性能。大量研究表明，基础饲粮中适当添加蛋氨酸可以显著提高家禽体增重，改善其饲料利用率、胴体品质并促进羽毛的生长^{[26, 27, 28, 29]}。程传锋^[18]研究表明，饲粮蛋氨酸水平(0.18%、0.24%、0.30%、0.36%、0.42%和0.48%)能显著影响仔猪的生长性能；张永翠等^[30]报道，饲粮中添加蛋氨酸能显著提高幼兔的ADG和饲料转化率(FCR)，而对ADFI无显著影响。本试验研究结果表明，饲粮蛋氨酸水平对9～10月龄豪猪ADFI的影响不显著，对F/G的影响显著，这与上述研究结果相一致，但对其ADG的影响不显著。也有研究认为饲粮蛋氨酸水平不影响动物的生产性能，叶慧等^[19]曾报道，在试验设定的蛋氨酸水平范围内(0.28%～0.48%)，42～62日龄康贝尔麻鸭生产性能不受饲粮蛋氨酸水平的显著影响。此外，蛋氨酸不足或过量都会降低动物的生长性能，宋丹等^[20]曾报道，饲粮蛋氨酸水平在0.37%～0.44%时5～8周龄京红蛋雏鸡的生长性能最好，低于或高于这个范围时生长性能均有所下降。本研究中，饲粮蛋氨酸水平为0.85%时获得了最低的F/G，因此主观判定0.85%为9～10月龄豪猪饲粮适宜蛋氨酸水平；回归分析显示，F/G与饲粮蛋氨酸水平间存在显著的二次相关，随着蛋氨酸水平的升高，F/G表现出先降低后升高的二次曲线变化趋势，说明在饲粮中添加适量的蛋氨酸改善了豪猪的饲料利用率；根据回归模型估测得出，饲粮蛋氨酸水平为0.76%时9～10月龄豪猪可发挥最佳的生长性能；通过回归模型估测的蛋氨酸水平要低于从试验结果中观测到的主观判定值，这对降低饲养成本，减少环境污染更有意义。

蛋白质和氨基酸对维持机体正常的免疫功能起着重要的作用^{[31, 32]}。侯永清等^[33]报道，蛋氨酸主要影响机体的体液免疫反应，饲粮蛋氨酸水平显著影响早期断奶仔猪血液中IgG含量及抗绵羊红细胞(SRBC)抗体效价。吴邦元^[34]认为，饲粮蛋氨酸缺乏时雏鸡血清IgG、IgA和IgM含量显著或极显著低于对照组。Tsiagbe等^[10]研究表明，在 基础饲粮(蛋氨酸水平为0.35%，胱氨酸水平为0.37%)中添加0.25%的蛋氨酸可显著提高经SRBC腹腔注射后肉仔鸡血清抗SRBC抗体效价及IgG含量，但过量添加(0.45%)对接种后血清抗SRBC抗体效价无显著影响。刘文斐等^[35]也有类似的研究发现，即不同形式的蛋氨酸均能提高肉种鸡血清中免疫球蛋白和补体的含量。在本试验中，饲粮蛋氨酸水平对豪猪血清IgA、IgG和IgM的含量均无显著影响，与上述报道不一致。这可能与动物是否处于疾病或免疫应激状态有关，在应激或疾病状态下，机体可能动员较多的氨基酸参与免疫球蛋白的合成，使抗体在短期内达到较高水平，而在正常生理状态下仅维持较低水平^[30]，也可能与试验动物、免疫接种程序以及饲养环境等有关，其原因有待进一步研究。

蛋氨酸的另一个重要功能是作为半胱氨酸前体参与还原型谷胱甘肽(GSH)和牛磺酸的合成^{[11, 12, 13, 36]}，并一起作为抗氧化物参与机体分子氧化防御机制^[37]。SOD、GSH-Px是体内抗氧化系统中的重要酶系，其活性在清除自由基、抗氧化损伤和维持细胞结构方面起着重要作用，可作为机体抗氧化状态的标志；MDA是细胞膜脂质过氧化物的产物，其含量高低可间接反映细胞的受损伤程度^[38]。麻丽坤等^[21]报道，适量的蛋氨酸能够提高蛋鸡血清SOD活性，增强机体抗氧化功能；刘文斐等^[35]研究表明，饲粮中添加不同形式的蛋氨酸均能提高肉种鸡血清的抗氧化功能，且均显著提高了肝脏和肾脏的GSH-Px和SOD活性，并降低了肝脏、肾脏的MDA含量。叶慧等^[39]认为，饲粮中添加蛋氨酸可显著提高21日龄狮头鹅血清GSH、SOD活性及显著降低血清MDA含量，血清GSH-Px活性随着蛋氨酸水平的升高而升高，但差异不显著。本试验结果表明，饲粮蛋氨酸水平显著影响豪猪血清GSH-Px活性并极显著影响豪猪血清MDA含量，这与上述研究相一致；但饲粮蛋氨酸水平对豪猪血清SOD活性无显著影响，与上述报道不一致，可能是豪猪机体清除自由基的能力主要反映在血清GSH-Px活性这一指标上，而SOD活性则表现不明显。综合分析，饲粮中添加适量的蛋氨酸可提高9～10月龄豪猪体内的抗氧化能力，对降低脂质过氧化有一定作用，其作用机理有待进一步探讨。

饲粮中添加适量蛋氨酸能不同程度改善9～10月龄豪猪的生长性能，提高其抗氧化能力。根据二次回归模型估测，9～10月龄豪猪获得最低F/G、最高血清GSH-Px活性和最低血清MDA含量的蛋氨酸需要量分别为0.76%、0.87%和0.96%。